CN113181252A - 黄芩汤在制备治疗腹泻及改善肠道功能药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了黄芩汤在制备治疗腹泻及改善肠道功能药物中的应用，其中所述包括：黄芩、芍药、甘草和红枣。本发明中的黄芩汤可以降低AQP3和NHE8的mRNA表达，并降低肠道菌群Firmicutes/Bacteroidetes(F/B)比值水平至接近正常水平，从而缓解腹泻症状。而且，该黄芩汤还能有效改善肠道菌群，高剂量中药组合物增加了假丝酵母菌的相对丰度，增强肠上皮的免疫活性；低剂量中药组合物增加了Jeotgalicoccus的相对丰度，促进肠道健康。

Description

黄芩汤在制备治疗腹泻及改善肠道功能药物中的应用
技术领域
本发明属于中药组合物的应用领域，具体涉及黄芩汤在制备治疗腹泻及改善肠道功能药物中的应用。
背景技术
急性腹泻是一个全球性的公共卫生问题。传统用于治疗急性腹泻的药物主要为抗生素，但近年来，由于抗生素存在诸如耐药性等问题，研究方向开始转向植物化合物的抗腹泻潜力。
黄芩汤是一种传统中药配方，最早出现在中医论著《伤寒论》中，1800多年前在东方国家广泛用于治疗胃肠道症状，包括腹部痉挛、发热、头痛、呕吐、恶心、极度口渴、心脏下胀等。但目前对于黄芩汤的实质适用病症及作用机理还不明确，从而使其应用受到了极大的限制。
肠道菌群是一个密集多样的生态系统，涉及生理和病理过程。正常的肠道菌群通过帮助机体新陈代谢、排除毒素和维持肠道屏障功能来提升宿主的健康。而肠道菌群失调则涉及多种疾病和炎症反应。
目前，对于黄芩汤治疗蓖麻油致腹泻的效果及其相关机制仍为空白，且对于黄芩汤在胃肠道其他方面的有效作用也未有相关公开，限制了黄芩汤的有效利用，因此，亟待开发出黄芩汤的更广泛的新应用。
发明内容
本发明的目的在于提供中药组合物在制备治疗蓖麻油诱发的腹泻的药物中的应用；
本发明的另一目的在于提供中药组合物在制备急性期蛋白表达抑制剂中的应用；
本发明的另一目的在于提供中药组合物在制备钠-氢交换体和水通道蛋白表达抑制剂中的应用；
本发明的另一目的在于提供中药组合物在制备肠道微生物菌群调节剂中的应用。
本发明所采取的技术方案是：
本发明的第一个方面，提供：
中药组合物在制备治疗蓖麻油诱发的腹泻的药物中的应用。
进一步地，上述中药组合物包括：黄芩、芍药、甘草和红枣。
更进一步地，上述中药组合物包括：以质量份计，黄芩6～12份、芍药3～9份、甘草3～9 份和红枣3～9份。
更进一步地，上述中药组合物优选包括：以质量份计，黄芩6～9份、芍药3～6份、甘草 3～6份和红枣3～6份。
更进一步地，上述中药组合物优选包括：以质量份计，黄芩9份、芍药6份、甘草6份和红枣6份。
更进一步地，上述中药组合物为黄芩汤。
经发明人测定，本发明实施例中的黄芩汤中的主要活性成分为芍药苷、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、甘草酸铵。其含量分别为芍药苷5.39％、黄芩苷10.03％、汉黄芩苷3.76％、黄芩素1.35％和甘草酸铵3.29％(以质量比计)。
蓖麻油及其活性成分蓖麻油酸可以降低小肠和结肠对Na+和K+的吸收，降低Na+、K+ATPase活性，改变肠道通透性，从而引发小鼠腹泻，而发明人发现，本发明实施例中的黄芩汤可以通过改变肠道菌群和急性期蛋白来治疗或缓解上述症状，从而起到抑制小鼠腹泻的作用。
本发明的第二个方面，提供：
中药组合物在制备急性期蛋白(APP)表达抑制剂中的应用。
进一步地，上述急性期蛋白包括α-1-酸性糖蛋白(AGP)、C-反应蛋白(CRP)、转铁蛋白(TRF)和白蛋白(ALB)。
包括α-1-酸性糖蛋白(AGP)、C-反应蛋白(CRP)、转铁蛋白(TRF)和白蛋白(ALB) 等在内的急性期蛋白(APP)主要由肝细胞合成，是创伤、感染、应激、肿瘤和炎症所触发的先天急性期反应的一部分。APP在肠道内的功能主要指控制肠道内的跨上皮液运输，而本发明实施例中的中药组合物在低剂量时能有效降低CRP mRNA水平，中、高剂量时降低AGP mRNA水平，使用上述中药组合物的实验组中TRF水平明显低于空白对照组，而且在各试验剂量范围内都能有效减低ALB mRNA表达，从而降低或减缓小鼠腹泻反应。
进一步地，上述中药组合物包括：黄芩、芍药、甘草和红枣。
更进一步地，上述中药组合物包括：以质量份计，黄芩6～12份、芍药3～9份、甘草3～9 份和红枣3～9份。
更进一步地，上述中药组合物优选包括：以质量份计，黄芩6～9份、芍药3～6份、甘草 3～6份和红枣3～6份。
更进一步地，上述中药组合物优选包括：以质量份计，黄芩9份、芍药6份、甘草6份和红枣6份。
更进一步地，上述中药组合物为黄芩汤。
经发明人测定，本发明实施例中的黄芩汤中的主要活性成分为芍药苷、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、甘草酸铵。其含量分别为芍药苷5.39％、黄芩苷10.03％、汉黄芩苷3.76％、黄芩素1.35％和甘草酸铵3.29％(以质量比计)。
本发明的第三个方面，提供：
中药组合物在制备钠-氢交换体和水通道蛋白表达抑制剂中的应用。
进一步地，上述钠-氢交换体为钠-氢交换体8(NHE8)。
进一步地，上述水通道蛋白为水通道蛋白3(AQP3)。
在分子水平上，上述中药组合物下调上皮运输相关的NHE8和AQP3的mRNA表达。而由于肠道的关键功能是吸收水分，在发生腹泻时，会下调AQP3和AQP4并影响水分吸收。而目前已知10种哺乳动物NHEs亚型，其中NHE1、NHE2、NHE3和NHE8在肠上皮中已被鉴定，均在细胞膜的刷状边缘(BBM)高表达，其中NHE3为主要亚型。NHE3缺陷小鼠的Na+吸收功能会出现缺陷，导致酸碱失衡，并出现自发性轻度腹泻和酸中毒。NHE8对Na+吸收也很重要，并能维持肠内粘膜稳态。而NHE2缺陷则会改变黏液层的酸性分泌，减少肠壁和酶原细胞的数量，影响肠道屏障恢复。
进一步地，上述中药组合物包括：黄芩、芍药、甘草和红枣。
更进一步地，上述中药组合物包括：以质量份计，黄芩6～12份、芍药3～9份、甘草3～9 份和红枣3～9份。
更进一步地，上述中药组合物优选包括：以质量份计，黄芩6～9份、芍药3～6份、甘草 3～6份和红枣3～6份。
更进一步地，上述中药组合物优选包括：以质量份计，黄芩9份、芍药6份、甘草6份和红枣6份。
更进一步地，上述中药组合物为黄芩汤。
经发明人测定，本发明实施例中的黄芩汤中的主要活性成分为芍药苷、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、甘草酸铵。其含量分别为芍药苷5.39％、黄芩苷10.03％、汉黄芩苷3.76％、黄芩素1.35％和甘草酸铵3.29％(以质量比计)。
本发明的第四个方面，提供：
中药组合物在制备肠道微生物菌群调节剂中的应用。
进一步地，上述肠道微生物菌群调节剂下调肠道中厚壁菌门的丰度，上调拟杆菌门的丰度，从而下调肠道菌群F/B(Firmicutes/Bacteroidetes，厚壁菌门/拟杆菌门)比值。
由于厚壁菌门和拟杆菌门为肠道优势菌群，占据了整个肠道菌群的80％～90％，因此，厚壁菌门和拟杆菌门的比值(Firmicutes/Bacteroidetes，F/B)可以作为反映肠菌紊乱的重要参数。
肠道菌群是一个密集多样的生态系统，涉及生理和病理过程。正常的肠道菌群通过帮助新陈代谢、排除毒素和维持肠道屏障功能来影响宿主的健康。而一旦出现肠道菌群失调，则可能会进一步涉及多种疾病和炎症反应，因此，改善肠道菌群对于评价肠道健康具有至关重要的影响。
进一步地，上述中药组合物包括：黄芩、芍药、甘草和红枣。
更进一步地，上述中药组合物包括：以质量份计，黄芩6～12份、芍药3～9份、甘草3～9 份和红枣3～9份。
更进一步地，上述中药组合物优选包括：以质量份计，黄芩6～9份、芍药3～6份、甘草 3～6份和红枣3～6份。
更进一步地，上述中药组合物优选包括：以质量份计，黄芩9份、芍药6份、甘草6份和红枣6份。
更进一步地，上述中药组合物为黄芩汤。
经发明人测定，本发明实施例中的黄芩汤中的主要活性成分为芍药苷、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、甘草酸铵。其含量分别为芍药苷5.39％、黄芩苷10.03％、汉黄芩苷3.76％、黄芩素1.35％和甘草酸铵3.29％(以质量比计)。
本发明的有益效果是：
1.本发明中的中药组合物具有明显的止泻作用，该中药组合物可以降低AQP3和NHE8 的mRNA表达，并降低肠道菌群Firmicutes/Bacteroidetes(F/B)比值水平至接近正常水平，从而缓解腹泻症状。
2.本发明中的中药组合物还能有效改善肠道菌群，高剂量中药组合物增加了假丝酵母菌的相对丰度，增强肠上皮的免疫活性；低剂量中药组合物增加了Jeotgalicoccus的相对丰度，促进肠健康。
附图说明
图1为标准品(A)和实施例中的黄芩汤(B)的UPLC组分色谱图，其中，1为芍药苷， 2为黄芩苷，3为汉黄芩苷，4为黄芩素，5为甘草酸铵；
图2为各组腹泻指数(A)及腹泻评分(B)比较，*p<0.05；
图3为各组大鼠肝脏APP mRNA水平，其中，A为CRP，B为AGP，C为TRF，D为 ALB，*p<0.05；
图4为各组小肠中NHE、AQP mRNA水平，其中，A为AQP3，B为AQP4，C为NHE2， D为NHE3，E为NHE8，*p<0.05，vs模型组；
图5为AQP3(A)和NHE8(B)在基侧肠膜内的免疫组织化学图像，比例尺为50μm，其中为AQP3；
图6为不同类群肠道菌群的属水平群落条形图；
图7为在菌门水平上，不同类群细菌属(Actinobacteria、Firmicutes和unclassified_k_norank) 的相对丰度；*p<0.05，**p<0.01，vs模型组；#p<0.05，#p<0.01，###p<0.001，vs 对照组；
图8为在菌门水平上，不同类群细菌属(Bacteroidetes和Proteobacteria)的相对丰度；* p<0.05，**p<0.01，vs模型组；#p<0.05，#p<0.01，###p<0.001，vs对照组；
图9为在属水平上，不同类群细菌属(Candidatus arthromitus、Facklamia、Corynebacterium_1、Lactobacillus、Helicobacter、Jeotgalicoccus、Faecalibaculum和Psychrobacter) 的相对丰度；*p<0.05，**p<0.01，vs模型组；#p<0.05，#p<0.01，###p<0.001，vs 对照组；
图10为在属水平上，不同类群细菌属(Bifidobacterium、Aerococcus、Ruminococcaceae_UCG-014和unclassified_p_Firmicutes)的相对丰度；*p<0.05，**p<0.01， vs模型组；#p<0.05，#p<0.01，###p<0.001，vs对照组。
具体实施方式
为了使本发明的发明目的、技术方案及其技术效果更加清晰，以下结合具体实施方式，对本发明进行进一步详细说明。应当理解的是，本说明书中描述的具体实施方式仅仅是为了解释本发明，并非为了限定本发明。
所使用的实验材料和试剂，若无特别说明，均为常规可从商业途径所获得的耗材和试剂。
中药材料
黄芩、芍药、甘草和红枣购自中国广东广州某药店，并经中药专家鉴定确认。
使用超高效液相色谱(UPLC)分析确认黄芩中黄芩苷含量为13.19％，白芍中芍药苷含量为3.1％，甘草中甘草酸铵含量为2.29％，符合《中国药典》(2015年版)中的要求含量(黄芩中黄芩苷含量>9％，白芍中芍药苷含量>1.6％，甘草中甘草酸铵含量>2％)。
其中，色谱分析使用安捷伦1260系统执行。样品在Poroshell 120EC-C18柱上(3×100毫米，2.7μm)分离，流速为0.6毫升/分钟，温度为40℃。流动相由0.2％的磷酸(A)和乙腈(B)组成，洗脱梯度如下：
0-4min：90％A；
4-5min：90-80％A；
5-15min：80％-50％A；
15-16min：50％-0％A；
16-17min：0％-90％A。
中药组合物的制备
取黄芩(90克)、芍药(60克)、甘草(60克)和红枣(60克)在15倍水(v/w)中煮沸2小时，过滤，将残渣在10倍体积的沸水中再次提取1小时，过滤。将两次过滤的滤液混合并浓缩至 270mL(使中药组合物浓度变为1g/mL)，冷却至4℃。取冷却后的浓缩液，用蒸馏水稀释50倍(浓度为0.02g/mL)，用0.22μm过滤器过滤，即得。
标准品的制备
分别称重0.0205g芍药苷标准品、0.0205g黄芩苷标准品、0.0100g汉黄芩苷标准品、 0.0101g黄芩素标准品、0.0103g甘草酸铵标准品溶于10mL甲醇中。并分别按照下述要求进行梯度稀释：
芍药苷标准品：梯度稀释至40、60、80、100、120g/mL；
黄芩苷标准品：梯度稀释至120、140、160、200、220g/mL；
汉黄芩苷标准品：梯度稀释至10、30、50、70、90g/mL；
甘草酸铵标准品：梯度稀释至20、40、40、80、100g/mL。
超高效液相色谱(UPLC)分析确认黄芩汤(黄芩、芍药、甘草和红枣)主要含有芍药苷、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、甘草酸铵，峰面积(Y)与浓度(X)呈线性关系如表1所示。
表1黄芩汤中的峰面积(Y)与浓度(X)关系
Figure RE-GDA0003103342830000061
表2黄芩汤活性成分含量
Figure RE-GDA0003103342830000062
Figure RE-GDA0003103342830000071
由表2可知，在本实施例中的黄芩汤中，芍药苷、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、甘草酸铵的含量分别为5.39％、10.03％、3.76％、1.35％和3.29％。其中，标准品的UPLC色谱图如图1A，本实施例中的黄芩汤的色谱图如图1B。
蓖麻油诱导小鼠腹泻模型的制备
将3～4周龄野生型KM小鼠(购自山东济南鹏跃实验动物繁育有限公司)，在恒温(23±1.5℃)和恒定湿度(50±15％)下饲养，光/暗12小时循环。
适应性饲喂小鼠7天后，将小鼠随机分为对照组(control)、不治疗组(模型组，model)、洛哌丁胺(loperamide，LP)治疗组(CastorOil LP)、高剂量黄芩汤组(CastorOilHH)、中剂量黄芩汤组(CastorOil HM)和低剂量黄芩汤组(CastorOil HL)(n均为10个)。CastorOil HH、 CastorOil HM、CastorOil HL组分别以0.4mL的黄芩汤灌胃(浓度分别为：CastorOil HH为1 g/mL、CastorOil HM为0.5g/mL、CastorOil HL为0.25g/mL)，对照组和模型组给予等量生理盐水，LP处理组给予5mg/kg洛哌丁胺。试验小鼠需每天灌服相应剂量的药物一次，共灌服三天。其中，在灌服的第二天晚上灌胃后禁食不禁水，第三天时，在灌服小鼠相应剂量药物30分钟后，灌胃0.5mL蓖麻油。将试验小鼠分笼隔离(1只/笼)，分别用滤纸收集粪便。 4小时后，将小鼠处死，用棉线从每组5只小鼠中取出小肠(从十二指肠开始至回肠末端的小肠整段取出)，置于干冰中冷冻。切除各组剩余小鼠的肝脏和小肠，随机取1份速冻，剩余几份用4％多聚甲醛固定。
腹泻评分测试
将腹泻小鼠的粪便滤纸收集起来，记录小鼠的总排便、正常便、软便、水样便、稀便等级。计算腹泻评分和腹泻指数。利用Spass statistics 23软件统计分析各组实验组腹泻评分和腹泻指数的差异性并用GraphPad Prism 7软件作图。
其中，腹泻评分：
正常便0分；
半固体便2分；
水样便3分。
腹泻指数＝稀便率×稀便级数；
其中，
Figure RE-GDA0003103342830000072
Figure RE-GDA0003103342830000081
稀便等级的判定为：稀便直径小于1cm为1级，1.0～1.9cm为2级，2.0～3.0cm为3级，>3.0cm为4级。污迹为较规则圆形者直接测其直径；不规则形状则测其最长和最短的直径，两数相加除以2。
试验结果如图2所示。蓖麻油处理的模型小鼠的腹泻指数和腹泻核心明显高于对照组，说明蓖麻油处理的模型小鼠具有腹泻诱导作用。此外，黄芩汤组和洛哌丁胺均显示出显著的治疗效果，测定值均出现显著下降。
qPCR测定
使用TRIZOL试剂提取上述实施例获得的小肠和肝脏组织中的总RNA，并使用NanoDrop ND-2000紫外分光光度计进行定量。然后使用带gDNA Eraser的Prime Script TMRT试剂盒按照说明书进行逆转录，得到cDNA，使用SYBR Premix Ex Taq试剂盒扩增cDNA，以β-actin 为内参，采用2-△△Ct法分析目的基因的相对mRNA水平。每个样品重复分析三次。
其中，目的基因NHE8、NHE3、NHE2、AQP3、AQP4、AGP、CRP、TRF、ALB以及内参β-actin的引物序列如表3所示。
表3目的基因和内参的引物序列
Figure RE-GDA0003103342830000082
Figure RE-GDA0003103342830000091
结果发现，蓖麻油诱导小鼠模型的肝脏中AGP、CRP mRNA水平明显升高，低剂量黄芩汤降低CRP mRNA水平，中、高剂量黄芩汤降低AGP mRNA水平，未处理组的小鼠模型体内的TRF mRNA表达下调，洛哌丁胺组及黄芩汤组未发生变化。蓖麻油致腹泻对ALB水平无影响，但在黄芩汤组和洛哌丁胺组中，ALB mRNA表达均呈下降趋势(图3A)。
免疫组化分析
将上述实施例获得的肝脏和小肠标本用的石蜡包埋固定，切成4微米的切片。用3％BSA (牛血清白蛋白)封闭，小肠切片分别同多克隆抗AQP3抗体(购自Servicebio)(加入的体积比为1:800)、NHE3抗体(购自Bioss)(加入的体积比为1:500)、NHE8抗体(购自Santa)(加入的体积比为1:100)孵育，肝切片分别用多克隆CRP抗体(购自Bioss)(加入的体积比为1:500)、AGP抗体(购自Bioss)(加入的体积比为1:500)和TRF抗体(购自Bioss)(加入的体积比为1:500)。PBS洗涤切片，用过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔抗体或小鼠抗体室温孵育5分钟。用二氨基联苯胺检测HRP活性。
结果发现，腹泻模型组小鼠小肠AQP3、AQP4、NHE3、NHE8在表达上调，黄芩汤组则显著降低其AQP3、NHE8的表达，但对AQP4、NHE3 mRNA表达无影响。在小鼠模型中，小肠NHE2水平均未发生明显变化(图4B)，经免疫组化进一步证实肠道AQP3和NHE8的表达上调。而肝内未发现AGP和CRP(图5)。
16S rRNA测序
将上述实施例收集的小鼠肠道转移到生物安全柜内取出肠道内的小鼠粪便，根据E.Z.N.A.
Figure RE-GDA0003103342830000092
Soil DNA试剂盒说明书抽提总DNA，使用引物338-F：5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3’(SEQ ID NO.21)和806-R：5’-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’(SEQ ID NO.22) 对16SrRNA V3-V4可变区进行PCR扩增，扩增条件为：95℃预变性3min，95℃变性30s， 55℃退火30s，72℃延伸30s，共27个循环，最后72℃延伸10min。2％琼脂糖凝胶电泳获得扩增条谱。回收PCR产物，利用AxyPrep DNA Gel Extraction试剂盒对产物进行纯化，用 Tris-HCl洗脱，2％琼脂糖电泳检测。最后使用微量荧光计进行定量。将纯化后的扩增产物等量汇合，在Illumina MiSeq平台上进行配对端测序(2×300)。
统计学分析方法
采用ANOVA比较mRNA的相对表达量、肠道菌群的相对丰度以及shannon指数和ACE指数这两种alpha多样性指数。用Kruskal-Wallis检验和Benjaminio-Hochberg p值校正比较属和种丰度。P值小于0.05为有统计学意义。
结果发现，在腹泻小鼠模型中，所有肠道微生物类群的优势门为变形杆菌门、拟杆菌门和厚壁菌门。除对照组外，变形杆菌门在所有组中都是一个显著优势的门。黄芩汤治疗组以剂量依赖的方式降低了腹泻小鼠模型中厚壁菌门的丰度，增加了拟杆菌门的丰度(图6)。此外，黄芩汤组和洛哌丁胺组均降低了蓖麻油诱导腹泻模型中的Firmicutes/Bacteroidetes(F/B) 比值(表4)。
表4各组肠道菌群相对丰度
Figure RE-GDA0003103342830000101
Figure RE-GDA0003103342830000111
Figure RE-GDA0003103342830000121
其中，.n＝5，
Figure RE-GDA0003103342830000122
vs模型组*p<0.05，vs模型组**p<0.01，vs模型组***p<0.01；
vs对照组#p<0.05，##p<0.01，###p<0.001。
此外，结果还发现肠道菌群的主要属为假丝酵母菌属、乳杆菌属、粪便菌属、棒状杆菌属、双歧杆菌属、幽门杆菌属和空气球菌属，但各菌群的相对百分比有所不同(图6)。与未处理组相比，黄芩汤治疗组中的双歧杆菌的相对丰度、Faecalibaculumruminococcaceae_UCG-014和unclassified_p_Firmicutes出现了显著降低(图7～8，表4)。低剂量黄芩汤显著增加了小鼠肠道内的Facklamia，Jeotgalicoccus Corynebacterium_1，而在高剂量组，假丝酵母的丰度显著高于对照组。与对照组和模型组相比，中剂量黄芩汤显著增加了 Psychrobacter的相对丰度(图9～10)
综上所述，蓖麻油及其活性成分蓖麻油酸降低小肠和结肠对Na+和K+的吸收，降低Na+、 K+ATP酶活性，改变肠道通透性。上述结果表明，黄芩汤可通过调节小鼠小肠内Na+/H+交换蛋白和水通道蛋白来缓解小鼠腹泻，而且还可以能通过改变肠道菌群和急性期蛋白对小鼠腹泻产生反应。
在分子水平上，黄芩汤下调上皮运输相关AQP3和NHE8的mRNA表达，下调急性期蛋白如AGPs和CRP的mRNA表达。模型组的AQP4和TRF水平明显低于空白对照组，而模型组的NHE3水平较高。但HQT对AQP4、TRF和NHE3三种因素均无影响。APP在转录水平上有所不同，但没有在任何小鼠的肝脏中检测到APP相关蛋白。可以推测，其主要原因是在腹泻诱导和小肠剥离之间的时间窗过短。
蓖麻油处理会导致肠道菌群的显著改变，而黄芩汤则可以部分逆转这一改变。厚壁菌门和拟杆菌门是主要的肠道细菌，调节宿主炎症和免疫状态。厚壁菌门是宿主代谢的关键因素，但其在肠道内的过度生长会导致脂多糖等内毒素的产生，这些内毒素会进入血液中，诱发炎症。而拟杆菌门则减少了肠道和全身的炎症反应。因此，F/B比值升高提示机体处于促炎环境，具有自身免疫性疾病的免疫失衡特征。蓖麻油导致的F/B提高，而洛哌丁胺和黄芩汤显然都具有较好的改善作用。
另一方面，黄芩汤也能显著降低了Faecalibaculum的相对丰度。在小鼠腹泻模型中，双歧杆菌、镰刀菌、Ruminococcaceae_UCG-014和其他未分类的厚壁菌门的相对丰度被黄芩汤降低，从而改变了小肠微生物群的组成。双歧杆菌被认为是人类胃肠道的主要有益共生菌， Ruminococcaceae_UCG-014通过分泌大量的复合酶帮助机体消化吸收纤维素的能量。此外，附着于肠道上皮调节宿主免疫系统的分节丝状菌(Candidatus Arthromitus)在高剂量黄芩汤组丰度增加，但在中、低剂量黄芩汤组中未观察到这种现象。低剂量黄芩汤组的Facklamia、 Jeotgalicoccus和Corynebacterium_1的丰度增加。在中剂量组中，发现致病菌的相对丰度增加。Jeotgalicoccus对人体健康有着至关重要的作用，被认为是一种潜在的有益菌，属肠道菌群的核心功能菌群。发明人推测，发生变化的只要原因在于黄芩汤降低了双歧杆菌和 Ruminococcaceae_UCG-014的相对丰度，但通过增加假丝酵母和Jeotgalicoccus的相对丰度平衡了小鼠的肠道健康。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 广东省农业科学院动物卫生研究所
<120> 黄芩汤在制备治疗腹泻及改善肠道功能药物中的应用
<130>
<160> 22
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
gagatgcttc acatccgcta ccg 23
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
ccagccacca agatgccaag g 21
<210> 3
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
ggagctacat ggaggtggag gac 23
<210> 4
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
gtctcttctg ccttcagtgc tgtc 24
<210> 5
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
ttacctaaga acacaaagct tccag 25
<210> 6
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
gagcacagtg gttccaacat c 21
<210> 7
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
cttcgccttc ctgctgtcct tg 22
<210> 8
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
gccgactgct ctgagatgtt gg 22
<210> 9
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
cttcttcaca cggcggctga c 21
<210> 10
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
cctgacggac ctcctcatac cac 23
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
ccagaaggct gtcacacacg 20
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 12
gcttcttctc ctgctgaccg 20
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<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 13
cagagattcc tgaggctcca aca 23
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<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 14
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<213> 人工序列
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<400> 17
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<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 18
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<211> 23
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<400> 19
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 21
actcctacgg gaggca 16
<210> 22
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 22
ggactachvg ggtwtctaat 20

Claims (9)

1.中药组合物在制备治疗蓖麻油诱发的腹泻的药物中的应用；其中，所述中药组合物包括以下重量份的原料药物：黄芩6～12份、芍药3～9份、甘草3～9份和红枣3～9份。
2.中药组合物在制备急性期蛋白表达抑制剂中的应用；其中，所述中药组合物包括以下重量份的原料药物：黄芩6～12份、芍药3～9份、甘草3～9份和红枣3～9份。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述急性期蛋白包括α-1-酸性糖蛋白、C-反应蛋白、转铁蛋白和白蛋白。
4.中药组合物在制备钠-氢交换体和水通道蛋白表达抑制剂中的应用；其中，所述中药组合物包括以下重量份的原料药物：黄芩6～12份、芍药3～9份、甘草3～9份和红枣3～9份。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述钠-氢交换体为钠-氢交换体8，所述水通道蛋白为水通道蛋白3。
6.中药组合物在制备肠道微生物菌群调节剂中的应用；其中，所述中药组合物包括以下重量份的原料药物：黄芩6～12份、芍药3～9份、甘草3～9份和红枣3～9份。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述肠道微生物菌群调节剂调节肠道菌群F/B比值。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述肠道微生物菌群调节剂下调肠道菌群F/B比值，其中，下调厚壁菌门的丰度，或上调拟杆菌门的丰度。
9.根据权利要求1～8任一项所述的应用，其特征在于，所述中药组合物包括以下重量份的原料药物：黄芩6～9份、芍药3～6份、甘草3～6份和红枣3～6份。
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