CN113057954A - Phb抑制剂与ir在胶质瘤治疗中的联合应用 - Google Patents

Phb抑制剂与ir在胶质瘤治疗中的联合应用 Download PDF

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CN113057954A CN202110323965.4A CN202110323965A CN113057954A CN 113057954 A CN113057954 A CN 113057954A CN 202110323965 A CN202110323965 A CN 202110323965A CN 113057954 A CN113057954 A CN 113057954A
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周涛
黄浩浩
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Abstract

本发明公开了PHB抑制剂与IR在胶质瘤治疗中的联合应用。本发明发现PHB抑制剂RocA联合放疗可以促进肿瘤细胞的凋亡，抑制肿瘤的生长，并延长荷瘤动物的生存期，说明，RocA能够增加GBM移植瘤对放疗的敏感性并改善其治疗效果，RocA可以作为治疗GBM患者的潜在小分子药物。本发明具有广泛的应用前景。

Description

PHB抑制剂与IR在胶质瘤治疗中的联合应用
技术领域
本发明涉及生物医学领域领域中，PHB抑制剂与IR在胶质瘤治疗中的联合应用。
背景技术
源自神经上皮的肿瘤统称为脑胶质瘤，它是最常见的颅内恶性肿瘤，约占颅脑肿瘤的40％-50％，世界卫生组织(WHO)根据脑胶质瘤恶性程度将其分为I到Ⅳ级，由低到高。脑胶质瘤根据病理可分为星形细胞瘤、髓母细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤(GlioblastomaMultiforme，GBM)、室管膜瘤、少突胶质细胞瘤等，其中多形性胶质母细胞瘤(GBM)均是Ⅳ级胶质瘤，是恶性程度最高的一类肿瘤，GBM患者即使经过最积极的治疗，平均生存周期也仅为12-15个月。
脑胶质瘤呈浸润性生长，与正常脑组织无明显界限，GBM作为恶性程度最高的胶质瘤，浸润转移更迅速，更易复发，患者预后极差，临床上标准治疗手段为手术结合放化疗。手术不能完全切除病灶，放化疗短时间内可以抑制肿瘤的生长，但GBM对放化疗抵抗且易复发，因此患者5年存活率仍不足5％。GBM组织中的肿瘤干细胞称为胶质瘤干细胞(Gliomastem-like cell,GSC),它与正常的神经干细胞(Neural stem cell，NSC)表达同样的干细胞标志物，如CD133、Nestin、SOX2、Olig2等，同时也具备自我更新、无限增殖、肿瘤发生的能力。越来越多证据表明GSC与GBM肿瘤发生、持续生长和复发密切相关。以GSC为研究对象，剖析其在脑胶质瘤中的特点及功能，可以更深入的揭示脑胶质瘤的发生、发展以及复发的原因，为脑胶质瘤的治疗提供新的思路。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是如何治疗和/或预防脑肿瘤。
为解决上述技术问题，本发明提供了一种系统在制备治疗和/或预防脑肿瘤产品中的应用，所述系统由Rocaglamide(RocA，楝酰胺)与放疗装置组成。
上述应用中，所述治疗和/或预防脑肿瘤可体现在抑制脑肿瘤生长和/或延长脑肿瘤动物生存期上。
所述动物可为哺乳动物。所述哺乳动物可为人或小鼠。
上述应用中，所述脑肿瘤可为胶质瘤。所述胶质瘤可为胶质瘤干细胞引发的肿瘤。在本发明的一个实施例中，所述胶质瘤干细胞(GSC)为4121GSC或387GSC。
上述应用中，所述放疗装置能够释放伽马射线。所述放疗装置具体可采用放射性同位素钴源(Co-60)释放伽马射线。
本发明还提供了所述系统在制备具有如下任一用途产品中的应用：
X1、抑制脑肿瘤细胞生长；
X2、抑制脑肿瘤细胞成瘤能力；
X3、降低脑肿瘤细胞活力；
X4、降低脑肿瘤细胞的自我更新能力。
上述应用中，所述脑肿瘤细胞可为胶质瘤细胞。所述胶质瘤细胞可为胶质瘤干细胞，如4121GSC或387GSC。
本发明还提供了具有如下任一用途的系统，为所述系统：
Y1、治疗和/或预防脑肿瘤；
Y2、抑制脑肿瘤生长；
Y3、延长脑肿瘤动物生存期；
Y4、抑制脑肿瘤细胞生长；
Y5、抑制脑肿瘤细胞成瘤能力；
Y6、降低脑肿瘤细胞活力；
Y7、降低脑肿瘤细胞的自我更新能力。
本发明还提供了Rocaglamide在制备脑肿瘤放疗增敏剂中的应用。
上述应用中，所述放疗增敏剂为对伽马射线的增敏剂。所述放疗增敏剂可为对3Gy的增敏剂。
所述脑肿瘤可为哺乳动物脑肿瘤。所述脑肿瘤细胞、所述胶质瘤细胞和所述胶质瘤干细胞均可为哺乳动物细胞。所述哺乳动物可为人或小鼠。在本发明的一个实施例中，所述小鼠为免疫缺陷小鼠Balb/c nude。在本发明的另一个实施例中，所述小鼠为免疫缺陷小鼠NOD/SCID。
本发明的实验证明，RocA联合放疗可以促进肿瘤细胞的凋亡，抑制肿瘤的生长，并延长荷瘤动物的生存期，说明，RocA能够增加GBM移植瘤对放疗的敏感性并改善其治疗效果，RocA可以作为治疗GBM患者的潜在小分子药物。本发明具有广泛的应用前景。
附图说明
图1为RocA能够促进GSC放疗敏感性。
a.4121GSC的六组(RocA 5nM或10nM)细胞中凋亡细胞比例的流式分析结果(Annexin-V/PI)；Ctrl表示未利用IR处理；
b.4121GSC中凋亡标志物(Cleaved-PARP/Caspase3)蛋白变化情况的WB检测结果；Ctrl表示未利用RocA处理；
c.387GSC的六组(RocA 5nM或10nM)细胞中凋亡细胞比例的流式分析结果(Annexin-V/PI)；Ctrl表示未利用IR处理；
d.387GSC中凋亡标志物(Cleaved-PARP/Caspase3)蛋白变化情况的WB检测结果，Ctrl表示未利用RocA处理。
图2为RocA能够促进GBM放疗敏感性。
a.活体成像实时动态监测GBM移植瘤肿瘤生长情况4121GSC，并量化统计；
b.Kaplan-Meier生存曲线分析4121GSC各组荷瘤小鼠生存周期；
c.活体成像实时动态监测GBM移植瘤肿瘤生长情况387GSC，并量化统计；
d.Kaplan-Meier生存曲线分析387GSC各组荷瘤小鼠生存周期。
*表示差异达到了显著水平，p＜0.05；**表示差异达到了极显著水平，p＜0.01；***表示差异达到了极显著水平，p＜0.001。
图3为PHB缺失促进GBM肿瘤细胞放疗敏感性。
a.GBM移植瘤小鼠肿瘤组织切片后，免疫荧光染色分析凋亡标志物Tunel；
b.Tunel+肿瘤细胞比例统计。
***表示差异达到了极显著水平，p＜0.001。
图4为PHB缺失促进PDXs放疗敏感性。
a.实时测量PDXs皮下移植瘤体积大小；
b.Kaplan-Meier生存曲线分析各组PDXs皮下移植瘤小鼠生存周期。
**表示在注射第33天差异达到了极显著水平，p＜0.01；***表示在注射第33天差异达到了极显著水平，p＜0.001。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂、仪器等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中的387GSC、4121GSC均记载在文献(Hypoxic Induction of VasorinRegulates Notch1 Turnover to Maintain Glioma Stem-like Cells，Man et al.,2018,Cell Stem Cell 22,104-118.January 4,2018a 2017 Elsevier Inc.https://doi.org/10.1016/j.stem.2017.10.005)(第六页Figure3图B)中，公众可从申请人处获得，这些生物材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。387GSC、4121GSC均为不同GBM患者肿瘤组织中分离所得的胶质瘤干细胞，经过一系列的功能验证，它们与正常的神经干细胞(Neural stem cell，NSC)表达同样的干细胞标志物，如CD133、Nestin、SOX2、Olig2等，同时也具备自我更新、无限增殖、肿瘤发生的能力。
PHB抗体：Anti-Prohibitin antibody，Abcam公司，货号ab28172。
SOX2抗体：Anti-SOX2 antibody，Millipore公司，货号MAB4423。
Olig2抗体：Anti-Olig2 antibody，Santa Cruz公司，货号sc-48817。
Tubulin抗体：Anti-Tubulin antibody，Sigma公司，货号T5168。
RocA(Rocaglamide，楝酰胺)：MCE公司，货号HY-19356,cas号码：84573-16-0；分子式：C29H31NO7。
psPAX2：addgene公司，货号#12260。
pCI-VSVG：addgene公司，货号#1733。
pCDH-neo质粒：System Biosciences公司，货号CD514B-1。
pCDH-luciferase-neo质粒：将pCDH-neo质粒的NotI和XhoI识别序列间的DNA片段替换为luciferase的编码DNA得到的重组质粒，luciferase的编码DNA如序列表中序列1所示。
实施例1、RocA能够促进GSC及PDX放疗敏感性
一、细胞水平
待测细胞：4121GSC和387GSC。
将未经RocA处理和RocA处理后的待测细胞分别给予IR处理，然后检测细胞凋亡情况。
具体实验步骤如下：
1.将待测细胞接种于96孔板中，每孔2000个细胞，分为六组，即对照IR-组、对照IR+组、5nM RocA处理IR-组、5nM RocA处理IR+组、10nM RocA处理IR-组、10nM RocA处理IR+组，每组5个复孔，每孔200μL NBM完全培养基(在500mL基础培养基Neurobasal Medium(Thermo Fisher公司，货号12348-017)中添加10mL B27-supplement血清替代物(ThermoFisher公司，货号12580-010),20ng/ml EGF(R&D公司，货号Cat#236-EG)和20ng/ml bFGF(R&D公司，货号Cat#4114-TC)配制而成)；
2.向5nM RocA处理IR-组、5nM RocA处理IR+组、10nM RocA处理IR-组、10nM RocA处理IR+组的每孔中分别添加RocA，RocA在体系中的浓度分别为5nM、5nM、10nM和10nM中；
3.步骤2完成后，将对照IR+组、5nM RocA处理IR+组、10nM RocA处理IR+组在放射性同位素钴源(Co-60)释放的伽马射线的照射下于37摄氏度下处理48小时；将对照IR-组、5nM RocA处理IR-组、10nM RocA处理IR-组在37摄氏度下处理48小时；
4.处理结束后，利用流式分析检测不同处理组的细胞凋亡情况，用FlowJo软件处理数据并作图。所用试剂Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit，TACS公司，Cat#4830-01-k。
实验发现：IR和RocA单独处理均会导致凋亡细胞比例增加，而RocA+IR联合处理后线粒体凋亡细胞比例增加更为显著，且具有RocA浓度依赖趋势(图1中a、c)。
对于4121GSC细胞，对照IR-组、对照IR+组、5nM RocA处理IR-组、10nM RocA处理IR-组、5nM RocA处理IR+组、5nM RocA处理IR+组的凋亡细胞比例分别为2.11％、27.2％、13.2％、23.7％、61.8％、77.4％；对于387GSC细胞，对照IR-组、对照IR+组、5nM RocA处理IR-组、10nM RocA处理IR-组、5nM RocA处理IR+组、5nM RocA处理IR+组的凋亡细胞比例分别为1.47％、26.0％、7.92％、19.6％、46.3％、78.6％。
收集细胞样品，利用Western Blot(WB)对Cleaved-PARP和Cleaved-Caspase3检测，同样发现RocA与IR联合处理组中细胞凋亡标志蛋白显著增加(图1中b和d)。所用抗体为：PARP抗体：Cell signaling technology公司，货号#9542；Cleaved-Caspase3抗体：Cellsignaling technology公司，货号#9664；兔二抗AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)，Jackson ImmunoResearch公司，货号111-005-003。
二、动物水平
免疫缺陷小鼠：Balb/c nude(北京维通利华实验动物技术有限公司)，4周龄，15-17克。
1、稳定表达Luciferase的4121GSC制备
1)病毒包装
提前24h将1.5×106个HEK293细胞接种于10cm培养皿中，利用磷酸钙转染法将慢病毒包装质粒psPAX2(5μg)和pCI-VSVG(5μg)以及pCDH-luciferase-neo质粒(5ug，表达luciferase)分别转染至HEK293细胞中，转染12h后换成NBM完全培养基。细胞培养72h后收集病毒上清，3000rpm离心3min，病毒上清用0.45μm过滤器进行过滤，收集过滤后的病毒(记为含有pCDH-luciferase-neo病毒)置于-80℃保存。
按照上述方法，将pCDH-luciferase-neo质粒替换为对照质粒pCDH-neo，其他步骤均不变，得到阴性对照病毒(即pCDH-neo病毒)。
2)病毒感染GSC并筛选阳性细胞
将1.5×106个GSC(4121GSC或387GSC)接种于10cm培养皿中，分别加入5mL含有pCDH-luciferase-neo和阴性对照病毒上清，然后用NBM完全培养基补齐至10mL，将细胞置于培养箱中培养48h后，用Accutase消化细胞至单个，用含有G418 1mg/mL的NBM完全培养基重悬细胞筛选实验组GSC(由含有pCDH-luciferase-neo病毒上清得到)以及阴性对照GSC(由含有阴性对照病毒上清得到)。
3)鉴定GSC中Luciferase表达
取等量实验组GSC以及阴性对照GSC于96孔板中，加入适量Luciferin底物于孔板中(避光操作)，待其反应5-10分钟后，利用酶标仪对相应的孔进行读值。若实验组GSC读值远远大于阴性对照GSC，则表明实验组GSC稳定表达Luciferase，即稳定表达Luciferase的GSC制备成功。
2、GSC动物实验
2.1 4121GSC
将步骤1的稳定表达Luciferase的4121GSC利用NBM基础培养基(NeurobasalMedium，Thermo Fisher公司，货号12348-017)稀释后原位注射至免疫缺陷小鼠颅内右额叶部位构建GBM移植瘤模型，每只小鼠注射5×104个细胞，每隔一周进行活体成像实时监测肿瘤大小。待肿瘤生长至合适大小(注射第7天，D7)时将其随机分为四组：对照组，IR组，RocA组，RocA+IR联合治疗组，每组6只。各组分别进行如下处理：
对照组(Ctrl)：在构建移植瘤模型第7天(即细胞注射第7天)注射橄榄油，三天一次，共八次，每次注射体积同RocA组；
IR组：采用放射性同位素钴源(Co-60)释放伽马射线进行放疗(即粒子辐射，Ionizing radiation，IR)，在细胞注射第7天进行第一次放疗，以后每七天一次，每次3Gy，剂量为3Gy，共四次，总计量共计4x3Gy＝12Gy；
RocA组：利用橄榄油稀释RocA后进行腹腔注射，每次RocA注射量为2.5mg/kg体重,三天一次，共八次，在注射第7天进行第一次RocA注射；
RocA+IR联合治疗组：利用橄榄油稀释RocA后进行腹腔注射，每次RocA注射量为2.5mg/kg体重,三天一次，共八次，在注射第7天进行第一次RocA注射；在注射第7天采用放射性同位素钴源(Co-60)释放伽马射线进行第一次放疗，以后每七天一次，每次3Gy，共四次，总计量共计4x3Gy＝12Gy。
利用活体成像实时观测肿瘤生长情况，并记录荷瘤小鼠生存期。
2.2 387GSC
将步骤1的稳定表达Luciferase的387GSC利用NBM基础培养基(NeurobasalMedium，Thermo Fisher公司，货号12348-017)稀释后原位注射至免疫缺陷小鼠颅内右额叶部位构建GBM移植瘤模型，每只小鼠注射5×104个细胞，每隔一周进行活体成像实时监测肿瘤大小。待肿瘤生长至合适大小(注射第9天，D9)时将其随机分为四组：对照组，IR组，RocA组，RocA+IR联合治疗组，每组8只。各组分别进行如下处理：
对照组(Ctrl)：在构建移植瘤模型第9天(即细胞注射第9天)注射橄榄油，三天一次，共八次，每次注射体积同RocA组；
IR组：采用放射性同位素钴源(Co-60)释放伽马射线进行放疗，在细胞注射第9天进行第一次放疗，以后每七天一次，每次3Gy，共四次，总计量共计4x3Gy＝12Gy；
RocA组：利用橄榄油稀释RocA后进行腹腔注射，每次RocA注射量为2.5mg/kg体重,三天一次，共八次，在注射第9天进行第一次RocA注射；
RocA+IR联合治疗组：利用橄榄油稀释RocA后进行腹腔注射，每次RocA注射量为2.5mg/kg体重,三天一次，共八次，在注射第9天进行第一次RocA注射；在注射第9天采用放射性同位素钴源(Co-60)释放伽马射线进行第一次放疗，以后每七天一次，每次3Gy，共四次，总计量共计4x3Gy＝12Gy。
利用活体成像实时观测肿瘤生长情况，并记录荷瘤小鼠生存期。
2.3实验结果
对实验结果进行分析，发现与对照组相比，IR单独治疗组和RocA单独治疗组中肿瘤生长受到一定程度的抑制，小鼠生存周期也有一定延长；而在RocA+IR联合治疗组中，荷瘤小鼠的肿瘤生长明显受到抑制(图2中a和c)，并且生存周期得到显著延长(图2中b和d)。
对于注射稳定表达Luciferase的4121GSC的各组小鼠，在注射第7天各组的肿瘤大小均无显著差异，在注射第16天RocA+IR联合治疗组的肿瘤大小显著小于对照组，在注射第23天，对照组、IR组、RocA组和RocA+IR联合治疗组的肿瘤活体成像读取的Lucifer值(生物发光数，单位：p/s/cm2/sr)分别为27288333.33±7968124.17、4623333.33±976294.58、12225000±4113368.25、351666.67±96944.54，与对照组、IR组和RocA组相比，RocA+IR联合治疗组的肿瘤大小均显著下降；对照组、IR组、RocA组和RocA+IR联合治疗组小鼠的中位生存期分别为40、50、48和59天，与对照组、IR组和RocA组相比，RocA+IR联合治疗组小鼠的生存期均显著延长。
对于注射稳定表达Luciferase的387GSC的各组小鼠，在注射第9天各组的肿瘤大小均无显著差异，在注射第18天RocA+IR联合治疗组的肿瘤大小显著小于对照组和RocA组，在注射第25天，对照组、IR组、RocA组和RocA+IR联合治疗组的肿瘤活体成像读取的Lucifer值(单位：p/s/cm2/sr)分别为61975000±8141598.43、3963750±761288.70、7785250±2065712.36、865500±204624.74，与对照组、IR组和RocA组相比，RocA+IR联合治疗组的肿瘤大小均显著下降；对照组、IR组、RocA组和RocA+IR联合治疗组小鼠的中位生存期分别为31、37、38和48天，与对照组、IR组和RocA组相比，RocA+IR联合治疗组小鼠的生存期均显著延长。
2.3切片分析
在小鼠死亡后，取稳定表达Luciferase的4121GSC移植的各组移植瘤的整个脑组织进行切片，然后对凋亡标志物Tunel进行荧光染色。所用试剂分别为DeadEndFluorometric TUNEL System试剂盒：Promega公司，G3250。
发现与对照组相比，IR组和RocA组中发生凋亡的肿瘤细胞比例均有一定程度增加，而在RocA+IR联合治疗组中，发生凋亡的肿瘤细胞比例则显著增加(图3中a和b)。对照组、IR组、RocA组和RocA+IR联合治疗组的Tunel阳性细胞的百分比分别为2.95±0.30、15.19±0.71、16.36±0.84与42.17±1.36。
上述结果提示：RocA能够增加GBM移植瘤对放疗的敏感性并改善其治疗效果，RocA可以作为治疗GBM患者的潜在小分子药物。
3、患者来源的胶质母细胞瘤肿瘤细胞的动物实验
患者来源的胶质母细胞瘤肿瘤细胞：由中国人民解放军陆军军医大学卞修武院士课题组从胶质母细胞瘤患者肿瘤组织中分离所得。
将患者来源的胶质母细胞瘤肿瘤细胞利用NBM基础培养基稀释后原位注射至免疫缺陷小鼠(NOD/SCID)(北京维通利华实验动物技术有限公司)右侧腹股沟中上部构建皮下移植瘤模型(Patient-Derived Xenografts，PDXs)，每只小鼠注射2x 106个细胞，每隔一天测量肿瘤大小，待肿瘤生长至合适大小(注射第11天)时将其随机分为四组：：对照组，IR组，RocA组，RocA+IR联合治疗组，每组8只。各组分别进行如下处理：
对照组(Ctrl)：在细胞注射第11天注射橄榄油，三天一次，共八次，每次注射体积同RocA组；
IR组：采用放射性同位素钴源(Co-60)释放伽马射线进行放疗，在细胞注射第11天进行第一次放疗，以后每七天一次，每次3Gy，共四次，总计量共计4x3Gy＝12Gy；
RocA组：利用橄榄油稀释RocA后进行腹腔注射，每次RocA注射量为2.5mg/kg体重,三天一次，共八次，在注射第11天进行第一次RocA注射；
RocA+IR联合治疗组：利用橄榄油稀释RocA后进行腹腔注射，每次RocA注射量为2.5mg/kg体重,三天一次，共八次，在注射第11天进行第一次RocA注射；在注射第11天采用放射性同位素钴源(Co-60)释放伽马射线进行第一次放疗，以后每七天一次，每次3Gy，共四次，总计量共计4x3Gy＝12Gy。
每隔一天测量肿瘤大小，并记录荷瘤小鼠生存期。
发现在PDXs模型中，单独IR及RocA治疗均对肿瘤生长有一定抑制作用，且能够延长小鼠生存周期；而在联合治疗组中，肿瘤生长受到明显抑制，小鼠生存周期显著延长(图4中a和b)。在注射第33天，对照组、IR组、RocA组和RocA+IR联合治疗组的肿瘤活体成像读取的Lucifer值(单位：p/s/cm2/sr)分别为1198.69±95.95、567.32±53.06、534.03±73.41与293.84±47.67，与对照组、IR组和RocA组相比，RocA+IR联合治疗组的肿瘤大小均显著下降；对照组、IR组、RocA组和RocA+IR联合治疗组小鼠的中位生存期分别为32、46、47、57天，与对照组、IR组和RocA组相比，RocA+IR联合治疗组小鼠的生存期均显著延长。
综合以上实验结果，发现RocA能够促进GSC、GBM移植瘤、PDXs移植瘤放疗敏感性并改善其治疗效果，对胶质瘤患者临床治疗具有重要提示意义。
以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。
序列表
<110> 军事科学院军事医学研究院生物医学分析中心
<120> PHB抑制剂与IR在胶质瘤治疗中的联合应用
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1830
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 1
atggaagatg ccaaaaacat taagaagggc ccagcgccat tctacccact cgaagacggg 60
accgccggcg agcagctgca caaagccatg aagcgctacg ccctggtgcc cggcaccatc 120
gcctttaccg acgcacatat cgaggtggac attacctacg ccgagtactt cgagatgagc 180
gttcggctgg cagaagctat gaagcgctat gggctgaata caaaccatcg gatcgtggtg 240
tgcagcgaga atagcttgca gttcttcatg cccgtgttgg gtgccctgtt catcggtgtg 300
gctgtggccc cagctaacga catctacaac gagcgcgagc tgctgaacag catgggcatc 360
agccagccca ccgtcgtatt cgtgagcaag aaagggctgc aaaagatcct caacgtgcaa 420
aagaagctac cgatcataca aaagatcatc atcatggata gcaagaccga ctaccagggc 480
ttccaaagca tgtacacctt cgtgacttcc catttgccac ccggcttcaa cgagtacgac 540
ttcgtgcccg agagcttcga ccgggacaaa accatcgccc tgatcatgaa cagtagtggc 600
agtaccggat tgcccaaggg cgtagcccta ccgcaccgca ccgcttgtgt ccgattcagt 660
catgcccgcg accccatctt cggcaaccag atcatccccg acaccgctat cctcagcgtg 720
gtgccatttc accacggctt cggcatgttc accacgctgg gctacttgat ctgcggcttt 780
cgggtcgtgc tcatgtaccg cttcgaggag gagctattct tgcgcagctt gcaagactat 840
aagattcaat ctgccctgct ggtgcccaca ctatttagct tcttcgctaa gagcactctc 900
atcgacaagt acgacctaag caacttgcac gagatcgcca gcggcggggc gccgctcagc 960
aaggaggtag gtgaggccgt ggccaaacgc ttccacctac caggcatccg ccagggctac 1020
ggcctgacag aaacaaccag cgccattctg atcacccccg aaggggacga caagcctggc 1080
gcagtaggca aggtggtgcc cttcttcgag gctaaggtgg tggacttgga caccggtaag 1140
acactgggtg tgaaccagcg cggcgagctg tgcgtccgtg gccccatgat catgagcggc 1200
tacgttaaca accccgaggc tacaaacgct ctcatcgaca aggacggctg gctgcacagc 1260
ggcgacatcg cctactggga cgaggacgag cacttcttca tcgtggaccg gctgaagagc 1320
ctgatcaaat acaagggcta ccaggtagcc ccagccgaac tggagagcat cctgctgcaa 1380
caccccaaca tcttcgacgc cggggtcgcc ggcctgcccg acgacgatgc cggcgagctg 1440
cccgccgcag tcgtcgtgct ggaacacggt aaaaccatga ccgagaagga gatcgtggac 1500
tatgtggcca gccaggttac aaccgccaag aagctgcgcg gtggtgttgt gttcgtggac 1560
gaggtgccta aaggactgac cggcaagttg gacgcccgca agatccgcga gattctcatt 1620
aaggccaaga agggcggcaa gatcgccgtg aattctgctt gcaagaactg gttcagtagc 1680
ttaagccact ttgtgatcca ccttaacagc cacggcttcc ctcccgaggt ggaggagcag 1740
gccgccggca ccctgcccat gagctgcgcc caggagagcg gcatggatag acaccctgct 1800
gcttgcgcca gcgccaggat caacgtctaa 1830

Claims (9)

1.一种系统在制备治疗和/或预防脑肿瘤产品中的应用，所述系统由Rocaglamide与放疗装置组成。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述治疗和/或预防脑肿瘤体现在抑制脑肿瘤生长和/或延长脑肿瘤动物生存期上。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述脑肿瘤为胶质瘤。
4.根据权利要求1-3中任一所述的应用，其特征在于：所述放疗装置能够释放伽马射线。
5.权利要求1-4中任一所述系统在制备具有如下任一用途产品中的应用：
X1、抑制脑肿瘤细胞生长；
X2、抑制脑肿瘤细胞成瘤能力；
X3、降低脑肿瘤细胞活力；
X4、降低脑肿瘤细胞的自我更新能力。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述脑肿瘤细胞为胶质瘤细胞。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述胶质瘤细胞为胶质瘤干细胞。
8.具有如下任一用途的系统，为权利要求1-4中任一所述系统：
Y1、治疗和/或预防脑肿瘤；
Y2、抑制脑肿瘤生长；
Y3、延长脑肿瘤动物生存期；
Y4、抑制脑肿瘤细胞生长；
Y5、抑制脑肿瘤细胞成瘤能力；
Y6、降低脑肿瘤细胞活力；
Y7、降低脑肿瘤细胞的自我更新能力。
9.Rocaglamide在制备脑肿瘤放疗增敏剂中的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015075165A1 (en) * 2013-11-22 2015-05-28 Deutsches Krebsforschungszentrum Translation inhibitors in high-dose chemo- and/or high-dose radiotherapy
CN107921139A (zh) * 2015-06-26 2018-04-17 海德堡吕布莱希特-卡尔斯大学 使用flavagline和2‑脱氧葡萄糖的组合疗法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015075165A1 (en) * 2013-11-22 2015-05-28 Deutsches Krebsforschungszentrum Translation inhibitors in high-dose chemo- and/or high-dose radiotherapy
CN107921139A (zh) * 2015-06-26 2018-04-17 海德堡吕布莱希特-卡尔斯大学 使用flavagline和2‑脱氧葡萄糖的组合疗法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
何国杰等: "化疗增敏剂研究进展", 《中国临床医学》 *
彭颖: "术后残留及复发脑胶质瘤立体定向放疗治疗探讨", 《中外医学研究》 *

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