CN112924574B - 一种基于PDA@Fe3O4-MWCNTs检测食用植物油中多种真菌毒素的方法 - Google Patents

一种基于PDA@Fe3O4-MWCNTs检测食用植物油中多种真菌毒素的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种基于PDA@Fe3O4‑MWCNTs检测食用植物油中多种真菌毒素的方法，属于农业、食品检测领域。本发明先采用多巴胺包覆Fe3O4‑MWCNTs得到PDA@Fe3O4‑MWCNTs，之后将PDA@Fe3O4‑MWCNTs应用在检测食用植物油中多种真菌毒素中，通过选择合适的提取液(乙腈、水、乙酸的体积比为84：15：1)、解析液(乙腈、水、乙酸的体积比为84：15：1)，调整吸附的时间(10‑20min)、待测油样的pH等参数实现了同时检测食用油中的6种真菌毒素(黄曲霉毒素B1(AFB1)、黄曲霉毒素B2(AFB2)、黄曲霉毒素G1(AFG1)、黄曲霉毒素G2(AFG2)和赭曲霉毒素A(OTA)、赭曲霉毒素B(OTB))，通过测试，加标回收率为70.15～89.25％，RSDs小于6.4％。

Description

一种基于PDA@Fe3O4-MWCNTs检测食用植物油中多种真菌毒素 的方法
技术领域
本发明涉及一种基于PDA@Fe3O4-MWCNTs检测食用植物油中多种真菌毒素的方法，属于农业、食品检测领域。
背景技术
食用植物油因油料作物生长、收获及油脂精炼、储存和消费过程中受到异常气候、储藏环境和运输条件等影响造成的真菌污染而容易产生有害的真菌毒素。食用油中常见的真菌毒素有黄曲霉类毒素、单端孢霉烯族类毒素、伏马类毒素、赭曲霉类毒素等。其真菌毒检测素多为痕量检测，且受污染的油脂样品基质大多成分复杂，增大了检测难度，因此其前处理技术很大程度上决定了检测结果的准确与否。样品前处理是分析食品复杂基质的基础，目的是富集和分离目标分析物，从而减少基质效应和对目标组分的干扰，是食品样品分析中的重要环节。
提取和净化是真菌毒素样品前处理技术中常用的操作，常见的提取、净化方法包括液液提取(LLE)、固相萃取法(SPE)、免疫亲和层析法、凝胶渗透色谱(GPC)、固相微萃取(SMPE)、浊点萃取(CPE)、直接稀释法、分散液液微萃取法(DLLME)、QuEChERS等方法。其中LLE存在有机溶剂消耗量大的缺点；SPE尽管选择性高和特异性强，但是其价格昂贵、不能重复使用且只能净化一种或一类真菌毒素，同时由于吸附剂对部分目标物有一定的吸附作用，会造成部分真菌毒素的回收率偏低；GPC可有效去除色素、脂肪等大分子干扰物，但是也存在昂贵的溶剂纯化系统和大量有机溶剂的消耗问题；SMPE萃取容量小。
发明内容
为了解决上述至少一个问题，本发明提供一种基于PDA@Fe3O4-MWCNTs磁性固相萃取 -高效液相色谱检测食用植物油中多种真菌毒素的方法，本发明的方法具有高效、经济、灵敏度和准确性高的特点，为植物油中多种真菌毒素的测定提供了一种新的前处理技术。
本发明的第一个目的是提供一种制备PDA@Fe3O4-MWCNTs的方法，包括如下步骤：
(1)将Fe3O4-MWCNTs和Tris-HCl缓冲溶液混合均匀，得到混合溶液；其中 Fe3O4-MWCNTs和Tris-HCl缓冲溶液的比例以mg/mL计为3-5：1；
(2)在步骤(1)的混合溶液中加入盐酸多巴胺进行反应；其中Fe3O4-MWCNTs和多巴胺的质量比为1-3：1；
(3)反应结束后将沉淀分离出来，洗涤、干燥、得到PDA@Fe3O4-MWCNTs。
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中Fe3O4-MWCNTs和Tris-HCl缓冲溶液的比例以mg/mL计为4：1。
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中Fe3O4-MWCNTs和盐酸多巴胺的质量比为2：1。
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中Tris-HCl缓冲溶液的pH为8.5，浓度为0.01 mol/L。
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中Fe3O4-MWCNTs的制备方法为：
将25mg MWCNTs加入到50mL水中，之后加入107mg FeCl2·4H2O和291mg FeCl3·6H2O，超声5～10min，然后通入N2 30min以净化溶液，再加入2mL氨水，最后，在 90℃下搅拌90min；分离、洗涤、干燥得到Fe3O4-MWCNTs。
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中Fe3O4-MWCNTs的制备方法具体为：
将25mg MWCNTs加入到50mL超纯水中，接着加入107mg FeCl2·4H2O和291mgFeCl3·6H2O，超声5(5～10min)min，然后通入N2 30min以净化溶液(脱O2)，再加入2mL 氨水，最后，通过恒温磁力搅拌水浴锅让溶液在90℃下剧烈搅拌90min；通过外加磁场(加磁铁)将样品分离出来、并用去离子水(超纯水)多次清洗、最后用恒温真空干燥箱在50℃干燥即得到Fe3O4-MWCNTs(或放入80℃烘箱中干燥10h)。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中反应的条件为20～40℃下，300-1000r/min反应10-14h，进一步优选为25℃下，500r/min反应12h。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)的反应原理为：由Fe3O4-MWCNTs和盐酸多巴胺经氧化自聚修饰制备，具体是盐酸多巴胺在碱性条件下先氧化成多巴胺醌，通过1,4-迈克尔加成分子内环化成无色5,6-二羟基吲哚啉(LDC)，继续氧化重排成5,6-二羟基吲哚(DHI)，再氧化成5,6-吲哚醌(IDQ)和Fe3O4-MWCNT表面的金属元素形成配位键修饰制备而成。
在本发明的一种实施方式中，步骤(3)中所述的分离是通过外加磁场(加磁铁)进行分离。
在本发明的一种实施方式中，步骤(3)中所述的洗涤是用水洗涤5次以上，进一步优选为用超纯水洗涤。
在本发明的一种实施方式中，步骤(3)中所述的干燥是在50℃下真空干燥10h。
本发明的第二个目的是本发明所述的方法制备得到的PDA@Fe3O4-MWCNTs。
本发明的第三个目的是一种基于本发明所述的PDA@Fe3O4-MWCNTs检测食用植物油中多种真菌毒素的方法，包括如下步骤：
(1)在油样溶液中加入提取液进行提取；之后离心、取下层提取液加水混合均匀，离心，取上清液过膜，得到预处理的油样；其中所述的提取液为乙腈、水、乙酸的混合溶液，混合溶液中乙腈、水、乙酸的体积比为83-85：14-16：1；
(2)在PDA@Fe3O4-MWCNTs中加入步骤(1)得到的预处理的油样，混合均匀进行吸附；吸附完成后分离得到沉淀；之后在沉淀中加入解析剂进行洗脱，收集洗脱液，氮气吹干，残留物供柱前衍生化用，衍生后的溶液经氮气吹干，残留物复溶，得到待测油样；其中所述的解析液为乙腈、水、乙酸的混合溶液，混合溶液中乙腈、水、乙酸的体积比为83-85：14-16：1；
(3)采用高效液相色谱仪对待测油样进行检测，得到多种毒素的吸收峰面积；之后根据标准曲线得到油样中多种毒素的含量。
在本发明的一种实施方式中，所述的多种真菌毒素包括黄曲霉毒素B1(AFB1)、黄曲霉毒素B2(AFB2)、黄曲霉毒素G1(AFG1)、黄曲霉毒素G2(AFG2)和赭曲霉毒素A(OTA)、赭曲霉毒素B(OTB)。
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中乙腈、水、乙酸的体积比为84：15：1。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中乙腈、水、乙酸的体积比为84：15：1。
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中油样溶液是油样和石油醚的混合溶液；其中油样和石油醚的比例以g/mL计为1：1-3，进一步优选为1：2。
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中油样和提取液的比例以g/mL计为4-6：10，进一步优选为5-5.1：10。
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中提取是采用超声提取，提取时间为10-30min，进一步优选为20min。
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中提取之后的离心是室温下8000r/min离心10min。
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中下层提取液和水的体积比为1：0.5-1.5，进一步优选为1：1。
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中加水混合均匀之后的离心为4℃，12000r/min 离心10min。
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中所述的上清液过膜采用的滤膜的规格为0.22μm。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中PDA@Fe3O4-MWCNTs和预处理油样的比例以mg/mL计为40-70：1，进一步优选为50：1。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中预处理油样的pH为7-8，进一步优选为7。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中所述的吸附的时间为10-20min，进一步优选为10min。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中所述的吸附是于振荡器中以1500r/min振摇 10-20min。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中所述的分离是用外加磁铁分离固液两相。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中预处理油样和解析剂的体积比为1：1-3，进一步优选为1：2。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中洗脱时间为3min。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中洗脱可以重复进行，洗脱次数为3次。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中氮气吹干的条件为40℃，1mL/min。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中柱前衍生化为在盛有残留物的离心管中加入衍生试剂200μL正己烷和100μL三氟乙酸，振荡30s，40℃水浴条件下衍生15min。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中所述的复溶是加入乙腈复溶。
在本发明的一种实施方式中，步骤(3)中所述的高效液相色谱仪，其色谱条件为：
色谱柱：Agilent XDB-C18(4.6mm×150mm,3.5μm)；
柱温：40℃；流速：0.6mL/min；进样体积：10μL；
荧光检测器的检测波长：AFB1、AFB2、AFG1、AFG2激发波长365nm，发射波长460nm；OTA和OTB激发波长327nm，发射波长460nm；流动相：A为甲醇，B为0.05％甲酸，梯度洗脱。
在本发明的一种实施方式中，步骤(3)中所述的标准曲线的制备方法为：
以甲醇-乙腈(体积比50：50)为溶剂分别配制AFB1、AFB2、AFG1和AFG2质量浓度为1.00、2.00、5.00、10.00、25.00、50.00μg/L，OTA和OTB质量浓度为2.00、4.00、10.00、20.00、50.00、100.00μg/L的混合标准溶液；采用高效液相色谱仪对得到的上述溶液进行检测，得到吸收峰面积和浓度的对应关系；通过对应关系得到标准曲线。
本发明的有益效果：
(1)本发明制备的Fe3O4-MWCNTs材料被PDA修饰后，Fe3O4-MWCNTs材料将会保持两者原有的吸附性，同时也将借助PDA在环境中的稳定性及在水中极好的分散性，改善材料的吸附性能，将提高萃取效率。
(2)本发明通过建立的MSPE-HPLC方法在最优条件下分析食用油中6种真菌毒素，加标回收率为70.15％～89.25％，RSDs小于6.4％，表明本发明的方法可有效同步检测6种真菌毒素。
(3)本发明的方法丰富了目标检测物，抑制了样品基质影响，提高了实验准确性和样品前处理的效率，具有快速高效、经济环保的特点。
附图说明
图1为实施例1中PDA@Fe3O4-MWCNTs的制备原理图。
图2为实施例2中磁性固相萃取6种毒素的过程。
图3为实施例2中油样中6种毒素加标前后分离色谱图。
图4为对照例1和实施例2的测试结果对比。
具体实施方式
以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解实施例是为了更好地解释本发明，不用于限制本发明。实施例中所涉及的食用油样品、试剂材料如6种真菌毒素标准品、多壁碳纳米管MWCNTs(>95％,ID:2-5nm,OD<8nm,Length:10-30μm)、氯化亚铁-四水合物(99.95％)、盐酸多巴胺(98％)、三氯化铁-六水合物(99％)以及其它试剂均可通过市售途径获取。
实施例1
一种制备PDA@Fe3O4-MWCNTs的方法，包括如下步骤：
(1)Fe3O4-MWCNTs的制备：
将25mg MWCNTs加入到50mL超纯水中(置于500mL烧瓶中，便于后面清洗)，接着加入107mg FeCl2·4H2O和291mg FeCl3·6H2O，超声5min，然后通入N2 30min以净化溶液(脱O2)，再加入2mL氨水，最后，通过恒温磁力搅拌水浴锅让溶液在90℃下剧烈搅拌 90min；之后通过外加磁场(加磁铁)将样品分离出来，并用超纯水多次清洗；最后用恒温真空干燥箱在50℃干燥即得到Fe3O4-MWCNTs；
(2)PDA@Fe3O4-MWCNTs的制备(原理图如图1所示)
在100mL烧杯中加入80mg步骤(1)得到的Fe3O4-MWCNTs和20mL 0.01mol/L的pH 为8.5的Tris-HCl缓冲溶液，混合均匀得到混合溶液；之后将40mg盐酸多巴胺加入混合溶液中，500r/min揽拌12h；反应结束后，通过外加磁场(加磁铁)将PDA@Fe3O4-MWCNTs 分离出来、并用超纯水洗涤数次，在50℃下真空干燥10h，得到PDA@Fe3O4-MWCNTs，之后保存在4℃冰箱。
实施例2
一种基于PDA@Fe3O4-MWCNTs检测食用玉米油中多种真菌毒素的方法，包括如下步骤：
(1)制备标准曲线：
配制质量浓度均为1.00、2.00、5.00、10.00、25.00、50.00μg/L AFB1、AFB2、AFG1和AFG2和质量浓度均为2.00、4.00、10.00、20.00、50.00、100.00μg/L OTA和OTB混合标准溶液作为标准工作液；
将标准工作液1mL置于2mL离心管中，在40℃下氮吹至干；向上述盛有残留物的离心管中加入衍生试剂200μL正己烷和100μL三氟乙酸，振荡30s，40℃水浴条件下衍生15min；之后衍生后的溶液经氮气(40℃，1mL/min)吹干，残留物用200μL乙腈复溶，涡旋混匀；
最后采用高效液相色谱仪进行样品分析，色谱条件为：色谱柱：Agilent XDB-C18(4.6mm ×150mm,3.5μm)；柱温40℃；流速0.6mL/min，进样体积10μL；荧光检测器，检测波长： AFB1、AFB2、AFG1、AFG2激发波长365nm，发射波长460nm；OTA和OTB激发波长327 nm，发射波长460nm；流动相：A为甲醇，B为0.05％甲酸，梯度洗脱见表1。
表1流动相梯度洗脱程序
Figure BDA0002914260560000061
根据高效液相色谱的吸收峰和标准溶液的浓度绘制6种真菌毒素的标准曲线(表2)。从表2可以看出：在1～100μg/L线性范围内，6种真菌毒素方法的线性关系良好，R2均大于0.999，方法检出限(以S/N≧3计)为0.20～0.50μg/kg，定量限(以S/N≧10计)为0.60～1.50 μg/kg。
表2 6种真菌毒素的线性回归方程、相关系数(R2)、检出限(LOD)及定量限(LOQ)
Figure BDA0002914260560000062
(2)玉米油的检测(如图2)
取玉米油样品5.018g放入50mL离心管中，再加入10mL石油醚，涡旋混匀1min，加提取液乙腈-水-乙酸(体积比84：15：1)10mL，涡旋1min后，超声提取20min，静置，之后室温下8000r/min离心10min，取下层提取液置于15mL离心管中，待用；取下层提取液1mL于15mL离心管中，加1mL的水，涡旋1min，静置，4℃、12 000r/min离心10min，取上清液过膜(滤膜的规格为0.22μm)，得到预处理的油样；
将1mL预处理的油样(pH为7)转移至装有50mg PDA@Fe3O4-MWCNTs磁性纳米材料离心管中，于振荡器中以1500r/min振摇10min进行吸附，完成吸附过程后，用外加磁铁分离固液两相，并倾倒掉上清液；将沉淀物用2mL解析液乙腈-水-乙酸(体积比84：15：1) 涡旋振荡3min进行洗脱，重复洗脱2次，收集三次洗脱液于离心管中，在40℃下氮吹至干，残留物供柱前衍生化用(在盛有残留物的离心管中加入衍生试剂200μL正己烷和100μL三氟乙酸，振荡30s，40℃水浴条件下衍生15min)，衍生后的溶液经氮气(40℃，1mL/min) 吹干，残留物用200μL乙腈复溶，涡旋混匀，得到待测油样；
采用高效液相色谱仪进行待测油样分析，色谱条件为：色谱柱：Agilent XDB-C18(4.6mm ×150mm,3.5μm)；柱温40℃；流速0.6mL/min，进样体积10μL；荧光检测器，检测波长： AFB1、AFB2、AFG1、AFG2激发波长365nm，发射波长460nm；OTA和OTB激发波长327 nm，发射波长460nm；流动相：A为甲醇，B为0.05％甲酸，梯度洗脱见实施例1的表1。
(3)加标回收率的测试
准确称取玉米油样品5.026g、5.012g、5.021g分别放入50mL离心管中，分别添加1mL AFB1、AFB2、AFG1和AFG2溶液(质量浓度均为10.00、25.00、50.00μg/L)，1mL OTA和 OTB溶液(质量浓度均为20.00、50.00、100.00μg/L)；其余操作同步骤(2)。油样中6种毒素加标前后分离色谱图如图3。
实施例3
调整实施例2中的玉米油为花生油、大豆油、调和油、菜籽油，其他和实施例2保持一致，进行检测。
计算实施例2和3中各个样品中6种真菌毒素加标回收率及相对标准偏差，结果如表3。
表3 5种油样中6种真菌毒素加标回收率及相对标准偏差(n＝6)
Figure BDA0002914260560000081
计算实施例2和3步骤(2)中各个样品中6种真菌毒素的含量，具体如表4：
表4油样中真菌毒素AFB1、AFB2、AFG1、AFG2、OTA和OTB的含量(单位/μg/kg)
Figure BDA0002914260560000082
注：ND代表不含有此类真菌毒素。
实施例4 PDA@Fe3O4-MWCNTs磁性纳米材料用量的优化
调整实施例2步骤(2)中PDA@Fe3O4-MWCNTs磁性纳米材料的用量为10、20、30、 40、60、70、80，其他和实施例2保持一致，进行检测。其中加标回收率的测试条件为：玉米油样品5.012g放入50mL离心管中，分别添加1mL AFB1、AFB2、AFG1和AFG2溶液(质量浓度均为25.00μg/L)，1mL OTA和OTB溶液(质量浓度均为50.00μg/L)。
检测结果如表5。从表5可以看出：当PDA@Fe3O4-MWCNTs的量为50mg时，即可获得最高的提取效率。继续增加吸附剂的量，不会增大提取效率，在相同洗脱剂的条件下，反而会降低洗脱效率，因此，PDA@Fe3O4-MWCNTs的量最优为50mg。
表5不同用量的PDA@Fe3O4-MWCNTs磁性纳米材料的测试结果
Figure BDA0002914260560000091
实施例5吸附时间的优化
调整实施例2中吸附的时间为2、5、10、20、30min，其他和实施例2保持一致，进行检测；其中加标回收率的测试条件为：玉米油样品5.012g放入50mL离心管中，分别添加1 mLAFB1、AFB2、AFG1和AFG2溶液(质量浓度均为25.00μg/L)，1mL OTA和OTB溶液(质量浓度均为50.00μg/L)。
测试结果如表6，从表6可以看出：在2～10min内，吸附效率随混合液振荡时间延长而显著提高，之后基本趋于平稳。10min时，得到了较高的吸附效率，6种毒素的吸附率在70.6％～83.5％，继续增加萃取时间吸附率变化不明显，萃取基本达到平衡。这一结果表明，真菌毒素在PDA@Fe3O4-MWCNTs吸附材料上可快速达到平衡。
表6不同吸附时间的测试结果
Figure BDA0002914260560000101
实施例6解析液乙腈-水-乙酸(体积比84:15:1)用量的优化
调整实施例2中解析液乙腈-水-乙酸(体积比84:15:1)用量为1、3、4、8、10，其他和实施例2保持一致，进行检测；其中加标回收率的测试条件为：玉米油样品5.012g放入50mL离心管中，分别添加1mL AFB1、AFB2、AFG1和AFG2溶液(质量浓度均为25.00μg/L)，1mL OTA和OTB溶液(质量浓度均为50.00μg/L)。
测试结果如表7，从表7可以看出：在1～2mL内，洗脱效率随解析剂体积的增加而提高， 2mL时得到了较高的洗脱效率，6种毒素的洗脱率在73.2％～83.7％，当解吸剂的体积继续增大时，洗脱效率逐渐降低，因此，解析剂体积最优为2mL。
表7不同解析液用量的测试结果
Figure BDA0002914260560000102
实施例7预处理油样pH的优化
调整实施例2中预处理油样的pH为5、6、7、8、9，其他和实施例2保持一致，进行检测；其中加标回收率的测试条件为：玉米油样品5.012g放入50mL离心管中，分别添加1mLAFB1、AFB2、AFG1和AFG2溶液(质量浓度均为25.00μg/L)，1mL OTA和OTB溶液(质量浓度均为50.00μg/L)。
测试结果如表8，从表8可以看出：预处理油样pH在7时可得到较高的吸附效率(70％～90％)，此时，毒素吸附量较高。
表8不同pH的油样溶液的测试结果
Figure BDA0002914260560000111
对照例1
调整实施例2中PDA@Fe3O4-MWCNTs为实施例1步骤(1)制备得到的Fe3O4-MWCNTs，其他和实施例2保持一致，进行检测；其中加标回收率的测试条件为：玉米油样品5.012g放入50mL离心管中，分别添加1mL AFB1、AFB2、AFG1和AFG2溶液(质量浓度均为25.00 μg/L)，1mLOTA和OTB溶液(质量浓度均为50.00μg/L)。
测试结果如图4，从图4可以看出：PDA@Fe3O4-MWCNTs的吸附效率要明显好于Fe3O4-MWCNTs。
对照例2
调整实施例2中提取液乙腈-水-乙酸(体积比84：15：1)为MeOH、ACN、MeOH/ACN(50/50)、纯ACN其他和实施例2保持一致，进行检测；其中加标回收率的测试条件为：玉米油样品5.012g放入50mL离心管中，分别添加1mL AFB1、AFB2、AFG1和AFG2溶液(质量浓度均为25.00μg/L)，1mL OTA和OTB溶液(质量浓度均为50.00μg/L)。
测试结果如表9，从表9可以看出：提取液乙腈-水-乙酸(体积比84：15：1)的吸附效果最好。
表9不同提取液的测试结果
Figure BDA0002914260560000112
注：乙腈/pH 3.3表示在乙腈溶液中添加乙酸，使得溶液的pH为3.3；乙腈+甲醇/pH3.3表示将乙腈和乙醇按照1：1混合均匀，之后添加乙酸，使得溶液的pH为3.3；甲醇/pH 3.3表示在甲醇溶液中添加乙酸，使得溶液的pH为3.3；乙腈+水+乙酸/84+15+1表示三者之间的体积比为84：15：1。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (9)

1.一种基于PDA@Fe3O4-MWCNTs检测食用植物油中多种真菌毒素的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）在油样溶液中加入提取液进行提取；之后离心、取下层提取液加水混合均匀，离心，取上清液过膜，得到预处理的油样；其中所述的提取液为乙腈、水、乙酸的混合溶液，混合溶液中乙腈、水、乙酸的体积比为84：15：1；油样和提取液的比例以g/mL计为5-5.1：10；下层提取液和水的体积比为1：1；
（2）在PDA@Fe3O4-MWCNTs中加入步骤（1）得到的预处理的油样，混合均匀进行吸附10min；吸附完成后分离得到沉淀；之后在沉淀中加入解析剂进行洗脱，收集洗脱液，氮气吹干，残留物供柱前衍生化用，衍生后的溶液经氮气吹干得到残留物；之后残留物复溶，得到待测油样；其中所述的解析剂为乙腈、水、乙酸的混合溶液，混合溶液中乙腈、水、乙酸的体积比为84：15：1；预处理的油样的pH为7；预处理油样和解析剂的体积比为1：2；PDA@Fe3O4-MWCNTs和预处理油样的比例以mg/mL计为50：1；柱前衍生化为在盛有残留物的离心管中加入衍生试剂200 µL正己烷和100 µL三氟乙酸，振荡30 s，40 ℃水浴条件下衍生15 min；
（3）采用高效液相色谱仪对待测油样进行检测，得到多种毒素的吸收峰面积；之后根据标准曲线得到油样中多种毒素的含量；其中，采用高效液相色谱仪进行待测油样分析，色谱条件为：色谱柱：Agilent XDB-C18 4.6 mm×150 mm, 3.5 µm；柱温40 ℃；流速0.6 mL/min，进样体积10 µL；荧光检测器，检测波长：AFB1、AFB2、AFG1、AFG2激发波长365 nm，发射波长460 nm；OTA和OTB激发波长327 nm，发射波长460 nm；流动相：A为甲醇，B为0.05%甲酸，梯度洗脱如下：
Figure 733608DEST_PATH_IMAGE001
所述的多种真菌毒素为黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、赭曲霉毒素A、赭曲霉毒素B；
所述的PDA@Fe3O4-MWCNTs的制备方法，包括如下步骤：
将Fe3O4-MWCNTs和Tris-HCl缓冲溶液混合均匀，得到混合溶液；其中Fe3O4-MWCNTs和Tris-HCl缓冲溶液的比例以mg/mL计为3-5：1；在混合溶液中加入盐酸多巴胺进行反应；其中Fe3O4-MWCNTs和多巴胺的质量比为1-3：1；反应结束后将沉淀分离出来，洗涤、干燥、得到PDA@Fe3O4-MWCNTs。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中所述的油样溶液是油样和石油醚的混合溶液；其中油样和石油醚的比例以g/mL计为1：2。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中提取是采用超声提取，提取时间为10-30 min。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中提取之后的离心是室温下8000r/min离心10 min。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中加水混合均匀之后的离心为4℃，12000 r/min离心10 min。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中所述的上清液过膜采用的滤膜的规格为0.22 µm。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述的吸附是于振荡器中以1500 r/min振摇10 min。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述的分离是用外加磁铁分离固液两相。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中氮气吹干的条件为40 ℃，1 mL/min。
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