CN112891238A - 一种聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶的制备方法及应用 - Google Patents

一种聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶的制备方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种聚氨基酸‑根皮素衍生物缓释凝胶的制备方法及应用；所述的聚氨基酸‑根皮素衍生物由聚氨基酸、连接臂和根皮素类化合物合成，提高了其生物利用率和生物活性；当聚氨基酸‑根皮素衍生物缓释凝胶形成凝胶后，由于分子间的范德华力具有助溶的作用，提高了活性物质的生物利用度；本发明的凝胶制剂在室温条件下，pH<3.0，16h内在环境中少量分解，5.5＜pH＜7.5时，在8h内缓慢分解完毕，释放其包裹的物质；本发明的聚氨基酸‑根皮素衍生物缓释凝胶可以显著的提高美白的效果，且具有长效美白的功能，明显提高了活性物质的经济价值。

Description

一种聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶的制备方法及应用
技术领域
本发明属于材料领域，具体涉及一种聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶的制备方法及应用。
技术背景
凝胶具有三维网状结构，可吸收大量的水分或体内组织液，因其特殊的性质，水凝胶已被广泛应用于生物医学和化妆品领域。Click反应是一类常用的制备原位凝胶的化学交联方法，但其所涉及的化学改性通常比较复杂，对聚合物的高分子骨架影响比较大。
人体表皮的基底层细胞中含4～5％的色素细胞。人类皮肤的颜色不是取决于黑色素细胞数量，而是取决于黑色素体的数量、大小、分布及黑素化程度。因此，可以通过影响黑色素体的形成、成熟及转移来达到美白的效果。
根皮素(Phloretin)学名为2,4,6-三羟基-3-(4-羟基苯基)苯丙酮，是具有二氢查尔酮类结构的黄酮类化合物。大量研究发现根皮素具有明显生物活性，如：抗氧化、抑菌、抑制酪氨酸酶活性、抑制心血管疾病等生理功效；根皮素具有强大的抗氧化活性，对DPPH、ABTS自由基清除能力及抑制脂质过氧化强于Vc；根皮素还是出色的酪氨酸酶抑制剂，因此，根皮素的美白效果在化妆品中高效的应用有现实的意义。
将根皮素或糖基化根皮素与氨基酸制成聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶用于包裹根皮素或糖基化根皮素等，长效发挥根皮素或糖基化根皮素在清除自由基和抗氧化等方面的功能，及以在美白生理功能，具有现实意义。
发明内容
为了解决以上的不足，本发明是通过以下方案实现的。本发明的一个目的在于提供一种聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶的制备方法。
本发明的另一个目的在于提供一种聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶在化妆品中的应用。
本发明所述的聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶由聚氨基酸、连接臂和根皮素类化合物合成。
本发明所述的聚氨基酸-根皮素衍生物的结构式由P-L-K组成。
本发明所述的P为聚氨基酸，其结构式如式(Ⅰ)：
Figure BDA0002919362590000021
其中：m、n、i、j为2～100。
优选为m、n、i、j为10～20。
本发明所述K为根皮素类化合物，其结构式如式(Ⅱ)所示：
Figure BDA0002919362590000022
其中x为1～10；y为1～10；R1，R2为烷基或H；R3为Glu，Rha；
所述根皮素类化合物的结构式式(Ⅱ)优选为：其中x为3～5；y为3～5；R1，R2为甲基；R3为Rha。
本发明所述的根皮素类化合物的方程式的通式为：
Figure BDA0002919362590000023
本发明所述的聚氨基酸-根皮素衍生物的制备步骤为：
1)将0.8～3.0g的(Ⅱ-1)与1.9～12.0g硫酸二甲酯溶解在50～100mL正丁醇溶液中，在55～80℃条件下，磁力搅拌，反应1.0～8.0h，得到黄色固体(Ⅱ-2)，产率80.0～99.6％。
2)将连有冷凝管的二颈瓶置于恒温磁力加热搅拌器的水浴中，依次加入1.5～3.0g V/Al2O3催化剂、4.30～6.20g盐酸羟铵、30～55mL冰醋酸、10～20mL DMSO和磁力搅拌子，在18～35℃水浴中恒温搅拌20min，加入1.5～4.5g的(Ⅱ-2)，开冷凝水，水浴温度逐渐升温至80～85℃，恒温回流、搅拌反应3～6h后，停止反应，将反应后混合物冷却至室温，抽滤出催化剂粉末，向滤液中加入一定体积的10～15％的KOH水溶液至pH＝6～7，有黄色沉淀，抽滤得到固体(Ⅱ-3)。
3)将0.8～2.5g(Ⅱ-3)与1～5倍当量于(Ⅱ-3)的长链脂肪酸在恒温油浴锅中进行，反应温度为60～90℃，冷凝回流，加入过量的哌啶为催化剂。随着反应的进行，体系的颜色由透明渐渐变成浑乳白色并伴有固体生成，反应结束后加入稀盐酸。可用乙酸乙酯初步洗涤，固体析出变多，得到糖基化根皮素(Ⅱ)。
4)将0.8～2.5g(Ⅱ)、2.0～8.6g EDC和3.5～20.0g NHS混合于圆底烧瓶，加入20～80g DMF，待所有物质溶解后，室温避光下搅拌10～26h，得到活化的(Ⅱ)反应液。
5)以同样的方式活化(Ⅰ)。
6)将活化的(Ⅰ)和(Ⅱ)反应液按每4～8秒1滴的速度滴入磷酸缓冲溶液中，滴加完后，需控制(Ⅰ)和(Ⅱ)比例为：3：10～60，然后室温避光搅拌30min，接着3～5℃下避光搅拌直到反应完全，得到偶联的(P-L-K)反应液。
7)将偶联的(P-L-K)反应液，经冷冻干燥得白色固体，即为聚氨基酸-根皮素衍生物(P-L-K)。
本发明所述L为长链脂肪酸，其结构式如(Ⅳ)所示：
Figure BDA0002919362590000031
其中x为1、2、3、4。
本发明所述的聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶的制备步骤为：
1)精确称取1.2～5.2g的聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶溶于150～800mL的纯水中，在磁力加热搅拌器上搅拌混匀，配制成聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶。
2)精确称取1.0～8.0倍当量与聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶的根皮素类化合物和/或熊果酸溶解在步骤1)的溶液中，形成均相溶液。
3)将步骤2)制备的均相溶液，用正压过滤器经0.80μm、0.45μm、0.2μm微孔滤膜三级过滤，除去不溶的颗粒。
4)利用高压微胶囊成型装置，将过滤的根皮素衍生物滴入1～10mL1.0～1.5％的K+溶液中，发生凝胶化反应，制备出具有透明的
Figure BDA0002919362590000041
凝胶。
本发明所述K+溶液为KCl，K2SO4，KNO3，K3PO4。
本发明所述的聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶用于增加活性物质根皮素类化合物和熊果苷的溶解度及生物利用度。
本发明所述的聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶在室温、pH<3.0的条件下稳定，pH>5.5时缓慢分解。
本发明所述的聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶在K+溶液中缓慢形成凝胶。
本发明所述的聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶在化妆品中的应用。
本发明所述的聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶在美白面膜，美白面霜及美白爽肤水中的应用。
本发明所述的聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶用于抑制酪氨酸酶的活性。
本发明所述的根皮素类化合物为根皮素、烷基化根皮素和糖基化根皮素以及可接受的盐与衍生物。
有益效果：
本发明的凝胶制剂在空气中，室温条件下，pH<3.0，16h内在环境中少量分解，5.5＜pH＜7.5时，在8h内缓慢分解完毕，释放包裹的物质；本发明的聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶显著提高了活性物质在化妆品中溶解度和生物利用度。
本发明的聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶中聚氨基酸的氨基基团上连接有多个根皮素，增加了根皮素在聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶中的含量，提高了其生物利用率和生物活性。当聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶形成凝胶后，由于分子间的范德华力的作用，对熊果酸，根皮素等天然的美白的成分具有助溶的作用，大大提高了生物活性物质的生物利用度。
说明书附图
图1聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶对B16细胞内酪氨酸酶活性的抑制图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面结合具体实施方式，对本发明进一步详细说明。应该理解，本发明以下描述只是示例性的，而并非要限制本发明的范围。此外，在以下说明中，省略了对公知结构和技术的描述，以避免不必要地混淆本发明的概念。为提高说明效率，本发明实施例选用结构式(Ⅱ)中：其中n为3～5；m＝3～5；R1，R2为甲基；R3为Rha。
实施例1聚氨基酸-根皮素衍生物的制备
1)将1.5g的(Ⅱ-1)与5.0g硫酸二甲酯溶解在60mL正丁醇溶液中，在75℃条件下，磁力搅拌，反应3.0h，得到黄色固体(Ⅱ-2)，产率97.3％。
2)将连有冷凝管的二颈瓶置于恒温磁力加热搅拌器的水浴中，依次加入1.5g V/Al2O3催化剂、4.30g盐酸羟铵、30mL冰醋酸、12mL DMSO和磁力搅拌子，在18～35℃水浴中恒温搅拌20min，加入2.0g的(Ⅱ-2)，开冷凝水，水浴温度逐渐升温至80～85℃，恒温回流、搅拌反应3～6h后，停止反应，将反应后混合物冷却至室温，抽滤出催化剂粉末，向滤液中加入一定体积的10～15％的KOH水溶液至pH＝6～7，有黄色沉淀，抽滤得到固体(Ⅱ-3)。
3)将1.5g(Ⅱ-3)与2～4倍当量于(Ⅱ-3)的长链脂肪酸在恒温油浴锅中进行，反应温度为80℃，冷凝回流，加入过量的哌啶为催化剂。随着反应的进行，体系的颜色由透明渐渐变成浑乳白色并伴有固体生成，反应结束后加入稀盐酸。可用乙酸乙酯初步洗涤，固体析出变多，得到糖基化根皮素(Ⅱ)。
4)将2.0g(Ⅱ)、5.0g EDC和12.0g NHS混合于圆底烧瓶，加入20g DMF，待所有物质溶解后，室温避光下搅拌10～26h，得到活化的(Ⅱ)反应液。
5)以同样的方式活化(Ⅰ)。
6)将活化的(Ⅰ)和(Ⅱ)反应液按每5秒1滴的速度滴入磷酸缓冲溶液中，滴加完后，需控制(Ⅰ)和(Ⅱ)比例为：3：35，然后室温避光搅拌30min，接着3～5℃下避光搅拌直到反应完全，得到偶联的(P-L-K)反应液。
7)将偶联的(P-L-K)反应液，经冷冻干燥得白色固体，即为聚氨基酸-根皮素衍生物(P-L-K)。
实施例2聚氨基酸-根皮素衍生物的制备
1)将2.0g的(Ⅱ-1)与8.0g硫酸二甲酯溶解在80mL正丁醇溶液中，在75℃条件下，磁力搅拌，反应4.0h，得到黄色固体(Ⅱ-2)，产率97.2％。
2)将连有冷凝管的二颈瓶置于恒温磁力加热搅拌器的水浴中，依次加入3.0g V/Al2O3催化剂、6.0g盐酸羟铵、50mL冰醋酸、15mL DMSO和磁力搅拌子，在30℃水浴中恒温搅拌20min，加入3.0g的(Ⅱ-2)，开冷凝水，水浴温度逐渐升温至80～85℃，恒温回流、搅拌反应3～6h后，停止反应，将反应后混合物冷却至室温，抽滤出催化剂粉末，向滤液中加入一定体积的10～15％的KOH水溶液至pH＝6～7，有黄色沉淀，抽滤得到固体(Ⅱ-3)。
3)将2.0g(Ⅱ-3)与4倍当量于(Ⅱ-3)的长链脂肪酸在恒温油浴锅中进行，反应温度为85～90℃，冷凝回流，加入过量的哌啶为催化剂。随着反应的进行，体系的颜色由透明渐渐变成浑乳白色并伴有固体生成，反应结束后加入稀盐酸。可用乙酸乙酯初步洗涤，固体析出变多，得到糖基化根皮素(Ⅱ)。
4)将2.5g(Ⅱ)、8.0g EDC和20.0g NHS混合于圆底烧瓶，加入70g DMF，待所有物质溶解后，室温避光下搅拌10～26h，得到活化的(Ⅱ)反应液。
5)以同样的方式活化(Ⅰ)。
6)将活化的(Ⅰ)和(Ⅱ)反应液按每6秒1滴的速度滴入磷酸缓冲溶液中，滴加完后，需控制(Ⅰ)和(Ⅱ)比例为：3：45，然后室温避光搅拌30min，接着3～5℃下避光搅拌直到反应完全，得到偶联的(P-L-K)反应液。
7)将偶联的(P-L-K)反应液，经冷冻干燥得白色固体，即为聚氨基酸-根皮素衍生物(P-L-K)。
实施例3聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶的制备
1)精确称取3.0g的聚氨基酸-根皮素衍生物溶于500mL的纯水中，在磁力加热搅拌器上搅拌混匀，配制成聚氨基酸-根皮素衍生物溶液。
2)精确称取4.0倍当量于聚氨基酸-根皮素衍生物的根皮素类化合物和/或熊果酸溶解在步骤1)的溶液中，形成均相溶液。
3)将步骤2)制备的均相溶液，用正压过滤器经0.80μm、0.45μm、0.2μm微孔滤膜三级过滤，除去不溶的颗粒。
4)利用高压微胶囊成型装置，将过滤的根皮素衍生物滴入5mL 1.0～1.5％的K+溶液中，发生凝胶化反应，制备出具有透明的聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶。
5)聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶经冷冻干燥得白色固体。
本发明所述K+溶液为KCl，K2SO4，KNO3，K3PO4。
实施例4聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶在不同溶液中的溶解缓释实验
1分析方法学的建立
检测波长的确定：分别称实施例3制备的聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶和辅料适量，用甲醇配制成适宜浓度的溶液，并以甲醇为空白对照，于200～700nm范围内用紫外光谱仪进行扫描。结果表明在290nm处有聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶的最大吸收峰；而辅料在此处对聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶的测定均无干扰。因此，选定290nm作为测定波长。标准曲线：精密称聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶适量，用甲醇配制成系列浓度的溶液，于290nm处测定吸收度，以浓度(C)对吸收度(A)进行线性回归。
2聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶溶出度的测定方法
称取含有聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶100mg的固体颗粒。样品平行测定3份，按中国药典2015版第二部的方法进行。溶出介质为900mL的蒸馏水，温度为37±0.5℃，转速为100±3rpm。分别在3、6、9、12、15min取样5mL并补入相同体积的溶出介质，样品经0.8μm微孔滤膜过滤。取续滤液稀释后于290nm处测定吸收度，计算化聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶的溶出度。
3测定结果
标准曲线方程C＝15.3492A+0.3015,R2＝0.9906，线性范围：10.523～92.357μg/mL。测定聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶在体外的溶出情况，结果表明，聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶在体外不同的环境中的溶解度符合本发明的预期,结果见表1。
表1聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶的溶出速率
Figure BDA0002919362590000071
从表1可以看出，在室外条件下，在本发明的聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶在pH＜3.0的条件下，16h内溶出速率为0.92％；在3.0≤pH＜5.5的条件下，16h内溶出速率为1.96％；在5.5＜pH＜7.5的条件下，8h内溶出速率为99.81％；说明本发明的聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶在pH＜3.0较稳定，3.0≤pH≤5.5的条件下溶出速率增加；在5.5＜pH＜7.5的条件下溶出速率显著增加，在0～8h几乎完全溶解，可以应用在持久缓释效果，在化妆品用具有长效的效果。
实施例5一种美白抗衰老洁面乳1
聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶4％月桂酸4％、甘油8％、氢氧化钾2％、角鲨烷4％、月桂酰谷氨酸钠2％、单硬脂酸甘油酯4％、聚乙二醇4％、杜仲提取物2％、辣木叶提取物4％、麦门冬提取物4％、银杏叶提取物4％、EDTA二钠1％、羟苯甲酯0.2％、香精0.08％，余量为水；
制备方法和配方参照专利授权号CN105287290B，本实施例增加了聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶4％，分别减少了杜仲提取物1％、辣木叶提取物1％、麦门冬提取物1％、银杏叶提取物1％。
实施例6一种美白抗衰老洁面乳2
聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶4％月桂酸4％、甘油8％、氢氧化钾2％、角鲨烷4％、月桂酰谷氨酸钠2％、单硬脂酸甘油酯4％、聚乙二醇4％、杜仲提取物2％、辣木叶提取物3％、麦门冬提取物3％、银杏叶提取物3％、根皮素2％、熊果酸2％、EDTA二钠1％、羟苯甲酯0.2％、香精0.08％，余量为水；
制备方法和配方参照专利授权号CN105287290B，本实施例增加了聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶4％、根皮素2％和熊果酸2％，分别减少了杜仲提取物1％、辣木叶提取物2％、麦门冬提取物2％、银杏叶提取物2％。
聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶包裹根皮素和熊果酸的步骤与实施例3相同。
实施例7聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶制备的化妆品的美白淡斑效果进行临床评价
选择60位年龄在23～50岁健康女性，随机分为3组，测定其脸颊的色素含量及皮肤颜色，然后发放受试化妆品。受试对象连续使用美白洁面乳样品。测试者左、右脸颊部，作对照实验，每天早晚各使用1次，洁面后使用。在实验期间停用其他美白化妆品。连续使用7d、14d、21d、28d后，再测定各功效指标。同时询问志愿者使用受试样品后自我感觉及有无过敏现象等，记录自身前后对比；经过询问统计，测试者均有良好的耐受性，无不良反应发生。
在使用化妆品前1d和使用后7d、14d、21d、28d利用Lab色度系统光谱光度计测量皮肤颜色的变化，连续测试3次，取平均值。同时使用MEXAMETER MX1 8皮肤色素仪测皮肤黑色素含量，连续测试3次，取平均值。数据处理采用sigmastat统计软件进行配对检验，以P<0.05具有显著意义。数据见表2，实施例组6和7用样品后7d、14d、21d、28d的黑色素含量与使用前相比均降低(P<0.05)，其中参照专利授权号CN105287290B制备的美白面霜的黑色素含量降低较少，空白组无黑色素含量降低的表现。因此，聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶能显著降低黑色素的作用。空白组不使用任何化妆品。
表2美白洁面乳使用期间受试部位黑色素变化情况
Figure BDA0002919362590000091
试验前后受试部位皮肤色度L*值的变化情况：皮肤色度L*值越大，表示皮肤颜色越浅。产品使用后第7d，皮肤色度L*值就有增加的趋势，自第21d开始，就明显大于试验前水平(P<0.05)(数据见表3)，L*值随着产品使用时间的延长呈现逐渐增加的趋势。
表3美白洁面乳使用期间受试部位L*值的变化情况
Figure BDA0002919362590000092
由表2和表3，可知本发明的聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶的美白功效显著，具有提高活性物质的生物活性的功效，且在提亮肤色和淡化色斑的上具有显著的效果。
实施例8聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶对B16细胞内酪氨酸酶活性的测定
取对数生长期B16细胞，用0.05％胰蛋白酶+0.53mmol/L EDTA溶液消化后，以新鲜培养液配成密度为6×103个/mL的细胞悬液，接种于96孔细胞培养板，每孔180μL。细胞板置于CO2培养箱中孵育过夜后，每孔细胞加入终浓度为1mmol/L的茶碱。每个样品设置4个样品浓度梯度。在96孔细胞培养板中，加入样品稀释液，并以PBS补充至20μL，分别使细胞培养板中的聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶，糖基化根皮素，Vc，根皮素的终质量浓度分别为1μg/L，1mg/L，10mg/L，100mg/L。空白对照孔加入20μL PBS，混匀。细胞板置于CO2培养箱中孵育48h后，吸去培养液，加入100μL体积分数为1％的Triton X-100溶液，-80℃下放置60min。取出细胞板恢复至室温后，取10μL培养液用BCA法测定蛋白含量。另取80μL培养液，加入0.1％L-Dopa溶液50μL，37℃下孵育2h。用酶标仪于490nm处测定吸光度并计算酪氨酸酶活性抑制率。
当各种样品的浓度为100mg/L时，酪氨酸酶活性抑制率结果如附图1所示：聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶(a)对于酪氨酸酶活性抑制率达到约58.37％，而聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶包裹根皮素(b)达到97.33％，根皮素只有48.35％，Vc只有44.2％，充分说明聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶可以穿过细胞膜，将活性物质-根皮素运输到细胞内，对化妆品中的活性物质起到了协同的作用，利于发挥生物活性功能。

Claims (8)

1.一种聚氨基酸-根皮素衍生物的制备方法，其特征在于，所述的聚氨基酸-根皮素衍生物由聚氨基酸、连接臂和根皮素类化合物合成；
所述的聚氨基酸-根皮素衍生物的结构式由P-L-K组成；
所述的P为聚氨基酸，其结构式如式(Ⅰ)：
Figure FDA0002919362580000011
其中：m、n、i、j为2～100；
所述K为根皮素类化合物，其结构式如式(Ⅱ)所示：
Figure FDA0002919362580000012
其中x为1～10；y为1～10；R1，R2为烷基或H；R3为Glu，Rha；
所述的根皮素类化合物的方程式的通式为：
Figure FDA0002919362580000013
所述的聚氨基酸-根皮素衍生物的制备步骤为：
1)将0.8～3.0g的(Ⅱ-1)与1.9～12.0g硫酸二甲酯溶解在50～100mL正丁醇溶液中，在55～80℃条件下，磁力搅拌，反应1.0～8.0h，得到黄色固体(Ⅱ-2)，产率80.0～99.6％；
2)将连有冷凝管的二颈瓶置于恒温磁力加热搅拌器的水浴中，依次加入1.5～3.0g V/Al2O3催化剂、4.30～6.20g盐酸羟铵、30～55mL冰醋酸、10～20mL DMSO和磁力搅拌子，在18～35℃水浴中恒温搅拌20min，加入1.5～4.5g的(Ⅱ-2)，开冷凝水，水浴温度逐渐升温至80～85℃，恒温回流、搅拌反应3～6h后，停止反应，将反应后混合物冷却至室温，抽滤出催化剂粉末，向滤液中加入一定体积的10～15％的KOH水溶液至pH＝6～7，有黄色沉淀，抽滤得到固体(Ⅱ-3)；
3)将0.8～2.5g(Ⅱ-3)与1～5倍当量于(Ⅱ-3)的长链脂肪酸在恒温油浴锅中进行，反应温度为60～90℃，冷凝回流，加入过量的哌啶为催化剂；随着反应的进行，体系的颜色由透明渐渐变成浑乳白色并伴有固体生成，反应结束后加入稀盐酸；可用乙酸乙酯初步洗涤，固体析出变多，得到糖基化根皮素(Ⅱ)；
4)将0.8～2.5g(Ⅱ)、2.0～8.6g EDC和3.5～20.0g NHS混合于圆底烧瓶，加入20～80gDMF，待所有物质溶解后，室温避光下搅拌10～26h，得到活化的(Ⅱ)反应液；
5)以同样的方式活化(Ⅰ)；
6)将活化的(Ⅰ)和(Ⅱ)反应液按每4～8秒1滴的速度滴入磷酸缓冲溶液中，滴加完后，需控制(Ⅰ)和(Ⅱ)比例为：3：10～60，然后室温避光搅拌30min，接着3～5℃下避光搅拌直到反应完全，得到偶联的(P-L-K)反应液；
7)将偶联的(P-L-K)反应液，经冷冻干燥得白色固体，即为聚氨基酸-根皮素衍生物(P-L-K)；
所述L为长链脂肪酸，其结构式如(Ⅳ)所示：
Figure FDA0002919362580000021
其中x为1、2、3、4。
2.根据权利要求1所述的一种聚氨基酸-根皮素衍生物的制备方法，其特征在于，所述的根皮素类化合物的结构式式(Ⅱ)中：其中x为3～5；y为3～5；R1，R2为甲基；R3为Rha。
3.一种聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶的制备方法，其特征在于，所述的聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶的制备步骤为：
l)精确称取1.2～5.2g的聚氨基酸-根皮素衍生物溶于150～800mL的纯水中，在磁力加热搅拌器上搅拌混匀，配制成聚氨基酸-根皮素衍生物；
2)精确称取1.0～8.0倍当量与聚氨基酸-根皮素衍生物的根皮素类化合物和/或熊果酸溶解在步骤l)的溶液中，形成均相溶液；
3)将步骤2)制备的均相溶液，用正压过滤器经0.80μm、0.45μm、0.2μm微孔滤膜三级过滤，除去不溶的颗粒；
4)利用高压微胶囊成型装置，将过滤的根皮素衍生物滴入1～10mL 1.0～1.5％的K+溶液中，发生凝胶化反应，制备出具有透明的凝胶；
所述的K+溶液为KCl，K2SO4，KNO3，K3PO4。
4.根据权利要求3所述的一种聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶的制备方法，其特征在于：所述的聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶在K+溶液中缓慢形成凝胶。
5.一种聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶的应用，其特征在于，所述的聚氨基酸-根皮素衍生物用于增加根皮素类化合物或/和熊果苷类化合物的溶解度及生物利用度。
6.根据权利要求5所述的一种聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶的应用，其特征在于：所述的聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶在化妆品中的应用。
7.根据权利要求6所述的聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶的应用，其特征在于，所述的聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶在美白面膜，美白面霜及美白爽肤水中的应用。
8.根据权利要求6或7所述的聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶的应用，其特征在于，所述的聚氨基酸-根皮素衍生物缓释凝胶用于抑制酪氨酸酶的活性。
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