CN113105425A - 一种抗炎化合物、其制备方法和抗炎用途 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物医药领域，涉及一种抗炎化合物、其制备方法和抗炎用途。具体地，涉及具有抗炎活性的2‑乙基‑2,7‑二羟基‑5甲基‑苯并二氢吡喃‑4‑酮衍生物制备方法和抗炎药物中的用途，其中2‑乙基‑2,7‑二羟基‑5甲基‑苯并二氢吡喃‑4‑酮衍生物通过有机合成方法得到，可以用于制备抗炎药物。所述衍生物在能明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO释放和炎症因子TNF‑α和IL‑6的产生，作为潜在的治疗炎症的药物。

Description

一种抗炎化合物、其制备方法和抗炎用途
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及一种抗炎化合物、其制备方法和抗炎用途；更具体地，涉及一种具有抗炎活性的2-乙基-2,7-二羟基-5甲基-苯并二氢吡喃-4-酮衍生物及其合成制备方法、应用。
背景技术
炎症(inflammation)俗称“发炎”，是指具有血管系统的机体组织对外界刺激所发生的防御性反应。过度的炎症反应会造成机体器官更严重损伤和病变，从而影响人类健康。在炎症反应急性阶段机体组织损伤后释放一氧化氮(NO)、前列腺素(PGE2)、血小板活化因子(PAF)、缓激肽等炎症介质因子，接着免疫系统被激活，进入慢性炎症阶段并释放大量的炎症因子如TNF-α和IL-6等进一步加剧免疫反应，严重时可引起机体出现感染性休克、全身性炎症反应、多器官功能衰竭甚至死亡。炎性肠病(包括溃疡性结肠炎和克罗恩病)、肝炎和慢性神经性退行性疾病(包括老年痴呆和帕金森症)的发生和发展均与炎症因子过度表达相关。通过抑制TNF-α和IL-6等产生，能够明显改善上述疾病的病理学症状。巨噬细胞是一种免疫细胞，分布在不同的器官和组织中，在机体炎症反应过程中起着至关重要的作用。利用脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7发生炎症反应，是一种评价药物抗炎活性和抗炎机制研究应用最广泛的体外模型。
发明内容
本发明是通过有机合成方法得到的2-乙基-2,7-二羟基-5甲基-苯并二氢吡喃-4-酮衍生物，活性研究表明这类化合物具有显著的抗炎活性。
本发明的目的之一是提供一种具有抗炎活性的2-乙基-2,7-二羟基-5甲基-苯并二氢吡喃-4-酮类化合物，所述化合物的结构通式如式I所示：
Figure BDA0003011479270000011
其中：R为1～5个碳原子的烷烃、烯烃、脂肪族烷氧基、芳香族烷氧基或氢。
在一些可选的实施方案中，式I中，R为甲基、乙基、丙基或氢。
在另一些可选的实施方案中，式I中，R为苯氧基、3-甲基苯氧基、4-甲氧基苯氧基、3-氟甲基苯氧基或3-氟苯氧基。
更进一步地，在一些优选的实施方案中，本发明所述的具有抗炎活性的2-乙基-2,7-二羟基-5甲基-苯并二氢吡喃-4-酮类化合物为下式中的化合物1-8，化合物1-8能够明显抑制糖诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7一氧化氮释放和TNF-α与IL-6等炎症因子的产生，可以用于制备抗炎药物。
Figure BDA0003011479270000012
本发明另一目的在于提供一种制备上述的具有抗炎活性的2-乙基-2,7-二羟基-5甲基-苯并二氢吡喃-4-酮类化合物的方法，其包括以下步骤：
Figure BDA0003011479270000021
(1)S3a-S3e的合成：相应苯酚衍生物S2a-S2e，3-溴丙醛缩乙二醇和无水碳酸钾，以N,N-二甲基甲酰胺或其它非质子性溶剂为溶剂在25℃～100℃下反应24小时，抽滤，滤液减压蒸馏除N,N-二甲基甲酰胺，加入水，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，减压浓缩，得粗产物为无色至淡黄色油状物。粗产物经重结晶或硅胶柱层析(石油醚和乙酸乙酯混合溶剂洗脱)获得S3a-S3e进行下一步反应。
(2)S4a-S4e的合成：将步骤1中获得的相应中间体S3a-S3e加入冰乙酸和水(V/V,4:1)，25℃～65℃加热反应4～12小时，减压蒸馏除去乙酸，加入水，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，饱和食盐水萃取有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得S4a-S4e粗产物，该产物不纯化直接进行下一步反应。
(3)S5a-S5h的合成：将步骤2中获得的相应化合物S4a-S4e，正丁醛，正戊醛或正己醛分别与苯乙酮衍生物S1，以四氢呋喃为溶剂，在强碱催化下，于-80℃～25℃反应0.5～24小时。加入饱和氯化铵水溶液，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得粗产物为淡黄色至黄色油状物。粗产物经重结晶或硅胶柱层析(石油醚和乙酸乙酯混合溶剂洗脱)获得S5a-S5h进行下一步反应。
(4)S6a-S6h的合成：将步骤3中获得的相应化合物S5a-S5h溶于无水二氯甲烷中，-40℃～25℃加入氧化剂，搅拌反应1～12小时。加入饱和硫代硫酸钠水溶液和饱和碳酸氢钠水溶液，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水萃取有机相，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得粗产物为淡黄色至黄色油状物。粗产物经硅胶柱层析(石油醚和乙酸乙酯混合溶剂洗脱)获得S6a-S6h进行下一步反应。
(5)化合物1-8的合成：将步骤4中获得的相应化合物S6a-S6h和钯碳置于圆底烧瓶中，以乙醇为溶剂，室温反应。抽滤，滤液减压浓缩，得粗产物为淡黄色至黄色油状物。粗产物用硅胶柱层析(二氯甲烷和甲醇混合溶液洗脱)，得白色固体纯品。即为相应的化合物1-8。
本发明的另一个目的在于提供如上所述的具有抗炎活性的2-乙基-2,7-二羟基-5甲基-苯并二氢吡喃-4-酮类化合物或者如上所述的制备方法制备获得的2-乙基-2,7-二羟基-5甲基-苯并二氢吡喃-4-酮类化合物在制备用于抗炎症的药物中的用途。
进一步地，所述的炎症为患有炎性疾病的受试者中的炎症。
进一步地，所述的炎性疾病选自肝炎、溃疡性结肠炎、克罗恩病和神经退行性疾病。
进一步地，所述的药物通过抑制NO的释放治疗炎性疾病。
进一步地，所述的药物通过抑制炎症因子TNF-α和/或IL-6产生治疗炎性疾病。
本发明的另一个目的在于提供一种药物组合物，其包含如上所述的具有抗炎活性的2-乙基-2,7-二羟基-5甲基-苯并二氢吡喃-4-酮类化合物或者如上所述的制备方法制备获得的2-乙基-2,7-二羟基-5甲基-苯并二氢吡喃-4-酮类化合物或其任意组合，以及可药用的赋形剂、稀释剂或载体。
本发明对所得2-乙基-2,7-二羟基-5甲基-苯并二氢吡喃-4-酮衍生物进行了体外抗炎活性实验，结果表明，所述间能够明显抑制脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞RAW 264.7的NO释放和炎症因子TNF-α及IL-6产生，因此可以用于制备抗炎药物。
附图说明
图1为化合物1氢谱图(600MHz,DMSO-d6)。
图2为化合物1碳谱图(150MHz,DMSO-d6)。
图3为化合物2氢谱图(600MHz,DMSO-d6)。
图4为化合物2碳谱图(150MHz,DMSO-d6)。
图5为化合物3氢谱图(600MHz,DMSO-d6)。
图6为化合物3碳谱图(150MHz,DMSO-d6)。
图7为化合物4氢谱图(600MHz,DMSO-d6)。
图8为化合物4碳谱图(150MHz,DMSO-d6)。
图9为化合物5氢谱图(600MHz,DMSO-d6)。
图10为化合物5碳谱图(150MHz,DMSO-d6)。
图11为化合物6氢谱图(600MHz,DMSO-d6)。
图12为化合物6碳谱图(150MHz,DMSO-d6)。
图13为化合物7氢谱图(600MHz,DMSO-d6)。
图14为化合物7碳谱图(150MHz,DMSO-d6)。
图15为化合物8氢谱图(600MHz,DMSO-d6)。
图16为化合物8碳谱图(150MHz,DMSO-d6)。
图17为化合物1-8对细胞存活率的影响。Veh组为空白溶剂处理组；DXM为阳性药地塞米松处理组；1-8分别为各化合物处理组。每组实验独立重复三次，数值为均值±标准偏差值。
图18为化合物1-8对LPS诱导的RAW264.7细胞NO释放的影响。每实验组中，Con为空白对照，LPS为模型对照；每个给药组中化合物1，2，3，4，5，6，7，8或阳性药地塞米松(DXM)浓度分别为3.3μM,11μM和33μM；每组实验独立重复三次，数值为均值±标准偏差值。#,p＜0.05,LPS组与Con组；*,p＜0.05，给药组与LPS组。
图19为化合物1-8对LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α释放的影响。每实验组中，Con为空白对照，LPS为模型对照；每个给药组中化合物1，2，3，4，5，6，7，8或阳性药地塞米松(DXM)浓度分别为3.3μM,11μM和33μM；每组实验独立重复三次，数值为均值±标准偏差值。#,p＜0.05,LPS组与Con组；*,p＜0.05，给药组与LPS组。
图20为化合物1-8对LPS诱导的RAW264.7细胞IL-6释放的影响。每实验组中，Con为空白对照，LPS为模型对照；每个给药组中化合物1，2，3，4，5，6，7，8或阳性药地塞米松(DXM)浓度分别为3.3μM,11μM和33μM；每组实验独立重复三次，数值为均值±标准偏差值。#,p＜0.05,LPS组与Con组；*,p＜0.05，给药组与LPS组。
具体实施方式
以下结合附图，通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。以下提供了本发明实施方案中所使用的具体材料及其来源。但是，应当理解的是，这些仅仅是示例性的，并不意图限制本发明，与如下试剂和仪器的类型、型号、品质、性质或功能相同或相似的材料均可以用于实施本发明。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例一：化合物1的制备
Figure BDA0003011479270000051
(1)化合物S3a合成：
苯酚S2a(940mg,10.0mmol)和无水K2CO3(2.76g,20.0mmol)置于100mL圆底烧瓶中，以DMF(40mL)为溶剂，室温下滴加3-溴丙醛缩乙二醇(1.99g,11.0mmol)，滴加完毕，转移至65℃搅拌过夜，停止反应。抽滤，减压浓缩滤液，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×30ml)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(30mL)洗涤有机相一次，无水Na2SO4干燥、过滤、浓缩。残余物经硅胶柱层析，石油醚/乙酸乙酯(体积比25:1)洗脱，得无色油状物S3a(1.43g,73.7％收率)。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.27(t,J＝7.8Hz,2H),6.94(t,J＝7.8Hz,1H),6.91(d,J＝7.8Hz,2H),5.10(t,J＝4.8Hz,1H),4.12(t,J＝6.5Hz,2H),4.03–3.95(m,2H),3.91–3.85(m,2H),2.16(dt,J＝6.5,4.8Hz,2H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ158.75,129.41(2×C),120.68,114.47(2×C),102.05,64.91(2×C),63.44,33.81。
(2)化合物S5a合成：
将化合物S3a(437mg,2.25mmol)、乙酸(20mL)和水(5mL)置于50mL圆底烧瓶中，45℃搅拌反应5h，减压浓缩，加入饱和NaHCO3溶液(20mL)，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(20mL)洗涤有机相一次，无水Na2SO4干燥、过滤、浓缩，得到无色油状物S4a，无需纯化直接用于下一步反应。
取N,N-二异丙基氨基锂(2.0M的THF溶液,1.5mL,3.0mmol)置于圆底烧瓶中，N2置换3次，注入无水四氢呋喃(3mL)，-78℃条件下滴加化合物S1(520mg,1.5mmol)的无水四氢呋喃(2mL)溶液，滴加完毕后搅拌30min，将相应的醛S4a的无水四氢呋喃(2mL)溶液滴加到反应体系中，搅拌过夜。升温至0℃，缓慢滴加饱和NH4Cl溶液(5mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取(3×50mL)，合并有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物经硅胶柱层析石油醚/乙酸乙酯(体积比15:1)洗脱，得黄色油状物S5a(316mg,42.4％收率)。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.42–7.26(m,12H),6.93(t,J＝7.3Hz,1H),6.86(d,J＝8.1Hz,2H),6.45(brs,1H),6.44(brs,1H),5.04(s,2H),5.01(s,2H),4.35–4.29(m,1H),4.03(t,J＝6.2Hz,2H),3.41(brs,1H),3.13(dd,J＝17.4,2.8Hz,1H),2.87(dd,J＝17.3,8.9Hz,1H),2.26(s,3H),1.90–1.78(m,2H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ207.67,160.51,158.75,157.54,138.41,136.38,135.96,129.39(2×C),128.68(2×C),128.67(2×C),128.28,128.18,127.51(4×C),123.82,120.64,114.45(2×C),108.72,98.02,70.64,70.10,65.92,64.64,51.16,35.85,20.06。
(3)化合物S6a合成：
取化合物S5a(249mg,0.5mmol)置于25mL圆底烧瓶中，以无水二氯甲烷(10mL)为溶剂，0℃条件下缓慢加入戴斯-马丁氧化剂DMP(275mg,0.65mmol)，搅拌反应2h，滴加饱和Na2S2O3溶液(3mL)和饱和NaHCO3溶液(5mL)。滴加完毕，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取(3×50mL)，合并有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物经硅胶柱层析，石油醚/乙酸乙酯(体积比25:1)洗脱，得黄色油状物S6a(201mg,80.1％收率)。化合物S6a为烯醇互变异构体，且异构体比例通过特征氢信号积分计算约为S6a烯醇式(enol):S6a酮式(keto)＝10:3。烯醇式：1H NMR(600MHz,CDCl3)δ15.63(brs,1H),7.42–7.28(m,10H),7.28–7.26(m,2H),6.95(t,J＝7.5Hz,1H),6.87(d,J＝8.2Hz,2H),6.45(d,J＝2.4Hz,2H),5.87(s,1H),5.03(s,4H),4.23(t,J＝6.5Hz,2H),2.80(t,J＝6.5Hz,2H),2.33(s,3H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ190.61,186.75,160.44,158.47,157.34,139.40,136.59,136.47,129.44(2×C),128.64(2×C),128.50(2×C),128.13,127.83,127.50(2×C),126.91(2×C),120.93,119.93,114.57(2×C),108.65,104.27,98.44,70.48,70.04,63.66,38.41,20.42。酮式：1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.42–7.28(m,10H),7.25–7.23(m,2H),6.95(t,J＝7.5Hz,1H),6.82(d,J＝8.2Hz,2H),6.45(d,J＝2.4Hz,2H),5.04(s,2H),5.02(s,2H),4.08(t,J＝6.5Hz,2H),3.98(s,2H),2.80(t,J＝6.5Hz,2H),2.31(s,3H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ202.38,198.80,160.96,158.47,158.16,139.98,136.26,135.74,129.38(2×C),128.77(2×C),128.68(2×C),128.44,128.22,127.82(2×C),127.52(2×C),122.88,120.81,114.44(2×C),109.06,97.89,70.77,70.10,62.36,59.08,42.52,20.52。
(4)化合物1合成：
取化合物S6a(100mg)和5％钯碳(20mg,20wt％)置于25mL圆底烧瓶中，用H2置换3次，注入乙醇(5mL)为溶剂，室温搅拌2.5h，反应停止。抽滤，减压浓缩滤液，加水(5mL)，用乙酸乙酯(3×5mL)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(5mL)洗涤有机相一次，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物经硅胶柱层析，二氯甲烷/甲醇(体积比25:1)洗脱，得黄色油状物1(52mg,80.8％收率)。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.32(s,1H),7.31–7.27(m,2H),6.96–6.92(m,4H),6.26(d,J＝2.3Hz,1H),6.18(d,J＝2.3Hz,1H),4.15(brd,J＝7.0Hz,2H),3.01(dd,J＝15.9,1.9Hz,1H),2.62(d,J＝15.9Hz,1H),2.46(s,3H),2.36(dt,J＝14.0,7.0Hz,1H),2.26(dt,J＝14.0,6.8Hz,1H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ191.37,163.09,161.68,158.73,142.81,129.98(2×C),121.06,114.87(2×C),112.91,112.43,102.07,101.38,63.73,48.39,39.96,23.03；HRMS(ESI)m/z：315.1214(calcd.C18H18O5,[M+H]+315.1227)。
实施例二：化合物2的制备
Figure BDA0003011479270000071
(1)化合物S3b合成：
3-甲基苯酚S2b(1.08mg,10.0mmol)和无水K2CO3(2.76g,20.0mmol)置于100mL圆底烧瓶中，以DMF(40mL)为溶剂，室温下滴加3-溴丙醛缩乙二醇(1.99g,11.0mmol)，滴加完毕，转移至65℃搅拌过夜，停止反应。抽滤，减压浓缩滤液，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×30ml)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(30mL)洗涤有机相一次，无水Na2SO4干燥、过滤、浓缩。残余物经硅胶柱层析，石油醚/乙酸乙酯(体积比25:1)洗脱，得无色油状物S3b(1.46g,70.2％收率)。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.15(t,J＝7.8Hz,1H),6.76(d,J＝7.5Hz,1H),6.73(d,J＝2.3Hz,1H),6.71(dd,J＝8.1,2.3Hz,1H),5.09(t,J＝4.9Hz,1H),4.11(t,J＝6.5Hz,2H),4.03–3.96(m,2H),3.91–3.84(m,2H),2.32(s,3H),2.15(dt,J＝6.5,4.9Hz,2H)；13CNMR(150MHz,CDCl3)δ158.78,139.43,129.14,121.51,115.34,111.32,102.07,64.91(2×C),63.40,33.84,21.52。
(2)化合物S5b合成：
将化合物S3b(469mg,2.25mmol)、乙酸(20mL)和水(5mL)置于50mL圆底烧瓶中，45℃搅拌反应5h，减压浓缩，加入饱和NaHCO3溶液(20mL)，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取，合并有机相，饱和NaCl(20mL)溶液洗涤有机相一次，无水Na2SO4干燥、过滤、浓缩，得到无色油状物S4b，无需纯化直接用于下一步反应。
取N,N-二异丙基氨基锂(2.0M的THF溶液,1.5mL,3.0mmol)置于圆底烧瓶中，N2置换3次，注入无水四氢呋喃(3mL)，-78℃条件下滴加化合物S1(520mg,1.5mmol)的无水四氢呋喃(2mL)溶液，滴加完毕后搅拌30min，将相应的醛S4b的无水四氢呋喃(2mL)溶液滴加到反应体系中，搅拌过夜。升温至0℃，缓慢滴加饱和NH4Cl溶液(5mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取(3×50mL)，合并有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物经硅胶柱层析，石油醚/乙酸乙酯(体积比15:1)洗脱，得黄色油状物S5b(309mg,40.3％收率)。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.41–7.30(m,10H),7.14(t,J＝7.8Hz,1H),6.75(brd,J＝7.5Hz,1H),6.69(d,J＝2.1,1H),6.66(d,J＝8.2,2.1Hz,1H),6.45(d,J＝2.2Hz,1H),6.44(d,J＝2.2Hz,1H),5.04(s,2H),5.01(s,2H),4.34–4.29(m,1H),4.02(t,J＝6.3Hz,2H),3.42(brs,1H),3.12(dd,J＝17.3,2.9Hz,1H),2.87(dd,J＝17.3,8.9Hz,1H),2.31(s,3H),2.26(s,3H),1.88–1.79(m,2H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ207.71,160.53,158.80,157.57,139.45,138.45,136.42,136.01,129.17,128.72(2×C),128.71(2×C),128.31,128.22,127.55(2×C),127.53(2×C),123.87,121.52,115.35,111.36,108.75,98.06,70.66,70.14,66.03,64.67,51.21,35.91,21.56,20.10。
(3)化合物S6b合成：
取化合物S5b(255mg,0.5mmol)置于25mL圆底烧瓶中，以无水二氯甲烷(10mL)为溶剂，0℃条件下缓慢加入戴斯-马丁氧化剂DMP(275mg,0.65mmol)，搅拌反应2h，滴加饱和Na2S2O3溶液(3mL)和饱和NaHCO3溶液(5mL)，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取(3×50mL)，合并有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物经硅胶柱层析，石油醚/乙酸乙酯(体积比25:1)洗脱，得黄色油状物S6b(211mg,82.4％收率)。化合物S6b为烯醇互变异构体，且异构体比例通过特征氢信号积分计算约为S6b烯醇式(enol):S6b酮式(keto)＝10:2.75。烯醇式：1H NMR(600MHz,CDCl3)δ15.63(brs,1H),7.42–7.27(m,10H),7.15(t,J＝7.8Hz,1H),6.77(brd,J＝8.0Hz,1H),6.70(d,J＝2.2Hz,1H),6.68(dd,J＝8.0,2.2Hz,1H),6.46(brs,1H),6.45(brs,1H),5.87(s,1H),5.03(s,4H),4.22(t,J＝6.6Hz,2H),2.80(t,J＝6.6Hz,2H),2.33(s,3H),2.31(s,3H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ190.67,186.77,160.44,158.50,157.34,139.49,139.40,136.60,136.48,129.17,128.65(2×C),128.51(2×C),128.14,127.83,127.51(2×C),126.90(2×C),121.76,119.96,115.42,111.43,108.65,104.26,98.45,70.48,70.05,63.61,38.44,21.51,20.41。酮式：1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.42–7.27(m,10H),7.13(t,7.8Hz,1H),6.75(brd,J＝8.4Hz,1H),6.64(brs,1H),6.62(brd,8.0Hz,1H),6.46(brs,1H),6.45(brs,1H),5.04(s,2H),5.02(s,2H),4.07(t,J＝6.4Hz,2H),3.98(s,2H),2.80(t,J＝6.5Hz,2H),2.30(s,6H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ202.47,198.83,160.96,158.50,158.16,140.00,139.42,136.27,135.76,129.12,128.77(2×C),128.68(2×C),128.43,128.22,127.79(2×C),127.53(2×C),122.90,121.64,115.29,111.33,109.07,97.90,70.76,70.11,62.34,59.08,42.58,29.70,20.53。
(4)化合物2合成：
取化合物S6b(100mg)和5％钯碳(20mg,20wt％)置于25mL圆底烧瓶中，用H2置换3次，注入乙醇(5mL)为溶剂，室温搅拌2.5h，反应停止。抽滤，减压浓缩滤液，加水(5mL)，用乙酸乙酯(3×5mL)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(5mL)洗涤有机相一次，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物经硅胶柱层析，二氯甲烷/甲醇(体积比25:1)洗脱，得黄色油状物2(59mg,89.7％收率)。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.34(brs,1H),7.16(t,J＝7.8Hz,1H),6.94(brs,1H),6.78(brs,1H),6.77–6.73(m,2H),6.26(d,J＝2.3Hz,1H),6.18(d,J＝2.3Hz,1H),4.12(brt,J＝7.0Hz,2H),3.00(d,J＝16.0Hz,1H),2.62(d,J＝16.0Hz,1H),2.46(s,3H),2.34(dt,J＝13.9,6.9Hz,1H),2.28(s,3H),2.24(dt,J＝13.9,6.8Hz,1H)；13CNMR(150MHz,DMSO-d6)δ191.39,163.10,161.68,158.75,142.80,139.47,129.70,121.79,115.44,112.90,112.41,111.91,102.06,101.40,63.65,48.37,39.95,23.05,21.57；HRMS(ESI)m/z：329.1376(calcd.C19H20O5,[M+H]+329.1384)。
实施例三：化合物3的制备
Figure BDA0003011479270000091
(1)化合物S3c合成：
4-甲氧基苯酚S2c(1.24g,10.0mmol)和无水K2CO3(2.76g,20.0mmol)置于100mL圆底烧瓶中，以DMF(40mL)为溶剂，室温下滴加3-溴丙醛缩乙二醇(1.99g,11.0mmol)，滴加完毕，转移至65℃搅拌过夜，停止反应。抽滤，减压浓缩滤液，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×30ml)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(30mL)洗涤有机相一次，无水Na2SO4干燥、过滤、浓缩。残余物经硅胶柱层析，石油醚/乙酸乙酯(体积比15:1)洗脱，得无色油状物S3c(1.47g,65.6％收率)。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ6.85(d,J＝9.2Hz,2H),6.82(d,J＝9.2Hz,2H),5.09(t,J＝4.9Hz,1H),4.07(t,J＝6.5Hz,2H),4.02–3.96(m,2H),3.91–3.85(m,2H),3.76(s,3H),2.14(dt,J＝6.5,4.9Hz,2H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ153.78,152.93,115.46(2×C),114.57(2×C),102.10,64.91(2×C),64.24,55.71,33.90。
(2)化合物S5c合成：
将化合物S3c(505mg,2.25mmol)、乙酸(20mL)和水(5mL)置于50mL圆底烧瓶中，45℃搅拌反应5h，减压浓缩，加入饱和NaHCO3溶液(20mL)，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(20mL)洗涤有机相一次，无水Na2SO4干燥、过滤、浓缩，得到无色油状物S4c，无需纯化直接用于下一步反应。
取N,N-二异丙基氨基锂(2.0M的THF溶液,1.5mL,3.0mmol)置于圆底烧瓶中，N2置换3次，注入无水四氢呋喃(3mL)，-78℃条件下滴加化合物S1(520mg,1.5mmol)的无水四氢呋喃(2mL)溶液，滴加完毕后搅拌30min，将相应的醛S4c的无水四氢呋喃(2mL)溶液滴加到反应体系中，搅拌过夜。升温至0℃，缓慢滴加饱和NH4Cl溶液(5mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取(3×50mL)，合并有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物经硅胶柱层析，石油醚/乙酸乙酯(体积比8:1)洗脱，得黄色油状物S5c(345mg,43.7％收率)。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.42–7.28(m,10H),6.81(d,J＝9.2Hz,2H),6.79(d,J＝9.2Hz,2H),6.45(d,J＝2.0Hz,1H),6.43(d,J＝2.0Hz,1H),5.04(s,2H),5.01(s,2H),4.35–4.28(m,1H),3.98(t,J＝6.2Hz,2H),3.76(s,3H),3.41(brs,1H),3.12(dd,J＝17.3,2.7Hz,1H),2.87(dd,J＝17.3,8.9Hz,1H),2.26(s,3H),1.88–1.76(m,2H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ207.64,160.48,157.52,153.73,152.92,138.39,136.38,135.97,128.67(2×C),128.66(2×C),128.26,128.18,127.51(2×C),127.49(2×C),123.84,115.38(2×C),114.56(2×C),108.71,98.02,70.62,70.09,66.00,65.46,55.71,51.19,35.93,20.04。
(3)化合物S6c合成：
取化合物S5c(264mg,0.5mmol)置于25mL圆底烧瓶中，以无水二氯甲烷(10mL)为溶剂，0℃条件下缓慢加入戴斯-马丁氧化剂DMP(275mg,0.65mmol)，搅拌反应2h，滴加饱和Na2S2O3溶液(3mL)和饱和NaHCO3溶液(5mL)，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取(3×50mL)，合并有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物经硅胶柱层析，石油醚/乙酸乙酯(体积比15:1)洗脱，得黄色油状物S6c(214mg,81.2％收率)。化合物S6c为烯醇互变异构体，且异构体比例通过特征氢信号积分计算约为S6c烯醇式(enol):S6c酮式(keto)＝10:3。烯醇式：1HNMR(600MHz,CDCl3)δ15.64(brs,1H),7.42–7.25(m,10H),6.81(brs,4H),6.45(d,J＝2.3Hz,1H),6.44(d,J＝2.3Hz,1H),5.86(s,1H),5.03(s,4H),4.18(t,J＝6.5Hz,2H),3.76(s,3H),2.77(t,J＝6.5Hz,2H),2.33(s,3H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ190.71,186.78,160.43,157.33,153.97,152.63,139.39,136.60,136.48,128.64(2×C),128.50(2×C),128.13,127.82,127.51(2×C),126.90(2×C),119.96,115.67(2×C),114.58(2×C),108.65,104.28,98.45,70.47,70.04,64.53,55.70,38.51,20.41。酮式：1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.42–7.25(m,10H),6.80(d,J＝9.0Hz,2H),6.75(d,J＝9.0Hz,2H),6.44(brs,2H),5.03(s,2H),5.01(s,2H),4.03(t,J＝6.4Hz,2H),3.97(s,2H),3.75(s,3H),2.77(t,J＝6.4Hz,2H),2.30(s,3H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ202.50,198.83,160.95,158.15,153.87,152.65,139.98,136.27,135.76,128.77(2×C),128.68(2×C),128.42,128.22,127.79(2×C),127.52(2×C),122.90,115.47(2×C),114.54(2×C),109.07,97.90,70.75,70.10,63.18,59.08,55.70,42.65,20.52。
(4)化合物3合成：
取化合物S6c(100mg)和5％钯碳(20mg,20wt％)置于25mL圆底烧瓶中，用H2置换3次，注入乙醇(5mL)为溶剂，室温搅拌2.5h，反应停止。抽滤，减压浓缩滤液，加水(5mL)，用乙酸乙酯(3×5mL)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(5mL)洗涤有机相一次，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物经硅胶柱层析，二氯甲烷/甲醇(体积比25:1)洗脱，得黄色油状物3(59mg,90.3％收率)。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.33(s,1H),6.92(d,J＝2.1Hz,1H),6.89(d,J＝9.1Hz,2H),6.86(d,J＝9.1Hz,2H),6.26(d,J＝2.4Hz,1H),6.17(d,J＝2.3Hz,1H),4.08(brt,J＝6.9Hz,2H),3.69(s,3H),3.00(dd,J＝16.0,2.2Hz,1H),2.61(d,J＝16.0Hz,1H),2.46(s,3H),2.33(dt,J＝13.9,6.9Hz,1H),2.23(dt,J＝13.9,6.6Hz,1H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ191.39,163.08,161.68,153.82,152.75,142.80,115.75(2×C),115.06(2×C),112.89,112.42,102.06,101.41,64.27,55.78,48.38,40.02,23.05；HRMS(ESI)m/z：345.1316(calcd.C19H20O6,[M+H]+345.1333)。
实施例四：化合物4的制备
Figure BDA0003011479270000111
(1)化合物S3d合成：
3-三氟甲基苯酚S2d(1.62g,10.0mmol)和无水K2CO3(2.76g,20.0mmol)置于100mL圆底烧瓶中，以DMF(40mL)为溶剂，室温下滴加3-溴丙醛缩乙二醇(1.99g,11.0mmol)，滴加完毕，转移至65℃搅拌过夜，停止反应。抽滤，减压浓缩滤液，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×30ml)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(30mL)洗涤有机相一次，无水Na2SO4干燥、过滤、浓缩。残余物经硅胶柱层析，石油醚/乙酸乙酯(体积比25:1)洗脱，得无色油状物S3d(1.89g,72.1％收率)。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.38(t,J＝8.0Hz,1H),7.20(d,J＝7.7Hz,1H),7.14(brs,1H),7.07(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),5.10(t,J＝4.8Hz,1H),4.16(t,J＝6.5Hz,2H),4.04–3.97(m,2H),3.93–3.86(m,2H),2.18(dt,J＝6.5,4.8Hz,2H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ158.90,131.77(q,JC-F＝32.3Hz),129.92,123.96(JC-F＝272.4Hz),117.97,117.39(q,JC-F＝3.9Hz),111.27(q,J＝3.9Hz),101.96,64.97(2×C),63.89,33.64.
(2)化合物S5d合成：
将化合物S3d(589mg,2.25mmol)、乙酸(20mL)和水(5mL)置于50mL圆底烧瓶中，45℃搅拌反应5h，减压浓缩，加入饱和NaHCO3溶液(20mL)，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取，合并有机相，饱和NaCl(20mL)溶液洗涤有机相一次，无水Na2SO4干燥、过滤、浓缩，得到无色油状物S4d，无需纯化直接用于下一步反应。
取N,N-二异丙基氨基锂(2.0M的THF溶液,1.5mL,3.0mmol)置于圆底烧瓶中，N2置换3次，注入无水四氢呋喃(3mL)，-78℃条件下滴加化合物S1(520mg,1.5mmol)的无水四氢呋喃(2mL)溶液，滴加完毕后搅拌30min，将相应的醛S4d的无水四氢呋喃(2mL)溶液滴加到反应体系中，搅拌过夜。升温至0℃，缓慢滴加饱和NH4Cl溶液(5mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取(3×50mL)，合并有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物经硅胶柱层析，石油醚/乙酸乙酯(体积比15:1)洗脱，得黄色油状物S5d(386mg,45.6％收率)。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.41–7.33(m,10H),7.30–7.28(m,1H),7.19(d,J＝7.6Hz,1H),7.08(t,J＝2.1Hz,1H),7.01(dd,J＝8.3,2.4Hz,1H),6.46(d,J＝2.2Hz,1H),6.44(d,J＝2.2Hz,1H),5.04(s,2H),5.01(s,2H),4.33–4.27(m,1H),4.07–4.01(m,2H),3.45(brs,1H),3.13(dd,J＝17.4,2.7Hz,1H),2.85(dd,J＝17.4,9.0Hz,1H),2.26(s,3H),1.89–1.78(m,2H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ207.73,160.60,158.94,157.63,138.50,136.35,135.90,131.71(q,JC-F＝32.2Hz),129.89,128.68(4×C),128.32,128.20,127.56(2×C),127.51(2×C),123.97(q,JC-F＝272.4Hz),123.68,117.86,117.27(q,JC-F＝3.9Hz),111.30(q,JC-F＝3.9Hz),108.77,98.02,70.67,70.11,65.56,64.87,51.01,35.71,20.09.
(3)化合物S6d合成：
取化合物S5d(282mg,0.5mmol)置于25mL圆底烧瓶中，以无水二氯甲烷(10mL)为溶剂，0℃条件下缓慢加入戴斯-马丁氧化剂DMP(275mg,0.65mmol)，搅拌反应2h，滴加饱和Na2S2O3溶液(3mL)和饱和NaHCO3溶液(5mL)，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取(3×50mL)，合并有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物经硅胶柱层析，石油醚/乙酸乙酯(体积比25:1)洗脱，得黄色油状物S6d(222mg,78.8％收率收率)。化合物S6d为烯醇互变异构体，且异构体比例通过特征氢信号积分计算约为S6d烯醇式(enol):S6d酮式(keto)＝10:3。烯醇式：1H NMR(600MHz,CDCl3)δ15.60(brs,1H),7.42–7.29(m,10H),7.27(t,J＝7.4Hz,1H),7.21(d,J＝8.2Hz,1H),7.10(brs,1H),7.02(brd,J＝8.2Hz,1H),6.46(brs,2H),5.87(s,1H),5.04(s,2H),5.03(s,2H),4.25(t,J＝6.5Hz,2H),2.81(t,J＝6.5Hz,2H),2.34(s,3H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ190.30,186.58,160.52,158.64,157.40,139.50,136.55,136.45,131.79(q,JC-F＝32.3Hz),129.96,128.65(2×C),128.49(2×C),128.15,127.86,127.51(2×C),126.93(2×C),123.90(q,JC-F＝272.4Hz),119.74,117.98,117.62(q,JC-F＝3.9Hz),111.39(q,JC-F＝3.7Hz),108.70,104.32,98.44,70.50,70.05,63.98,38.25,20.44。酮式：1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.42–7.29(m,10H),7.27(t,J＝7.4Hz,1H),7.18(d,J＝8.2Hz,1H),7.04(brs,1H),6.97(brd,J＝8.3Hz,1H),6.46(brs,2H),5.04(s,2H),5.02(s,2H),4.07(t,J＝6.5Hz,2H),3.97(s,2H),2.81(t,J＝6.5Hz,2H),2.31(s,3H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ201.95,198.72,161.03,158.64,158.21,140.00,136.24,135.69,131.72(q,JC-F＝32.2Hz),129.90,128.78(2×C),128.69(2×C),128.49,128.24,127.92(2×C),127.52(2×C),123.92(q,JC-F＝272.4Hz),122.82,117.85,117.48(q,JC-F＝3.7Hz),111.31(q,JC-F＝3.8Hz),109.10,97.89,70.82,70.12,62.66,59.08,42.17,20.52。
(4)化合物4合成：
取化合物S6d(100mg)和5％钯碳(20mg,20wt％)置于25mL圆底烧瓶中，用H2置换3次，注入乙醇(5mL)为溶剂，室温搅拌2.5h，反应停止。抽滤，减压浓缩滤液，加水(5mL)，用乙酸乙酯(3×5mL)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(5mL)洗涤有机相一次，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物经硅胶柱层析，二氯甲烷/甲醇(体积比25:1)洗脱，得黄色油状物4(58mg,85.3％收率)。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.33(s,1H),7.53(t,J＝8.3Hz,1H),7.31–7.27(m,3H),6.97(d,J＝2.0Hz,1H),6.26(d,J＝2.3Hz,1H),6.18(d,J＝2.3Hz,1H),4.24(brt,J＝6.9Hz,2H),3.04(dd,J＝15.9,2.0Hz,1H),2.64(d,J＝15.9Hz,1H),2.47(s,3H),2.39(dt,J＝14.0,6.9Hz,1H),2.29(dt,J＝14.0,6.8Hz,1H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ191.35,163.09,161.65,159.08,142.80,131.18,130.79(q,JC-F＝31.5Hz),124.49(q,JC-F＝272.4Hz),119.32,117.62(q,JC-F＝3.9Hz),112.91,112.41,111.33(q,JC-F＝3.9Hz),102.07,101.27,64.49,48.25,39.97,23.05；HRMS(ESI)m/z:383.1100(calcd.C19H17F3O5,[M+H]+383.1101)。
实施例五：化合物5的制备
Figure BDA0003011479270000131
(1)化合物S3e合成：
3-氟苯酚S2e(1.12g,10.0mmol)和无水K2CO3(2.76g,20.0mmol)置于100mL圆底烧瓶中，以DMF(40mL)为溶剂，室温下滴加3-溴丙醛缩乙二醇(1.99g,11.0mmol)，滴加完毕，转移至65℃搅拌过夜，停止反应。抽滤，减压浓缩滤液，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(3×30ml)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(30mL)洗涤有机相一次，无水Na2SO4干燥、过滤、浓缩。残余物经硅胶柱层析，石油醚/乙酸乙酯(体积比25:1)洗脱，得黄色油状物S3e(1.44g,67.9％收率)。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.21(brq,J＝7.6Hz,1H),6.69(dd,J＝8.3,2.3Hz,1H),6.66–6.60(m,2H),5.09(t,J＝4.8Hz,1H),4.10(t,J＝6.5Hz,2H),4.03–3.97(m,2H),3.92–3.86(m,2H),2.16(dt,J＝6.5,4.8Hz,2H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ163.60(d,JC-F＝244.9Hz),160.26(d,JC-F＝10.9Hz),130.14(d,JC-F＝10.0Hz),110.27(d,C-FJ＝2.8Hz),107.49(d,JC-F＝21.5Hz),102.19(d,JC-F＝24.9Hz),101.90,64.95(2×C),63.85,33.64。
(2)化合物S5e合成：
将化合物S3e(477mg,2.25mmol)、乙酸(20mL)和水(5mL)置于50mL圆底烧瓶中，45℃搅拌反应5h，减压浓缩，加入饱和NaHCO3溶液(20mL)，用乙酸乙酯(3×20mL)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(20mL)洗涤有机相一次，无水Na2SO4干燥、过滤、浓缩，得到无色油状物S4e，无需纯化直接用于下一步反应。
取N,N-二异丙基氨基锂(2.0M的THF溶液,1.5mL,3.0mmol)置于圆底烧瓶中，N2置换3次，注入无水四氢呋喃(3mL)，-78℃条件下滴加化合物S1(520mg,1.5mmol)的无水四氢呋喃(2mL)溶液，滴加完毕后搅拌30min，将相应的醛S4e的无水四氢呋喃(2mL)溶液滴加到反应体系中，搅拌过夜。升温至0℃，缓慢滴加饱和NH4Cl溶液(5mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取(3×50mL)，合并有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物经硅胶柱层析，石油醚/乙酸乙酯(体积比15:1)洗脱，得黄色油状物S5e(342mg,44.3％收率)。1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.42–7.28(m,10H),7.18(q,J＝7.8Hz,1H),6.65–6.61(m,2H),6.56(brd,J＝10.0Hz,1H),6.46(d,J＝2.1Hz,1H),6.44(d,J＝2.1Hz,1H),5.04(s,2H),5.00(s,2H),4.32–4.26(m,1H),4.02–3.96(m,2H),3.42(brs,1H),3.11(dd,J＝17.3,2.7Hz,1H),2.85(dd,J＝17.3,8.9Hz,1H),2.26(s,3H),1.87–1.75(m,2H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ207.67,163.57(d,JC-F＝244.8Hz),160.56,160.18(d,JC-F＝10.7Hz),157.59,138.46,136.36,135.91,130.10(d,JC-F＝10.0Hz),128.68(2×C),128.66(2×C),128.31,128.18,127.54(2×C),127.50(2×C),123.71,110.25(d,JC-F＝2.8Hz),108.75,107.38(d,JC-F＝21.2Hz),102.14(d,JC-F＝24.8Hz),98.01,70.65,70.09,65.63,64.89,51.05,35.69,20.07。
(3)化合物S6e合成：
取化合物S5e(257mg,0.5mmol)置于25mL圆底烧瓶中，以无水二氯甲烷(10mL)为溶剂，0℃条件下缓慢加入戴斯-马丁氧化剂DMP(275mg,0.65mmol)，搅拌反应2h，滴加饱和Na2S2O3溶液(3mL)和饱和NaHCO3溶液(5mL)，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取(3×50mL)，合并有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物经硅胶柱层析，石油醚/乙酸乙酯(体积比25:1)洗脱，得黄色油状物S6e(197mg,76.7％收率)。化合物S6e为烯醇互变异构体，且异构体比例通过特征氢信号积分计算约为S6e烯醇式(enol):S6e酮式(keto)＝10:2.7。烯醇式：1HNMR(600MHz,CDCl3)δ15.60(brs,1H),7.41–7.27(m,10H),7.20(brq,J＝8.2Hz,1H),6.68–6.62(m,2H),6.58(dt,J＝10.9,2.4Hz,1H),6.46(d,J＝2.5Hz,1H),6.45(d,J＝2.5Hz,1H),5.86(s,1H),5.04(s,2H),5.03(s,2H),4.20(t,J＝6.5Hz,2H),2.79(t,J＝6.5Hz,2H),2.34(s,3H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ190.40,186.69,163.59(d,JC-F＝245.2Hz),160.52,159.88(d,JC-F＝10.8Hz),157.41,139.49,136.59,136.49,130.22(d,JC-F＝9.9Hz),128.68(2×C),128.54(2×C),128.18,127.90,127.54(2×C),126.97(2×C),119.84,110.30(d,JC-F＝2.8Hz),108.71,107.78(d,JC-F＝21.3Hz),104.31,102.37(d,JC-F＝24.8Hz),98.47,70.53,70.08,64.00,38.26,20.46。酮式：1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.41–7.27(m,10H),7.20(brq,J＝8.2Hz,1H),6.68–6.62(m,2H),6.52(dt,J＝10.9,2.4Hz,1H),6.46(d,J＝2.5Hz,1H),6.45(d,J＝2.5Hz,1H),5.04(s,2H),5.02(s,2H),4.04(t,J＝6.4Hz,2H),3.96(s,2H),2.79(t,J＝6.4Hz,2H),2.30(s,3H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ202.10,198.77,163.56(d,JC-F＝245.1Hz),161.04,159.89(d,JC-F＝10.9Hz),158.22,140.04,136.28,135.73,130.16(d,JC-F＝10.0Hz),128.81(2×C),128.72(2×C),128.52,128.27,127.92(2×C),127.56(2×C),122.85,110.18(d,JC-F＝2.7Hz),109.12,107.65(d,JC-F＝21.0Hz),102.26(d,JC-F＝24.8Hz),97.92,70.83,70.15,62.70,59.09,42.26,20.55。
(4)化合物5合成：
取化合物S6e(100mg)和5％钯碳(20mg,20wt％)置于25mL圆底烧瓶中，用H2置换3次，注入乙醇(5mL)为溶剂，室温搅拌2.5h，反应停止。抽滤，减压浓缩滤液，加水(5mL)，用乙酸乙酯(3×5mL)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(5mL)洗涤有机相一次，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物经硅胶柱层析，二氯甲烷/甲醇(体积比25:1)洗脱，得黄色油状物5(56mg,86.4％收率)。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.35(brs,1H),7.31(q,J＝7.8Hz,1H),6.96(brs,1H),6.86(brd,J＝11.3Hz,1H),6.81(brd,J＝8.4Hz,1H),6.77(brt,J＝8.4Hz,1H),6.26(d,J＝2.2Hz,1H),6.18(d,J＝2.2Hz,1H),4.17(brt,J＝6.9Hz,2H),,3.01(d,J＝16.0Hz,1H),2.62(d,J＝16.0Hz,1H),2.46(s,3H),2.36(dt,J＝13.8,7.0Hz,1H),2.27(dt,J＝13.8,6.7Hz,1H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ191.35,163.48(d,JC-F＝242.8Hz),163.10,161.65,160.27(d,JC-F＝11.0Hz),142.81,131.16(d,JC-F＝10.1Hz),112.92,112.41,111.34(d,JC-F＝2.7Hz),107.67(d,JC-F＝21.2Hz),102.39(d,JC-F＝24.9Hz),102.07,101.28,64.38,48.28,39.96,23.05；HRMS(ESI)m/z:355.0953(calcd.C18H17FO5,[M+Na]+355.0952)。
实施例六：化合物6的制备
Figure BDA0003011479270000151
(1)化合物S5f合成：
取N,N-二异丙基氨基锂(2.0M的THF溶液,1.5mL,3.0mmol)置于圆底烧瓶中，N2置换3次，注入无水四氢呋喃(3mL)，-78℃条件下滴加化合物S1(520mg,1.5mmol)的无水四氢呋喃(2mL)溶液，滴加完毕后搅拌30min，将正丁醛(162mg,2.25mmol)的无水四氢呋喃(2mL)溶液滴加到反应体系中，搅拌过夜。升温至0℃，缓慢滴加饱和NH4Cl溶液(5mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取(3×50mL)，合并有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物经硅胶柱层析，石油醚/乙酸乙酯(体积比10:1)洗脱，得黄色油状物S5f(256mg,38.1％收率)。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.42–7.32(m,10H),6.45(d,J＝2.1Hz,1H),6.43(d,J＝2.1Hz,1H),5.04(s,2H),5.01(s,2H),4.06–4.02(m,1H),3.23(brs,1H),3.07(dd,J＝17.4,2.4Hz,1H),2.71(dd,J＝17.4,9.3Hz,1H),2.25(s,3H),1.45–1.39(m,1H),1.37–130(m,1H),1.29–1.21(m,2H),0.85(t,J＝7.2Hz,3H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ208.26,160.45,157.49,138.32,136.42,135.99,128.66(2×C),128.65(2×C),128.25,128.17,127.56(2×C),127.51(2×C),123.99,108.69,98.01,70.64,70.10,68.01,51.14,38.70,20.01,18.56,14.02。
(2)化合物S6f合成：
取化合物S5f(209mg,0.5mmol)置于25mL圆底烧瓶中，以无水二氯甲烷(10mL)为溶剂，0℃条件下缓慢加入戴斯-马丁氧化剂DMP(275mg,0.65mmol)，搅拌反应2h，滴加饱和Na2S2O3溶液(3mL)和饱和NaHCO3溶液(5mL)，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取(3×50mL)，合并有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物经硅胶柱层析，石油醚/乙酸乙酯(体积比20:1)洗脱，得黄色油状物S6f(177mg,85.2％收率)。化合物S6f为烯醇互变异构体，且异构体比例通过特征氢信号积分计算约为S6f烯醇式(enol):S6f酮式(keto)＝4:1。烯醇式：1HNMR(600MHz,CDCl3)δ15.72(brs,1H),7.42–7.27(m,10H),6.45(brs,2H),5.76(s,1H),5.04(s,2H),5.03(s,2H),2.33(s,3H),2.28(t,J＝7.5Hz,2H),1.62(sext,J＝7.5Hz,1H),0.93(t,J＝7.5Hz,3H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ193.60,187.44,160.29,157.20,139.17,136.64,136.55,128.64(2×C),128.45(2×C),128.12,127.78,127.51(2×C),126.95(2×C),120.56,108.57,103.54,98.42,70.46,70.05,40.36,20.32,19.23,13.76。酮式：1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.42–7.27(m,10H),6.44(brs,2H),5.04(s,2H),5.02(s,2H),3.90(s,2H),2.31(t,J＝7.4Hz,2H),2.30(s,3H),1.46(sext,J＝7.4Hz,2H),0.80(t,J＝7.4Hz,3H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ204.86,199.26,160.84,158.04,139.85,136.33,135.87,128.73(2×C),128.68(2×C),128.39,128.20,127.78(2×C),127.52(2×C),123.13,109.03,97.89,70.74,70.10,58.74,45.17,20.44,16.72,13.55。
(3)化合物6合成：
取化合物S6f(100mg)和5％钯碳(20mg,20wt％)置于25mL圆底烧瓶中，用H2置换3次，注入乙醇(5mL)为溶剂，室温搅拌2.5h，反应停止。抽滤，减压浓缩滤液，加水(5mL)，用乙酸乙酯(3×5mL)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(5mL)洗涤有机相一次，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物经硅胶柱层析，二氯甲烷/甲醇(体积比15:1)洗脱，得黄色油状物6(49mg,85.7％收率)。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.27(brs,1H),6.61(s,1H),6.23(d,J＝2.4Hz,1H),6.13(d,J＝2.4Hz,1H),2.84(d,J＝15.8Hz,1H),2.47(d,J＝15.8Hz,1H),2.45(s,3H),1.83–1.71(m,2H),1.45–1.38(m,2H),0.91(t,J＝7.4Hz,3H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ191.72,163.04,162.02,142.69,112.69,112.45,102.49,101.98,47.70,42.86,23.03,17.12,14.57；HRMS(ESI)m/z:237.1118(calcd.C13H16O4,[M+H]+237.1121)。
实施例七：化合物7的制备
Figure BDA0003011479270000161
(1)化合物S5g合成：
取N,N-二异丙基氨基锂(2.0M的THF溶液,1.5mL,3.0mmol)置于圆底烧瓶中，N2置换3次，注入无水四氢呋喃(3mL)，-78℃条件下滴加化合物S1(520mg,1.5mmol)的无水四氢呋喃溶液(2mL)，滴加完毕后搅拌30min，将正戊醛醛(194mg,2.25mmol)的无水四氢呋喃溶液(2mL)滴加到反应体系中，搅拌过夜。升温至0℃，缓慢滴加饱和NH4Cl溶液(5mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取(3×50mL)，合并有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物经硅胶柱层析，石油醚/乙酸乙酯(体积比10:1)洗脱，得黄色油状物S5g(252mg,37.6％收率)。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.41–7.33(m,10H),6.45(d,J＝2.2Hz,1H),6.43(d,J＝2.2Hz,1H),5.04(s,2H),5.01(s,2H),4.05–4.01(m,1H),3.24(brs,1H),3.07(dd,J＝17.4,2.4Hz,1H),2.71(dd,J＝17.4,9.3Hz,1H),2.25(s,3H),1.46–1.41(m,1H),1.32–1.23(m,4H),1.22–1.17(m,1H),0.86(t,J＝7.1Hz,3H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ208.29,160.45,157.49,138.33,136.42,136.01,128.67(2×C),128.66(2×C),128.26,128.18,127.54(2×C),127.51(2×C),124.01,108.70,98.02,70.64,70.11,68.29,51.14,36.29,27.53,22.65,20.02,14.05。
(2)化合物S6g合成：
取化合物S5g(216mg,0.5mmol)置于25mL圆底烧瓶中，以无水二氯甲烷(10mL)为溶剂，0℃条件下缓慢加入戴斯-马丁氧化剂DMP(275mg,0.65mmol)，搅拌反应2h，滴加饱和Na2S2O3溶液(3mL)和饱和NaHCO3溶液(5mL)，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取(3×50mL)，合并有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物经硅胶柱层析，石油醚/乙酸乙酯(体积比20:1)洗脱，得黄色油状物S6g(173mg,76.7％收率)。化合物S6g为烯醇互变异构体，且异构体比例通过特征氢信号积分计算约为S6g烯醇式(enol):S6g酮式(keto)＝4:1。烯醇式：1HNMR(600MHz,CDCl3)δ15.72(s,1H),7.42–7.27(m,10H),6.45(brs,2H),5.76(s,1H),5.04(s,2H),5.03(s,2H),2.32(s,3H),2.30(t,J＝7.4Hz,2H),1.57(quint,J＝7.4Hz,2H),1.34(sext,J＝7.4Hz,2H),0.90(t,J＝7.4Hz,3H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ193.94,187.30,160.28,157.20,139.16,136.65,136.55,128.63(2×C),128.44(2×C),128.11,127.77,127.50(2×C),126.93(2×C),120.54,108.58,103.46,98.43,70.46,70.04,38.22,27.89,22.37,20.31,13.83。酮式：1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.42–7.27(m,10H),6.44(brs,2H),5.04(s,2H),5.02(s,2H),3.90(s,2H),2.31(t,J＝7.4Hz,2H),2.30(s,3H),1.42(quint,J＝7.4Hz,2H),1.34(sext,J＝7.4Hz,2H),0.83(t,J＝7.4Hz,3H；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ204.98,199.27,160.84,158.05,139.86,136.33,135.88,128.73(2×C),128.67(2×C),128.37,128.20,127.74(2×C),127.52(2×C),123.13,109.04,97.89,70.73,70.10,58.75,43.03,25.37,22.12,20.44,13.83。
(3)化合物7合成：
取化合物S6g(100mg)和5％钯碳(20mg,20wt％)置于25mL圆底烧瓶中，用H2置换3次，注入乙醇(5mL)为溶剂，室温搅拌2.5h，反应停止。抽滤，减压浓缩滤液，加水(5mL)，用乙酸乙酯(3×5mL)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(5mL)洗涤有机相一次，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物经硅胶柱层析二氯甲烷/甲醇(体积比15:1)洗脱，得黄色油状物7(52mg,89.4％收率)。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.26(s,1H),6.60(d,J＝2.2Hz,1H),6.23(d,J＝2.3Hz,1H),6.13(d,J＝2.3Hz,1H),2.83(d,J＝15.7Hz,1H),2.47(d,J＝15.7Hz,1H),2.45(s,3H),1.84–1.73(m,2H),1.41–1.35(m,2H),1.34–1.28(m,2H),0.89(t,J＝7.2Hz,3H)；13CNMR(150MHz,DMSO-d6)δ191.71,163.02,162.02,142.69,112.68,112.46,102.57,101.98,47.71,39.98,25.87,23.03,22.76,14.40；HRMS(ESI)m/z:251.1269(calcd.C14H18O4,[M+H]+251.1278)。
实施例八：化合物8的制备
Figure BDA0003011479270000181
(1)化合物S5h合成：
取N,N-二异丙基氨基锂(2.0M的THF溶液,1.5mL,3.0mmol)置于圆底烧瓶中，N2置换3次，注入无水四氢呋喃(3mL)，-78℃条件下滴加化合物S1(520mg,1.5mmol)的无水四氢呋喃(2mL)溶液，滴加完毕后搅拌30min，将正己醛(226mg,2.25mmol)的无水四氢呋喃(2mL)溶液滴加到反应体系中，搅拌过夜。升温至0℃，缓慢滴加饱和NH4Cl溶液(5mL)，分离有机相，水相用乙酸乙酯萃取(3×50mL)，合并有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物经硅胶柱层析，石油醚/乙酸乙酯(体积比10:1)洗脱，得无色油状物S5h(273mg,40.7％收率)。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.41–7.33(m,10H),6.45(d,J＝2.2Hz,1H),6.43(d,J＝2.2Hz,1H),5.04(s,2H),5.01(s,2H),4.05–4.01(m,1H),3.24(d,J＝2.8Hz,1H),3.07(dd,J＝17.3,2.4Hz,1H),2.71(dd,J＝17.4,9.3Hz,1H),2.25(s,3H),1.45–1.40(m,1H),1.34–1.31(m,1H),1.30–1.20(m,6H),0.87(t,J＝7.1Hz,3H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ208.28,160.44,157.48,138.31,136.42,136.00,128.66(2×C),128.65(2×C),128.25,128.17,127.52(2×C),127.50(2×C),124.01,108.69,98.02,70.63,70.10,68.30,51.14,36.58,31.80,25.04,22.59,20.01,14.06。
(2)化合物S6h合成：
取化合物S5h(216mg,0.5mmol)置于25mL圆底烧瓶中，以无水二氯甲烷(10mL)为溶剂，0℃条件下缓慢加入戴斯-马丁氧化剂DMP(275mg,0.65mmol)，搅拌反应2h，滴加饱和Na2S2O3溶液(3mL)和饱和NaHCO3溶液(5mL)，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取(3×50mL)，合并有机相，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩，石油醚/乙酸乙酯(体积比20:1)洗脱，得黄色油状物S6h(179mg,80.7％收率)。化合物S6h为烯醇互变异构体，且异构体比例通过特征氢信号积分计算约为S6h烯醇式(enol):S6h酮式(keto)＝4:1。烯醇式：1H NMR(600MHz,CDCl3)δ15.72(brs,1H),7.42–7.27(m,10H),6.45(brs,2H),5.76(s,1H),5.03(s,2H),5.03(s,2H),2.33(s,3H),2.30(t,J＝7.4Hz,2H),1.60(qiunt,J＝7.4Hz,2H),1.34–1.26(m,4H),0.88(t,J＝7.0Hz,3H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ194.04,187.22,160.28,157.19,139.15,136.67,136.55,128.64(2×C),128.45(2×C),128.11,127.77,127.50(2×C),126.90(2×C),120.54,108.58,103.45,98.46,70.46,70.05,38.51,31.44,25.49,22.40,20.31,13.94。酮式：1H NMR(600MHz,CDCl3)δ7.42–7.27(m,10H),6.44(brs,2H),5.03(s,2H),5.02(s,2H),3.90(s,2H),2.32(t,J＝7.5Hz,2H),2.30(s,3H),1.44(qiunt,J＝7.5Hz,2H),1.23(qiunt,J＝7.5Hz,2H),1.17–1.11(m,2H),0.85(t,J＝7.3Hz,3H)；13C NMR(150MHz,CDCl3)δ204.99,199.27,160.84,158.05,139.86,136.33,135.88,128.73(2×C),128.67(2×C),128.37,128.20,127.74(2×C),127.52(2×C),123.13,109.04,97.89,70.73,70.10,58.76,43.29,31.17,22.98,22.42,20.45,13.92。
(3)化合物8合成：
取化合物S6h(100mg)和5％钯碳(20mg,20wt％)置于25mL圆底烧瓶中，用H2置换3次，注入乙醇(5mL)为溶剂，室温搅拌2.5h，反应停止。抽滤，减压浓缩滤液，加水(5mL)，用乙酸乙酯(3×5mL)萃取，合并有机相，饱和NaCl溶液(5mL)洗涤有机相一次，无水Na2SO4干燥，过滤，浓缩。残余物经硅胶柱层析，二氯甲烷/甲醇(体积比25:1)洗脱，得黄色油状物8(49mg,81.9％收率)。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.26(s,1H),6.60(d,J＝2.1Hz,1H),6.23(d,J＝2.3Hz,1H),6.12(d,J＝2.3Hz,1H),2.84(dd,J＝15.8,2.1Hz,1H),2.47(d,J＝15.9Hz,1H),2.45(s,3H),1.83–1.72(m,2H),1.43–1.36(m,2H),1.33–1.25(m,4H),0.88(t,J＝7.0Hz,3H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ191.71,163.01,162.02,142.69,112.68,112.46,102.57,101.97,47.70,40.61,31.82,23.36,23.03,22.52,14.38；HRMS(ESI)m/z:265.1434(calcd.C15H20O4,[M+H]+265.1434)。
测试例一：抗炎活性实验
1.实验方法
在本测试例中，所用到的细胞系均在完全培养基(含10％胎牛血清、1％L-谷氨酰胺、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素的DMEM培养基)中培养，并置于5％CO2，37℃恒温培养箱中孵育。本实验测试化合物1-8由所述实施例一至实施例八所述制备，用DMSO配置成100mM的母液储存于-20℃条件保存，实验之前再稀释成实验所需要的浓度，DMSO不超过千分之一。
1.1MTT法检测细胞的存活率：消化生长状态良好的RAW 264.7细胞，制成细胞悬液并计数，调整细胞浓度以1×105cells/well铺96孔板，于5％CO2、37℃培养过夜，次日先加测试化合物(33μM)预处理2h，同时空白对照加等体积DMSO处理，之后再加LPS(1μg/mL)，每组样品设有三个复孔，继续培养24h，加20μL 5mg/mL MTT继续培养4h后，弃去培养液，加入150μL DMSO低速摇床上震荡10min，使得紫色结晶充分溶解后，采用酶标仪在490nm测OD值计算抑制率。该实验目的是找出化合物的最佳实验浓度，避免因细胞毒性干扰实验结果。细胞存活率＝OD490(药物组)/OD490(空白对照组)×100％。
1.2Griess法检测药物处理后RAW 264.7细胞NO释放率，具体步骤如下：
(1)消化对数期生长RAW 264.7细胞，制成细胞悬液，计数并调整细胞数，以1×106cells/well铺6孔板，置于5％CO2、37℃培养箱培养过夜。
(2)每孔里面换1mL的无血清DMEM培养基，加入稀释好的化合物浓度均为3.3、11和33μM预处理2h后，再加入LPS(1μg/mL)刺激，过夜继续培养24h。每个化合物实验组中空白对照(Con)，用空白试剂处理不加LPS刺激；模型对照(LPS)，加空白试剂和LPS刺激。
(3)将Griess ReagentⅠ和Ⅱ恢复至室温，用无血清的DMEM培养基稀释标准品，其浓度分别是：0、1、2、5、10、20、40、60、和100μM。
(4)取待测样品和标准品各50μL，加到新96孔板，每个样品设三个复孔，之后每孔加入50μL Griess ReagentⅠ，接着再加入Griess ReagentⅡ，540nm处测吸光值。
NO释放率＝OD540(药物组或空白溶剂组)/OD540(LPS对照组)×100％。
1.3ELISA法检测细胞培养基炎症因子含量：
取对数期生长RAW 264.7细胞，消化并计数，以1×106cells/well铺6孔板，于5％CO2、37℃培养过夜，次日换1mL无血清DMEM，加化合物(3.3、11和33μM)预处理2h，再加LPS(1μg/mL)刺激4h之后收集上清，按ELISA试剂盒操作步骤检测炎症因子TNF-α和IL-6的含量。每个化合物实验组中空白对照(Con)，用空白试剂处理不加LPS刺激；模型对照(LPS)，加空白试剂和LPS刺激。具体的步骤如下：
(1)将试剂盒中的所有试剂恢复至室温，稀释剂和洗涤液用灭菌的去离子水稀释为1×的工作液，同时按试剂盒要求稀释标准品。
(2)吸取50μL待测细胞培养基和标准品于96孔板，再加入1×的稀释剂50μL，密封之后，于室温水平震荡孵育2h，每个样品设三个复孔。
(3)弃去液体，每孔加入1×的洗涤液400μL，洗干净96孔板，并用吸水纸吸干，尽量去除残液，重复洗涤三次。
(4)控干96孔板之后往每孔加入100μL酶标检测抗体，用封板膜封闭96孔板，室温水平震荡孵育2h。
(5)再重复操作步骤(3)，每孔加入显色液100μL，室温避光水平震荡孵育30min。
(6)加入100μL终止液，终止反应，轻拍96孔板，使溶液混合均匀，接着450nm处读取OD值。
(7)绘制标准曲线，根据公式计算出各待测炎症因子TNF-α和IL-6的含量。
2实验结果
在细胞的存活率实验中，在给予33μM不同药物处理后与溶剂处理组(Vel)相比，细胞存活率未见明显差异(见图17)。结果表明在此实验浓度或更低浓度下，待测化合物不影响细胞生长。
如图18所示，在一氧化氮释放率实验中，与对照组(Con)相比，LPS刺激后RAW264.7细胞NO释放明显增强。与LPS相比，在分别给予化合物1-8处理后，NO释放明显受到抑制，且呈剂量依赖性。结果表明化合物1-8能够明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO释放。
如图19和图20所示，与对照组(Con)相比，LPS刺激后RAW264.7细胞产生炎症因子TNF-α和IL-6水平明显增加。与LPS相比，在分别给予化合物1-8处理后，TNF-α和IL-6水平明显降低，且呈剂量依赖性。结果表明化合物1-8能够明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子TNF-α和IL-6的产生。
3、实验结论
上述活性实验表明本发明所述的2-乙基-2,7-二羟基-5甲基-苯并二氢吡喃-4-酮衍生物具有较好的抗炎活性。因此，本发明的2-乙基-2,7-二羟基-5甲基-苯并二氢吡喃-4-酮衍生物可用于制备抗炎药物。
以上示例性实施方式所呈现的描述仅用以说明本发明的技术方案，并不想要成为毫无遗漏的，也不想要把本发明限制为所描述的精确形式。显然，本领域的普通技术人员根据上述教导做出很多改变和变化都是可能的。选择示例性实施方式并进行描述是为了解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的其它技术人员便于理解、实现并利用本发明的各种示例性实施方式及其各种选择形式和修改形式。本发明的保护范围意在由所附权利要求书及其等效形式所限定。

Claims (9)

1.一种具有抗炎活性的2-乙基-2,7-二羟基-5甲基-苯并二氢吡喃-4-酮类化合物，其特征在于，所述化合物的结构通式如式I所示：
Figure FDA0003011479260000011
其中：R为1～5个碳原子的烷烃、烯烃、脂肪族烷氧基、芳香族烷氧基或氢。
2.根据权利要求1所述的具有抗炎活性的2-乙基-2,7-二羟基-5甲基-苯并二氢吡喃-4-酮类化合物，其特征在于，在式I中，R为甲基、乙基、丙基、苯氧基、3-甲基苯氧基、4-甲氧基苯氧基、3-氟甲基苯氧基、3-氟苯氧基或氢。
3.如权利要求1或2所述的具有抗炎活性的2-乙基-2,7-二羟基-5甲基-苯并二氢吡喃-4-酮类化合物的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括以下步骤：
Figure FDA0003011479260000012
(1)S3a-S3e的合成：相应苯酚衍生物S2a-S2e，3-溴丙醛缩乙二醇和无水碳酸钾，以N,N-二甲基甲酰胺或其它非质子性溶剂为溶剂在25℃～100℃下反应24小时，抽滤，滤液减压蒸馏除N,N-二甲基甲酰胺，加入水，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，减压浓缩，得粗产物为无色至淡黄色油状物；粗产物经重结晶或硅胶柱层析获得中间体S3a-S3e；
(2)S4a-S4e的合成：将步骤1中获得的相应中间体S3a-S3e加入冰乙酸和水，25℃～65℃加热反应4～12小时，减压蒸馏除去乙酸，加入水，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，饱和食盐水萃取有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得化合物S4a-S4e粗产物；
(3)S5a-S5h的合成：将步骤2中获得的相应化合物S4a-S4e，正丁醛，正戊醛或正己醛分别与苯乙酮衍生物S1，以四氢呋喃为溶剂，在强碱催化下，于-80℃～25℃反应0.5～24小时；加入饱和氯化铵水溶液，乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得粗产物为淡黄色至黄色油状物；粗产物经重结晶或硅胶柱层析获得化合物S5a-S5h；
(4)S6a-S6h的合成：将步骤3中获得的相应化合物S5a-S5h溶于无水二氯甲烷中，-40℃～25℃加入氧化剂，搅拌反应1～12小时；加入饱和硫代硫酸钠水溶液和饱和碳酸氢钠水溶液，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水萃取有机相，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，得粗产物为淡黄色至黄色油状物；粗产物经硅胶柱层析获得化合物S6a-S6h；
(5)化合物1-8的合成：将步骤4中获得的相应化合物S6a-S6h和钯碳置于圆底烧瓶中，以乙醇为溶剂，室温反应；抽滤，滤液减压浓缩，得粗产物为淡黄色至黄色油状物；粗产物用硅胶柱层析，得白色固体纯品，即为相应的化合物1-8。
4.如权利要求1或2所述的具有抗炎活性的2-乙基-2,7-二羟基-5甲基-苯并二氢吡喃-4-酮类化合物或者如权利要求3所述的制备方法制备获得的2-乙基-2,7-二羟基-5甲基-苯并二氢吡喃-4-酮类化合物在制备用于抗炎症的药物中的用途。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述的炎症为患有炎性疾病的受试者中的炎症。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于，所述的炎性疾病选自肝炎、溃疡性结肠炎、克罗恩病和神经退行性疾病。
7.根据权利要求5或6所述的用途，其特征在于，所述的药物通过抑制NO的释放治疗炎性疾病。
8.根据权利要求5或6所述的用途，其特征在于，所述的药物通过抑制炎症因子TNF-α和/或IL-6产生治疗炎性疾病。
9.一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包含如权利要求1或2所述的具有抗炎活性的2-乙基-2,7-二羟基-5甲基-苯并二氢吡喃-4-酮类化合物或者如权利要求3所述的制备方法制备获得的2-乙基-2,7-二羟基-5甲基-苯并二氢吡喃-4-酮类化合物或其任意组合，以及可药用的赋形剂、稀释剂或载体。
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