CN112999194A - 一种口服的胰岛素多肽纳米胶囊的制备方法及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种口服的胰岛素多肽纳米胶囊的制备方法及应用,可有效解决多肽纳米囊包裹胰岛素的制备以及在口服给药降低血糖的应用问题,解决的技术方案是,将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，涡旋混合，加入胰岛素后，混合均匀，25℃静置2h，4℃静置4h，高速离心，收集胰岛素多肽纳米囊，用去离子水反复冲洗3次，得胰岛素多肽纳米囊，本发明制备方法简单,制备条件容易满足,是口服给药治疗糖尿病上的创新。
Description
技术领域
本发明涉及医药领域，特别是一种口服的胰岛素多肽纳米胶囊的制备方法及应用。
背景技术
糖尿病是胰岛素分泌不足所致的慢性代谢障碍性疾病，自胰岛素在临床应用以来，其一直是胰岛素依赖型和非胰岛素依赖型糖尿病患者治疗糖尿病的支柱性药物。
目前胰岛素常用给药途径是皮下注射、肺部和鼻腔途径，这些给药方式仅有小部分胰岛素能到达肝脏，发挥生理作用，而且降低了患者的依从性。胰岛素在外周循环中的滞留可导致外周胰岛素抵抗和免疫原性。当注射的胰岛素作用于错误的靶点时，高胰岛素血症也会发生，导致高血压、心血管疾病、体重增加和周围水肿。而通过口服胰岛素，在一定程度上模拟人体正常胰岛素的分泌和吸收路线，符合正常生理状态胰岛素的分泌，最大限度的降低外周组织发生低血糖和免疫反应的风险。
纳米口服递送系统一直是实现胰岛素口服的热点，纳米技术促进胰岛素吸收，有效提高口服生物利用度，但由于其复杂性，制备成本高，不易放大，难以通过各种上皮屏障入血等问题，未见有口服胰岛素纳米制剂上市销售。
胰岛素作为一种蛋白质激素，由于胃肠道上皮细胞紧密连接阻碍了机体对胰岛素这种大分子物质的吸收以及胃肠道存在的各种蛋白酶可以水解胰岛素，使得口服胰岛素难以达到治疗糖尿病所需剂量，用磷脂酰胆碱类化合物对多肽进行修饰，保存了该纳米囊的球形结构和稳定性，在此基础上将胰岛素包裹于多肽与磷脂酰胆碱类化合物自团聚的纳米囊中，可制备具有口服降糖疗效的胰岛素纳米囊。应用该胰岛素纳米囊，增加了胰岛素在机体中的稳定性，提高生物利用度。如何制备磷脂酰胆碱类化合物修饰多肽包裹胰岛素纳米囊至今未见有公开报道。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种可口服的胰岛素多肽纳米胶囊的制备方法及应用，可有效解决可口服的胰岛素多肽纳米胶囊的制备方法及在口服胰岛素降低血糖水平中的应用问题。
本发明解决的技术方案，在通过多肽与磷脂酰胆碱类化合物自团聚的同时包覆胰岛素形成纳米囊，实现胰岛素口服。口服胰岛素多肽纳米胶囊粒径为190-220nm，由以下步骤实现：
1)将80.0-120.0μg磷脂酰胆碱类化合物溶解于8-12mL三氟乙醇溶剂中，得到烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液；所述的烷基磷脂酸胆碱类化合物为十六烷基磷脂酰胆碱、二棕榈酸磷脂酰胆碱、1-棕榈酰基-2-油酰基卵磷脂、二油酰基磷脂酰乙醇胺中的任意一种中的任意一种；
2)将12.0-60.0μg多肽溶解于1-5mL三氟乙醇溶液中，得到多肽溶液；所述的多肽为
其Phe-Leu-Ile-Val-Ile-Gly-Ser-Ile-Ile-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys为主链， Phe-Leu-Ile-Val-Ile-Gly-Ser-Ile-Ile为支链；
3)将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，其中烷基磷脂酸胆碱类化合物和多肽的摩尔比为12:20，涡旋混合5-10min，在4000r/min的转速下，加入超纯水200μL，涡旋混合1-3min，25℃静置1-2h，4℃静置3-4h，高速离心10-15min，得多肽纳米胶囊；
4)将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，其中烷基磷脂酸胆碱类化合物和多肽的摩尔比为12:20，涡旋混合5-10min，在4000r/min的转速下，加入100IU/mL胰岛素100-200μL，涡旋混合1-3min，25℃静置1-2h，4℃静置3-4h，在14000r/min的转速下，高速离心3-5min，用去离子水反复冲洗3次，得口服胰岛素多肽纳米胶囊，所述的胰岛素为猪胰岛素、牛胰岛素、重组人胰岛素。
本发明方法所制备的多肽与磷脂酰胆碱类化合物自团聚的同时包覆胰岛素形成纳米囊，口服给药可有效降低血糖水平，制备方法简单，制备条件容易满足，并且不会对胰岛素本身的药物效果进行破坏，有效解决口服胰岛素治疗糖尿病的问题，是口服胰岛素的创新。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
实施例1
1)将80.0μg磷脂酰胆碱类化合物溶解于8mL三氟乙醇溶剂中，得到烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液；所述的烷基磷脂酸胆碱类化合物为十六烷基磷脂酰胆碱、二棕榈酸磷脂酰胆碱、1-棕榈酰基-2-油酰基卵磷脂、二油酰基磷脂酰乙醇胺中的任意一种；
2)将12.0μg多肽溶解于1mL三氟乙醇溶液中，得到多肽溶液；所述的多肽为
其Phe-Leu-Ile-Val-Ile-Gly-Ser-Ile-Ile-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys为主链， Phe-Leu-Ile-Val-Ile-Gly-Ser-Ile-Ile为支链；
3)将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，其中烷基磷脂酸胆碱类化合物和多肽的摩尔比为12:20，涡旋混合5min，在4000r/min的转速下，加入超纯水200μL，涡旋混合1min，25℃静置1h，4℃静置3h，高速离心10min，得多肽纳米胶囊；
4)将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，其中烷基磷脂酸胆碱类化合物和多肽的摩尔比为12:20，涡旋混合5min，在4000r/min的转速下，加入100IU/mL胰岛素100μL，涡旋混合1min，25℃静置1h，4℃静置3h，在14000r/min的转速下，高速离心3min，用去离子水反复冲洗3次，得口服胰岛素多肽纳米胶囊，所述的胰岛素为猪胰岛素、牛胰岛素、生物合成人胰岛素。
实施例2
1)将90.0μg磷脂酰胆碱类化合物溶解于9mL三氟乙醇溶剂中，得到烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液；所述的烷基磷脂酸胆碱类化合物为十六烷基磷脂酰胆碱、二棕榈酸磷脂酰胆碱、1-棕榈酰基-2-油酰基卵磷脂、二油酰基磷脂酰乙醇胺中的任意一种；
2)将24.0μg多肽溶解于2mL三氟乙醇溶液中，得到多肽溶液；所述的多肽为
，其Phe-Leu-Ile-Val-Ile-Gly-Ser-Ile-Ile-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys为主链， Phe-Leu-Ile-Val-Ile-Gly-Ser-Ile-Ile为支链；
3)将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，其中烷基磷脂酸胆碱类化合物和多肽的摩尔比为12:20，涡旋混合6min，在4000r/min的转速下，加入超纯水200μL，涡旋混合1min，25℃静置2h，4℃静置4h，高速离心11min，得多肽纳米胶囊；
4)将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，其中烷基磷脂酸胆碱类化合物和多肽的摩尔比为12:20，涡旋混合6min，在4000r/min的转速下，加入100IU/mL胰岛素130μL，涡旋混合1min，25℃静置2h，4℃静置4h，在14000r/min的转速下，高速离心4min，用去离子水反复冲洗3次，得口服胰岛素多肽纳米胶囊，所述的胰岛素为猪胰岛素、牛胰岛素、生物合成人胰岛素。
实施例3
1)将100.0μg磷脂酰胆碱类化合物溶解于10mL三氟乙醇溶剂中，得到烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液；所述的烷基磷脂酸胆碱类化合物为十六烷基磷脂酰胆碱、二棕榈酸磷脂酰胆碱、1-棕榈酰基-2-油酰基卵磷脂、二油酰基磷脂酰乙醇胺中的任意一种；
2)将36.0μg多肽溶解于3mL三氟乙醇溶液中，得到多肽溶液；所述的多肽为
，其Phe-Leu-Ile-Val-Ile-Gly-Ser-Ile-Ile-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys为主链， Phe-Leu-Ile-Val-Ile-Gly-Ser-Ile-Ile为支链；
3)将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，其中烷基磷脂酸胆碱类化合物和多肽的摩尔比为12:20，涡旋混合8min，在4000r/min的转速下，加入超纯水200μL，涡旋混合2min，25℃静置1h，4℃静置3h，高速离心12min，得多肽纳米胶囊；
4)将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，其中烷基磷脂酸胆碱类化合物和多肽的摩尔比为12:20，涡旋混合8min，在4000r/min的转速下，加入100IU/mL胰岛素160μL，涡旋混合2min，25℃静置1h，4℃静置3h，在14000r/min的转速下，高速离心5min，用去离子水反复冲洗3次，得口服胰岛素多肽纳米胶囊，所述的胰岛素为猪胰岛素、牛胰岛素、生物合成人胰岛素。
实施例4
1)将110.0μg磷脂酰胆碱类化合物溶解于11mL三氟乙醇溶剂中，得到烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液；所述的烷基磷脂酸胆碱类化合物为十六烷基磷脂酰胆碱、二棕榈酸磷脂酰胆碱、1-棕榈酰基-2-油酰基卵磷脂、二油酰基磷脂酰乙醇胺中的任意一种；
2)将48.0μg多肽溶解于4mL三氟乙醇溶液中，得到多肽溶液；所述的多肽为
其Phe-Leu-Ile-Val-Ile-Gly-Ser-Ile-Ile-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys为主链， Phe-Leu-Ile-Val-Ile-Gly-Ser-Ile-Ile为支链；
3)将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，其中烷基磷脂酸胆碱类化合物和多肽的摩尔比为12:20，涡旋混合9min，在4000r/min的转速下，加入超纯水200μL，涡旋混合3min，25℃静置2h，4℃静置4h，高速离心14min，得多肽纳米胶囊；
4)将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，其中烷基磷脂酸胆碱类化合物和多肽的摩尔比为12:20，涡旋混合9min，在4000r/min的转速下，加入100IU/mL胰岛素190μL，涡旋混合3min，25℃静置2h，4℃静置4h，在14000r/min的转速下，高速离心3min，用去离子水反复冲洗3次，得口服胰岛素多肽纳米胶囊，所述的胰岛素为猪胰岛素、牛胰岛素、生物合成人胰岛素。
实施例5
1)将120.0μg磷脂酰胆碱类化合物溶解于12mL三氟乙醇溶剂中，得到烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液；所述的烷基磷脂酸胆碱类化合物为十六烷基磷脂酰胆碱、二棕榈酸磷脂酰胆碱、1-棕榈酰基-2-油酰基卵磷脂、二油酰基磷脂酰乙醇胺中的任意一种；
2)将60.0μg多肽溶解于5mL三氟乙醇溶液中，得到多肽溶液；所述的多肽为
其Phe-Leu-Ile-Val-Ile-Gly-Ser-Ile-Ile-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys为主链， Phe-Leu-Ile-Val-Ile-Gly-Ser-Ile-Ile为支链；
3)将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，其中烷基磷脂酸胆碱类化合物和多肽的摩尔比为12:20，涡旋混合10min，在4000r/min的转速下，加入超纯水200μL，涡旋混合3min，25℃静置1h，4℃静置3h，高速离心15min，得多肽纳米胶囊；
4)将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，其中烷基磷脂酸胆碱类化合物和多肽的摩尔比为12:20，涡旋混合10min，在4000r/min的转速下，加入100IU/mL胰岛素200μL，涡旋混合3min，25℃静置1h，4℃静置3h，在14000r/min的转速下，高速离心 5min，用去离子水反复冲洗3次，得口服胰岛素多肽纳米胶囊，所述的胰岛素为猪胰岛素、牛胰岛素、生物合成人胰岛素。
透射电镜下观察胰岛素多肽纳米胶囊粒径在190-220nm，为类球形双层膜结构，分散性好，无团聚现象。
上述发明内容部分以及实施例1-5给出的口服胰岛素多肽纳米胶囊的制备方法，可有效用于治疗高血糖疾病，实现磷脂酰胆碱类化合物修饰多肽纳米胶囊在胰岛素口服治疗糖尿病中的应用。并经试验取得了有益的技术效果，有关实验资料如下：
本发明口服胰岛素多肽纳米胶囊具有治疗高血糖作用，可通过以下试验证明。
将1mM胰岛素多肽纳米胶囊分散于pH1.2、pH5.0、pH6.8、pH7.4的缓冲盐介质中，在37℃、100r/min水浴摇床中测定释放，分别于0.5、1、2、4、6、8、10、12、24、36、 48h取出一定量的溶出介质，并补充等体积的新鲜溶出介质，采用高效液相色谱测定游离胰岛素的含量。
为模拟药物口服给药后在胃中及进入小肠中的释放，分别考察了胰岛素多肽纳米胶囊在pH 1.2、pH 5.0、pH 6.8和pH7.4释放介质中的药物释放情况，结果显示，胰岛素多肽纳米胶囊在pH 1.2盐酸水溶液中，48h最大累计释放量为3.6％；在pH 5.0、6.8磷酸缓冲液48h的累计释放量分别为8％、13％；在pH 7.4磷酸缓冲液48h的累计释放量为25％。
链脲佐菌素建立I型糖尿病小鼠模型实验过程：适应性饲养2天，禁食12h，自由饮水后，通过尾静脉采血检测。测定未给药前的昆明小鼠空腹血糖值(正常小鼠的血糖值 3～6mmol/L)，将体重为25～27g的昆明小鼠禁食12h，使用链脲佐菌素，按100mg/Kg 剂量连续3天腹腔注射给药；等量注射柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液为对照组。于注射后第3，5， 7天分别对实验组和对照组小鼠的血糖进行测定，检测前一晚禁食不禁水，尾静脉采血，用血糖仪检测血糖水平。以注射链脲佐菌素后第七天的空腹血糖值>16.65mmol/L，并表现出明显的多饮、多食及多尿为造模成功。
将I型糖尿病模型小鼠分为6组，设置口服胰岛素多肽纳米胶囊溶液为A及B组，其胰岛素的含量分别为20IU/kg和40IU/kg；设置皮下注射胰岛素为C组，其胰岛素的含量为1.5IU/kg；设置口服生理盐水为D组；设置口服胰岛素为E组,其胰岛素含量为40IU/kg；设置皮下注射胰岛素多肽纳米胶囊溶液为F组，其胰岛素的含量为1.5IU/kg。将糖尿病模型小鼠随机分成6组，每组3只，实验前禁食，可自由饮水，称重。按实验分组给药。用罗氏血糖仪和配套试纸测定给药后小鼠血糖浓度变化，并与初始血糖(0h)比较，计算各时间点的血糖值与初始血糖值的百分比。
通过测定糖尿病模型小鼠各时间点的血糖值与初始血糖值的百分比，评估胰岛素多肽纳米胶囊降糖效果。A、B组的糖尿病小鼠血糖水平在4～8小时内降低了50％，相反用相同剂量的D、E组在实验期间未显示血糖水平的明显变化。且与D、E组相比，A、B组的血糖水平明显降低(P＜0.05)。结果表明，口服胰岛素多肽纳米胶囊具有明显降血糖活性。 A、B组与C组相比，降低的血糖水平没有显著性差异(P>0.05)，表明口服胰岛素多肽纳米胶囊可以与皮下注射胰岛素组的降糖效果相媲美。C与F组相比，降低的血糖水平没有显著性差异(P>0.05)，表明胰岛素的活性保留；C组在0.5～1h有明显降血糖效果，而F组在 0.5～10h有明显持续的降糖效果，表明皮下注射胰岛素多肽纳米胶囊能持续降低血糖水平，具有缓释效果。
本发明与现有技术相比具有以下突出的有益技术效果:
1)本发明制备方法简单，制备条件容易满足，物理及化学稳定性好，原料来源丰富，并且不会对胰岛素本身的治疗效果进行破坏；
2)本发明自团聚成胰岛素纳米囊，可用于口服治疗糖尿病，提高生物利用度，延长药物在机体内的作用时间；
3)本发明可作为胰岛素口服给药的有效制剂，有极小的毒性，生物相容性好，具有缓释效果，可发挥降低血糖作用，更好的维持血糖稳态。测试结果表明，本发明制备口服的胰岛素多肽纳米胶囊，粒径均匀，可以在水溶液中分散均匀，无粘连现象。是胰岛素口服治疗糖尿病的创新。
序列表
<110> 郑州大学
<120> 一种口服的胰岛素多肽纳米胶囊的制备方法及应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 14
<212> PRT
<213> 多肽主链(Artificial Sequence)
<400> 1
Phe Leu Ile Val Ile Gly Ser Ile Ile Lys Lys Lys Lys Lys
1 5 10
Claims (7)
1.一种可口服的胰岛素多肽纳米胶囊的制备方法，其特征在于通过两亲性多肽与磷脂酰胆碱类化合物自团聚的同时包覆胰岛素形成纳米囊，实现胰岛素口服降糖，口服胰岛素多肽纳米胶囊粒径为190-220nm，由以下步骤实现：
1)将80.0-120.0μg磷脂酰胆碱类化合物溶解于8-12mL三氟乙醇溶剂中，得到烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液；所述的烷基磷脂酸胆碱类化合物为十六烷基磷脂酰胆碱、二棕榈酸磷脂酰胆碱、1-棕榈酰基-2-油酰基卵磷脂、二油酰基磷脂酰乙醇胺中的任意一种；
2)将12.0-60.0μg支链两亲性多肽溶解于1-5mL三氟乙醇溶液中，得到多肽溶液；所述的多肽为
其Phe-Leu-Ile-Val-Ile-Gly-Ser-Ile-Ile-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys为主链，Phe-Leu-Ile-Val-Ile-Gly-Ser-Ile-Ile为支链；
3)将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，其中烷基磷脂酸胆碱类化合物和两亲性多肽的摩尔比为12:20，涡旋混合5-10min，在4000r/min的转速下，加入超纯水200μL，涡旋混合1-3min，25℃静置1-2h，4℃静置3-4h，高速离心10-15min，得多肽纳米胶囊；
4)将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，其中烷基磷脂酸胆碱类化合物和多肽的摩尔比为12:20，涡旋混合5-10min，在4000r/min的转速下，加入100IU/mL胰岛素100-200μL，涡旋混合1-3min，25℃静置1-2h，4℃静置3-4h，在14000r/min的转速下，高速离心3-5min，用去离子水反复冲洗3次，得口服胰岛素多肽纳米胶囊，所述的胰岛素为猪胰岛素、牛胰岛素、重组人胰岛素。
2.根据权利要求1所述的可口服的胰岛素多肽纳米胶囊的制备方法，其特征在于，由以下步骤实现:
1)将80.0μg磷脂酰胆碱类化合物溶解于8mL三氟乙醇溶剂中，得到烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液；所述的烷基磷脂酸胆碱类化合物为十六烷基磷脂酰胆碱、二棕榈酸磷脂酰胆碱、1-棕榈酰基-2-油酰基卵磷脂、二油酰基磷脂酰乙醇胺中的任意一种；
2)将12.0μg多肽溶解于1mL三氟乙醇溶液中，得到多肽溶液；所述的多肽为
其Phe-Leu-Ile-Val-Ile-Gly-Ser-Ile-Ile-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys为主链，Phe-Leu-Ile-Val-Ile-Gly-Ser-Ile-Ile为支链；
3)将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，其中烷基磷脂酸胆碱类化合物和多肽的摩尔比为12:20，涡旋混合5min，在4000r/min的转速下，加入超纯水200μL，涡旋混合1min，25℃静置1h，4℃静置3h，高速离心10min，得多肽纳米胶囊；
4)将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，其中烷基磷脂酸胆碱类化合物和多肽的摩尔比为12:20，涡旋混合5min，在4000r/min的转速下，加入100IU/mL胰岛素100μL，涡旋混合1min，25℃静置1h，4℃静置3h，在14000r/min的转速下，高速离心3min，用去离子水反复冲洗3次，得口服胰岛素多肽纳米胶囊，所述的胰岛素为猪胰岛素、牛胰岛素、生物合成人胰岛素。
3.根据权利要求1所述的可口服的胰岛素多肽纳米胶囊的制备方法，其特征在于，由以下步骤实现:
1)将90.0μg磷脂酰胆碱类化合物溶解于9mL三氟乙醇溶剂中，得到烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液；所述的烷基磷脂酸胆碱类化合物为十六烷基磷脂酰胆碱、二棕榈酸磷脂酰胆碱、1-棕榈酰基-2-油酰基卵磷脂、二油酰基磷脂酰乙醇胺中的任意一种；
2)将24.0μg两亲性多肽溶解于2mL三氟乙醇溶液中，得到多肽溶液；所述的多肽为
其Phe-Leu-Ile-Val-Ile-Gly-Ser-Ile-Ile-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys为主链，Phe-Leu-Ile-Val-Ile-Gly-Ser-Ile-Ile为支链；
3)将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，其中烷基磷脂酸胆碱类化合物和多肽的摩尔比为12:20，涡旋混合6min，在4000r/min的转速下，加入超纯水200μL，涡旋混合1min，25℃静置2h，4℃静置4h，高速离心11min，得多肽纳米胶囊；
4)将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，其中烷基磷脂酸胆碱类化合物和多肽的摩尔比为12:20，涡旋混合6min，在4000r/min的转速下，加入100IU/mL胰岛素130μL，涡旋混合1min，25℃静置2h，4℃静置4h，在14000r/min的转速下，高速离心4min，用去离子水反复冲洗3次，得口服胰岛素多肽纳米胶囊，所述的胰岛素为猪胰岛素、牛胰岛素、生物合成人胰岛素。
4.根据权利要求1所述的可口服的胰岛素多肽纳米胶囊的制备方法，其特征在于，由以下步骤实现:
1)将100.0μg磷脂酰胆碱类化合物溶解于10mL三氟乙醇溶剂中，得到烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液；所述的烷基磷脂酸胆碱类化合物为十六烷基磷脂酰胆碱、二棕榈酸磷脂酰胆碱、1-棕榈酰基-2-油酰基卵磷脂、二油酰基磷脂酰乙醇胺中的任意一种；
2)将36.0μg多肽溶解于3mL三氟乙醇溶液中，得到多肽溶液；所述的多肽为
其Phe-Leu-Ile-Val-Ile-Gly-Ser-Ile-Ile-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys为主链，Phe-Leu-Ile-Val-Ile-Gly-Ser-Ile-Ile为支链；
3)将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，其中烷基磷脂酸胆碱类化合物和多肽的摩尔比为12:20，涡旋混合8min，在4000r/min的转速下，加入超纯水200μL，涡旋混合2min，25℃静置1h，4℃静置3h，高速离心12min，得多肽纳米胶囊；
4)将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，其中烷基磷脂酸胆碱类化合物和多肽的摩尔比为12:20，涡旋混合8min，在4000r/min的转速下，加入100IU/mL胰岛素160μL，涡旋混合2min，25℃静置1h，4℃静置3h，在14000r/min的转速下，高速离心5min，用去离子水反复冲洗3次，得口服胰岛素多肽纳米胶囊，所述的胰岛素为猪胰岛素、牛胰岛素、生物合成人胰岛素。
5.根据权利要求1所述的可口服的胰岛素多肽纳米胶囊的制备方法，其特征在于，由以下步骤实现:
1)将110.0μg磷脂酰胆碱类化合物溶解于11mL三氟乙醇溶剂中，得到烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液；所述的烷基磷脂酸胆碱类化合物为十六烷基磷脂酰胆碱、二棕榈酸磷脂酰胆碱、1-棕榈酰基-2-油酰基卵磷脂、二油酰基磷脂酰乙醇胺中的任意一种；
2)将48.0μg多肽溶解于4mL三氟乙醇溶液中，得到多肽溶液；所述的多肽为
其Phe-Leu-Ile-Val-Ile-Gly-Ser-Ile-Ile-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys为主链，Phe-Leu-Ile-Val-Ile-Gly-Ser-Ile-Ile为支链；
3)将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，其中烷基磷脂酸胆碱类化合物和支链两亲性多肽的摩尔比为12:20，涡旋混合9min，在4000r/min的转速下，加入超纯水200μL，涡旋混合3min，25℃静置2h，4℃静置4h，高速离心14min，得多肽纳米胶囊；
4)将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，其中烷基磷脂酸胆碱类化合物和多肽的摩尔比为12:20，涡旋混合9min，在4000r/min的转速下，加入100IU/mL胰岛素190μL，涡旋混合3min，25℃静置2h，4℃静置4h，在14000r/min的转速下，高速离心3min，用去离子水反复冲洗3次，得口服胰岛素多肽纳米胶囊，所述的胰岛素为猪胰岛素、牛胰岛素、生物合成人胰岛素。
6.根据权利要求1所述的可口服的胰岛素多肽纳米胶囊的制备方法，其特征在于，由以下步骤实现:
1)将120.0μg磷脂酰胆碱类化合物溶解于12mL三氟乙醇溶剂中，得到烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液；所述的烷基磷脂酸胆碱类化合物为十六烷基磷脂酰胆碱、二棕榈酸磷脂酰胆碱、1-棕榈酰基-2-油酰基卵磷脂、二油酰基磷脂酰乙醇胺中的任意一种；
2)将60.0μg多肽溶解于5mL三氟乙醇溶液中，得到多肽溶液；所述的两亲性多肽为
其Phe-Leu-Ile-Val-Ile-Gly-Ser-Ile-Ile-Lys-Lys-Lys-Lys-Lys为主链，Phe-Leu-Ile-Val-Ile-Gly-Ser-Ile-Ile为支链；
3)将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，其中烷基磷脂酸胆碱类化合物和支链两亲性多肽的摩尔比为12:20，涡旋混合10min，在4000r/min的转速下，加入超纯水200μL，涡旋混合3min，25℃静置1h，4℃静置3h，高速离心15min，得多肽纳米胶囊；
4)将烷基磷脂酸胆碱类化合物溶液加入到多肽溶液中，其中烷基磷脂酸胆碱类化合物和多肽的摩尔比为12:20，涡旋混合10min，在4000r/min的转速下，加入100IU/mL胰岛素200μL，涡旋混合3min，25℃静置1h，4℃静置3h，在14000r/min的转速下，高速离心5min，用去离子水反复冲洗3次，得口服胰岛素多肽纳米胶囊，所述的胰岛素为猪胰岛素、牛胰岛素、生物合成人胰岛素。
7.权利1或2-6任一项所述的方法制备的胰岛素多肽纳米胶囊具有口服有效性，在制备口服胰岛素治疗高血糖中应用。
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|---|---|
| CN (1) | CN112999194A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114146183A (zh) * | 2021-12-02 | 2022-03-08 | 武汉轻工大学 | 一种紫薯降血糖多肽微胶囊化产品及其制备方法和应用 |
-
2021
- 2021-03-26 CN CN202110329876.0A patent/CN112999194A/zh active Pending
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| PB01 | Publication | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20210622 |
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| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |