CN113133454A - 花粉多糖提取液在植物抗逆中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及花粉多糖提取液在植物抗逆中的应用，属于农业技术领域。本发明解决的技术问题是提供一种花粉多糖提取液的新用途，即花粉多糖提取液在植物抗逆中的应用，其中，该花粉多糖提取液采用如下方法制备得到：将油菜花粉和水混合，加热搅拌提取至少一次，过滤，合并滤液，将壳聚糖加入滤液，得待澄清液，将待澄清液于60～80℃维持至少1小时，冷却静置后，固液分离，所得液体即为花粉多糖提取液。本发明采用水提后澄清的方法，得到花粉多糖提取液，该花粉多糖提取液具有提高植物抗逆能力的作用，拓展了花粉多糖的应用领域，同时也为植物抗逆提供了新的选择。
Description
技术领域
本发明涉及花粉多糖提取液在植物抗逆中的应用，属于农业技术领域。
背景技术
农作物在生长过程中经常会遇到逆境胁迫，植物逆境是指对植物生长和生存不利的各种环境因素，例如高温、干旱、低温、盐碱等。农作物在长期胁迫条件下,会造成减产甚至死亡,对农业生产造成损害。同时这些环境胁迫因子也限制了农艺性状与园艺性状良好的一些栽培作物的分布。
随着全球极端气候的频发，植物生长调节剂成为了农业生产中的刚需产品。油菜是我国传统主要油料作物，种植地域广，而油菜花粉是我国最大宗蜂花粉，在我国花粉中占有举足轻重地位。目前，已知的从油菜花粉中提取的具有抗逆作用的为芸苔素内酯(BR)，是一种使用广泛的植物生长调节剂，天然芸苔素内酯一般是从油菜花粉中通过醇提后得到，其提取率并不高，导致芸苔素内酯的价格较贵。而现有的芸苔素内酯类物质已发现有近40种，其中生物活性较高、有实用价值的只有四五种，虽然已实现了人工合成制造，但是合成成本也较高。
我公司在天然芸苔素内酯(14-羟基芸苔素甾醇)的提取上拥有原创的核心技术，已具有稳定的14-羟基芸苔素甾醇生产线，每年14-羟基芸苔素甾醇产量可达500kg纯品。在天然芸苔素提取过程中，会产生大量的花粉多糖，本发明发现天然芸苔素提取过程中所产生的副产物花粉多糖经过简单的澄清处理后施用于农作物能够明显增强农作物的抗逆性，减少干旱、盐碱、低温等逆境对农作物根系、叶片、花芽和果实等器官的伤害，从而降低极端天气造成的农业损失。对其中的成分进行了检测，该副产物中含有糖类、蛋白质、氨基酸和脂类等多种成分。目前关于油菜花粉多糖的研究报道多为食品和医药领域，在农业领域未见研究。
发明内容
本发明解决的技术问题是提供一种花粉多糖提取液的新用途，即花粉多糖提取液在植物抗逆中的应用。
本发明花粉多糖提取液在植物抗逆中的应用，其中，花粉多糖提取液，采用如下方法制备得到：
将油菜花粉和水混合，加热搅拌提取至少一次，过滤，合并滤液，将壳聚糖加入滤液，得待澄清液，将待澄清液于60～80℃维持至少1小时，冷却静置后，固液分离，所得液体即为花粉多糖提取液。
优选的，每次提取时，搅拌温度为60～70℃，搅拌时间为3～5h，搅拌速率为3000～4000r/min。
进一步优选的，所述水为软水。
优选的，每次提取时，油菜花粉和水按重量比1:1.5～5混合；优选油菜花粉和水按重量比1:2混合。
作为优选方案，加热搅拌提取两次。
优选的，待澄清液中，壳聚糖的浓度为0.01～0.15wt％；优选壳聚糖的浓度为0.05～0.1wt％；更优选壳聚糖的浓度为0.08wt％。
优选的，将待澄清液于70℃维持1小时。
优选的，使用时，将花粉多糖提取液喷施于植物叶面或施于植物根部。
进一步优选的，所述植物为蔬菜或果树。更优选所述植物为小麦、辣椒、番茄、柑橘、猕猴桃、樱桃、梨或苹果。
优选的，所述植物抗逆为抗旱、抗高温、抗寒或耐盐碱。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明采用水提后澄清的方法，得到花粉多糖提取液，该花粉多糖提取液具有提高植物抗旱、抗高温、抗寒或耐盐碱的作用，拓展了花粉多糖的应用领域，同时也为植物抗逆提供了新的选择。
具体实施方式
花粉多糖提取液在植物抗逆中的应用，其中，本发明的花粉多糖提取液，采用如下方法制备得到：
将油菜花粉和水混合，加热搅拌提取至少一次，过滤，合并滤液，将壳聚糖加入滤液，得待澄清液，将待澄清液于60～80℃维持至少1小时，冷却静置后，固液分离，所得液体即为花粉多糖提取液。
本发明花粉多糖提取液，其提取方法简单，提取过程中无需用到有毒的有机试剂，安全环保，成本低廉，且该花粉多糖提取液来源于天然芸苔素提取过程中的副产物，成本极低，具有提高植物抗逆能力的作用。
为了能更好的破坏细胞壁，使得多糖充分溶出，优选的，每次提取时，搅拌温度为60～70℃，搅拌时间为3～5h，搅拌速率为3000～4000r/min。
优选的，搅拌时间为4h。
作为优选方案，所述水为软水。软水是指不含或含较少可溶性钙、镁化合物的水。通常的，把水中钙、镁离子的含量用“硬度”这个指标来表示。硬度1度相当于每升水中含有10毫克氧化钙。低于8度的水称为软水。可以采用本领域常规方法来制备得到软水。
油菜花粉中的花粉多糖是溶于水的，因此，本发明采用水提法，如果水用量过少，则会存在花粉多糖提取率不高的缺陷，而水用量太多的话，后期浓缩的成本较高。因此，优选的，每次提取时，将油菜花粉和水按重量比1:1.5～5混合。作为优选方案，油菜花粉和水按重量比1:2混合。
为了尽可能的提取油菜花粉中的花粉多糖，同时兼顾提取效率，降低天然芸苔素提取工艺中的除杂难度，减少能耗和成本，优选的，加热搅拌提取两次。
提取后合并滤液，再加入壳聚糖进行澄清，除去花粉多糖中的杂质。优选的，待澄清液中，壳聚糖的浓度为0.01～0.15wt％；优选壳聚糖的浓度为0.05～0.1wt％；更优选壳聚糖的浓度为0.08wt％。
作为优选方案，将待澄清液于70℃维持1小时。
优选的，使用时，将花粉多糖提取液喷施于植物叶面或施于植物根部。其施用浓度以花粉多糖提取液中的粗多糖浓度计，施用于根部时，控制花粉多糖提取液中的粗多糖浓度为0.125～1ppm，施用于叶面时，控制花粉多糖提取液中粗多糖的浓度为1～8ppm。
施用量为常规用量，比如，喷施时，以叶面全部湿润而不向下滴水为度。施于植物根部时，使用量以能够使耕层土壤全部湿润为宜。
优选的，所述植物为蔬菜或果树。更优选所述植物为小麦、辣椒、番茄、柑橘、猕猴桃、樱桃、梨或苹果。
下面结合实施例对本发明的具体实施方式做进一步的描述，并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。实施例中的花粉多糖提取液采用如下工艺得到：
将油菜花粉和软水按重量比1:2混合，加热搅拌提取两次，每次提取时，搅拌温度为65℃，搅拌时间为4h，搅拌速率为3500r/min，搅拌后过滤，前一次的滤渣作为后一次的原料再进行提取。第二次提取后的滤渣用于提取芸苔素内酯，两次提取的滤液合并后，加入壳聚糖进行澄清。控制加入了壳聚糖的待澄清液中，壳聚糖的浓度为0.08％，待澄清液于70℃水浴中反应1小时，常温放置24小时后抽取上层清液为澄清液，过滤后减压浓缩至浓缩前液体重量的1/4，得到花粉多糖提取液。
检测该花粉多糖提取液的成分，结果见表1。
表1
注：总脂肪＝饱和脂肪+单元不饱和脂肪+多元不饱和脂肪+反式脂肪。
ND＝未检出。
实施例1
1、材料准备
试验名称：花粉多糖提高小麦抗旱性的生物活性试验
试验对象：小麦(豫农495)
小麦种子经5％次氯酸钠消毒10分钟后，用水清洗5-6次，洗去次氯酸钠溶液，将种子浸种过夜12h，在发芽盒里放上滤纸，加少量水浸湿滤纸，将种子平铺在滤纸上，放置在人工气候箱于25℃避光条件下催芽1天，挑选大小一致、无病虫害饱满、且露白程度一致的小麦种子，移到水培瓶，瓶口放入定植篮，定植篮中放入10颗小麦种子，水培3天后用于试验。
2、施药方法
配置20％PEG溶液，每个水培瓶中加入200ml配置好的PEG溶液，根据药剂浓度设计，加入不同量的药剂，混合均匀后放入小麦，每个处理设置三个重复，同时以20％PEG溶液和清水做为空白对照，以复合氨基酸粉(40％粉剂，成都螯合生物技术有限公司，2019年4月由厂家提供)和14-羟基芸苔素甾醇(成都新朝阳作物科学有限公司，20190608)作为阳性对照，设置3个重复。
3、药剂设计，见表2。
表2试验浓度设置
其中，花粉多糖浓度以粗多糖浓度计。
4、调查方法
6天后调查小麦根长、株高、根鲜重及地上部鲜重。其结果如下表3所示，表中的数据均为平均数。
表3各处理组指标测定结果
| 编号 | 根长(cm) | 株高(cm) | 根鲜重(g) | 地上部鲜重(g) |
| 1 | 10.7 | 11.8 | 0.80 | 1.07 |
| 2 | 12.1 | 12.0 | 0.94 | 1.11 |
| 3 | 11.5 | 12.1 | 0.89 | 1.13 |
| 4 | 11.2 | 11.8 | 0.81 | 1.08 |
| 5 | 11.8 | 12.2 | 0.83 | 1.12 |
| 6 | 10.7 | 11.9 | 0.86 | 1.10 |
| 7 | 10.3 | 11.5 | 0.79 | 1.02 |
| 8 | 17.2 | 14.6 | 1.06 | 1.45 |
由以上数据可得，在PEG模拟的干旱胁迫下，处理7(PEG胁迫)与处理8(清水)相比较根长和株高受到了明显的抑制，而在施加不同浓度的花粉多糖后各处理组干旱胁迫伤害均得到了缓解。其中0.5ppm的花粉多糖对干旱胁迫的缓解效果最好，效果与0.01ppm的14-羟基芸苔素甾醇相近，并显著优于阳性对照氨基酸。
综上所述，浓度为0.125～1ppm的花粉多糖能够促进小麦干旱胁迫下根长和株高，增加根鲜重和地上部鲜重，缓解小麦在干旱胁迫下伤害，在上述试验条件下0.5ppm的花粉多糖效果最佳。
实施例2
1、材料准备
试验名称：花粉多糖提高小麦抗盐碱性的生物活性试验
试验对象：小麦(豫农495)
小麦种子经5％次氯酸钠消毒10分钟后，用水清洗5-6次，洗去次氯酸钠溶液，将种子浸种过夜12h，在发芽盒里放上滤纸，加少量水浸湿滤纸，将种子平铺在滤纸上，放置在人工气候箱于25℃避光条件下催芽1天，挑选大小一致、无病虫害饱满、且露白程度一致的小麦种子，移到水培瓶，瓶口放入定植篮，定植篮中放入10颗小麦种子，水培3天后用于试验。
2、施药方法
配置盐碱胁迫溶液(0.12％氯化钠和0.1％碳酸钠)，每个水培瓶中加入200ml配置好的盐碱溶液，根据药剂浓度设计，加入不同量的药剂，混合均匀后放入小麦，每个处理设置三个重复，同时以盐碱溶液和清水做为空白对照，以复合氨基酸粉(40％粉剂，成都螯合生物技术有限公司，2019年4月由厂家提供)和14-羟基芸苔素甾醇(成都新朝阳作物科学有限公司，20190608)作为阳性对照，设置3个重复。
3、药剂设计，见表4。
表4试验浓度设置
| 编号 | 样品 | 稀释后花粉多糖浓度 |
| 1 | 花粉多糖提取液 | 1ppm |
| 2 | 花粉多糖提取液 | 0.5ppm |
| 3 | 花粉多糖提取液 | 0.25ppm |
| 4 | 花粉多糖提取液 | 0.125ppm |
| 5 | 0.0075％14羟基芸苔素甾醇水剂 | 0.01ppm |
| 6 | 40％复合氨基酸粉剂 | 20ppm |
| 7 | 20％PEG溶液 | — |
| 8 | 清水 | — |
其中，花粉多糖浓度以粗多糖浓度计。
4、调查方法
6天后调查小麦根长、株高、根鲜重及地上部鲜重。其结果如下表5所示，表中的数据均为平均数。
表5各处理组指标测定结果
| 编号 | 根长(cm) | 株高(cm) | 根鲜重(g) | 地上部鲜重(g) |
| 1 | 9.7 | 6.9 | 0.81 | 1.16 |
| 2 | 10.2 | 7.3 | 0.89 | 1.23 |
| 3 | 9.5 | 6.6 | 0.80 | 1.09 |
| 4 | 8.9 | 6.0 | 0.72 | 1.05 |
| 5 | 10.4 | 7.6 | 0.87 | 1.24 |
| 6 | 8.7 | 5.9 | 0.74 | 1.02 |
| 7 | 7.4 | 5.5 | 0.65 | 0.93 |
| 8 | 16.3 | 13.4 | 1.17 | 1.35 |
由以上数据可得，在盐碱溶液的胁迫下，小麦的根长和株高受到了明显的抑制作用，而在施加不同浓度的花粉多糖后各处理组的胁迫均得到了缓解。其中0.5ppm的花粉多糖对盐碱胁迫的缓解效果最好，效果与0.01ppm的14-羟基芸苔素甾醇相近，并显著优于阳性对照氨基酸。
综上所述，浓度为0.125～1ppm的花粉多糖能够促进小麦盐碱胁迫下根长和株高，增加根鲜重和地上部鲜重，缓解小麦在盐碱胁迫下伤害，在上述试验条件下0.5ppm的花粉多糖效果最佳。
实施例3
1、材料准备
试验名称：花粉多糖提高辣椒幼苗抗旱性的生物活性试验
试验对象：辣椒幼苗
辣椒种子播种到AOS中，待长到4片叶时移栽到育苗盆中，每盆1株，恢复后用于试验。挑选长势相近辣椒苗，统一浇水，使土壤完全浇透，之后不再浇水。
2、施药方法
本次试验设置6个处理组(一个空白对照和一个阳性对照)，每个处理6株植株。在盆栽土壤干燥时，按不同设置处理对幼苗进行药剂喷施，药液量以使植株湿润为宜(约3mL/株)。阳性对照处理喷施80ppm的复合氨基酸粉(40％粉剂，成都螯合生物技术有限公司，2019年4月由厂家提供)和0.1ppm的14-羟基芸苔素甾醇(成都新朝阳作物科学有限公司，20190608)，空白对照喷等量清水，处理期间不浇水，直至出现干旱胁迫。
3、药剂设计，见表6。
表6试验浓度设置
| 编号 | 样品 | 稀释后花粉多糖浓度 |
| 1 | 花粉多糖提取液 | 1ppm |
| 2 | 花粉多糖提取液 | 2ppm |
| 3 | 花粉多糖提取液 | 4ppm |
| 4 | 花粉多糖提取液 | 8ppm |
| 5 | 0.0075％14羟基芸苔素甾醇水剂 | 0.1ppm |
| 6 | 40％复合氨基酸粉剂 | 80ppm |
| 7 | 清水 | — |
其中，花粉多糖浓度以粗多糖浓度计。
4、调查方法
在各处理组出现胁迫时进行调查，本次试验在施药后11天后出现较明显的干旱状态，调查辣椒幼苗的受伤害指数，其结果见表8，取样测定幼苗中脯氨酸含量，其结果见表9。
受伤害指数＝(1*S1+2*S2+3*S3+4*S4+5*S5)/干旱胁迫总株数
Sn为相应伤害级的苗数
伤害等级分级标准见表7。
表7伤害等级分级标准
| 等级 | 症状 |
| 0级 | 幼苗生长良好，无任何症状 |
| 1级 | 植株挺立，20％以下叶片出现萎蔫 |
| 2级 | 植株挺立，50％以下叶片出现萎蔫 |
| 3级 | 植株挺立，50％以上叶片出现萎蔫 |
| 4级 | 植株无法挺立，叶片均出现萎蔫 |
| 5级 | 幼苗整株死亡 |
表8不同处理组受害程度
表9各处理组脯氨酸含量
| 编号 | 脯氨酸含量(％) | 脯氨酸增量(％) |
| 1 | 0.073 | 0.012 |
| 2 | 0.074 | 0.013 |
| 3 | 0.069 | 0.008 |
| 4 | 0.065 | 0.004 |
| 5 | 0.072 | 0.011 |
| 6 | 0.064 | 0.003 |
| 7 | 0.061 | 0 |
由上述表7结果可得，在干旱胁迫下，外源喷施1～8ppm的花粉多糖能够缓解辣椒幼苗受伤害程度，其中浓度为2ppm的花粉多糖效果最好，幼苗受伤害指数为2.00，效果稍优于14羟基芸苔素甾醇2.17，显著优于清水对照4.00和氨基酸阳性对照3.17。由表9可得，外源喷施1～8ppm的花粉多糖能够增辣椒幼苗体内脯氨酸含量，并且脯氨酸增量最多的处理组花粉多糖浓度为2ppm,与辣椒幼苗受伤害程度相对应，即脯氨酸含量越高，幼苗受伤害程度越小。
综上所述，在干旱前叶面喷施1～8ppm的花粉多糖能够通过增加辣椒幼苗体内脯氨酸的积累，从而提高植物的抗旱性，其中2ppm的花粉多糖效果最好。
实施例4
1、材料准备
试验名称：花粉多糖提高大豆幼苗抗高温的生物活性试验
试验对象：大豆幼苗
提前将大豆种子播种于AOS培养槽中育苗，待大豆长出两片真叶时挑选长势一致的大豆苗移栽至育苗杯中，待其节间长出三个复叶时用于试验。
2、施药方法
本次试验设置6个处理组(一个空白对照和一个阳性对照)，每个处理6株植株。按不同设置处理对幼苗进行药剂喷施，药液量以使植株湿润为宜(约3mL/株)。阳性对照处理喷施80ppm的复合氨基酸粉(40％粉剂，成都螯合生物技术有限公司，2019年4月由厂家提供)和0.1ppm的14-羟基芸苔素甾醇(成都新朝阳作物科学有限公司，20190608)，空白对照喷等量清水，在处理之前测定叶片的SPAD值，喷施后室温下缓苗1天，1天后放入人工气候箱中进行高温处理，处理温度为40℃。
3、药剂设计，见表10。
表10试验浓度设置
| 编号 | 样品 | 稀释后花粉多糖浓度 |
| 1 | 花粉多糖提取液 | 1ppm |
| 2 | 花粉多糖提取液 | 2ppm |
| 3 | 花粉多糖提取液 | 4ppm |
| 4 | 花粉多糖提取液 | 8ppm |
| 5 | 0.0075％14羟基芸苔素甾醇水剂 | 0.1ppm |
| 6 | 40％复合氨基酸粉剂 | 80ppm |
| 7 | 清水 | — |
其中，花粉多糖浓度以粗多糖浓度计。
4、调查方法
待各处理出现差异时测定叶片的SPAD值，调查热害等级并拍照记录。热害等级分级标准如表11所示。本次试验在高温处理3天后出现了明显差异，对各处理组调查结果如表12和表13所示。表12中的各值为平均值。
受伤害指数＝(1*S1+2*S2+3*S3+4*S4+5*S5)/高温胁迫总株数
Sn为相应热害级的苗数
表11热害等级分级标准
| 等级 | 症状 |
| 0级 | 幼苗生长良好，无任何症状 |
| 1级 | 植株挺立，叶片少部分变黄，变黄面积20％以下 |
| 2级 | 植株挺立，叶片大部分变黄，变黄面积80％ |
| 3级 | 幼苗叶片全部变黄 |
| 4级 | 幼苗上半部分枯死 |
| 5级 | 幼苗整株枯死 |
表12不同处理组高温胁迫前后SPAD值
| 编号 | 高温前SPAD值 | 高温后SPAD值 | SPAD降低值 |
| 1 | 32.3 | 25.7 | 6.6 |
| 2 | 33.2 | 28.8 | 4.4 |
| 3 | 31.7 | 26.5 | 5.2 |
| 4 | 32.5 | 25.7 | 6.8 |
| 5 | 33.9 | 29.8 | 4.1 |
| 6 | 31.4 | 23.3 | 8.1 |
| 7 | 32.8 | 24.6 | 8.2 |
表13不同处理组受害程度
由上述表12结果可得，在高温胁迫下，外源喷施1～8ppm的花粉多糖能够减缓大豆苗叶绿素含量的降低，从而提高幼苗的抗高温能力，其中浓度为2ppm的花粉多糖效果最好，SPAD降低值为4.4，阳性对照14-羟基芸苔素甾醇和复合氨基酸粉SPAD降低值分别为4.1和8.1，清水对照SPAD降低值为8。
由表13可得，从幼苗表型上看，外源喷施1～8ppm的花粉多糖能够使大豆苗的受伤害指数降低，其中2ppm效果最佳。
综上所述，在高温前叶面喷施1～8ppm的花粉多糖能够通过减缓大豆幼苗在高温环境下SPAD值的降低，减少幼苗受伤害指数，其中2ppm效果最佳。
实施例5
1、材料准备
试验名称：花粉多糖提高柑橘抗寒性的生物活性试验
试验对象：柑橘，爱媛38号
本试验供试柑橘树为成年果树，种植密度约80株/亩，实验地位于成都市蒲江县。
2、施药方法
挑选长势和挂果量相当的柑橘树作为试验材料。按不同设置处理对其进行全株喷施，每个处理1棵柑橘，以叶片和果实全部湿润，不滴水为度。各处理柑橘均不套袋。
3、药剂设计，见表14。
4、
表14试验浓度设置
| 编号 | 样品 | 稀释后花粉多糖浓度 |
| 1 | 花粉多糖提取液 | 1ppm |
| 2 | 花粉多糖提取液 | 2ppm |
| 3 | 花粉多糖提取液 | 4ppm |
| 4 | 花粉多糖提取液 | 8ppm |
| 5 | 0.0075％14羟基芸苔素甾醇水剂 | 0.1ppm |
| 6 | 40％复合氨基酸粉剂 | 80ppm |
| 7 | 清水 | — |
其中，花粉多糖浓度以粗多糖浓度计。
4、调查方法
施药次数为3次，第一次施药时间为柑橘套带前，以后每一周进行一次施药，低温过后或者清水对照出现明显冻害时进行调查。采回所有果实调查果实受冻率和柑橘叶片丙二醛和脯氨酸含量。调查结果见表15和表16。
表15试验浓度设置
表16各处理组脯氨酸含量
由表15可得，在未套袋的情况下，清水对照的柑橘果实大部分受到冻害，受冻率为91.78％，而外源喷施浓度为1～8ppm的花粉多糖能够降低柑橘果实的冻伤率，其中浓度为4ppm的花粉多糖效果最好，柑橘果实受冻率为50.88％，效果接近于喷施0.1ppm的14-羟基芸苔素甾醇(果实受冻率为50.72％)，而明显优于清水对照和氨基酸阳性对照。由表16可得，外源喷施浓度为1～8ppm的花粉多糖能够增加柑橘叶片中脯氨酸含量和降低丙二醛含量，效果最优的处理组与果实冻伤率最低的一致。
综上所述，外源喷施浓度为1～8ppm的花粉多糖能够通过增加柑橘脯氨酸的积累，减少丙二醛的产生，从而提高柑橘的抗寒性，降低柑橘果实的受冻率，其中4ppm的效果最佳。
实施例6
1、材料准备
试验名称：花粉多糖在低温下对苹果花芽和果实抗寒性影响的生物活性试验
试验对象：苹果，红富士
试验地点：山西省万荣县
2、施药方法
挑选长势相当的苹果树作为试验材料。苹果树花芽萌发通常在3～4月，在此期间如果气温骤降，将会造成对花芽的冻害和落花，严重影响苹果树的产量。本试验施药时间为苹果树花期(2018年3月13日)，共设置6个处理组，每个处理组3棵树，按照试验设计对不同处理组喷施对应浓度的花粉多糖，以14-羟基芸苔素甾醇和复合氨基酸粉作为阳性对照，空白对照喷施等量清水，对其进行全株喷施，以叶片全部湿润，不滴水为度。2018年4月6日，发生了低温冻害，地面温度降低至-6℃左右，低于0℃气温持续8小时以上，在寒潮来临前共喷施3次，每次间隔时间为7天，统一水肥管理，每个处理组的每棵树在四个方向选择一个花蕾数相当的枝条做标记，在第三次施药前统计各枝条上的花芽数量。
5、药剂设计，见表17。
表17试验浓度设置
| 编号 | 样品 | 稀释后花粉多糖浓度 |
| 1 | 花粉多糖提取液 | 2ppm |
| 2 | 花粉多糖提取液 | 4ppm |
| 3 | 花粉多糖提取液 | 8ppm |
| 4 | 0.0075％14羟基芸苔素甾醇水剂 | 0.1ppm |
| 5 | 40％复合氨基酸粉剂 | 80ppm |
| 6 | 清水 | -- |
其中，花粉多糖浓度以粗多糖浓度计。
5、调查方法
寒潮过后(4月9日)，待气温回升时统计各处理组已做标记枝条上的花蕾总数，计算落蕾率。在果树幼果坐稳后(5月9日)调查已标记枝条上的坐果数，计算坐果率。
坐果率(％)＝着果数/寒潮前花蕾数×100％
调查结果见表18，表中各数据为各处理组所有枝条上的总数。
表18试验浓度设置
| 处理 | 寒潮前花蕾数 | 寒潮后花蕾数 | 落蕾率(％) | 着果数 | 坐果率(％) |
| 1 | 1037.00 | 721.00 | 30.47 | 66.00 | 6.36 |
| 2 | 1152.00 | 922.00 | 19.97 | 92.00 | 7.99 |
| 3 | 1291.00 | 973.00 | 24.63 | 75.00 | 5.81 |
| 4 | 1026.00 | 849.00 | 17.25 | 87.00 | 8.48 |
| 5 | 1102.00 | 691.00 | 37.30 | 68.00 | 6.17 |
| 6 | 1082.00 | 569.00 | 47.41 | 46.00 | 4.25 |
由表18可得，苹果花期遭遇寒流后在无任何保护措施的情况下，花蕾会受到严重的损伤，出现大量的落花现象，落雷率达47.41％，也对后期的坐果造成了一定的影响。喷施不同浓度的花粉多糖后能够增强苹果树在逆境条件下的抵抗能力，在一定程度上减少落蕾率，其中喷施4ppm是花粉多糖后能够降低花蕾的落率至19.97％，使坐果率达7.99％，效果与0.1ppm的14-羟基芸苔素甾醇阳性对照接近，显著优于清水对照。
综上所述，在寒潮前喷施2～8ppm的花粉多糖能够增明显降低低温对苹果树花蕾和果实伤害，减少落蕾率，提高坐果率，其中浓度为4ppm的花粉多糖效果最好。
Claims (10)
1.花粉多糖提取液在植物抗逆中的应用，其中，花粉多糖提取液，采用如下方法制备得到：
将油菜花粉和水混合，加热搅拌提取至少一次，过滤，合并滤液，将壳聚糖加入滤液，得待澄清液，将待澄清液于60～80℃维持至少1小时，冷却静置后，固液分离，所得液体即为花粉多糖提取液。
2.根据权利要求1所述的花粉多糖提取液在植物抗逆中的应用，其特征在于：每次提取时，搅拌温度为60～70℃，搅拌时间为3～5h，搅拌速率为3000～4000r/min。
3.根据权利要求1所述的花粉多糖提取液在植物抗逆中的应用，其特征在于：所述水为软水。
4.根据权利要求1所述的花粉多糖提取液在植物抗逆中的应用，其特征在于：每次提取时，油菜花粉和水按重量比1:1.5～5混合；优选油菜花粉和水按重量比1:2混合。
5.根据权利要求1～4所述的花粉多糖提取液在植物抗逆中的应用，其特征在于：加热搅拌提取两次。
6.根据权利要求1所述的花粉多糖提取液在植物抗逆中的应用，其特征在于：待澄清液中，壳聚糖的浓度为0.01～0.15wt％；优选壳聚糖的浓度为0.05～0.1wt％；更优选壳聚糖的浓度为0.08wt％。
7.根据权利要求1所述的花粉多糖提取液在植物抗逆中的应用，其特征在于：将待澄清液于70℃维持1小时。
8.根据权利要求1所述的花粉多糖提取液在植物抗逆中的应用，其特征在于：使用时，将花粉多糖提取液喷施于植物叶面或施于植物根部。
9.根据权利要求8所述的花粉多糖提取液在植物抗逆中的应用，其特征在于：所述植物为蔬菜或果树；优选所述植物为小麦、辣椒、番茄、柑橘、猕猴桃、樱桃、梨或苹果。
10.根据权利要求1所述的花粉多糖提取液在植物抗逆中的应用，其特征在于：所述植物抗逆为抗旱、抗高温、抗寒或耐盐碱。
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