CN113092465A - 一种快速鉴定丝瓜抗根结线虫的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于瓜类抗根结线虫抗性鉴定技术领域，公开了一种快速鉴定丝瓜抗根结线虫的方法，快速鉴定丝瓜抗根结线虫的方法包括以下步骤：进行丝瓜根结线虫的形态学鉴定：采集根结线虫病根样品，随机挑选30个根样，徒手解剖分离根结线虫成熟雌虫30头；在光学显微镜下测量其口针长度、口针基部球至肠前端的距离即DEGO值，镜检观察雌成虫的会阴花纹特征；获取田间丝瓜根结线虫病情数据；进行丝瓜根际2龄幼虫的分离计数与丝瓜根系染色与线虫计数；确定丝瓜对根结线虫的抗性水平。发明能够快速鉴定丝瓜抗根结线虫，且鉴定结果有效、判定具有科学依据，能够为丝瓜生产上合理选用抗性材料提供借鉴和参考。
Description
技术领域
本发明属于瓜类抗根结线虫抗性鉴定技术领域，尤其涉及一种快速鉴定丝瓜抗根结线虫的方法。
背景技术
目前，对根结线虫病的抗性鉴定方法有实验室鉴定、温室鉴定、田间鉴定三类，但各有适用条件和优缺点。实验室鉴定行业标准NY/T 1857.8-2010以黄瓜为例，详述了对人工接种、培育发病、调查分析的全过程。温室鉴定与实验室鉴定基本类似，不同点在于接种和培育的环境始终在温室内进行，抗性评价方法多样，如现有技术1采用发病率、病情指数和病程曲线下面积(AUDPC)来综合评价抗性水平；如现有技术2采用相对抗病性评价方法，即相对抗病指数＝1-所测品种的病情指数/发病最重品种的病情指数；以及通过线性回归及相关性分析，提出直接观测根部虫瘿数来快速评价花生的抗性水平。
田间鉴定方法是在作物实际生长环境下进行的抗性鉴定，该方法实施简单，自然诱发、无需接种，如现有技术3在番茄砧木品种抗病性的田间鉴定中，用发病率及病情指数来评价抗性；如现有技术4参照Soriano方法，用繁殖系数(即收获期和播种前的孢囊量比值)来评价小麦对孢囊线虫病的抗性；如现有技术5用初始群体密度与最终群体密度比值是否大于1来区分感病或抗病，再结合相对抗病指数综合评价品种抗性水平。
通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有的鉴定方法的鉴定结果并不准确，可能出现误判。
解决以上问题及缺陷的难度为：现有的抗性鉴定评价方法比较单一，应采取多指标综合评价、鉴定，才能够更有效的说明问题，需要各项不同层次的指标相互吻合，表现为一致的结果，在实际操作中有一定的难度。
解决以上问题及缺陷的意义为：能够提供更快更准确的评价鉴定抗根结线虫方法，有效保障瓜类蔬菜快速筛选抗根结线虫品种。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种快速鉴定丝瓜抗根结线虫的方法。
本发明是这样实现的，一种快速鉴定丝瓜抗根结线虫的方法，所述快速鉴定丝瓜抗根结线虫的方法包括：
通过调查田间病情指数、根系结瘤数量，结合根际J2幼虫计数、根组织线虫数量变化检测，综合评价丝瓜对根结线虫的抗性水平。
进一步，所述快速鉴定丝瓜抗根结线虫的方法包括以下步骤：
步骤一，进行丝瓜根结线虫的形态学鉴定；获取田间丝瓜根结线虫病情数据；
步骤二，进行丝瓜根际2龄幼虫的分离计数与丝瓜根系染色与线虫计数；确定丝瓜对根结线虫的抗性水平。
进一步，步骤一中，所述进行丝瓜根结线虫的形态学鉴定包括：
采集根结线虫病根样品，随机挑选30个根样，徒手解剖分离根结线虫成熟雌虫30头；在光学显微镜下测量其口针长度、口针基部球至肠前端的距离即DEGO值，镜检观察雌成虫的会阴花纹特征。
进一步，步骤一中，所述获取田间丝瓜根结线虫病情数据包括：
丝瓜移栽前，将田块25cm表土层移除、混匀后，再均匀撒布入田中，选取6个待鉴定的无棱型皱皮丝瓜，将所述无棱型皱皮丝瓜自无病苗床移栽入病圃田块，按随机区组排列分行种植，丝瓜行距1.3m，株距0.6m；
收获后期，挖取6个待鉴定的丝瓜材料根样，计算发病率、根结指数以及抗性分级。
进一步，所述计算发病率、根结指数包括：
发病率RI计算公式为：
RI＝n/N×100％；
根结指数RKI计算公式为：
RKI＝∑(s×n)/N；
其中，N表示调查总株数，n表示各病情级别病株数，s表示各病情级别代表数值。
进一步，所述抗性分级包括：
根结指数值在0～5范围，作物品种抗性等级可划分为：
0＜RKI≤1.0为高抗HR，1.0＜RKI≤2.0为抗病R，2.0＜RKI≤3.0为中抗MR，3.0＜RKI≤4.0为感病S，4.0＜RKI≤5.0为高感HS；
0为免疫，0＜DI≤20.0为高抗HR，20.0＜DI≤40.0为抗病R，40.0＜DI≤60.0为感病S，60.0＜DI≤80.0为中感MS，80.0＜RKI≤100.0为高感HS。
进一步，步骤二中，所述进行丝瓜根际2龄幼虫的分离计数包括：
自丝瓜生育期根际0～5cm范围、深度0～20cm土层选取土壤样品，每个丝瓜材料随机取3份土样，每份约200mL；将选取的土样充分混匀后，再从中量取100mL土样，采用漏斗法分离丝瓜根际土壤2龄幼虫并计数；
在丝瓜移栽期、抽蔓期、盛果期和收获期分别采集根际土样，依据分离检出的J2数量，计算根结线虫的繁殖系数；
丝瓜移栽期，田间随机采集6个材料所在小区的土壤样品，分离检测J2数量并计算其平均数，作为试验田土壤根结线虫的起始密度。
进一步，所述根结线虫的繁殖系数计算公式如下：
根结线虫的繁殖系数k，k＝Pf/Pi；
其中，Pf表示在丝瓜各生育期土壤中的J2数量，Pi表示在丝瓜幼苗移栽时土壤中的J2数量。
进一步，步骤二中，所述丝瓜根系染色与线虫计数包括：
每个丝瓜材料随机选取3株，每株随机切取5条5mm长的根段，位于幼嫩根系成熟区，色泽浅白微黄；采用次氯酸钠-酸性品红染色法，镜检记录其根系组织中的根结线虫数量。
进一步，所述根结线虫数量包括幼虫、成虫和卵3种虫态。
结合上述的所有技术方案，本发明所具备的优点及积极效果为：本发明能够快速鉴定丝瓜抗根结线虫，且鉴定结果有效、判定具有科学依据，能够为丝瓜生产上合理选用抗性材料提供借鉴和参考。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对本申请实施例中所需要使用的附图做简单的介绍，显而易见地，下面所描述的附图仅仅是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实施例提供的快速鉴定丝瓜抗根结线虫的方法流程图。
图2是本发明实施例提供的丝瓜盛果期幼嫩根组织中的线虫卵粒和雄成虫(虫体线形、口针明显,比例尺＝20μm)示意图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种快速鉴定丝瓜抗根结线虫的方法，下面结合附图对本发明作详细的描述。
本发明实施例提供的快速鉴定丝瓜抗根结线虫的方法包括：通过调查田间病情指数、根系结瘤数量，结合根际J2幼虫计数、根组织线虫检测，综合评价丝瓜对根结线虫的抗性水平。
如图1所示，本发明实施例提供的快速鉴定丝瓜抗根结线虫的方法包括以下步骤：
S101，进行丝瓜根结线虫的形态学鉴定；获取田间丝瓜根结线虫病情数据；
S102，进行丝瓜根际2龄幼虫的分离计数与丝瓜根系染色与线虫计数；确定丝瓜对根结线虫的抗性水平。
步骤S101中，本发明实施例提供的进行丝瓜根结线虫的形态学鉴定包括：
采集根结线虫病根样品，随机挑选30个根样，徒手解剖分离根结线虫成熟雌虫30头；在光学显微镜下测量其口针长度、口针基部球至肠前端的距离即DEGO值，镜检观察雌成虫的会阴花纹特征。
步骤S101中，本发明实施例提供的获取田间丝瓜根结线虫病情数据包括：
于丝瓜移栽前，将田块25cm表土层移除、混匀后，再均匀撒布入田中，选取6个待鉴定的丝瓜，将所述丝瓜无病苗床移栽入病圃田块，按随机区组排列分行种植，丝瓜行距1.3m，株距0.6m；
收获后期，挖取6个待鉴定的丝瓜材料根样，计算发病率和根结指数，以及抗性分级。
本发明实施例提供的计算发病率和根结指数，以及抗性分级包括：
发病率RI计算公式为：
RI＝n/N×100％；
根结指数RKI计算公式为：
RKI＝∑(s×n)/N；
其中，N表示调查总株数，n表示各病情级别病株数，s表示各病情级别代表数值；
所述抗性分级包括：
根结指数值在0～5范围，作物品种抗性等级可划分：
0＜RKI≤1.0为高抗HR，1.0＜RKI≤2.0为抗病R，2.0＜RKI≤3.0为中抗MR，3.0＜RKI≤4.0为感病S，4.0＜RKI≤5.0为高感HS；
0为免疫，0＜DI≤20.0为高抗HR，20.0＜DI≤40.0为抗病R，40.0＜DI≤60.0为感病S，60.0＜DI≤80.0为中感MS，80.0＜RKI≤100.0为高感HS。
步骤S102中，本发明实施例提供的进行丝瓜根际2龄幼虫的分离计数包括：
自丝瓜生育期根际0～5cm范围、深度0～20cm土层选取土壤样品，每个丝瓜材料随机取3份土样，每份约200mL；将选取的土样充分混匀后，再从中量取100mL土样，采用漏斗法分离丝瓜根际土壤2龄幼虫并计数；
在丝瓜移栽期、抽蔓期、盛果期和收获期分别采集根际土样，依据分离检出的J2数量，计算根结线虫的繁殖系数；
于丝瓜移栽期，田间随机采集6个材料所在小区的土壤样品，分离检测J2数量并计算其平均数，作为试验田土壤根结线虫的起始密度。
本发明实施例提供的根结线虫的繁殖系数计算公式如下：
根结线虫的繁殖系数k，k＝Pf/Pi；
其中，Pf表示在丝瓜各生育期土壤中的J2数量，Pi表示在丝瓜幼苗移栽时土壤中的J2数量。
步骤S102中，本发明实施例提供的丝瓜根系染色与线虫计数包括：
每个丝瓜材料随机选取3株，每株随机切取5条5mm长的根段，位于幼嫩根系成熟区，色泽浅白微黄。采用次氯酸钠-酸性品红染色法，镜检记录其根系组织中的根结线虫数量，包括幼虫、成虫和卵3种虫态，均计入数据。
下面结合具体实施例对本发明的技术效果作进一步描述。
本发明采用调查田间病情指数、根系结瘤数量、根际2龄幼虫(J2)数量，结合实验室根系染色计数线虫方法，综合评价6个供试丝瓜品种对南方根结线虫的抗性水平。
1材料与方法
1.1丝瓜根结线虫的形态学鉴定
采集重庆市九龙坡区丝瓜基地根结线虫病根样品，随机挑选30个根样，徒手解剖分离根结线虫成熟雌虫30头。在光学显微镜下测量其口针长度、口针基部球至肠前端的距离(DEGO值)，镜检观察雌成虫的会阴花纹特征。
1.2田间丝瓜根结线虫病情调查
试验地位于重庆市九龙坡区石板镇，田块平整，质地为壤土，面积约350m2。2017年－2018年均种植丝瓜感病品种，根结线虫病发生严重，发病率2017年为67.3％，2018年为82.5％。2019年3月上旬于丝瓜移栽前，将整个试验田块25cm表土层移除、混匀后，再均匀撒布入试验田。供试丝瓜为无棱型皱皮丝瓜，共6个待鉴定材料，编号依序为1、2、5、6、32和33号，于2019年3月下旬自无病苗床移栽入供试病圃田块，按随机区组排列分行种植，按随机区组试验，丝瓜双株单行栽培，行距1.3m，株距0.6m，3次重复，每个小区(重复)面积约8m2，分成6垄，每垄种植同个品种。
收获后期，挖取6个丝瓜材料所有根样，参照NY/T1857.8-2010标准，计算其发病率和根结指数，以及抗性分级。N为调查总株数，n为各病情级别病株数，s为各病情级别代表数值，RI为发病率：RI＝n/N×100％，RKI为根结指数：RKI＝∑(s×n)/N。依据抗性分级标准，根结指数值在0～5范围，作物品种抗性等级可划分：0＜RKI≤1.0为高抗HR，1.0＜RKI≤2.0为抗病R，2.0＜RKI≤3.0为中抗MR，3.0＜RKI≤4.0为感病S，4.0＜RKI≤5.0为高感HS。依据目前国际通行的0～5级标准计算病情指数(DI)，则抗性等级可划分：0为免疫，0＜DI≤20.0为高抗HR，20.0＜DI≤40.0为抗病R，40.0＜DI≤60.0为感病S，60.0＜DI≤80.0为中感MS，80.0＜RKI≤100.0为高感HS。
1.3丝瓜根际2龄幼虫的分离计数
土壤样品采自丝瓜生育期根际0～5cm范围、深度0～20cm土层，每个材料随机取3份土样，每份约200mL。将其充分混匀后，再从中量取100mL土样，采用漏斗法分离丝瓜根际土壤2龄幼虫并计数。根结线虫J2的主要鉴别特征是：热杀死后，虫体伸直，尾部细棒形，短小，尾尖有明显亮区，头部口针因处于发育中不易观察，但颈部中食道球较为明显。
在丝瓜移栽期、抽蔓期、盛果期和收获期分别采集根际土样，依据分离检出的J2数量，计算根结线虫的繁殖系数k，k＝Pf/Pi，Pf为在丝瓜各生育期土壤中的J2数量，Pi为在丝瓜幼苗移栽时土壤中的J2数量，二者的比值即为其繁殖系数。2019年4月上旬丝瓜移栽期，田间随机采集6个材料所在小区的土壤样品，分离检测J2数量并计算其平均数，作为试验田土壤根结线虫的起始密度。
1.4丝瓜根系染色与线虫计数
每个丝瓜材料随机选取3株，每株随机切取5条5mm长的根段，位于幼嫩根系成熟区，色泽浅白微黄。采用次氯酸钠-酸性品红染色法，镜检记录其根系组织中的根结线虫数量，包括幼虫、成虫和卵3种虫态，均计入数据。
2结果与分析
2.2田间根结线虫病情指数
2019年8月丝瓜收获期，田间病情调查结果如下(表2)，1号和5号根结指数最大，其次是33号和32号，再次为6号和2号。依据根结指数指标，划分抗性等级：1号材料RKI＝3.26为感病S，5号材料RKI＝2.76为中抗MR，32号、33号为抗病R，2号和6号为高抗HR。以上结果与依据病情指数DI划分抗性等级基本一致，即1号材料为中感MS，5号为感病S，32号、33号为抗病R，2号和6号为高抗HR。
在丝瓜抽蔓期即根结线虫侵染早期，通过刨根调查根系结瘤数也提前预知了病害发展的结果，6个材料侧根每10cm幼嫩根段上平均检出早期根结数分别为12.2、2.1、14.8、0、0、0个，材料1号和5号根结数最多，而其余材料极少见，即早期1号和5号材料感染线虫最重。
表2丝瓜收获期根结线虫病情调查
2.3丝瓜根际的线虫繁殖系数分析
2019年4月上旬丝瓜移栽期，试验田土壤中根结线虫J2幼虫的平均数量为98.2条/100mL，即为试验田块的初期土壤线虫数量。依据公式计算得抽蔓期、盛果期、收获期丝瓜根际的线虫繁殖系数k值(表3)。当RC大于1时，所在丝瓜生育期J2的种群数量比初期有增长，反之则下降。从丝瓜3个生育期的繁殖系数均值，显示1号、5号材料根际土壤中J2的种群密度有所提高，2号、6号、32号、33号材料根际土壤中J2的种群密度有所降低。
表3根结线虫在丝瓜主要生育期的繁殖系数k值
注：方差分析采用Duncan'sDMRT方法，不同字母表示差异显著(P<0.05)。
2.4丝瓜根系染色与线虫计数
在丝瓜盛果期阶段，对根组织中根结线虫进行染色并计数，结果发现(图2、表4)：在1号材料每5mm幼嫩根组织中平均检测出34条(粒)虫体或卵，其次是5号，材料2号、6号检出线虫数最低。其中1号材料根组织中成虫和卵数量均为最高，6号仅检出成虫和幼虫，没观测到卵，2号、32号未检测到幼虫。以上结果显示，6个材料中1号、5号根组织中线虫数量最多、各虫态占比较均衡。
表4丝瓜盛果期幼嫩根组织中根结线虫的检出数量(5mm根段)
3结果
重庆九龙坡丝瓜种植基地根结线虫种群，经形态学鉴定为南方根结线虫M.incognita，与前人报道的南方根结线虫地理分布结果一致。而且该物种的寄主范围甚广，除丝瓜外还可为害番茄、黄瓜、烟草、甘蓝、芹菜、莴苣、胡萝卜、柑橘等经济作物，需要在今后的农业生产中给予密切关注。
本发明借鉴了前人的多种抗性评价方法，通过调查田间病情指数、根系结瘤数量，结合根际J2幼虫计数、根组织线虫检测，综合评价6个丝瓜材料对南方根结线虫的抗性水平。综合判定2号和6号材料为高抗(HR)，具体为，二者的田间根结指数最低(0.63、0.94)、10cm根段结瘤数量最小(2个、0个)、根际线虫繁殖系数最低(0.46、0.57)、根组织线虫数量最少或较少(4条、7条)且各虫态分布不均衡；按照多项指标依序判定，32号和33号材料为抗性(R)，5号材料为中抗(MR)，而1号材料为感病(S)。按病情指数划分，5号材料为感病(S)，在两个指标体系中表现为摇摆，在后续研究者需综合其它指标加以判定。
4项指标层次不同，但相互呼应，总体展现了较为一致的结果。特别是丝瓜各生育期线虫的繁殖系数与收获期根结指数之间，显示了明显的正相关关系(R＝0.99)，因此认为，线虫的繁殖系数k值可作为抗性分级的重要辅助指标。此外，之所以选择在丝瓜抽蔓时(6月初)刨根调查根系结瘤数，一是此期为根结线虫侵染早期，具有病害预警的作用，二是此期丝瓜幼嫩根段上根结尚处于膨大隆起初期，还没有发生结瘤之间的重叠并合，相互是分离的，便于准确计数。
丝瓜1号材料每5mm根组织中线虫数量最多，均全部检出卵、幼虫、成虫三种虫态，表明线虫侵入根组织后能有效利用根系营养生长繁殖、完成生活史，实现持续寄生的目的。6号材料虽检出成虫和幼虫，但没检测到卵粒，表明该材料可能抑制线虫的发育特别是成虫性成熟的进程，造成其生活史产卵阶段被延缓或停止。上述结果与分析，也为材料的抗感性判定提供了合理的解释依据。
采用根结指数(RKI)评定材料或品种的抗性水平已被业内研究者广泛认同，但需要强调的是，试验所选感病对照组的根结指数须大于3，即整个试验的发病压力达到一定水平条件下，才能认定所开展的抗性鉴定结果有效，否则可能出现严重的误判。本发明丝瓜1号材料的RKI大于3符合鉴定要求，相关抗性结果判定具有科学依据，后期应通过室内盆栽人工接种试验、在更加稳定可控条件下进一步评价其抗性，从而为丝瓜生产上合理选用抗性材料提供借鉴和参考。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种快速鉴定丝瓜抗根结线虫的方法，其特征在于，所述快速鉴定丝瓜抗根结线虫的方法包括：通过调查田间病情指数、根系结瘤数量，结合根际J2幼虫计数、根组织线虫检测，综合评价丝瓜对根结线虫的抗性水平。
2.如权利要求1所述快速鉴定丝瓜抗根结线虫的方法，其特征在于，所述快速鉴定丝瓜抗根结线虫的方法包括以下步骤：
步骤一，进行丝瓜根结线虫的形态学鉴定；获取田间丝瓜根结线虫病情数据；
步骤二，进行丝瓜根际2龄幼虫的分离计数与丝瓜根系染色与线虫计数；确定丝瓜对根结线虫的抗性水平。
3.如权利要求2所述快速鉴定丝瓜抗根结线虫的方法，其特征在于，步骤一中，所述进行丝瓜根结线虫的形态学鉴定包括：采集根结线虫病根样品，随机挑选30个根样，徒手解剖分离根结线虫成熟雌虫30头；在光学显微镜下测量其口针长度、口针基部球至肠前端的距离即DEGO值，镜检观察雌成虫的会阴花纹特征。
4.如权利要求2所述快速鉴定丝瓜抗根结线虫的方法，其特征在于，步骤一中，所述获取田间丝瓜根结线虫病情数据包括：于丝瓜移栽前，将田块25cm表土层移除、混匀后，再均匀撒布入田中，选取6个待鉴定的无棱型皱皮丝瓜，将所述无棱型皱皮丝瓜自无病苗床移栽入病圃田块，按随机区组排列分行种植，丝瓜行距1.3m，株距0.6m；收获后期，挖取6个待鉴定的丝瓜材料根样，计算发病率、根结指数以及抗性分级。
5.如权利要求4所述快速鉴定丝瓜抗根结线虫的方法，其特征在于，所述计算发病率、根结指数包括：
发病率RI计算公式为：
RI＝n/N×100％；
根结指数RKI计算公式为：
RKI＝∑(s×n)/N；
其中，N表示调查总株数，n表示各病情级别病株数，s表示各病情级别代表数值。
6.如权利要求4所述快速鉴定丝瓜抗根结线虫的方法，其特征在于，所述抗性分级包括：根结指数值在0～5范围，作物品种抗性等级可划分为：
0＜RKI≤1.0为高抗HR，1.0＜RKI≤2.0为抗病R，2.0＜RKI≤3.0为中抗MR，3.0＜RKI≤4.0为感病S，4.0＜RKI≤5.0为高感HS；
0为免疫，0＜DI≤20.0为高抗HR，20.0＜DI≤40.0为抗病R，40.0＜DI≤60.0为感病S，60.0＜DI≤80.0为中感MS，80.0＜RKI≤100.0为高感HS。
7.如权利要求2所述快速鉴定丝瓜抗根结线虫的方法，其特征在于，步骤二中，所述进行丝瓜根际2龄幼虫的分离计数包括：自丝瓜生育期根际0～5cm范围、深度0～20cm土层选取土壤样品，每个丝瓜材料随机取3份土样，每份约200mL；将选取的土样充分混匀后，再从中量取100mL土样，采用漏斗法分离丝瓜根际土壤2龄幼虫并计数；
在丝瓜移栽期、抽蔓期、盛果期和收获期分别采集根际土样，依据分离检出的J2数量，计算根结线虫的繁殖系数；
于丝瓜移栽期，田间随机采集6个材料所在小区的土壤样品，分离检测J2数量并计算其平均数，作为试验田土壤根结线虫的起始密度。
8.如权利要求7所述快速鉴定丝瓜抗根结线虫的方法，其特征在于，所述根结线虫的繁殖系数计算公式如下：根结线虫的繁殖系数k，k＝Pf/Pi；
其中，Pf表示在丝瓜各生育期土壤中的J2数量，Pi表示在丝瓜幼苗移栽时土壤中的J2数量。
9.如权利要求2所述快速鉴定丝瓜抗根结线虫的方法，其特征在于，步骤二中，所述丝瓜根系染色与线虫计数包括：
每个丝瓜材料随机选取3株，每株随机切取5条5mm长的根段，位于幼嫩根系成熟区，色泽浅白微黄；采用次氯酸钠-酸性品红染色法，镜检记录其根系组织中的根结线虫数量。
10.如权利要求9所述快速鉴定丝瓜抗根结线虫的方法，其特征在于，所述根结线虫数量包括幼虫、成虫和卵3种虫态。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114467659A (zh) * | 2022-03-31 | 2022-05-13 | 重庆市农业科学院 | 一种评价茄子对根结线虫抗性的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH08173189A (ja) * | 1994-12-27 | 1996-07-09 | Japan Tobacco Inc | 線虫の簡易同定法 |
| KR19980082350A (ko) * | 1997-05-06 | 1998-12-05 | 김동태 | 뿌리혹선충 방제용 파스테리아 페네트랜스(Pasteuria penetrans) CJ-1 세균 및 이를 대량 증식하는 방법 |
| CN102257953A (zh) * | 2011-05-12 | 2011-11-30 | 南京农业大学 | 抗南方根结线虫黄瓜渐渗系材料的培育方法 |
| CN105165434A (zh) * | 2015-10-14 | 2015-12-23 | 广西壮族自治区农业科学院植物保护研究所 | 一种番茄苗期根结线虫病抗性鉴定方法 |
-
2021
- 2021-03-22 CN CN202110301804.5A patent/CN113092465A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH08173189A (ja) * | 1994-12-27 | 1996-07-09 | Japan Tobacco Inc | 線虫の簡易同定法 |
| KR19980082350A (ko) * | 1997-05-06 | 1998-12-05 | 김동태 | 뿌리혹선충 방제용 파스테리아 페네트랜스(Pasteuria penetrans) CJ-1 세균 및 이를 대량 증식하는 방법 |
| CN102257953A (zh) * | 2011-05-12 | 2011-11-30 | 南京农业大学 | 抗南方根结线虫黄瓜渐渗系材料的培育方法 |
| CN105165434A (zh) * | 2015-10-14 | 2015-12-23 | 广西壮族自治区农业科学院植物保护研究所 | 一种番茄苗期根结线虫病抗性鉴定方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 刘纪霜: "罗汉果抗南方根结线虫的品种筛选及抗病机制初探", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技》, no. 05, 16 April 2007 (2007-04-16), pages 1 - 29 * |
| 董炜博, 石延茂, C.C.HOLBROOK, P.TIMPER, J.P.NOE: "温室快速鉴定花生根结线虫病抗性新方法", 花生学报, no. 03, 30 September 2004 (2004-09-30) * |
| 黄金玲;陆秀红;张禹;李秋捷;刘志明;黎起秦;: "柑橘砧木材料对根结线虫的抗性鉴定", 华中农业大学学报, no. 06, 12 November 2018 (2018-11-12) * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114467659A (zh) * | 2022-03-31 | 2022-05-13 | 重庆市农业科学院 | 一种评价茄子对根结线虫抗性的方法 |
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