CN113151356A - 稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞系及其制备方法 - Google Patents

稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞系及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN113151356A
CN113151356A CN202110492685.6A CN202110492685A CN113151356A CN 113151356 A CN113151356 A CN 113151356A CN 202110492685 A CN202110492685 A CN 202110492685A CN 113151356 A CN113151356 A CN 113151356A
Authority
CN
China
Prior art keywords
egfp
apoe
cho
stably expressing
cells
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202110492685.6A
Other languages
English (en)
Inventor
刘雅静
曹云霞
王梦瑶
宗凯
纪冬梅
梁丹
杜馨
张文香
魏兆莲
周平
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
First Affiliated Hospital of Anhui Medical University
Original Assignee
First Affiliated Hospital of Anhui Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by First Affiliated Hospital of Anhui Medical University filed Critical First Affiliated Hospital of Anhui Medical University
Priority to CN202110492685.6A priority Critical patent/CN113151356A/zh
Publication of CN113151356A publication Critical patent/CN113151356A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/775—Apolipopeptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0681—Cells of the genital tract; Non-germinal cells from gonads
    • C12N5/0682—Cells of the female genital tract, e.g. endometrium; Non-germinal cells from ovaries, e.g. ovarian follicle cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/60—Fusion polypeptide containing spectroscopic/fluorescent detection, e.g. green fluorescent protein [GFP]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C12N2510/02—Cells for production
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2800/00—Nucleic acids vectors
    • C12N2800/10—Plasmid DNA
    • C12N2800/106—Plasmid DNA for vertebrates
    • C12N2800/107—Plasmid DNA for vertebrates for mammalian

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞系及其制备方法。利用Lipofectamine 2000转染试剂将不同的人源ApoE质粒(ApoE2‑EGFP，ApoE3‑EGFP，ApoE4‑EGFP)和对照组质粒(N‑EGFP)转染到中国仓鼠卵巢细胞(chinese hamster ovary，CHO)中，随后用分选流式细胞仪将转染阳性的不同ApoE阳性细胞筛选出来，并用激光共聚焦显微镜、流式细胞仪和Western Blot进行ApoE的表达鉴定。本发明利用转染和细胞分选方法制备了能够稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞株，该细胞株为研究不同ApoE的生物学功能提供了一个很好的工具。

Description

稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞系及其制备方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞 系及其制备方法。
背景技术
载脂蛋白E(Apolipoprotein E，ApoE)，由299个氨基酸组成，分子量为34道尔顿，基因位于19号染色体上，ApoE主要通过与低密度脂蛋白受体(Low Density LipoproteinReceptor，LDLR)结合，在血浆胆固醇和甘油三脂的代谢中发挥作用。ApoE基因具有 多态性，其基因包含3种常见的等位基因：
Figure BDA0003045495930000011
和
Figure BDA0003045495930000012
产生六种表型E2/2、E3/3、 E4/4、E2/3、E2/4、E3/4。ApoE蛋白具有三个亚型：ApoE2，ApoE3和ApoE4，其区 别在于112位半胱氨酸(Cys)和158位的精氨酸(Arg)。ApoE3为一种较普遍的亚型，其 112位为Cys，158位为Arg。ApoE2在112位和158位都是Cys，则ApoE4在112位 和158位均为Arg。虽然每二种亚型之间只有易感氨基酸的微小变化，但这一微小变化 却引发了功能上的巨大改变。
ApoE基因多态性的分布具有种族和地域差异。对不同种族和地域的人群进行ApoE基因多态性分布的研究，已经成为近年来ApoE基因研究的热点之一。研究发现，ApoE 基因多态性与阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease，AD)、帕金森病、冠心病、高血脂症、 脑梗塞等多种疾病的发生密切相关。研究表明，ApoE基因型在AD发病过程中具有基 因-剂量效应。用敲除ApoE基因的转基因小鼠研究也表明，ApoE决定着AD发作的 年龄风险，ApoE4明显地提前疾病发作年龄。大量人群调查发现，
Figure BDA0003045495930000013
等位基因对应较 高的血浆胆固醇和LDL浓度，是心血管疾病的风险因子。
然而，迄今为止尚没有一个很好的体外细胞模型，可以为研究不同ApoE的生物学功能提供一个很好的工具。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞系及其制备方法，利用转染和细胞分选方法制备能够稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞 株，该细胞株为研究不同ApoE的生物学功能提供一个很好的工具。
为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞系的制备方法，包括以下步骤：
(1)将CHO细胞在DMEM细胞培养基中进行体外培养；
(2)利用转染试剂将不同的人源ApoE质粒ApoE2-EGFP、ApoE3-EGFP、 ApoE4-EGFP和对照组质粒N1-EGFP转染到CHO细胞中；
(3)4-6小时更换新的培养基，24-48小时后加入阳性筛选试剂G418；
(4)筛选转染阳性的ApoE2-EGFP、ApoE3-EGFP、ApoE4-EGFP和对照N1-EGFP 细胞株；
(5)对筛选出的阳性细胞进行鉴定，获得稳定表达人源ApoE2-EGFP，ApoE3-EGFP和ApoE4-EGFP的CHO细胞株。
在本发明一个较佳实施例中，在步骤(1)中，所述细胞培养基是含有10％胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素的DMEM细胞培养基。
在本发明一个较佳实施例中，在步骤(1)中，体外培养的培养条件为37℃、含5％CO2恒温培养箱中进行。
在本发明一个较佳实施例中，在步骤(2)中，所述转染试剂为Lipofectamine2000。
在本发明一个较佳实施例中，在步骤(3)中，所述阳性筛选试剂G418的浓度为 600μg/ml。
在本发明一个较佳实施例中，在步骤(4)中，筛选细胞的方法是利用分选流式细胞仪，细胞筛选的要求是各组细胞密度达到(3-5)×106个/ml。
在本发明一个较佳实施例中，在步骤(5)中，对筛选出的阳性细胞进行鉴定的方法包括利用激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、Western Blot检测各组细胞中ApoE的表 达：
(1)利用激光共聚焦显微镜对筛选出的细胞进行ApoE表达的鉴定：将分选后的 各组细胞分别接种到激光共聚焦显微镜专用培养皿中，48小时后利用激光共聚焦显微 镜可以直观地看到转染后带有绿色荧光的不同ApoE阳性细胞；
(2)利用流式细胞仪对筛选出的细胞进行ApoE表达的鉴定：将分选后的各组阳 性细胞(CHO-N1，CHO-ApoE2，CHO-ApoE3，CHO-ApoE4)和未转染的CHO细胞 继续培养，各组细胞数量达到5×106细胞/ml，消化，用流式细胞仪检测带有绿色荧光 的不同ApoE阳性细胞；
(3)利用Western Blot检测各组细胞中ApoE的表达：培养分选后的各组阳性细胞(CHO-N1，CHO-ApoE2，CHO-ApoE3，CHO-ApoE4)，待各组细胞数量达到5×106细胞/ml，消化，抽提细胞蛋白，用12％聚丙烯酰胺凝胶电泳分离各组细胞蛋白，经转 膜、封闭，孵育goatanti-ApoE抗体和HRP-anti-goat二抗后，检测各组细胞中ApoE蛋 白的表达。
为解决上述技术问题，本发明采用的另一个技术方案是：提供一种利用上述任一项 所述的稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞系的制备方法制备出的稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞系。
本发明的有益效果是：
(1)本发明以质粒为载体，利用细胞转染和细胞分选方法制备能够稳定表达人源不同ApoE蛋白的CHO细胞株，所述ApoE蛋白融合表达EGFP标签，方便ApoE蛋 白表达的检测，可以直接在激光共聚焦显微镜下进行活细胞的观察；
(2)与转染后采用细胞无限稀释法得到的单细胞克隆来源的稳转细胞系不同，本发明采用流式细胞分选的方法将所有转染阳性的细胞均分选出来，得到的不同ApoE2，ApoE3和ApoE4的稳转细胞系不是单细胞克隆来源的，而是来源于多个细胞的细胞系； 本发明建立了能够稳定表达人源不同ApoE蛋白的CHO细胞株，该细胞株为进一步深 入研究不同ApoE蛋白的生物学特性及药物研发奠定了坚实的基础；
(3)本发明构建了带有EGFP标签的过表达不同人源ApoE蛋白的细胞株，为研 究不同ApoE蛋白的生物学特性、卵巢功能及相关疾病提供了一个很好的工具。
附图说明
图1是利用激光共聚焦显微镜观察分选出的不同ApoE(ApoE2-EGFP， ApoE3-EGFP，ApoE4-EGFP)和对照(N1-EGFP)转染阳性细胞株。图A是转稳定染 N1-EGFP的CHO细胞(对照组CHO-N1)，图B是稳定转染ApoE2-EGFP的CHO细 胞(CHO-ApoE2)，图C是稳定转染ApoE3-EGFP的CHO细胞(CHO-ApoE3)，图 D是稳定转染ApoE4-EGFP的CHO细胞(CHO-ApoE4)。
图2是利用流式细胞仪检测各组细胞中ApoE的表达。图A是未转染质粒的CHO 细胞群，图B是稳定转染N1-EGFP的CHO细胞群，图C是稳定转染ApoE2-EGFP的 CHO细胞群，图D是稳定转染ApoE3-EGFP的CHO细胞群，图E是稳定转染ApoE4-EGFP的细胞群。
图3是利用Western Blot检测各组细胞中ApoE的表达，图3A是CHO-N1、 CHO-LC3、和MT+CHO-LC3各组细胞中TMRE染色结果图，图3B是各组的TMRE 染色平均荧光强度。图3A是CHO-N1、CHO-ApoE2、CHO-ApoE3、和CHO-ApoE4 各组细胞中ApoE表达的Western Blot结果图，图3B是各组细胞中ApoE表达水平的 相对定量图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更 易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。
实施例1：
不同ApoE质粒转染CHO细胞，并用分选流式分选出稳定表达不同ApoE的CHO 细胞株，并利用激光共聚焦显微镜观察分选出的不同ApoE(ApoE2-EGFP， ApoE3-EGFP，ApoE4-EGFP)和对照(N1-EGFP)转染阳性细胞株，如图1所示。
卵巢上皮细胞CHO细胞系购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库，胰酶消化CHO细胞，接种于60mm培养皿(5×105个/ml)，培养24小时后，应用转染试剂lipofectamine 2000将ApoE2-EGFP，ApoE3-EGFP，ApoE4-EGFP和对照N1-EGFP分别 转染到仓鼠卵巢上皮细胞CHO中；48小时后，利用分选流式细胞仪将转染成功的CHO 细胞分选出来；在含有600u g/ml的G418完全培养基(包括Dubucco’s modified Eagle’s medium(DMEM)，10％胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)，2mM谷氨酰胺 (L-glutamine)、100单位/ml青霉素(penicillin)、0.1mg/L链霉素(streptomycin)) 中培养，筛选出稳定表达不同ApoE的CHO-N1、CHO-ApoE2、CHO-ApoE3和 CHO-ApoE4细胞株，利用激光共聚焦显微镜进行观察。
实施例2：利用流式细胞术检测各组细胞中ApoE的表达，如图2所示。
将分选后的CHO-N1、CHO-ApoE2、CHO-ApoE3和CHO-ApoE4各组细胞及未转 染的CHO细胞接种到60mm培养皿中，待细胞密度达到5×106个/ml，用0.5％胰酶消 化各组细胞，2000rpm离心10分钟。弃去上清，将CHO-N1、CHO-ApoE2、CHO-ApoE3、 CHO-ApoE4和CHO各组细胞沉淀用新鲜PBS重悬，重复洗3次。用PBS重悬后的各 组细胞浓度达到5×105个/ml后，在流式细胞仪上进行检测。从图2中可以看出，转 染不同ApoE的各组细胞中ApoE的表达量基本一致。
实施例3：利用Western Blot检测各组细胞中ApoE的表达，如图3所示。
①从CHO-N1、CHO-ApoE2、CHO-ApoE3和CHO-ApoE4各组细胞中抽提蛋白；
从CHO-N1、CHO-ApoE2、CHO-ApoE3和CHO-ApoE4各组细胞培养皿中小心倾 去培养液。用预冷的PBS清洗细胞2次，小心倾去PBS。细胞培养皿中加入预冷的含 抑制剂的蛋白质抽提试剂(含蛋白酶抑制剂，PMSF和磷酸酶抑制剂的混合液)，轻轻 摇动1分钟。用细胞刮将细胞刮下来，转移细胞悬浮液到离心管中，置冰上裂解15分 钟。裂解液于预冷的离心机中12，000rpm离心15分钟。弃去沉淀，CHO-N1、 CHO-ApoE2、CHO-ApoE3和CHO-ApoE4各组细胞上清液(蛋白)立刻转移入新的离心 管中，100℃煮10分钟，-80℃保存待用。
②利用Western Blot检测各组细胞中ApoE的表达，验证分选细胞的纯度。
CHO-N1、CHO-ApoE2、CHO-ApoE3和CHO-ApoE4各组蛋白样品在12％的SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶上分离，然后转移到硝酸纤维素膜上，用ApoE的抗体进行检 测。对照组(CHO-N1)ApoE几乎没有表达，CHO-ApoE2、CHO-ApoE3和CHO-ApoE4 表达量基本一致。
应当理解本文所述的例子和实施方式仅为了说明，并不用于限制本发明，本领域技 术人员可根据它做出各种修改或变化，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、 等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞系的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将CHO细胞在DMEM细胞培养基中进行体外培养；
(2)利用转染试剂将不同的人源ApoE质粒ApoE2-EGFP、ApoE3-EGFP、ApoE4-EGFP和对照组质粒N1-EGFP转染到CHO细胞中；
(3)4—6小时更换新的培养基，24—48小时后加入阳性筛选试剂G418；
(4)筛选转染阳性的ApoE2-EGFP、ApoE3-EGFP、ApoE4-EGFP和对照N1-EGFP细胞株；
(5)对筛选出的阳性细胞进行鉴定，获得稳定表达人源ApoE2-EGFP，ApoE3-EGFP和ApoE4-EGFP的CHO细胞株。
2.根据权利要求1所述的稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞系的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述细胞培养基是含有10％胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素的DMEM细胞培养基。
3.根据权利要求1所述的稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞系的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，体外培养的培养条件为37℃、含5％CO2恒温培养箱中进行。
4.根据权利要求1所述的稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞系的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述转染试剂为Lipofectamine 2000。
5.根据权利要求1所述的稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞系的制备方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述阳性筛选试剂G418的浓度为600μg/ml。
6.根据权利要求1所述的稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞系的制备方法，其特征在于，在步骤(4)中，筛选细胞的方法是利用分选流式细胞仪，细胞筛选的要求是各组细胞密度达到(3—5)×106个/ml。
7.根据权利要求1所述的稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞系的制备方法，其特征在于，在步骤(5)中，对筛选出的阳性细胞进行鉴定的方法包括利用激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、Western Blot检测各组细胞中ApoE的表达。
8.利用权利要求1至7任一项所述的稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞系的制备方法制备出的稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞系。
CN202110492685.6A 2021-04-29 2021-04-29 稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞系及其制备方法 Pending CN113151356A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110492685.6A CN113151356A (zh) 2021-04-29 2021-04-29 稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞系及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110492685.6A CN113151356A (zh) 2021-04-29 2021-04-29 稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞系及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN113151356A true CN113151356A (zh) 2021-07-23

Family

ID=76873521

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110492685.6A Pending CN113151356A (zh) 2021-04-29 2021-04-29 稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞系及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113151356A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114350617A (zh) * 2022-01-24 2022-04-15 安徽医科大学第一附属医院 稳定表达人源不同ApoE基因型的Raw264.7细胞系的应用及其制备方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20160251665A1 (en) * 2014-09-12 2016-09-01 Whitehead Institute For Biomedical Research Cells expressing apolipoprotein e and uses thereof
CN111040999A (zh) * 2019-12-31 2020-04-21 南京拂晓生物科技有限公司 一种稳定表达gpc3的重组cho细胞株及其应用
CN112226460A (zh) * 2020-10-22 2021-01-15 广东省农业科学院动物卫生研究所 稳定表达猪源宿主限制因子a3z2分子的细胞系的筛选、培育方法及其应用
CN112481306A (zh) * 2020-11-30 2021-03-12 安徽医科大学第一附属医院 基于过度自噬的细胞损伤模型的构建方法
CN112538113A (zh) * 2020-08-06 2021-03-23 武汉天德生物科技有限公司 杂交瘤细胞株ace8及其产生的apoe4点突变单克隆抗体

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20160251665A1 (en) * 2014-09-12 2016-09-01 Whitehead Institute For Biomedical Research Cells expressing apolipoprotein e and uses thereof
CN111040999A (zh) * 2019-12-31 2020-04-21 南京拂晓生物科技有限公司 一种稳定表达gpc3的重组cho细胞株及其应用
CN112538113A (zh) * 2020-08-06 2021-03-23 武汉天德生物科技有限公司 杂交瘤细胞株ace8及其产生的apoe4点突变单克隆抗体
CN112226460A (zh) * 2020-10-22 2021-01-15 广东省农业科学院动物卫生研究所 稳定表达猪源宿主限制因子a3z2分子的细胞系的筛选、培育方法及其应用
CN112481306A (zh) * 2020-11-30 2021-03-12 安徽医科大学第一附属医院 基于过度自噬的细胞损伤模型的构建方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
庄骏等: "ApoE基因型对JAR细胞系芳香化酶mRNA转录的影响", 《中国科学技术大学学报》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114350617A (zh) * 2022-01-24 2022-04-15 安徽医科大学第一附属医院 稳定表达人源不同ApoE基因型的Raw264.7细胞系的应用及其制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Park et al. Hsp104 overexpression cures Saccharomyces cerevisiae [PSI+] by causing dissolution of the prion seeds
Peris et al. Tubulin tyrosination is a major factor affecting the recruitment of CAP-Gly proteins at microtubule plus ends
Lakowski et al. Effective transplantation of photoreceptor precursor cells selected via cell surface antigen expression
Derbyshire et al. Proteomic analysis of microtubule interacting proteins over the course of xylem tracheary element formation in Arabidopsis
Jablonka et al. Co-regulation of survival of motor neuron (SMN) protein and its interactor SIP1 during development and in spinal muscular atrophy
Chang et al. Phosphorylation of MAP4 affects microtubule properties and cell cycle progression
US20160252493A1 (en) 3d adcc nk facs assay
WO2016017795A1 (ja) ヒト間葉系幹細胞の品質評価方法、及び、そのためのモノクローナル抗体
Kerscher et al. Novel role for a Saccharomyces cerevisiae nucleoporin, Nup170p, in chromosome segregation
Chakrabarti et al. Mitochondrial membrane potential identifies cells with high recombinant protein productivity
Spugnesi et al. Effect of the expression of BRCA2 on spontaneous homologous recombination and DNA damage-induced nuclear foci in Saccharomyces cerevisiae
CN113151356A (zh) 稳定表达人源不同ApoE的CHO细胞系及其制备方法
Chen et al. Regulation of Mac-2BP secretion is mediated by its N-glycan binding to ERGIC-53
WO2006129735A1 (ja) 遺伝子導入細胞及び細胞分析方法
US5260191A (en) Method for diagnosing tumors
Tarkowski et al. Pathological mTOR mutations impact cortical development
Maeda et al. Actin filament disruption alters phragmoplast microtubule dynamics during the initial phase of plant cytokinesis
EP4263804A1 (en) A dual cardiac-blood model system for disease modelling and drug screening
Gradisnik et al. HUIEC, Human intestinal epithelial cell line with differentiated properties: process of isolation and characterisation
Schmucker et al. Novel alternatively spliced isoforms of the neurofibromatosis type 2 tumor suppressor are targeted to the nucleus and cytoplasmic granules
CN113881701A (zh) 一种阳性转染细胞亲和分选方法及试剂盒
Zhang et al. The m6A methyltransferase METTL16 negatively regulates MCP1 expression in mesenchymal stem cells during monocyte recruitment
CN112481306B (zh) 基于过度自噬的细胞损伤模型的构建方法
CN107446883B (zh) Treg细胞与心肌成纤维细胞共培养时的互促增殖作用
Lozovatsky et al. CASK deletion in intestinal epithelia causes mislocalization of LIN7C and the DLG1/Scrib polarity complex without affecting cell polarity

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination