CN113143824A

CN113143824A - 一种具有美白功效的组合物及其制备方法

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Publication number: CN113143824A
Application number: CN202110497178.1A
Authority: CN
Inventors: 刘忠; 杨涛
Original assignee: Guangzhou Yihe Biotechnology Co ltd
Current assignee: Guangzhou Yihe Biotechnology Co ltd
Priority date: 2021-05-07
Filing date: 2021-05-07
Publication date: 2021-07-23
Anticipated expiration: 2041-05-07
Also published as: CN113143824B

Abstract

本发明涉及化妆品技术领域，尤其是涉及一种具有美白功效的组合物及其制备方法。本发明的组合物原材料包括槐花、桑树皮、蛇婆子、光甘草根、石榴。分别从理化水平、细胞水平及人体功效进行评价，具体包括体外酪氨酸酶抑制、B16F10细胞毒性、胞内酪氨酸酶抑制、B16F10细胞黑色素生成实验及临床，验证本发明组合物具有优异的美白效果，组合物浓度为10μg/mL时对酪氨酸酶活性的抑制率约为82％，对酪氨酸酶活性抑制的IC50值约为0.143μg/mL，即表明本发明所提供的一种具有美白功效的组合物具有优异的抑制酪氨酸酶活性的效果。

Description

一种具有美白功效的组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种具有美白功效的组合物及其制备方法。

背景技术

在人体的组织中，皮肤直接暴露于外部环境，并在人体内部与外部环境之间起到保护的作用。它能够抵御包括化学物质，紫外线和微生物入侵在内的侵害。

肤色由黑色素，血红蛋白，胡萝卜素等决定，其中，黑色素尤为重要。除了确定人类皮肤的颜色外，黑色素还具有皮肤保护功能，例如紫外线吸收活性，自由基清除剂的活性等。然而，由于外部环境的变化(例如过度暴露于紫外线，空气污染，压力等)而导致黑色素的产生过量时，皮肤中会发生色素沉着现象，从而产生皮肤黑色素，小棕点，雀斑等，甚至可能导致皮肤癌。

人体中的黑素细胞是抵御外界紫外线防御机制的一部分，能够防止紫外线引起的皮肤细胞凋亡。当皮肤暴露于紫外线环境下时，酪氨酸酶就被激活。由于酪氨酸酶激活皮肤组织中存在的酪氨酸以氧化二羟基苯丙氨酸(DOPA)和多巴醌，从而在皮肤组织的黑素细胞中产生黑色素。这种黑色素被转移到皮肤的角质层形成细胞，并通过角质化过程保护皮肤免受紫外线的伤害。

由于皮肤黑色素的产生原因和机理是已知的，因此，为了研发皮肤美白化妆品，需要寻找对酪氨酸酶的活性具有抑制作用或抑制黑素细胞产生黑色素的材料及制备方法，所述酪氨酸酶是与皮肤黑色素形成过程有关的酶，通常使用或通过抑制黑色素产生过程中的部分反应来减少黑色素产生的方法。用于此目的的代表性材料包括化学材料，例如氢醌、抗坏血酸或对苯二酚。然而，化学材料存在诸多的局限性，如氢醌可能会产生有害反应包括刺激性皮炎、发炎后色素过度沉着、诱发黄褐病等；抗坏血酸不适合用作黑色素生成抑制剂，因为它本身的稳定性差，且由于明显的皮肤刺激性，其存在局限性；由于与皮肤刺激性和安全性有关的问题，对苯二酚用作化妆品材料也受到限制。

因此，有必要在天然植物中继续进行研究，期望研发出温和有效、无毒副作用的用于美白的改进产品。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种具有美白功效的组合物及其制备方法。本发明提供的一种具有美白功效的组合物及其制备方法，其能抑制黑色素的产生，并通过抑制酪氨酸酶的活性来减少黑色素的形成，具有天然温和有效，无毒副作用，无刺激的优点。

本发明的技术方案是：

一种具有美白功效的组合物，其包括槐花、桑树皮、蛇婆子、光甘草根、石榴。

进一步地，所述组合物包括以下重量份数计的原料：槐花2～6份、桑树皮3～6份、蛇婆子2～6份、光甘草根6～10份、石榴4～8份。

更进一步地，所述组合物由以下重量份数计的原料组成：槐花6份、桑树皮5份、蛇婆子4份、光甘草根10份、石榴8份。

进一步地，该组合物制备方法包括以下步骤：

1)将槐花、桑树皮、蛇婆子、光甘草根、石榴洗净，在避光、40-80℃条件下干燥粉碎，得原料；

2)将步骤1)中的原料分别用溶剂进行提取，过滤，保留滤液并弃掉废渣，旋蒸滤液为原体积的十分之一，得到浓缩液；

3)将步骤2)所得的浓缩液用大孔树脂脱色，得脱色浓缩液，对脱色浓缩液进行真空冷凝干燥，得到浓缩粉；

4)将步骤3)所得的槐花、桑树皮、蛇婆子、光甘草根、石榴浓缩粉混合，得组合物，并置于4℃的环境下避光保存。

更进一步地，所述步骤2)中的溶剂可以是任何药学上可接受的有机溶剂或去离子水。

进一步地，所述步骤2)中的有机溶剂为甲醇，乙醇，丙醇，异丙醇，丁醇，丙酮，苯，氯仿，乙酸乙酯，二氯甲烷，己烷，环己烷中的一种或一种以上。

进一步地，所述步骤2)中的提取方法为加热提取，冷却提取，回流冷却提取，蒸汽蒸馏，超声提取，超临界CO₂萃取，加压提取中的一种。

进一步地，所述步骤3)中的脱色浓缩液需要在30-50℃下真空冷凝干燥。

本发明还提供了一种所述的具有美白功效组合物的制备方法所制得的组合物。

本发明还提供了一种所述的具有美白功效的组合物在美白化妆品中的应用。

更进一步地，该组合物可作为化妆品原料用于美白化妆品中。将组合物作为原材料应用到水、乳、霜、精华、凝胶、面膜等化妆品中，1天涂抹两次，坚持使用8-12周。

本发明提供的一种具有美白功效的组合物及其制备方法，其中具有美白效果的组合物包括有效量的天然植物提取物。槐花富含黄酮能抑制黑素生成，具有美白和抗衰老等功效；桑树皮富含羟白藜芦醇和黄酮，能够抑制黑素生成，其作用与曲酸相当，且效果持久；蛇婆子能够直接和间接抑制酪氨酸酶，温和地促进细胞脱落与更新，促进黑素残留物的消除等功效；光甘草根含光甘草酸、光果甘草定、光果甘草素和光果甘草醇等，具有强大的美白效果，此外具有抗炎、舒缓、抑菌、抗粉刺、抗衰老等活性；石榴富含鞣花酸和多酚，具有美白、抗癌等生物活性。

与现有技术相比，本发明提供的一种具有美白功效的组合物及其制备方法，具有以下优势：

(1)本发明的组合物原材料包括槐花、桑树皮、蛇婆子、光甘草根、石榴，经申请人不断研究、试验，分别从理化水平、细胞水平及人体功效评价，包括体外酪氨酸酶抑制、B16F10细胞毒性、胞内酪氨酸酶抑制、B16F10细胞黑色素生成实验及临床验证本发明组合物的功效，均显示本发明所提供的一种具有美白功效的组合物具有优异的美白效果。

(2)由本发明实施例1所制得的一种具有美白功效的组合物，浓度为10μg/mL时对酪氨酸酶活性的抑制率约为82％，对酪氨酸酶活性抑制的IC50值约为0.143μg/mL，即表明本发明所提供的一种具有美白功效的组合物具有优异的抑制酪氨酸酶活性的效果。

(3)本发明提供的一种具有美白功效的组合物，可用于护肤品如水、乳液、霜、精华、凝胶、面膜等中，适合于男女成年人群使用。

附图说明

图1为本发明实施例1～3和对比实施例1～3所制得的具有美白功效的组合物对体外理化水平酪氨酸酶抑制率影响实验的结果图；

图2为本发明实施例1所制得不同浓度的具有美白功效的组合物对体外理化水平酪氨酸酶抑制率影响实验的结果图；

图3为本发明实施例1所制得不同浓度的具有美白功效的组合物对体外理化水平酪氨酸酶抑制率影响曲线；

图4为本发明实施例1所制得不同浓度的具有美白功效的组合物对B16F10细胞毒性实验结果图；

图5为本发明实施例1所制得不同浓度的具有美白功效的组合物胞内酪氨酸酶抑制活性的影响实验结果图；

图6为本发明实施例1所制得不同浓度的具有美白功效的组合物B16F10细胞黑色素生成的影响实验结果图。

注：*P＜0.05、**P＜0.01、***P＜0.001、****P＜0.0001；*表示组合物在该浓度作用下与空白对照组对比有显著性差异。

具体实施方式

以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的保护范围之内。

其中，本发明所用试剂均为常用试剂，均可在常规试剂生产销售公司购买。

实施例1～3具有美白功效的组合物及其制备方法

(1)试验材料：干燥的槐花、桑树皮、蛇婆子、光甘草根、石榴、70％乙醇。

(2)本发明提供的具有美白功效的组合物，原料成分以重量份计，如表1所示：

表1具有美白功效组合物的配方

(3)制备方法：

1)将槐花、桑树皮、蛇婆子、光甘草根、石榴洗净，随后在避光、60℃下干燥、粉碎，得原料，并存放在4℃的环境中；所述槐花、桑树皮、蛇婆子、光甘草根、石榴按表1所示的重量份计；

2)将步骤1)中的原料分别进行提取，加入粉末总体积10倍的70％乙醇，在室温下浸泡提取24小时，过滤，保留滤液并弃掉废渣，旋蒸滤液为原体积的十分之一，得到浓缩液；

3)将步骤2)所得的浓缩液用大孔树脂脱色，得脱色浓缩液，将所得脱色浓缩液在-20℃过夜冷冻，随后在40℃的温度下进行真空冷凝干燥，得到浓缩粉；

4)将步骤3)所得的槐花、桑树皮、蛇婆子、光甘草根、石榴浓缩粉进行组合，得组合物，并装入容器置于4℃的环境下避光保存。

实施例4一种含具有美白功效的组合物的美白淡斑乳液

一种含具有美白功效的组合物的美白淡斑乳液配方，如表2所示：

表2一种含具有美白功效的组合物的美白淡斑乳液配方

本发明提供的一种含具有美白功效组合物的美白淡斑乳液制备方法，包括以下步骤：

1)将B相加入A相混合，搅拌并加热至78℃，保温均质4min；

2)将D相搅拌均匀，备用；

3)将温度降到40℃，然后再向步骤1)中加入C相和D相，维持温度40℃，搅拌15min，搅拌速率为60rpm，调节溶液的pH值至5.5，得含具有美白功效的组合物的美白淡斑乳液。

对比实施例1～3具有美白功效的组合物及其制备方法

(2)本发明提供的具有美白功效组合物的配方，如表3所示：

表3具有美白功效组合物的配方

注：“～”为未添加任何物质。

所述对比实施例1～3的制备方法与实施例1～3类似。

对比实施例1与实施例1的区别在于,组合物的配比与之不同，其他参数和操作与实施例1相同。

对比实施例2与实施例1的区别在于,不包含光甘草根，其他参数和操作与实施例1相同。

对比实施例3与实施例1的区别在于,不包含桑树皮，其他参数和操作与实施例1相同。

试验例一～四所用的试剂、仪器如下所示：

1、试验材料：

本发明实施例1～3和对比实施例1～3所制得的具有美白功效的组合物、DMEM基础培养基、1640完全培养基、青霉素/链霉素溶液、胎牛血清(FBS)、胰酶(0.25％，含EDTA)、磷酸盐缓冲液(PBS)、DMSO、NaOH、α-MSH、2mg/mLα-熊果苷(阳性对照)、CCK8

2、主要仪器：

酶标仪、混匀仪、恒温恒湿水浴锅、倒置显微镜、二氧化碳培养箱、多管架自动平衡离心机、自动细胞计数仪

试验例一、体外酪氨酸酶抑制试验

1、试验材料：本发明实施例1～3和对比实施例1～3所制得的具有美白功效的组合物、1mMα-熊果苷稀释液

2、试验对象：3mM L-酪氨酸溶液

3、试验方法：

将实施例1所制得的具有美白功效的组合物以含0.5％DMSO的PBS溶解稀释成不同浓度的溶液(分别为0.01，0.2，0.4，1，5，10μg/mL)，并分别在96孔板中加入50μL本发明实施例1～3和对比实施例1～3所制得的具有美白功效的组合物受检样品(10μg/mL)、不同浓度的实施例1所制得的具有美白功效的组合物受检样品和1mMα-熊果苷稀释液及40μL 100U/mL酪氨酸酶溶液，振荡混匀后于37℃下孵育10min。随后分别加入110μL 3mM L-酪氨酸溶液，振荡混匀后于37℃下孵育，分别于0min、20min后检测OD450，得出样品对酪氨酸酶活性的影响。

式中：样品组的吸光度为As，20min；样品阴性对照组的吸光度为As，0min；空白组的吸光度为A₀。

4、试验结果

如图1所示，浓度为10μg/mL的实施例1～3和对比实施例1～3所制得的具有美白功效的组合物样品对酪氨酸酶活性均具有显著的抑制作用。与实施例1～3相比，对比实施例1～3制得的具有美白功效的组合物样品对酪氨酸酶活性抑制率较低，表明本发明实施例实施例1～3所制得的具有美白功效的组合物对酪氨酸酶活性抑制作用较对比实施例1～3更为优异。实施例1所制得的具有美白功效的组合物样品对酪氨酸酶活性抑制作用最优，为本发明的最佳实施例。

如图2和图3所示，在0.01～10μg/mL浓度下的实施例1所制得的具有美白功效的组合物，其浓度为10μg/mL时对酪氨酸酶活性的抑制率约为82％，对酪氨酸酶活性抑制的IC50值约为0.143μg/mL，表明本发明所提供的一种具有美白功效的组合物具有优异的抑制酪氨酸酶活性的效果。

试验例二 B16F10细胞毒性试验

1、试验材料：本发明实施例1所制得的具有美白功效的组合物、2mg/mLα-熊果苷

2、试验对象：B16F10细胞

3、试验方法：取对数生长期B16F10细胞，用胰酶(0.25％，含EDTA)消化，离心(1000rpm，5min)，于自动细胞计数仪中计数，以3*10^³cells/孔密度接种于96孔板，每孔100μL细胞悬液。铺板24h后，以2mg/mLα-熊果苷作阳性对照，以1640完全培养基作为空白对照，并加入含有不同浓度实施例1所制得的具有美白功效的组合物受检样品的加药培养基，每个浓度设置3个复孔，48h后每孔加入10μL CCK8，孵育2h后将96孔细胞培养板放入酶标仪中，以630nm为参比波长，在450nm处测定吸光度，记录测定结果。

式中：样品组的吸光度为As；空白组的吸光度为A₀。

4、试验结果：

如图4所示，由本发明实施例1所制得的一种具有美白功效的组合物在小于3.13μg/mL浓度下，对B16F10细胞活性无明显抑制作用，该组合物在1.56mg/mL浓度时，抑制率高于50％，按照欧盟标准，可认为此组合物无毒或毒性极小，可用于B16F10细胞内酪氨酸酶活性及对黑色素生成抑制作用影响的试验。

试验例三 B16F10细胞内酪氨酸酶活性试验

2、试验对象：B16F10细胞内酪氨酸酶

3、试验方法：

取对数生长期B16F10细胞，用胰酶(0.25％，含EDTA)消化，离心(1000rpm，5min)，于自动细胞计数仪中计数，以3*10^³cells/孔密度接种于96孔板，每孔100μL细胞悬液。铺板24h后，以2mg/mLα-熊果苷作阳性对照，样品溶解试剂作为空白对照，作为模型，并分别加入含有不同浓度的实施例1所制得的具有美白功效组合物受检样品于加药培养基，每个浓度设置3个复孔，48h后每孔加入90μL 1％TritonX-100和10μL 2mM左旋多巴(底物)，孵育1h后将96孔细胞培养板放入酶标仪中，475nm处测定吸光度，记录测定结果。

式中：样品组的吸光度为As；模型组的吸光度为A_C；空白组的吸光度为A₀。

4、试验结果

如图5所示，由实施例1所制得的一种具有美白功效的组合物在浓度低于3.13μg/mL时，对B16F10细胞内酪氨酸酶活性具有显著的抑制作用，且呈一定的浓度依赖性。

试验例四 B16F10细胞内黑色素含量试验

1、试验材料：

本发明实施例1所制得的具有美白功效的组合物、2mg/mLα-熊果苷

2、试验对象：B16F10细胞内黑色素

3、试验方法：

取对数生长期B16F10细胞，用胰酶(0.25％，含EDTA)消化，离心(1000rpm，5min)，于自动细胞计数仪中计数，以3*10^⁴cells/孔密度接种于细胞培养皿，每孔1mL细胞悬液。铺板24h后，以2mg/mLα-熊果苷作阳性对照，并加入含有不同浓度实施例1所制得的具有美白功效的组合物受检样品于加药培养基，每个浓度设置3个复孔，48h后弃上清，用PBS洗两遍，弃PBS，每孔加入400μL胰酶(0.25％，含EDTA)，消化10min，轻轻吹打数次，使贴于底部的细胞脱落。将各孔的细胞消化液分别转移至EP管中，离心(13200rpm，30min)。弃上层清液，向EP管中各加入100μL含有10％DMSO的1M NaOH裂解细胞，于80℃水浴1h。水浴过程中振荡一次，取出EP管用漩涡振荡仪混匀，将细胞裂解液转移至96孔板中，酶标仪在405nm处测定吸光度，记录测定结果。

式中：样品组的吸光度为As；空白组的吸光度为A₀。

4、试验结果

如图6所示，由实施例1所制得的具有美白功效的组合物在浓度低于3.13μg/mL时，对B16F10细胞内黑色素生成具有显著的抑制作用且呈一定的浓度依赖性。

通过以上结果，证实了本发明提供的一种具有美白功效的组合物在有效浓度内对细胞无毒，且能够有效抑制酪氨酸酶的活性，对黑色素生成具有显著的抑制作用，表明本发明提供的具有美白功效的组合物具有优异的美白效果。

试验例五临床评估本发明实施例4所制得的含具有美白功效组合物的美白淡斑乳液之美白淡斑效果

1、试验材料：本发明实施例4所制得的含具有美白功效的组合物的美白淡斑乳液

2、试验方法：

选取30名健康志愿者(年龄在20～60岁之间，平均年龄40±7岁)，要求面部显示出色素沉着过度(面部斑点、偏黑)或偏黄，研究期间志愿者不使用防晒及美白类产品。

志愿者脸部每天早晚共涂抹2次本发明实施例4所制得的一种含具有美白功效的组合物的美白淡斑乳液。在涂抹前，志愿者统一用洗面奶清洗面部，并用纸巾轻轻擦拭掉多余的水分，志愿者稳定20min后，分别在涂抹前及涂抹第2、4、8和12周后，用Chroma-Meter色度分析仪评估3次同一个区域皮肤色素沉着的变化，结果用均值表示。所有生物计量学测量均在恒温的环境中进行，保持温度(22℃±2℃)，相对湿度(50％±5％)。

3、试验结果：

表4色度表记录颜色参数变化结果

产品测试时间(周)	L*值	b*值
			0	57.6±2.9	18.8±3.2
2	59.8±3.7	18.5±3.4
			4	62.2±2.5	18.1±2.7
8	65.8±2.1*	17.7±2.9
			12	71.5±1.6***	17.3±2.1

注：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；*表示组与0周相比有显著性差异。L*值(0～100)表示颜色的明度，L*值越高表明越白皙；b*值表示色度，-b*为蓝色，+b*为黄色，b*值越低表明皮肤黄度越低。

结果如表4所示，使用本发明实施例4美白乳液2、4、8和12周后，皮肤亮度L*显著升高，表明皮肤在使用产品后随使用时间推移而变得越来越白皙，皮肤黄度b*值逐渐降低，表明皮肤在使用产品后可改善皮肤暗沉。因此，本发明提供的一种具有美白功效的组合物能够皮肤美白，淡化色斑。

上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims

1.一种具有美白功效的组合物，其特征在于，该组合物包括槐花、桑树皮、蛇婆子、光甘草根、石榴。

2.根据权利要求1所述的具有美白功效的组合物，其特征在于，所述组合物包括以下重量份数计的原料：槐花2～6份、桑树皮3～6份、蛇婆子2～6份、光甘草根6～10份、石榴4～8份。

3.根据权利要求2所述的具有美白功效的组合物，其特征在于，所述组合物由以下重量份数计的原料组成：槐花6份、桑树皮5份、蛇婆子4份、光甘草根10份、石榴8份。

4.根据权利要求1～3任一所述的具有美白功效的组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

5.根据权利要求4所述的具有美白功效组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中的溶剂可以是任何药学上可接受的有机溶剂或去离子水。

6.根据权利要求5所述的具有美白功效组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中的有机溶剂为甲醇，乙醇，丙醇，异丙醇，丁醇，丙酮，苯，氯仿，乙酸乙酯，二氯甲烷，己烷，环己烷中的一种或一种以上。

7.根据权利要求4所述的具有美白功效组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤2)中的提取方法为加热提取，冷却提取，回流冷却提取，蒸汽蒸馏，超声提取，超临界CO₂萃取，加压提取中的一种。

8.根据权利要求4所述的具有美白功效组合物的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中的脱色浓缩液需要在30-50℃下真空冷凝干燥。

9.一种根据权利要求4～8任一所述的具有美白功效组合物的制备方法所制得的组合物。

10.一种根据权利要求1～8任一所述的具有美白功效的组合物在美白化妆品中的应用。