CN113176263A - 利用高倍显微镜辅助鉴定玉米单倍体幼苗植株的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了利用高倍显微镜辅助鉴定玉米单倍体幼苗植株的方法,包括操作装置和运行步骤,操作装置中包含有高倍显微镜、设置在高倍显微镜载物台上的主框架以及计算机,运行步骤中包含有样品信息录入、批量样品自动检测、自动分析对比和数据结果自动建成四个过程,主框架上呈对称分布开设有竖向滑槽,且主框架上端设置有竖向托板,竖向托板上呈对称分布开设有横向滑槽,且竖向托板上设置有横向托板。本发明中采用高倍显微镜辅助鉴定的方式,针对单倍体诱导不显色的玉米幼苗根尖细胞染色体数目进行批量鉴定,挑选出单倍体幼苗进行移苗移栽,解决单倍体诱导不显色玉米材料难以实现单倍体育种的技术难题。

Description

利用高倍显微镜辅助鉴定玉米单倍体幼苗植株的方法
技术领域
本发明涉及实验检测技术领域,尤其涉及利用高倍显微镜辅助鉴定玉米单倍体幼苗植株的方法。
背景技术
单倍体技术是指通过自然发生或人工诱导获得单倍体,然后经过自然或人工染色体加倍恢复其倍性,并在此基础上进行选择从而获得所需纯系的方法。与传统育种方法相比,单倍体育种技术在自交系选育上具有快速、准确、高效的特点,因而越来越受到育种家的重视。但是玉米单倍体自然产生率极低,一般不超过0.1%;
因此,快速准确地鉴定玉米单倍体尤为关键。目前,玉米单倍体的鉴定方法主要有形态学鉴定、解剖学鉴定、细胞学鉴定、放射性方法鉴定和遗传标记鉴定及分子标记鉴定等,而在形态学鉴定方式中需要技术娴熟的科技人员进行操作,细胞学和解剖学鉴定准确,但速度较慢,不适合大批量材料的鉴定,放射法鉴定单倍体速度快,但是工作量大,且会对玉米植株造成不可逆的损伤,而遗传标记鉴定及分子标记鉴定这类方式中,因为标记系统中籽粒标记的表现差异很大,并且要花费大量的人力物力,单倍体诱导不显色,玉米材料难以实现单倍体育种,因此,为解决此类问题,我们提出利用高倍显微镜辅助鉴定玉米单倍体幼苗植株的方法。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点,而提出的利用高倍显微镜辅助鉴定玉米单倍体幼苗植株的方法。
为了实现上述目的,本发明采用了如下技术方案:
利用高倍显微镜辅助鉴定玉米单倍体幼苗植株的方法,包括操作装置和运行步骤,所述操作装置中包含有高倍显微镜、设置在高倍显微镜载物台上的主框架以及计算机,所述运行步骤中包含有样品信息录入、批量样品自动检测、自动分析对比和数据结果自动建成四个过程。
优选的,所述主框架上呈对称分布开设有竖向滑槽,且所述主框架上端设置有竖向托板,所述竖向托板上呈对称分布开设有横向滑槽,且所述竖向托板上设置有横向托板,所述竖向托板下表面呈对称分布固定安装有与竖向滑槽匹配的竖向滑条,且所述竖向托板一侧设置有竖向驱动件,所述横向托板下表面呈对称分布固定安装有与横向滑槽匹配的横向滑条,且所述横向托板的一侧设置有横向驱动件。
优选的,所述横向托板上表面呈对称分布固定安装有弹簧夹条,且所述横向托板上表面中心位置固定安装有L型定位条,所述横向托板和竖向托板中心位置均开设有与高倍显微镜上的遮光器匹配的通孔。
优选的,所述计算机与高倍显微镜中间位置设置有中转盒,所述中转盒上端电性连接有数据导线,且所述中转盒内部分别固定安装有PLC控制模块、摄像单元、处理器、存储器、分析模块和蜂鸣器,所述数据导线末端固定安装有套入式摄像头,所述套入式摄像头位于高倍显微镜的目镜处。
优选的,所述样品信息录入过程中,包括如下步骤:
SE01-1:选取单倍体玉米种子样品,对种子进行育苗出芽,采取幼苗根系上的组织并进行切片处理,沿着L型定位条将切片放置在横向托板上,此处为检测定位点,通过弹簧夹条对切片进行固定,调节好高倍显微镜上的焦距;
SE01-2:控制且调节横向驱动件和竖向驱动件的运动时间、运动轨迹和运动尺寸,并将参数录入到存储器中,此处为检测程序,并以检测程序为基础且通过处理器和PLC控制模块启动横向驱动件和竖向驱动,带动切片进行固定运动轨迹进行移动;
SE01-3:通过摄像头和摄像单元采集样品切片中的各个位置的图像信息,并通过处理器分析各个位置的图像信息,再次将图像信息录入到存储器中,并分析图像信息中的染色体数量,此处为对比数量,完成样品信息录入过程,取出切片样品,通过检测程序,使横向托板和竖向托板恢复原位。
优选的,所述批量样品自动检测过程中,包含有如下步骤:
SE02-1:按照SE01-1步骤中的方式,处理好各个待检样品的切片,并对每个切片进行标号记录;
SE02-2:按照切片的标号依次进行检测:首先在计算机中输入切片标号,并将对应标号的切片放置在横向托板上,依照检测程序进行图像采集,采集数据依次录入到存储器中;
SE02-3:在一段程序完成后,蜂鸣器发出警告声,可以进行下一段的检测鉴定,依次完成多个标号的切片检测鉴定。
优选的,所述自动分析对比过程中,包含有如下步骤:
SE03-1:通过计算机提取SE02-2和SE02-3中的图像信息,每组图像信息对应每组标号;
SE03-2:通过分析模块分析SE02-2和SE03-3中的图像信息,计算该图像信息中染色体数量,并与SE01-3中存入的样品信息中的染色体数量进行对比,以SE01-3中的样品信息为基础,计算SE02-2和SE02-3中的图像信息中的染色体数量,当SE02-2和SE02-3中的染色体数量与SE01-3中的染色体数量匹配时,该受检样本为单倍体植株,并将数据存储在存储器中,且得出玉米单倍体幼苗植株是否为单倍体的数据信息。
优选的,所述数据结果自动建成过程中,包含有如下步骤:
SE04-1:提取SE03-2过程中的数据,并传输到计算机中,通过计算机中的word软件进行文档自动生成。
本发明提出的利用高倍显微镜辅助鉴定玉米单倍体幼苗植株的方法,有益效果在于:
1、该发明中利用高倍显微镜辅助检测的方式,对玉米幼苗植株进行检测,整体操作过程,以一个样本为基础,可以同时进行批量鉴定操作,采用自动鉴定的方式,可以节约大量的操作时间,操作过程中,缩短鉴定时间;
2、并采用计算染色体数量来判断玉米植株是否单倍体植株,采用高倍显微镜对玉米植株样本进行入微观察,可以准确检测出玉米植株样本内部的染色体数量;
3、整体方法中,运用机器视觉的原理,通过高倍显微镜对玉米幼苗进行观测,通过对多组待检样本进行观测,并通过图像分析法与样本图像进行对比,具有自动化检测的作用,检测准确率较高。
附图说明
图1为本发明提出的利用高倍显微镜辅助鉴定玉米单倍体幼苗植株的方法的操作装置的结构示意图;
图2为本发明提出的利用高倍显微镜辅助鉴定玉米单倍体幼苗植株的方法的辅助结构部件的拆分图;
图3为本发明提出的利用高倍显微镜辅助鉴定玉米单倍体幼苗植株的方法的中转盒部件的剖切图;
图4是本发明提出的利用高倍显微镜辅助鉴定玉米单倍体幼苗植株的方法的运行步骤。
图中:1、主框架;2、中转盒;3、计算机;4、数据导线;5、套入式摄像头;6、高倍显微镜;7、横向托板;8、竖向托板;9、横向滑条;10、竖向滑条;11、横向滑槽;12、竖向滑槽;13、竖向驱动件;14、横向驱动件;15、L型定位条;16、弹簧夹条;17、PLC控制模块;18、摄像单元;19、处理器;20、存储器;21、分析模块;22、蜂鸣器。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。
在本发明的描述中,需要理解的是,术语“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“顶”、“底”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系,仅是为了便于描述本发明和简化描述,而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作,因此不能理解为对本发明的限制。
参照图1、图2和图3,利用高倍显微镜辅助鉴定玉米单倍体幼苗植株的方法,包括操作装置和运行步骤,操作装置中包含有高倍显微镜6、设置在高倍显微镜6载物台上的主框架1以及计算机3,运行步骤中包含有样品信息录入、批量样品自动检测、自动分析对比和数据结果自动建成四个过程,主框架1上呈对称分布开设有竖向滑槽12,且主框架1上端设置有竖向托板8,竖向托板8上呈对称分布开设有横向滑槽11,且竖向托板8上设置有横向托板7,竖向托板8下表面呈对称分布固定安装有与竖向滑槽12匹配的竖向滑条10,且竖向托板8一侧设置有竖向驱动件13,横向托板7下表面呈对称分布固定安装有与横向滑槽11匹配的横向滑条9,且横向托板7的一侧设置有横向驱动件14,横向托板7上表面呈对称分布固定安装有弹簧夹条16,且横向托板7上表面中心位置固定安装有L型定位条15,横向托板7和竖向托板8中心位置均开设有与高倍显微镜6上的遮光器匹配的通孔,计算机3与高倍显微镜6中间位置设置有中转盒2,中转盒2上端电性连接有数据导线4,且中转盒2内部分别固定安装有PLC控制模块17、摄像单元18、处理器19、存储器20、分析模块21和蜂鸣器22,数据导线4末端固定安装有套入式摄像头5,套入式摄像头5位于高倍显微镜6的目镜处。
本发明中包含的样品信息录入SE01、批量样品自动检测SE02、自动分析对比SE03和数据结果自动建成SE04四个步骤:
实施例一中,参照图4所示:
SE01-1:选取单倍体玉米种子样品,对种子进行育苗出芽,采取幼苗根系上的组织并进行切片处理,沿着L型定位条将切片放置在横向托板上,此处为检测定位点,通过弹簧夹条对切片进行固定,调节好高倍显微镜上的焦距;
SE01-2:控制且调节横向驱动件和竖向驱动件的运动时间、运动轨迹和运动尺寸,并将参数录入到存储器中,此处为检测程序,并以检测程序为基础且通过处理器和PLC控制模块启动横向驱动件和竖向驱动,带动切片进行固定运动轨迹进行移动;
SE01-3:通过摄像头和摄像单元采集样品切片中的各个位置的图像信息,并通过处理器分析各个位置的图像信息,再次将图像信息录入到存储器中,并分析图像信息中的染色体数量,此处为对比数量,完成样品信息录入过程,取出切片样品,通过检测程序,使横向托板和竖向托板恢复原位。
工作原理:以SE01~SE03步骤为主,架设高倍显微镜6,并在高倍显微镜6的载物台上架设好操作装置,并选取单倍体玉米幼苗植株样本,并制成切片;
再将样本切片放置L型定位条15中,并通过弹簧夹条16加以固定,以此处的位置为定位点;
通过PLC控制器17控制横向驱动件14和竖向驱动件13的启闭,带动横向托板7和竖向托板8进行有序运动,通过套入式摄像头5记录切片中的图像信息,并将图像信息传输到存储器20中存储,此处为基础样本图像信息,并通过存储器20记录横向驱动件14和竖向驱动件13的运行程序,为基础运行程序;
操作完成后,蜂鸣器22发出声音,代表一段操作完成,横向驱动件14和竖向驱动件13带动横向托板7和竖向托板8恢复原位。
实施例二中,参照图4所示:
所述批量样品自动检测过程中,包含有如下步骤:
SE02-1:处理好各个待检样品的切片,并对每个切片进行标号记录;
SE02-2:按照SE01-1步骤中的方式,按照切片的标号依次进行检测:首先在计算机中输入切片标号,并将对应标号的切片放置在横向托板上,依照检测程序进行图像采集,采集数据依次录入到存储器中;
SE02-3:在一段程序完成后,蜂鸣器发出警告声,可以进行下一段的检测鉴定,依次完成多个标号的切片检测鉴定。
所述自动分析对比过程中,包含有如下步骤:
SE03-1:通过计算机提取SE02-2和SE02-3中的图像信息,每组图像信息对应每组标号;
SE03-2:通过分析模块分析SE02-2和SE03-3中的图像信息,计算该图像信息中染色体数量,并与SE01-3中存入的样品信息中的染色体数量进行对比,以SE01-3中的样品信息为基础,计算SE02-2和SE02-3中的图像信息中的染色体数量,当SE02-2和SE02-3中的染色体数量与SE01-3中的染色体数量匹配时,该受检样本为单倍体植株,并将数据存储在存储器中,且得出玉米单倍体幼苗植株是否为单倍体的数据信息。
所述数据结果自动建成过程中,包含有如下步骤:
SE04-1:提取SE03-2过程中的数据,并传输到计算机中,通过计算机中的word软件进行文档自动生成。
根据待检样本的各项参数生成报告如下:
Figure BDA0003052949410000091
有益效果:通过将样本图像信息和待检样本图像信息进行图像分析对比,同时对大批量玉米幼苗植株进行鉴定,并自动生成表格,操作过程中可缩短大量操作时间,鉴定准确率较高;
针对单倍体诱导不显色的玉米幼苗根尖细胞染色体数目进行批量鉴定,挑选出单倍体幼苗进行移苗移栽,解决单倍体诱导不显色玉米材料难以实现单倍体育种的技术难题。
以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.利用高倍显微镜辅助鉴定玉米单倍体幼苗植株的方法,包括操作装置和运行步骤,其特征在于,所述操作装置中包含有高倍显微镜(6)、设置在高倍显微镜(6)载物台上的主框架(1)以及计算机(3),所述运行步骤中包含有样品信息录入、批量样品自动检测、自动分析对比和数据结果自动建成四个过程。
2.根据权利要求1所述的利用高倍显微镜辅助鉴定玉米单倍体幼苗植株的方法,其特征在于,所述主框架(1)上呈对称分布开设有竖向滑槽(12),且所述主框架(1)上端设置有竖向托板(8),所述竖向托板(8)上呈对称分布开设有横向滑槽(11),且所述竖向托板(8)上设置有横向托板(7),所述竖向托板(8)下表面呈对称分布固定安装有与竖向滑槽(12)匹配的竖向滑条(10),且所述竖向托板(8)一侧设置有竖向驱动件(13),所述横向托板(7)下表面呈对称分布固定安装有与横向滑槽(11)匹配的横向滑条(9),且所述横向托板(7)的一侧设置有横向驱动件(14)。
3.根据权利要求2所述的利用高倍显微镜辅助鉴定玉米单倍体幼苗植株的方法,其特征在于,所述横向托板(7)上表面呈对称分布固定安装有弹簧夹条(16),且所述横向托板(7)上表面中心位置固定安装有L型定位条(15),所述横向托板(7)和竖向托板(8)中心位置均开设有与高倍显微镜(6)上的遮光器匹配的通孔。
4.根据权利要求1所述的利用高倍显微镜辅助鉴定玉米单倍体幼苗植株的方法,其特征在于,所述计算机(3)与高倍显微镜(6)中间位置设置有中转盒(2),所述中转盒(2)上端电性连接有数据导线(4),且所述中转盒(2)内部分别固定安装有PLC控制模块(17)、摄像单元(18)、处理器(19)、存储器(20)、分析模块(21)和蜂鸣器(22),所述数据导线(4)末端固定安装有套入式摄像头(5),所述套入式摄像头(5)位于高倍显微镜(6)的目镜处。
5.根据权利要求1所述的利用高倍显微镜辅助鉴定玉米单倍体幼苗植株的方法,其特征在于,所述样品信息录入过程中,包括如下步骤:
SE01-1:选取单倍体玉米种子样品,对种子进行育苗出芽,采取幼苗根系上的组织并进行切片处理,沿着L型定位条将切片放置在横向托板上,此处为检测定位点,通过弹簧夹条对切片进行固定,调节好高倍显微镜上的焦距;
SE01-2:控制且调节横向驱动件和竖向驱动件的运动时间、运动轨迹和运动尺寸,并将参数录入到存储器中,此处为检测程序,并以检测程序为基础且通过处理器和PLC控制模块启动横向驱动件和竖向驱动,带动切片进行固定运动轨迹进行移动;
SE01-3:通过摄像头和摄像单元采集样品切片中的各个位置的图像信息,并通过处理器分析各个位置的图像信息,再次将图像信息录入到存储器中,并分析图像信息中的染色体数量,此处为对比数量,完成样品信息录入过程,取出切片样品,通过检测程序,使横向托板和竖向托板恢复原位。
6.根据权利要求1所述的利用高倍显微镜辅助鉴定玉米单倍体幼苗植株的方法,其特征在于,所述批量样品自动检测过程中,包含有如下步骤:
SE02-1:按照SE01-1步骤中的方式处理好各个待检样品的切片,并对每个切片进行标号记录;
SE02-2:按照切片的标号依次进行检测:首先在计算机中输入切片标号,并将对应标号的切片放置在横向托板上,依照检测程序进行图像采集,采集数据依次录入到存储器中;
SE02-3:在一段程序完成后,蜂鸣器发出警告声,可以进行下一段的检测鉴定,依次完成多个标号的切片检测鉴定。
7.根据权利要求1所述的利用高倍显微镜辅助鉴定玉米单倍体幼苗植株的方法,其特征在于,所述自动分析对比过程中,包含有如下步骤:
SE03-1:通过计算机提取SE02-2和SE02-3中的图像信息,每组图像信息对应每组标号;
SE03-2:通过分析模块分析SE02-2和SE03-3中的图像信息,计算该图像信息中染色体数量,并与SE01-3中存入的样品信息中的染色体数量进行对比,以SE01-3中的样品信息为基础,计算SE02-2和SE02-3中的图像信息中的染色体数量,当SE02-2和SE02-3中的染色体数量与SE01-3中的染色体数量匹配时,该受检样本为单倍体植株,并将数据存储在存储器中,且得出玉米单倍体幼苗植株是否为单倍体的数据信息。
8.根据权利要求1所述的利用高倍显微镜辅助鉴定玉米单倍体幼苗植株的方法,其特征在于,所述数据结果自动建成过程中,包含有如下步骤:
SE04-1:提取SE03-2过程中的数据,并传输到计算机中,通过计算机中的word软件进行文档自动生成。
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