CN112920038A - 柳叶蜡梅中降倍半萜类化合物的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了柳叶蜡梅中降倍半萜类化合物的制备方法，具体涉及中药技术领域，包括通过经典的分离纯化手段，从蜡梅科蜡梅属植物柳叶蜡梅中提取和制备降倍半萜类成分，经体外实验证实，所述柳叶蜡梅中的降倍半萜类化合物具有抑制金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和绿脓杆菌的活性。本发明涉及的柳叶蜡梅中一系列降倍半萜类化合物的发现，包括新化合物的发现，这是柳叶蜡梅中化学成分的新发现；柳叶蜡梅降倍半萜类提取物及其单体化合物可单独应用或者合用，或与适宜的赋形剂结合，按照常规方法制成口服或非口服剂型作为抗菌剂使用。

Description

柳叶蜡梅中降倍半萜类化合物的制备方法
技术领域
本发明实施例涉及中药技术领域，具体涉及柳叶蜡梅中降倍半萜类化合物的制备方法。
背景技术
柳叶蜡梅是蜡梅科蜡梅属植物，半常绿灌木，主要分布于浙江的丽水(莲都区、云和、景宁、遂昌、松阳等县)、建德、开化等地，在安徽、江西等周边身份也有少量分布。本地民众用柳叶蜡梅的干燥茎叶(畲药名食凉茶)煎汤口服，用于治疗感冒、消化不良、腹部胀痛等症。柳叶蜡梅中含有萜类、甾体、黄酮类、香豆素类和生物碱类化合物，具有抗菌、抗氧化、抗肿瘤、抗酒精性肝损伤、抗炎、止泻、降脂等药理活性。
柳叶蜡梅中挥发油成分主要以单萜和倍半萜类成分为主，较多研究只是对柳叶蜡梅中总挥发油成分及其抗菌抗氧化活性进行报道，目前柳叶蜡梅中的单体倍半萜类成分的已报道的数量不多，单体降倍半萜只报道了6个，也未对其药理活性进行研究。
发明内容
为此，本发明的目的是提供柳叶蜡梅中降倍半萜类化合物的制备方法，具体地说，柳叶蜡梅中降倍半萜类新化合物的分离纯化及其体外具有抑菌的作用。
为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：柳叶蜡梅中降倍半萜类化合物的制备方法，具体制备步骤如下：
步骤一、浸提：将干燥柳叶蜡梅枝叶粉碎，然后分别加入体积比1：3的95％乙醇浸提三次，浓缩后得到枝叶浸提物；
步骤二、萃取：将枝叶浸提物使用热水溶解，其中枝叶浸提物水溶液采用乙酸乙酯萃取三次，合并浓缩获得乙酸乙酯层萃取物；
步骤三、分离纯化：将乙酸乙酯萃取物先后采用MCI(洗脱液为甲醇-水)、正相硅胶(洗脱液为石油醚-丙酮-异丙醇)、反相ODS(洗脱液为甲醇-水)、Sephadex LH-20(洗脱液为乙醇)分离材料进行柱色谱分离，并辅以HPLC方法进行纯化，获得单体化合物1～4，用MS、IR、NMR波谱分析技术鉴定其结构。
进一步地，柳叶蜡梅是蜡梅科蜡梅属植物，是畲药食凉茶的基源植物之一，具有治疗感冒、消化不良、腹部胀痛的功效。
本发明还包括柳叶蜡梅中降倍半萜类化合物，采用柳叶蜡梅中降倍半萜类化合物的制备方法制备得到。
进一步地，所述柳叶蜡梅中降倍半萜类化合物的结构式为：
Figure BDA0002924821640000021
进一步地，所述的柳叶蜡梅降倍半萜类单体化合物1～4，分别为以下四个化合物：化合物1为3-(2-羟乙基)-2，4，4-三甲基环己-2，5-二烯酮(3-(2-hydroxyethyl)-2,4,4-trimethylcyclohexa-2,5-dienone)，化合物2为robinlin，化合物3为(3R，6R，7E)-3-羟基-4，7-巨豆二烯-9-酮((3R,6R,7E)-3-hydroxy-4,7-megastigmadien-9-one)，化合物4为吐叶醇((+)-vomifoliol)。其中化合物1是新化合物，化合物2～4是已知化合物；
所述的新化合物1为白色无定形粉末。低分辨质谱ESI(+)MS给出分子离子峰m/z180.9[M+H]+，结合NMR数据推断其分子式为C11H16O2，不饱和度为4。IR(KBr)νmax：3412，2970，1656，1617，1040，834cm-1显示可能存在共轭羰基及羟基。1H-NMR(CDCl3，400MHz，表1)图谱包含了1对顺式烯烃氢δH6.75(1H,d,J＝9.9Hz)，6.19(1H，d，J＝9.9Hz)，1个连氧的亚甲基氢(δH3.74,2H,m)，1个亚甲基(δH2.68,2H,m)，和3个甲基氢δ1.25，1.25，1.92。13C-NMR(CDCl3，100MHz，表1)包含了11个C原子信号，其中有1个羰基(δC 186.4)，2个双键(δC157.4，157.2，133.3，125.9)，1个连氧碳(δC 61.0)以及5个其他碳信号(δC 40.6，34.2，25.9，25.9，11.9)。上述官能团占用3个不饱和度，剩余的1个不饱和度说明化合物1中还含有1个环。HSQC二维图谱(图3)分别给出季碳信号为δC 186.4，157.2，133.3，40.6。HMBC二维图谱(图4)中烯氢(δH6.75)与羰基碳(δC 186.4)的相关信号证明α、β不饱和羰基结构的存在。甲基氢(δH 1.92)和烯氢(δH6.19)与烯碳原子(δC 133.3)和羰基碳的HMBC相关信号，说明羰基两端分别与2个双键相连。2个烯质子(δH 6.75,6.19)、2个甲基(δH 1.25)和亚甲基(δH 2.68)分别与季碳(δC 40.6)存在HMBC相关信号，确定了化合物1的结构中母核为2，4，4-三甲基环己-2，5-二烯酮。通过1H-1H COSY二维图谱(图5)发现2个亚甲基相邻，其中1个与氧原子相连，结合HMBC谱中CH2-8(δH2.68)的氢与C-2(δC 133.3)和C-3(δC 157.2)相关信号，可以推断-CH2CH2OH侧链与C-3相连。故化合物推测为3-(2-羟乙基)-2，4，4-三甲基环己-2，5-二烯酮。
表1化合物1的1H-NMR(500MHz)和13C-NMR(125MHz)数据，溶剂CDCl3：
Figure BDA0002924821640000031
本发明中的化合物2～4为已知化合物。化合物2为无色油状物，ESI-MS m/z199[M+H]+。1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ：4.24(1H，dd，J＝14.1，6.2Hz)3.72(1H，m，H-9a)，3.65(1H，m，H-9b)，2.59(1H，m，H-8a)，2.48(1H，m，H-8b)，2.06(1H，dd，J＝14.1，6.2Hz，H-5a)，1.70(1H，t，J＝14.1Hz，H-5b)，1.20(3H，s，CH3-10)，1.15(3H，s，CH3-11)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ：200.1(C-1)，161.1(C-3)，129.4(C-2)，69.2(C-6)，60.7(C-9)，45.0(C-5)，37.3(C-4)，34.2(C-8)，29.3(C-11)，25.3(C-10)，12.0(C-7)。化合物3为无色油状物，ESI-MS m/z 209[M+H]+。1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ：6.53(1H，dd，J＝15.8，10.0Hz，H-7)，6.09(1H，d，J＝15.8Hz，H-8)，5.63(1H，brs，H-4)，4.27(1H，brs，H-3)，2.49(1H，d，J＝10.0Hz，H-6)，2.26(3H，s，CH3-10)，1.84(1H，dd，J＝13.4，5.8Hz，H-2a)，1.62(3H，s，CH3-13)，1.40(1H，dd，J＝13.4，6.4Hz，H-2b)，1.01(3H，s，CH3-11)，0.89(3H，s，CH3-12)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ：207(C-9)，147.4(C-7)，135.7(C-5)，133.9(C-8)，126.0(C-4)，65.7(C-3)，54.5(C-6)，44.1(C-2)，34.1(C-1)，29.5(C-11)，27.4(C-10)，24.9(C-12)，22.9(C-13)。化合物4为无色油状物，ESI-MS m/z 225[M+H]+。1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ：5.81(1H，s，H-4)，5.72(1H，dd，J＝16.0，5.0Hz，H-8)，5.67(1H，d，J＝16.0Hz，H-7)，4.29(1H，dd，J＝7.0，5.0Hz，H-9)，2.35(1H，d，J＝17.0Hz，H-2a)，2.12(1H，d，J＝17.0Hz，H-2b)，1.82(3H，d，J＝1.1Hz，CH3-13)，1.18(3H，d，J＝6.3Hz，CH3-10)，0.97(3H，s，CH3-11)，0.93(3H，s，CH3-12)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ：199.2(C-3)，164.8(C-5)，135.6(C-8)，128.9(C-7)，126.4(C-4)，78.9(C-6)，67.8(C-9)，49.6(C-2)，41.2(C-1)，24.0(C-10)，23.5(C-12)，22.9(C-11)，19.3(C-3)。
进一步地，所述柳叶蜡梅中的降倍半萜类化合物具有抑制金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和绿脓杆菌活性的作用，本发明中所述的畲药柳叶蜡梅中降倍半萜类化合物的抗菌活性，是通过现代药理实验得以证实。
本发明的抗菌活性是通过测定滤纸片扩散法测定各单体化合物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和绿脓杆菌的抑菌圈直径。以二甲基亚砜为空白对照组(CK)，以对羟基苯甲酸丙酯为阳性对照组(PP)。各化合物的浓度均为10mg/mL，PP浓度为1mg/mL。
本发明中化合物1～4的抗菌实验中抑菌直径如表2所示，
表2化合物1～4对3种菌的抑菌圈直径：
Figure BDA0002924821640000051
表2的实验数据表明，化合物1和2对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和绿脓杆菌，化合物3和4对金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌具有中等抑制作用，但是化合物3和4对枯草芽孢杆菌无明显抑制效果。
本发明实施例具有如下优点：
本发明通过经典的分离纯化手段，从蜡梅科蜡梅属植物柳叶蜡梅中提取和制备降倍半萜类成分，经体外实验证实，所述柳叶蜡梅中的降倍半萜类化合物具有抑制金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和绿脓杆菌的活性。本发明涉及的柳叶蜡梅中一系列降倍半萜类化合物的发现，包括新化合物的发现，这是柳叶蜡梅中化学成分的新发现；柳叶蜡梅降倍半萜类提取物及其单体化合物可单独应用或者合用，或与适宜的赋形剂结合，按照常规方法制成口服或非口服剂型作为抗菌剂使用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引申获得其它的实施附图。
本说明书所绘示的结构、比例、大小等，均仅用以配合说明书所揭示的内容，以供熟悉此技术的人士了解与阅读，并非用以限定本发明可实施的限定条件，故不具技术上的实质意义，任何结构的修饰、比例关系的改变或大小的调整，在不影响本发明所能产生的功效及所能达成的目的下，均应仍落在本发明所揭示的技术内容得能涵盖的范围内。
图1为本发明提供的化合物1的1H NMR图谱；
图2为本发明提供的化合物1的13C NMR图谱；
图3为本发明提供的化合物1的HSQC图谱；
图4为本发明提供的化合物1的HMBC图谱；
图5为本发明提供的化合物1的1H-1H COSY图谱。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的详细说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明中柳叶蜡梅中降倍半萜类化合物用于制备抗菌药物应用所作的任何变换或改进，均落入本发明的保护范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商，均为通过市场购买的常规产品。
实施例1
柳叶蜡梅药材的制备，以及降倍半萜类化合物1～4的提取分离，包括正相反相柱层析色谱、高压液相色谱纯化，其具体采用以下步骤：
1.柳叶蜡梅药材的制备：干燥柳叶蜡梅枝叶粉碎，加入体积比1：3的95％乙醇浸提三次，浓缩后得到枝叶浸提物。将枝叶的浸提物使用热水溶解，其中枝叶浸提物水溶液采用乙酸乙酯萃取三次，合并浓缩获得乙酸乙酯层萃取物。
2.柱色谱分离：将乙酸乙酯萃取物先后采用MCI，洗脱液为甲醇-水(50％～100％梯度洗脱)，共得到4个部位(50％～60％：部位I；70％～80％：部位II；80％～90％：部位III；100％：部位IV)；部位II采用正相硅胶进行柱色谱分离，洗脱液为石油醚-丙酮-异丙醇，得到9个分离部位(II-1～II-9)、部位II-3～II-6分别反相ODS(洗脱液为甲醇-水)、Sephadex LH-20(洗脱液为乙醇)分离材料进行柱色谱分离，并辅以HPLC方法进行纯化，获得单体化合物1～4。
实施例2
化合物1的结构鉴定
化合物1为新化合物，通过ESIMS、NMR等现代技术手段，鉴定出其结构。白色无定形粉末。低分辨质谱ESI(+)MS给出分子离子峰m/z 180.9[M+H]+，结合NMR数据推断其分子式为C11H16O2，不饱和度为4。IR(KBr)νmax：3412，2970，1656，1617，1040，834cm-1显示可能存在共轭羰基及羟基。1H-NMR(CDCl3，400MHz，表1)图谱包含了1对顺式烯烃氢δH6.75(1H,d,J＝9.9Hz)，6.19(1H，d，J＝9.9Hz)，1个连氧的亚甲基氢(δH3.74,2H,m)，1个亚甲基(δH2.68,2H,m)，和3个甲基氢δ1.25，1.25，1.92。13C-NMR(CDCl3，100MHz，表1)包含了11个C原子信号，其中有1个羰基(δC 186.4)，2个双键(δC 157.4，157.2，133.3，125.9)，1个连氧碳(δC 61.0)以及5个其他碳信号(δC 40.6，34.2，25.9，25.9，11.9)。上述官能团占用3个不饱和度，剩余的1个不饱和度说明化合物1中还含有1个环。HSQC二维图谱(图3)分别给出季碳信号为δC186.4，157.2，133.3，40.6。HMBC二维图谱(图4)中δH6.75烯氢与羰基碳(δC 186.4)的相关信号证明α、β不饱和羰基结构的存在。甲基氢(δH 1.92)和烯氢(δH6.18)与烯碳原子(δC133.3)和羰基碳的HMBC相关信号，说明羰基两端分别与2个双键相连。另外δC 40.6的季碳原子分别与2个烯氢、2个δH 1.25的甲基和1个δH 2.68的亚甲基存在HMBC相关信号，确定了化合物1的结构中母核为2，4，4-三甲基环己-2，5-二烯酮。通过1H-1H COSY二维图谱(图5)发现2个亚甲基相邻，其中1个与氧原子相连，结合HMBC谱中CH2-8(δH2.68)的氢与C-2(δC133.3)和C-3(δC 157.2)相关信号，可以推断-CH2CH2OH侧链与C-3相连。故化合物推测为3-(2-羟乙基)-2，4，4-三甲基环己-2，5-二烯酮。
实施例3
化合物2～4为已知化合物，化合物2为robinlin，化合物3为(3R，6R，7E)-3-羟基-4，7-巨豆二烯-9-酮((3R,6R,7E)-3-hydroxy-4,7-megastigmadien-9-one)，化合物4为吐叶醇((+)-vomifoliol)。化合物2为无色油状物，ESI-MS m/z 199[M+H]+。1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ：4.24(1H，dd，J＝14.1，6.2Hz)3.72(1H，m，H-9a)，3.65(1H，m，H-9b)，2.59(1H，m，H-8a)，2.48(1H，m，H-8b)，2.06(1H，dd，J＝14.1，6.2Hz，H-5a)，1.70(1H，t，J＝14.1Hz，H-5b)，1.20(3H，s，CH3-10)，1.15(3H，s，CH3-11)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ：200.1(C-1)，161.1(C-3)，129.4(C-2)，69.2(C-6)，60.7(C-9)，45.0(C-5)，37.3(C-4)，34.2(C-8)，29.3(C-11)，25.3(C-10)，12.0(C-7)。化合物3为无色油状物，ESI-MS m/z 209[M+H]+。1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ：6.53(1H，dd，J＝15.8，10.0Hz，H-7)，6.09(1H，d，J＝15.8Hz，H-8)，5.63(1H，brs，H-4)，4.27(1H，brs，H-3)，2.49(1H，d，J＝10.0Hz，H-6)，2.26(3H，s，CH3-10)，1.84(1H，dd，J＝13.4，5.8Hz，H-2a)，1.62(3H，s，CH3-13)，1.40(1H，dd，J＝13.4，6.4Hz，H-2b)，1.01(3H，s，CH3-11)，0.89(3H，s，CH3-12)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ：207(C-9)，147.4(C-7)，135.7(C-5)，133.9(C-8)，126.0(C-4)，65.7(C-3)，54.5(C-6)，44.1(C-2)，34.1(C-1)，29.5(C-11)，27.4(C-10)，24.9(C-12)，22.9(C-13)。化合物4为无色油状物，ESI-MS m/z 225[M+H]+。1H-NMR(CDCl3，400MHz)δ：5.81(1H，s，H-4)，5.72(1H，dd，J＝16.0，5.0Hz，H-8)，5.67(1H，d，J＝16.0Hz，H-7)，4.29(1H，dd，J＝7.0，5.0Hz，H-9)，2.35(1H，d，J＝17.0Hz，H-2a)，2.12(1H，d，J＝17.0Hz，H-2b)，1.82(3H，d，J＝1.1Hz，CH3-13)，1.18(3H，d，J＝6.3Hz，CH3-10)，0.97(3H，s，CH3-11)，0.93(3H，s，CH3-12)；13C-NMR(CDCl3，100MHz)δ：199.2(C-3)，164.8(C-5)，135.6(C-8)，128.9(C-7)，126.4(C-4)，78.9(C-6)，67.8(C-9)，49.6(C-2)，41.2(C-1)，24.0(C-10)，23.5(C-12)，22.9(C-11)，19.3(C-3)。
实施例4
柳叶蜡梅可以作为制备抗菌的药物，是基于柳叶蜡梅中提取分离的降倍半萜类化合物的抗菌实验得以证实。柳叶蜡梅中的化合物1～4对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和绿脓杆菌具有中等抑制活性。
化合物的药理活性是通过测定滤纸片扩散法测定各单体化合物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和绿脓杆菌的抑菌圈直径获得的。以二甲基亚砜为空白对照组(CK)，以对羟基苯甲酸丙酯为阳性对照组(PP)。各化合物的浓度均为10mg/mL，PP浓度为1mg/mL。
药理实验表明，化合物1和2对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和绿脓杆菌，化合物3和4对金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌具有中等抑制作用，但是化合物3和4对枯草芽孢杆菌无明显抑制效果
以上内容描述了本发明的基本原理、主要特征和优点。具体来说，本发明描述了柳叶蜡梅中降倍半萜类新化合物的发现及其抗菌活性，并阐述了柳叶蜡梅中降倍半萜类化合物提取分离的方法，以及化合物抑菌活性测试的方法。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中的描述知识说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明的范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (6)

1.柳叶蜡梅中降倍半萜类化合物的制备方法，其特征在于：具体制备步骤如下：
步骤一、浸提：将干燥柳叶蜡梅枝叶粉碎，然后分别加入体积比1：3的95％乙醇浸提三次，浓缩后得到枝叶浸提物；
步骤二、萃取：将枝叶浸提物使用热水溶解，其中枝叶浸提物水溶液采用乙酸乙酯萃取三次，合并浓缩获得乙酸乙酯层萃取物；
步骤三、分离纯化：将乙酸乙酯萃取物先后采用MCI、正相硅胶、反相ODS、Sephadex LH-20分离材料进行柱色谱分离，并辅以HPLC方法进行纯化，获得单体化合物，用波谱分析技术鉴定其结构。
2.根据权利要求1所述的柳叶蜡梅中降倍半萜类化合物的制备方法，其特征在于：柳叶蜡梅是蜡梅科蜡梅属植物，具有治疗感冒、消化不良、腹部胀痛的功效。
3.柳叶蜡梅中降倍半萜类化合物，其特征在于：所述柳叶蜡梅中降倍半萜类化合物采用如权利要求1所述的柳叶蜡梅中降倍半萜类化合物的制备方法制备得到。
4.根据权利要求3所述的柳叶蜡梅中降倍半萜类化合物，其特征在于：所述柳叶蜡梅中降倍半萜类化合物的结构式为：
Figure FDA0002924821630000011
5.根据权利要求4所述的柳叶蜡梅中降倍半萜类化合物，其特征在于：所述柳叶蜡梅中降倍半萜类化合物中的化合物1为新化合物，化合物2～4为已知化合物，化合物命名为：化合物1为3-(2-羟乙基)-2，4，4-三甲基环己-2，5-二烯酮(3-(2-hydroxyethyl)-2,4,4-trimethylcyclohexa-2,5-dienone)，化合物2为robinlin，化合物3为(3R，6R，7E)-3-羟基-4，7-巨豆二烯-9-酮((3R,6R,7E)-3-hydroxy-4,7-megastigmadien-9-one)，化合物4为吐叶醇((+)-vomifoliol)。
6.根据权利要求4所述的柳叶蜡梅中降倍半萜类化合物，其特征在于：所述柳叶蜡梅中的降倍半萜类化合物具有抑制金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和绿脓杆菌活性的作用。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105920059A (zh) * 2016-06-06 2016-09-07 上海神因生物科技有限公司 一种蜡梅提取物、其制备方法及应用
US20170295783A1 (en) * 2014-11-03 2017-10-19 Stephen F. Austin State University Compositions and methods to selectively control species
CN111269230A (zh) * 2020-03-12 2020-06-12 江西中医药大学 蜡梅碱-2，3二酮及其制备方法和医药用途

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20170295783A1 (en) * 2014-11-03 2017-10-19 Stephen F. Austin State University Compositions and methods to selectively control species
CN105920059A (zh) * 2016-06-06 2016-09-07 上海神因生物科技有限公司 一种蜡梅提取物、其制备方法及应用
CN111269230A (zh) * 2020-03-12 2020-06-12 江西中医药大学 蜡梅碱-2，3二酮及其制备方法和医药用途

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KRAMMER, GERHARD ET AL: "Glycosidically bound aroma compounds in the fruits of Prunus species: apricot (P. armeniaca, L.), peach (P. persica, L.), yellow plum (P. domestica, L. ssp. syriaca)", 《JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY》 *
LI, MING-XIANG ET AL: "Anti-aging potential, anti-tyrosinase and antibacterial activities of extracts and compounds isolated from Rosa chinensis cv. "JinBian"", 《INDUSTRIAL CROPS & PRODUCTS》 *
唐贵华等: "异叶三宝木叶的化学成分研究(英文)", 《天然产物研究与开发》 *
孙启: "亮叶蜡梅叶活性成分鉴定及抗炎功能研究", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库(硕士)工程科技Ⅰ辑》 *
徐金标等: "蜡梅科植物化学成分及其药理活性研究进展", 《中国中药杂志》 *
章瑶等: "柳叶蜡梅叶氯仿部位化学成分的研究", 《中国中药杂志》 *

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