CN112870253A - 一种改善肠道微生态失调的葛花提取物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种改善肠道微生态失调的葛花提取物。具体地，本发明提供一种葛花提取物的用途，用于制备组合物，所述的组合物用于改善肠道微生态失调。本发明所述的葛花提取物能够用于预防和治疗口服抗生素导致的肠道菌群失调。

Description

一种改善肠道微生态失调的葛花提取物
技术领域
本发明涉及食品和药物领域，具体涉及一种改善肠道微生态失调的葛花提取物。
背景技术
肠道存在许多有益菌，抗生素在发挥治疗的过程中对肠道微生物也有广泛的杀灭或抑制作用，造成肠道菌群失调，肠道菌群失调是口服抗生素常出现一个严重的副作用，肠道菌群失调会导致多种疾病，如腹泻、腹疼、腹胀、消化不良、炎性肠病、抑郁等，给病人带来痛苦。尤其是口服抗生素对一些有益肠道菌如双歧杆菌和乳酸杆菌的杀灭或抑制作用，严重降低双歧杆菌和乳酸杆菌等有益菌在肠道中的有益生理作用如助消化等功能，从而对健康造成不利影响。
因此，本领域需要开发一种改善口服抗生素导致的肠道菌群失调的药物，从而预防和治疗口服抗生素导致的肠道菌群失调副作用。
发明内容
本发明的目在于提供一种葛花提取物，所述的葛花提取物能够有效预防和治疗口服抗生素导致的肠道菌群失调。
本发明第一个方面提供一种葛花提取物的用途，用于制备组合物，所述的组合物用于改善肠道微生态失调；
所述的葛花提取物通过以下方法制备：
(1)用醇水溶液对葛花进行提取，得到醇水提取液；
(2)所述的醇水提取液经浓缩后，加入有机溶剂进行萃取，将有机相减压蒸馏除去溶剂，得到葛花提取物，其中，所述的有机溶剂包括石油醚、氯仿、乙酸乙酯中的一种或多种。
优选地，所述的葛花提取物包括干浸膏。
优选地，所述的葛花提取物为干提取物。
优选地，所述的醇水溶液中，所述的醇为C1-C4低级醇。
优选地，所述的C1-C4低级醇包括甲醇、乙醇、丙醇和丁醇中的一种或多种。
优选地，所述的醇水溶液中，醇的体积分数为40-70％，较佳地50-70％，更佳地55-65％，更佳地60％。。
优选地，所述的醇水溶液为乙醇水溶液。
优选地，所述的醇水溶液为乙醇水溶液，在所述的乙醇水溶液，乙醇的体积分数为40-70％，较佳地50-70％，更佳地55-65％，更佳地60％。
优选地，所述的步骤(2)中，所述的有机溶剂包括石油醚。
优选地，所述的葛花提取物通过以下方法制备而得：
向葛花中加入6-10倍量的55-65％(v/v)乙醇水溶液，加热回流提取4-8h后，过滤，滤液经减压浓缩，得到浓缩液，向所述浓缩液中加入石油醚萃取，将得到的石油醚有机相层减压蒸馏除去溶剂，干燥，得到葛花提取物。
优选地，所述的55-65％(v/v)乙醇水溶液为60％(v/v)乙醇水溶液。
优选地，所述的葛花提取物通过以下方法制备而得：
(a)称取45-55g葛花，粉碎后加入350-450ml 55-65％(v/v)乙醇水溶液后，加热回流提取4-8h后，过滤，滤液经减压浓缩到80-120ml，得到浓缩液；
(b)每次用280-320mL石油醚对步骤(a)得到浓缩液进行萃取，总共萃取两次，合并两次分离得到的石油醚层(即石油醚萃取液)，减压蒸馏除去石油醚，干燥，得到葛花提取物。
优选地，所述的葛花提取物通过以下方法制备而得：
(a)称取50g葛花，粉碎后加入400ml 60％(v/v)乙醇水溶液后，加热回流提取6h后，过滤，滤液经减压浓缩到100ml，得到浓缩液；
(b)每次用300mL石油醚对步骤(a)得到浓缩液进行萃取，总共萃取两次，合并两次分离得到的石油醚层(即石油醚萃取液)，减压蒸馏除去石油醚，干燥，得到葛花提取物。
优选地，所述的改善肠道微生态失调包括改善肠道菌群失调。
优选地，所述的菌群选自下组：双歧杆菌、乳酸杆菌，或其组合。
优选地，所述的肠道微生态失调包括口服抗生素导致的肠道微生态失调。
优选地，所述的肠道微生态失调包括口服抗生素导致的肠道菌群失调。
优选地，所述的肠道菌群失调包括口服抗生素导致的肠道菌群失调。
优选地，所述的肠道菌群失调包括口服抗生素导致的肠道菌群数量下降。
优选地，所述的改善肠道菌群失调包括提高肠道菌群数量。
优选地，所述的改善包括恢复、提高和/或构建。
优选地，所述的抗生素选自下组：盐酸林可霉素、头孢拉定，或其组合。
优选地，所述的盐酸林可霉素与所述头孢拉定重量比为0.5-1.5:0.5-1.5，较佳地0.8-1.2:0.8-1.2。
优选地，所述的组合物为药物组合物、食品组合物或保健品组合物。
优选地，所述的组合物还包括药学上、食品上或保健品上可接受的载体。
优选地，所述的组合物的剂型为固体制剂或液体制剂。
优选地，所述的组合物的剂型为口服制剂或注射制剂。
优选地，所述的食品组合物的为酸奶。
优选地，所述的组合物的剂型为乳液、片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂、散剂或糖浆剂。
优选地，所述的组合物还包括阿拉伯糖。
优选地，所述的阿拉伯糖包括L-阿拉伯糖。
优选地，所述的葛花提取物与阿拉伯糖的重量比为1：5-200，较佳地1：10-100，更佳地1：20-60，更加地1：30-50，更佳地1：35-45。
本发明第二个方面提供一种组合物，所述的组合物包括如本发明第一个方面所述的葛花提取物和阿拉伯糖。
优选地，所述的阿拉伯糖包括L-阿拉伯糖。
优选地，所述的组合物为药物组合物、食品组合物或保健品组合物。
优选地，所述的组合物还包括药学上、食品上或保健品上可接受的载体。
优选地，所述的组合物的剂型为固体制剂或液体制剂。
优选地，所述的组合物的剂型为口服制剂或注射制剂。
优选地，所述的组合物为食品组合物，所述的食品组合物为酸奶。
优选地，所述的组合物为酸奶。
优选地，所述的组合物的剂型为乳液、片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂、散剂或糖浆剂。
优选地，所述的酸奶为酸乳、发酵乳、风味酸乳或风味发酵乳。
优选地，所述的葛花提取物与阿拉伯糖的重量比为1：5-200，较佳地1：10-100，更佳地1：20-60，更加地1：30-50，更佳地1：35-45。
优选地，所述的葛花提取物的含量为1-99wt％，较佳地10-90wt％，更佳地20-80wt％，以组合物的总重量计算。
本发明第三个方面提供一种如本发明第二个方面所述的组合物的用途，用于制备改善肠道微生态失调的制剂。
优选地，所述制剂为口服制剂。
优选地，所述的改善肠道微生态失调包括改善肠道菌群失调。
优选地，所述的菌群选自下组：双歧杆菌、乳酸杆菌，或其组合。
优选地，所述的肠道微生态失调包括口服抗生素导致的肠道微生态失调。
优选地，所述的肠道微生态失调包括口服抗生素导致的肠道菌群失调。
优选地，所述的肠道菌群失调包括口服抗生素导致的肠道菌群失调。
优选地，，所述的肠道菌群失调包括口服抗生素导致的肠道菌群数量下降。
优选地，所述的改善肠道菌群失调包括提高肠道菌群数量。
优选地，所述的改善包括恢复、提高和/或构建。
优选地，所述的抗生素选自下组：盐酸林可霉素、头孢拉定，或其组合。
优选地，所述的盐酸林可霉素与所述头孢拉定重量比为0.5-1.5:0.5-1.5，较佳地0.8-1.2:0.8-1.2。
本发明第四个方面提供一种抗生素制剂，所述的抗生素制剂包括抗生素和如本发明第一个方面所述的葛花提取物。
优选地，所述的抗生素制剂为口服制剂。
优选地，所述的抗生素制剂还包括阿拉伯糖。
优选地，所述的阿拉伯糖包括L-阿拉伯糖。
优选地，所述的抗生素选自下组：盐酸林可霉素、头孢拉定，或其组合。
优选地，所述的盐酸林可霉素与所述头孢拉定重量比为0.5-1.5:0.5-1.5，较佳地0.8-1.2:0.8-1.2。
优选地，所述的葛花提取物与阿拉伯糖的重量比为1：5-200，较佳地1：10-100，更佳地1：20-60，更加地1：30-50，更佳地1：35-45。
优选地，所述的抗生素(例如盐酸林可霉素和/或头孢拉定)与阿拉伯糖的重量比为1：0.3-0.5。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。
具体实施方式
本发明开发了一种葛花提取物，所述的葛花提取物能够有效预防和治疗口服抗生素导致的肠道菌群失调。本发明的实验研究还表明，本发明所述的葛花提取物与阿拉伯糖能够协同改善口服抗生素导致的肠道乳酸杆菌和双歧杆菌等肠道菌群失调的失调。
术语
除非另有定义，否则本文中所用的所有技术和科学术语的含义与本发明所属领域普通技术人员普遍理解的含义相同。
如本文所用，术语“包括”、“包含”与“含有”可互换使用，不仅包括开放式定义，还包括半封闭式、和封闭式定义。换言之，所述术语包括了“由……构成”、“基本上由……构成”。
如本文所用，“葛花”中药名，为豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi、甘葛藤P.thomsonii Benth.的花。
如本文所用，术语“60％(v/v)乙醇”或“60％(v/v)乙醇水溶液”可互换使用，是指乙醇的体积分数为60％的乙醇水溶液，例如，60％的乙醇通过60ml无水乙醇+40ml水配制。
葛花提取物及其用途
本发明提供一种葛花提取物，所述的葛花提取物优选为干浸膏或干提取物。
优选地，本发明所述的葛花提取物通过以下方法制备：
(1)用醇水溶液对葛花进行提取，得到醇水提取液；
(2)所述的醇水提取液经浓缩后，加入有机溶剂进行萃取，将有机相减压蒸馏除去溶剂，得到葛花提取物，其中，所述的有机溶剂包括石油醚、氯仿、乙酸乙酯中的一种或多种。
优选地，所述的醇水溶液中，所述的醇为C1-C4低级醇。
优选地，所述的C1-C4低级醇包括甲醇、乙醇、丙醇和丁醇中的一种或多种。
优选地，所述的醇水溶液中，醇的体积分数为40-70％，较佳地50-70％，更佳地55-65％，更佳地60％。。
优选地，所述的醇水溶液为乙醇水溶液。
优选地，所述的醇水溶液为乙醇水溶液，在所述的乙醇水溶液，乙醇的体积分数为40-70％，较佳地50-70％，更佳地55-65％，更佳地60％。
优选地，所述的步骤(2)中，所述的有机溶剂包括石油醚。
代表性地，所述的葛花提取物通过以下方法制备而得：
向葛花中加入6-10倍量的55-65％(v/v)乙醇水溶液，加热回流提取4-8h后，过滤，滤液经减压浓缩，得到浓缩液，向所述浓缩液中加入石油醚萃取，将得到的石油醚有机相层减压蒸馏除去溶剂，干燥，得到葛花提取物。
优选地，所述的55-65％(v/v)乙醇水溶液为60％(v/v)乙醇水溶液。
代表性地，所述的葛花提取物通过以下方法制备而得：
(a)称取45-55g葛花，粉碎后加入350-450ml 55-65％(v/v)乙醇水溶液后，加热回流提取4-8h后，过滤，滤液经减压浓缩到80-120ml，得到浓缩液；
(b)每次用280-320mL石油醚对步骤(a)得到浓缩液进行萃取，总共萃取两次，合并两次分离得到的石油醚层，减压蒸馏除去石油醚，干燥，得到葛花提取物。
典型地，所述的葛花提取物通过以下方法制备而得：
(a)称取50g葛花，粉碎后加入400ml 60％(v/v)乙醇水溶液后，加热回流提取6h后，过滤，滤液经减压浓缩到100ml，得到浓缩液；
(b)每次用300mL石油醚对步骤(a)得到浓缩液进行萃取，总共萃取两次，合并两次分离得到的石油醚层(即石油醚萃取液)，减压蒸馏除去石油醚，干燥，得到葛花提取物。
本发明还提供一种本发明所述葛花提取物的用途，用于制备组合物，所述的组合物用于改善肠道微生态失调。
肠道微生态失调
本发明所述的葛花提取物、组合物能够用于改善肠道微生态失调。
优选地，所述的肠道微生态失调包括肠道菌群失调。
优选地，所述的改善肠道微生态失调包括改善肠道菌群失调。
优选地，所述的菌群选自下组：双歧杆菌、乳酸杆菌，或其组合。
优选地，所述的肠道微生态失调包括口服抗生素导致的肠道微生态失调。
优选地，所述的肠道微生态失调包括口服抗生素导致的肠道菌群失调。
优选地，所述的肠道菌群失调包括口服抗生素导致的肠道菌群失调。
代表性地，所述的肠道菌群失调包括口服抗生素导致的肠道菌群数量下降。
优选地，所述的改善肠道菌群失调包括提高肠道菌群数量。
优选地，所述的改善包括恢复、提高和/或构建。
在本发明中，所述的抗生素优选地选自下组：盐酸林可霉素、头孢拉定，或其组合。
优选地，所述的盐酸林可霉素与所述头孢拉定重量比为0.5-1.5:0.5-1.5，较佳地0.8-1.2:0.8-1.2。
组合物及其用途
本发明还提供一种组合物，所述的组合物可以为药物组合物、食品组合物或保健品组合物。
本发明所述的组合物还包括药学上、食品上或保健品上可接受的载体。
如本文所用，术语“药学上、食品上或保健品上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体、半固体、液体或凝胶填料，它们适合于人体或动物使用，而且有足够的纯度和足够低的毒性。
应理解，在本发明中，所述的载体没有特别的限制，可选用本领域常用材料，或用常规方法制得，或从市场购买得到。药学可接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙甲基纤维素、羧甲基纤维素钠等)、明胶、滑石粉、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、山梨醇等)、乳化剂(如吐温)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、缓冲剂、螯合剂、增稠剂、pH调节剂、透皮促进剂、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、抑菌剂、无热原水等。
在本发明中，药物组合物的剂型包括(但不限于)口服制剂或注射制剂。
代表性地，所述的组合物的剂型为乳液、片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂、散剂或糖浆剂。
代表性地，本发明所述的组合物、制剂或抗生素制剂为酸奶。
典型地，本发明所述的组合物、制剂或抗生素制剂为酸奶。本发明所述的葛花提取物能够制备成酸奶，通过口服酸奶能够简单、方便改善肠道微生态失调。
酸奶是一种酸甜口味的牛奶饮品，是以牛奶为原料，经过巴氏杀菌后再向牛奶中添加有益菌(发酵剂)，经发酵后，再冷却灌装的一种牛奶制品。市场上酸奶制品多以凝固型、搅拌型和添加各种果汁果酱等辅料的果味型为多。
本发明的酸奶包括但不限于酸乳、发酵乳、风味酸乳或风味发酵乳。
酸乳是以生牛(羊)乳或乳粉为原料，经杀菌、接种嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌(德氏乳杆菌保加利亚亚种)发酵制成的产品。
发酵乳是以生牛(羊)乳或乳粉为原料，经杀菌、发酵后制成的pH值降低的产品。
风味酸乳的酸奶里除了奶/奶粉，还添加了其他成分，如食品添加剂、果蔬或谷物杂粮等。只要满足奶/奶粉含量超过80％、蛋白质含量≥2.3％即可。
风味发酵乳除了奶/奶粉，接种发酵后，还添加其他成分。
代表性地，本发明所述的酸奶为风味酸乳。风味酸乳的口感更佳适合改善肠道微生态失调的主体儿童和老年人。
在本发明的一个优选例中，本发明所述的组合物包括本发明所述的葛花提取物。
在本发明的另一优选例中，本发明所述的组合物包括本发明所述的葛花提取物和阿拉伯糖。
优选地，所述的葛花提取物与阿拉伯糖的重量比为1：5-200，较佳地1：10-100，更佳地1：20-60，更加地1：30-50，更佳地1：35-45。
优选地，所述的阿拉伯糖包括L-阿拉伯糖。
抗生素制剂
本发明还提供一种抗生素制剂，所述的抗生素制剂能够治疗微生物感染。
在本发明一个优选例中，本发明所述的抗生素制剂包括抗生素和如本发明所述的葛花提取物。
在本发明另一优选例中，本发明所述的抗生素制剂还包括阿拉伯糖。优选地，所述的阿拉伯糖包括L-阿拉伯糖。
优选地，所述的抗生素选自下组：盐酸林可霉素、头孢拉定，或其组合。
优选地，所述的盐酸林可霉素与所述头孢拉定重量比为0.5-1.5:0.5-1.5，较佳地0.8-1.2:0.8-1.2。
优选地，所述的葛花提取物与阿拉伯糖的重量比为1：5-200，较佳地1：10-100，更佳地1：20-60，更加地1：30-50，更佳地1：35-45。
优选地，所述的抗生素(例如盐酸林可霉素和/或头孢拉定)与阿拉伯糖的重量比为1：0.3-0.5。
本发明的主要技术效果包括：
1、本发明所述的葛花提取物能够用于预防和治疗口服抗生素导致的肠道菌群失调。
2、本发明所述的葛花提取物与阿拉伯糖能够协同改善口服抗生素导致的肠道乳酸杆菌和双歧杆菌等肠道菌群失调的失调。
3、本发明所述的葛花提取物能够制成酸奶口服用于改善口服抗生素导致的肠道乳酸杆菌和双歧杆菌等肠道菌群失调的失调。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，以下具体实施例以本技术方案为前提，给出了详细的实施方式和具体操作过程，但本发明的保护范围并不限于本实施例。
实施例1
(1)葛花提取物的制备，葛花提取物通过以下方法制备：
(a)称取50g葛花，粉碎后加入400ml 60％(v/v)乙醇水溶液后，加热回流提取6h后，过滤，滤液经减压浓缩到100ml，得到浓缩液；
(b)每次用300mL石油醚对步骤(a)得到浓缩液进行萃取，总共萃取两次，合并两次分离得到的石油醚层(即石油醚萃取液)，减压蒸馏除去石油醚，干燥，得到葛花提取物。
(2)考察本实施例制备的葛花提取物对肠道菌群失调的改善作用
2.1实验方法
选取健康雄SD大鼠，购买后自适应一周，随机分成空白对照组、模型组、实施组1、实验组2和实验组3，每组8只。随即空白对照组大鼠灌胃给予生理盐水，模型组、实施组1、实验组2和实验组3的大鼠用生理盐水灌胃给予抗生素混合液(盐酸林可霉素(1g/kg.bw.次)和头孢拉定(1g/kg.bw.次)，每天2次，连续4天后，各组大鼠按照如下给药方式进行灌胃给药：
空白对照组：生理盐水；
模型组：生理盐水；
实施组1：葛花提取物(10mg/kg.bw.d)；
实验组2：L-阿拉伯糖(0.4g/kg.bw.d)；
实验组3：葛花提取物(10mg/kg.bw.d)+L-阿拉伯糖(0.4g/kg.bw.d)；
其中，实施组1-3大鼠用生理盐水灌胃递送给药。
连续给药3天，每天给药一次，最后一次给药后24h，无菌采取各组大鼠回盲部粪便1g，用于细菌培养，得到各组大鼠的肠道菌群变化如表1所示。肠道菌群的选择：双歧杆菌、乳酸杆菌。分别接种于相应的培养基上培养乳酸杆菌(Lbs培养基)、双歧杆菌(Blb培养基)。培养，根据菌落形态、涂片分析结果计算每克粪便湿重中菌落形成单位(CFU)的对数值。
统计学分析：
计量采用
Figure BDA0002907482080000101
采用SPSS软件进行数据分析，两两比较采用t检验，以p≤0.05为具有统计学意义。
2.2实验结果
不同组的SD大鼠取出的回盲部粪便中肠道菌群变化如表1所示。
表1不同组的SD大鼠取出的回盲部粪便中肠道菌群变化(
Figure BDA0002907482080000102
lgCFU/g)
组 双歧杆菌 乳酸杆菌
空白对照组 8.57±0.39 8.34±0.40
模型组 6.91±0.27* 6.74±0.28*
实验组1 7.83±0.32** 7.71±0.36*
实验组2 7.13±0.35* 7.01±0.32**
实验组3 8.29±0.41** 8.18±0.39**
注：与对照组比较，*p<0.05，**p<0.01。
从表1中可以看出，与空白对照组相比，模型组的大鼠肠道双歧杆菌和乳酸杆菌显著下降，表明抗生素导致肠道菌群失调的动物造模成功。与模型组相比，实验组1-3的结果表明，葛花提取物和L-阿拉伯糖能够提高肠道双歧杆菌和乳酸杆菌的菌群数量，表明葛花提取物和L-阿拉伯糖能够改善口服抗生素导致的肠道菌群失调，且葛花提取物和L-阿拉伯糖能够协同改善口服抗生素导致的肠道菌群失调。
上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种葛花提取物的用途，其特征在于，用于制备组合物，所述的组合物用于改善肠道微生态失调；
所述的葛花提取物通过以下方法制备：
(1)用醇水溶液对葛花进行提取，得到醇水提取液；
(2)所述的醇水提取液经浓缩后，加入有机溶剂进行萃取，将有机相减压蒸馏除去溶剂，得到葛花提取物，其中，所述的有机溶剂包括石油醚、氯仿、乙酸乙酯中的一种或多种。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的葛花提取物通过以下方法制备而得：
向葛花中加入6-10倍量的55-65％(v/v)乙醇水溶液，加热回流提取4-8h后，过滤，滤液经减压浓缩，得到浓缩液，向所述浓缩液中加入石油醚萃取，将得到的石油醚有机相层减压蒸馏除去溶剂，干燥，得到葛花提取物。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的改善肠道微生态失调包括改善肠道菌群失调。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的菌群选自下组：双歧杆菌、乳酸杆菌，或其组合。
5.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的肠道菌群失调包括口服抗生素导致的肠道菌群失调。
6.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的肠道菌群失调包括口服抗生素导致的肠道菌群数量下降。
7.一种组合物，其特征在于，所述的组合物包括如权利要求1所述的葛花提取物和阿拉伯糖。
8.如权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述的组合物为酸奶。
9.一种如权利要求7述的组合物的用途，其特征在于，用于制备改善肠道微生态失调的制剂。
10.一种抗生素制剂，其特征在于，所述的抗生素制剂包括抗生素和如权利要求1所述的葛花提取物。
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