CN112858533A - 一种烟丝中质体色素含量的测定方法 - Google Patents

一种烟丝中质体色素含量的测定方法 Download PDF

Info

Publication number
CN112858533A
CN112858533A CN202110306297.4A CN202110306297A CN112858533A CN 112858533 A CN112858533 A CN 112858533A CN 202110306297 A CN202110306297 A CN 202110306297A CN 112858533 A CN112858533 A CN 112858533A
Authority
CN
China
Prior art keywords
tobacco
plastid
plastid pigment
tobacco shreds
liquid chromatography
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202110306297.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112858533B (zh
Inventor
彭黔荣
邓葵
赵丽琴
冯淑艳
杨敏
张文
蔡元青
王宇
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
China Tobacco Guizhou Industrial Co Ltd
Original Assignee
China Tobacco Guizhou Industrial Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by China Tobacco Guizhou Industrial Co Ltd filed Critical China Tobacco Guizhou Industrial Co Ltd
Priority to CN202110306297.4A priority Critical patent/CN112858533B/zh
Publication of CN112858533A publication Critical patent/CN112858533A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112858533B publication Critical patent/CN112858533B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N30/14—Preparation by elimination of some components
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N2030/062—Preparation extracting sample from raw material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N30/14—Preparation by elimination of some components
    • G01N2030/146—Preparation by elimination of some components using membranes

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Manufacture Of Tobacco Products (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种烟丝中质体色素含量的测定方法，包括步骤：(1)标准曲线的制作：配制待测质体色素的一系列标准工作液，进行高效液相色谱测试，根据高效液相色谱的测试结果，制作待测质体色素的线性回归方程；(2)烟丝中质体色素含量的测定：在确定的色谱条件下测试，按照步骤(1)的色谱条件对烟丝提取液进行高效液相色谱测试，将测试结果带入对应的线性回归方程中，计算得到烟丝中质体色素的含量。本测定方法中，测定烟丝质体色素的时间短，检测效率高，采用的高效液相色谱具有快速、高效和分析灵敏度高的优点。

Description

一种烟丝中质体色素含量的测定方法
技术领域
本发明涉及烟草检验技术领域，特别涉及一种烟丝中质体色素含量的测定方法。
背景技术
烟叶质体色素主要包括叶绿素a、叶绿素b、β-胡萝卜素、叶黄素、新黄质和紫黄质等，它们大部分是烟叶香味成分的前体，直接或间接地影响烟叶的内在品质。烟叶调制过程中色素的降解与否将直接影响烟叶的香味和色泽。有研究表明，类胡萝卜素的降解产物含量约占致香总量的8％-12％，是烟气中重要的香气成分。例如类胡萝卜素的降解产物巨豆三烯酮有可可的香味，可改善烟气的香气；二氢猕猴桃内酯、香叶基丙酮则可增加烤烟香气并降低其刺激性等。因此，准确地测定烟叶中的质体色素对了解烟叶的品质和可用性具有重要意义。
传统测定方法是将叶绿素和类胡萝卜素分开测定。高效液相色谱实现了叶绿素a、叶绿素b、β-胡萝卜素、叶黄素、新黄质和紫黄质的同时测定。
田海英等用反相高效液相色谱实现上述质体色素的测定，但是，样品高效液相色谱测定时间为40分钟以上。刘少民等同样采用反相高效液相色谱分离测定上述6种质体色素，样品高效液相色谱测定时间为55分钟以上。吴方萍等采用微柱高效液相色谱测定烟草中的6种质体色素，但是样品前处理繁琐，经过：色素提取-固相萃取柱活化-固相萃取-洗脱等过程，且检测成本高，检测限为20～40μg/mL。
从田海英等研究和我们的试验可知，卷烟烟丝中只含有叶黄素和β-胡萝卜素。膨胀烟丝是卷烟配方的组成部分，使用膨胀烟丝，可为烟支提供厚实感，增加透气性、改善燃烧性能，也可达到降低焦油和烟碱的目的。膨胀烟丝的膨胀工艺伴随有温度值和湿度值的变化，膨胀过程中会发生质体色素的降解从而赋予烟丝香味及色泽。因此监测膨胀前后烟丝中质体色素的变化，有利于膨胀烟丝的工艺和质量控制。但是，现有技术中对烟丝中质体色素含量的测定存在测试时间长、成本高的技术问题。
综上，需要建立一种快速、准确、低成本的烟丝中质体色素含量的测定方法。
发明内容
本发明的目的正是基于上述现有技术状况，旨在克服现有技术缺陷，提供一种烟丝中质体色素含量的测定方法，实现对烟丝中质体色素的快速、准确、低成本的测定。
为解决上述技术问题，本发明的实施方式公开了一种烟丝中质体色素含量的测定方法，包括以下步骤：
(1)标准曲线的制作
配制待测质体色素的一系列标准工作液，进行高效液相色谱测试：
流动相，包括A相和B相：
A相为三乙胺、甲醇、异丙醇组成的混合溶液，三乙胺的体积百分比为0.18～0.22％，甲醇和异丙醇的体积比为1：1；
B相为超纯水；
洗脱方式为梯度洗脱，梯度洗脱包括以下三个阶段：
0-10min：流动相A的体积分数为90％，流动相B的体积分数为10％；
10-20min：流动相A的体积分数为100％，流动相B的体积分数为0；
20-25min：流动相A的体积分数为90％，流动相B的体积分数为10％；
根据所述高效液相色谱的测试结果，制作待测质体色素的线性回归方程。
(2)烟丝中质体色素含量的测定
按照步骤(1)的色谱条件对烟丝提取液进行高效液相色谱测试，将所述测试结果带入对应的线性回归方程中，计算得到所述烟丝中质体色素的含量。
采用上述技术方案，提取烟丝质体色素的时间短，检测效率高，准确性高；通过改变流动相组成和梯度洗脱程序，烟丝中各质体色素分离测定时间缩短到了22min；同时流动相组成简单、成本低。
本发明的实施方式公开了一种烟丝中质体色素含量的测定方法，质体色素为以下各质体色素中的至少一种：叶黄素、β-胡萝卜素。
本发明的实施方式公开了一种烟丝中质体色素含量的测定方法，步骤(2)还包括：将烟丝制成烟末样品，将烟末样品溶解于丙酮水溶液中，超声萃取，经定性滤纸过滤后，再经有机相滤膜过滤。
本发明的实施方式公开了一种烟丝中质体色素含量的测定方法，烟丝制成烟末样品包括以下步骤：将烟丝置于不高于40℃的烘箱内烘干2小时，取出研磨，过40目筛，得到烟末样品。
本发明的实施方式公开了一种烟丝中质体色素含量的测定方法，丙酮水溶液为丙酮和水按照体积分数9：1混合而成，丙酮水溶液体积为25mL，超声萃取时间为20min，有机相滤膜的膜孔为0.45μm。
本发明的实施方式公开了一种烟丝中质体色素含量的测定方法，步骤(1)中，高效液相色谱测试的高效液相色谱的仪器型号为Waters NOVA-Park，色谱柱为C18高效液相色谱柱，高效液相色谱柱规格为3.9mm×150mm，填料直径为4.0μm。
本发明的实施方式公开了一种烟丝中质体色素含量的测定方法，高效液相色谱柱的柱温为45℃，进样体积为10μL，所述流动相流速为1mL/min。
本发明的实施方式公开了一种烟丝中质体色素含量的测定方法，步骤(1)中，高效液相色谱的测试结果为待测质体色素一系列标准工作液的每个浓度对应的峰面积；制作待测质体色素的线性回归方程包括：分别以各质体色素的峰面积为纵坐标，以各质体色素的浓度为横坐标，制作各质体色素的线性回归方程。
本发明的实施方式公开了一种烟丝中质体色素含量的测定方法，烟丝中质体色素含量的测定时间不大于22min。
本发明通过高效液相色谱仪确定了烟丝中质体色素测定的色谱条件，22min内就可以将烟丝中的质体色素彻底分离，有利于鉴别样品中的质体色素。
附图说明
图1示出本发明实施例1的标准工作液的叶黄素和β-胡萝卜素的色谱图；
图2示出本发明实施例1烟丝样品的色谱图；
图3示出本发明对比例1的烟丝样品的色谱图；
图4示出本发明对比例2的烟丝样品的色谱图；
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭示的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。虽然本发明的描述将结合较佳实施例一起介绍，但这并不代表此发明的特征仅限于该实施方式。恰恰相反，结合实施方式作发明介绍的目的是为了覆盖基于本发明的权利要求而有可能延伸出的其它选择或改造。为了提供对本发明的深度了解，以下描述中将包含许多具体的细节。本发明也可以不使用这些细节实施。此外，为了避免混乱或模糊本发明的重点，有些具体细节将在描述中被省略。需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
应注意的是，在本说明书中，相似的标号和字母在下面的附图中表示类似项，因此，一旦某一项在一个附图中被定义，则在随后的附图中不需要对其进行进一步定义和解释。
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明的实施方式作进一步地详细描述。
下述具体实施方式中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
本发明中所用试剂参见表1。
表1实验所用试剂
Figure BDA0002987845360000041
本发明中的待测烟丝样品由贵州中烟工业有限责任公司铜仁卷烟厂提供，分别取经过微波膨胀处理的烟丝和微波膨胀前的烟丝，具体取样时间如表2所示。
表2烟丝样品的取样日期
Figure BDA0002987845360000042
本发明提供了一种烟丝中质体色素含量的测定方法，包括以下步骤：
(1)标准曲线的制作
(a)标准储备液的配制：
标准储备液1：称取1mg叶黄素，转移至10mL棕色容量瓶，90％丙酮水溶液定容至刻度，配成叶黄素浓度为100μg/mL的单一标准储备液1；
标准储备液2：称取2.5mgβ-胡萝卜素，置于50mL棕色容量瓶中，90％丙酮水溶液定容至刻度，配制成50μg/mL的单一标准储备液2。
其中，90％丙酮水溶液是丙酮和水按照体积比为9：1配制而成的溶液。
(b)系列标准工作液的配制：
分别移取1mL标准储备液1、2mL标准储备液2于10mL容量瓶中，90％丙酮水溶液定容至刻度，配制成10μg/mL的一级混合标准储备液，然后逐步稀释，分别得到10μg/mL、5μg/mL、2.5μg/mL、1.0μg/mL、0.50μg/mL、0.10μg/mL的标准工作液。
(c)液相色谱分析：利用高效液相色谱仪对系列标准工作液进行检测分析，色谱分析条件为：色谱柱采用Waters NOVA-Park C18柱，色谱柱规格为3.9mm×150mm，填料直径为4.0μm，柱温为45℃，进样体积为10μL，流动相流速为1mL/min，光电二极管阵列检测器(PDA)检测波长为448nm；流动相：A相为三乙胺、甲醇、异丙醇组成的混合溶液，三乙胺的体积百分比为0.18～0.22％，甲醇和异丙醇的体积比为1：1，B相为超纯水；采用梯度洗脱程序，0-10min：流动相A的体积分数为90％，流动相B的体积分数为10％，10-20min：流动相A的体积分数为100％，流动相B的体积分数为0，20-25min：流动相A的体积分数为90％，流动相B的体积分数为10％，总洗脱时间为25min。
烟丝中除了含有β-胡萝卜素外，还存在少量的α-胡萝卜素，二者互为同分异构体，由于其结构、性质相似，因此采用现有技术中的流动相组成作为高效液相色谱的色谱条件时，不能达到较好的分离效果，导致色谱图中的β-胡萝卜素谱峰出现拖尾、分叉等现象。本发明通过在流动相中加入三乙胺(TEA)，其属于竞争性胺类，可以与固定相中未键合的硅醇基发生强的相互作用，抑制样品中的成分与其发生反应，从而避免色谱峰出现拖尾、分叉等现象。
(d)标准曲线的制作：记录叶黄素系列标准工作液每个浓度的峰面积，以叶黄素的峰面积为纵坐标，以叶黄素的浓度为横坐标，制作叶黄素的线性回归方程；记录β-胡萝卜素系列标准工作液每个浓度的峰面积，以β-胡萝卜素的峰面积为纵坐标，以β-胡萝卜素的浓度为横坐标，制作β-胡萝卜素的线性回归方程，得到的各色素的线性回归方程和相关系数、检测限、定量限如表3所示。
表3色素的线性回归方程、相关系数和检测限
Figure BDA0002987845360000061
本发明的高效液相色谱测试方法采用特定的流动相组成和梯度洗脱程序，该方法在线性范围0.1～10μg/mL内得到的叶黄素和β-胡萝卜素的工作曲线的相关系数均大于0.999，线性关系良好，叶黄素和β-胡萝卜素的检测限(S/N＝3)在0.020-0.028μg/mL之间，定量限为0.0667～0.0933μg/mL之间。
(2)烟丝中质体色素含量的测定
(a)烟丝粉碎制烟末：根据烟草行业标准YC/T31-1996取贵州中烟工业有限责任公司铜仁卷烟厂的烟丝样品并处理，将烟丝样品置于温度不高于40℃的烘箱内烘干2h，直至可用手指捏碎，取出立即研磨成烟末，过40目筛，将烟末混合均匀并置于密封袋中备用。
(b)色素提取：准确称取2.00g烟末，置于100mL的三角瓶中，加入25mL 90％的丙酮水溶液(V丙酮：V水＝9:1)，超声萃取20min，取出摇匀后经定性滤纸过滤，取3mL滤液经0.45μm有机相滤膜过滤于1.5mL样品瓶中，随后作为待测样品直接进样分析。
(c)色素含量的测定：按照步骤(1)的色谱条件对待测样品中各质体色素的含量进行测定，分别记录各质体色素(叶黄素、β-胡萝卜素)的峰面积，把各质体色素的峰面积分别代入对应的线性回归方程中，用外标法定量，计算出10μL进样量中的质体色素的含量，再换算成2g烟末样品中质体色素的含量，即得烟丝样品中质体色素的含量。
(d)回收率与重复性:准确称取12份2g同一烟末样品于12个100mL三角瓶中，其中6份烟末样品的三角瓶中加入10μg/mL叶黄素和β-胡萝卜素混合标准溶液10mL，形成4μg/mL的加标浓度，然后按照(b)步骤进行超声萃取，后与未加混合标准溶液的烟末样品按照步骤(1)的色谱条件进行色谱分析，并根据叶黄素和β-胡萝卜素加标前后的测定值及加标量计算回收率，根据加标的6份样品的平行测定值计算相对标准偏差(RSD)。结果表明(见表4)：叶黄素和β-胡萝卜素的回收率为93.12％-106.7％，相对标准偏差(RSD)为0.657％-1.84％。
表4回收率和重复性(n＝6)
Figure BDA0002987845360000071
实施例1
(1)烟丝粉碎制烟末
根据烟草行业标准YC/T31-1996，取贵州中烟铜仁卷烟厂微波膨胀前后的烟丝样品(1#和2#烟丝样品)，将烟丝样品置于不高于40℃烘箱内烘干2h，取出立即研磨，过40目筛，将烟末样品混合均匀并置于密封袋中备用。
(2)提取烟丝中的叶黄素和β-胡萝卜素
准确称取2.00g烟末，置于100mL的三角瓶中，加入25mL 90％的丙酮水溶液(V丙酮：V水＝9:1)，超声萃取20min，取出摇匀后经定性滤纸过滤，取3mL滤液经0.45μm有机相滤膜过滤于1.5mL样品瓶中，直接进样分析。
(3)高效液相色谱检测
高效液相色谱检测色谱条件：
色谱柱：Waters NOVA-Park C18柱(3.9×150mm，4μm，Waters公司)；进样量10μL，流速1mL/min；柱温45℃；流动相A为0.2％三乙胺与甲醇、异丙醇的混合溶液(V甲醇：V异丙醇＝1：1)，流动相B是超纯水；梯度洗脱程序为：0—10min，流动相A的体积分数为90％，流动相B的体积分数为10％；10—20min，流动相A的体积分数为100％，流动相B的体积分数为0％；20—25min，流动相A的体积分数为90％，流动相B的体积分数为10％。
用光电二极管阵列检测器(PDA)进行检测，检测波长为448nm；
用外标法定量，计算出进样量10μL中叶黄素和β-胡萝卜素的浓度，再换算成2g烟末中叶黄素和β-胡萝卜素的含量，即得到待测烟丝样品中叶黄素和β-胡萝卜素的含量。每组样品平行测定两次，以样品测定结果的平均值表示，具体结果参见表5。测得的膨胀后的烟丝样品的色谱图如图2所示。
对比例1
高效液相色谱检测色谱条件：
色谱柱：Waters NOVA-Park C18柱(3.9×150mm，4μm，Waters公司)；进样量10μL，流速0.5mL/min；柱温：30℃；流动相A为异丙醇，流动相B为乙腈水溶液(80％体积分数)；梯度洗脱程序为：0min：流动相A的体积分数为0，流动相B的体积分数为100％；40min：流动相A的体积分数为100％，流动相B的体积分数为0。其他步骤同实施例1，测得的烟丝样品的色谱图如图3所示。
对比例2
高效液相色谱检测色谱条件：
色谱柱：Waters NOVA-Park C18柱(3.9×150mm，4μm，Waters公司)；进样量10μL，流速0.5mL/min；柱温：45℃；流动相A为异丙醇，流动相B为乙腈水溶液(80％体积分数)；梯度洗脱程序为：0min：流动相A的体积分数为0，流动相B的体积分数为100％；40min：流动相A的体积分数为100％，流动相B的体积分数为0。其他步骤同实施例1，测得的烟丝样品的色谱图如图4所示。
表5烟丝中叶黄素和β-胡萝卜素的测定结果(μg/g)
质体色素 1#烟丝膨胀前 1#烟丝膨胀后 2#烟丝膨胀前 2#烟丝膨胀后
叶黄素 48.2 43.6 71.2 66.6
β-胡萝卜素 72.3 66.2 159.2 136.3
图2为利用本发明的高效液相色谱条件测得的烟丝样品中叶黄素和β-胡萝卜素的色谱图，图1是采用本发明的高效液相色谱条件测得的标准工作液的叶黄素和β-胡萝卜素的色谱图，通过图1、图2对比可以看出，烟丝中只含有叶黄素和β-胡萝卜素两种质体色素，且采用本申请的色谱条件，可以将叶黄素和β-胡萝卜素的分离、测定时间缩短为22min，大大提高了检测效率。同时，表5的测定结果表明：烤烟经调制、复烤及陈化后，质体色素大量降解消失，主要剩余叶黄素和β-胡萝卜素；与微波膨胀前的烟丝相比，膨胀后的烟丝样品中，叶黄素及β-胡萝卜素的含量均有不同程度的下降，下降幅度最大为9.54％和14.38％；微波膨胀后烟丝的颜色及香味有所改变，与色素有一定关系。有研究表明，类胡萝卜素的降解产物含量约占致香总量的8％-12％，是烟气中重要的香气成分，如其降解产物巨豆三烯酮、二氢猕猴桃内酯、香叶基丙酮可增加烤烟香气并降低其刺激性。
对比例1-4采用现有技术中的色谱条件对烟丝中的质体色素进行测定。对比例1的高效液相色谱柱的柱温为30℃，对比例2的高效液相色谱柱的柱温为45℃，通过对比图3和图4可以看出，柱温为30℃时，烟丝中的杂质成分不能与β-胡萝卜素的主峰相分离，柱温45℃测得的色谱图中，杂质与β-胡萝卜素分离程度较好，且基线更平稳；同时，对比例1-2的高效液相色谱条件对烟丝中叶黄素和β-胡萝卜素的分离、测定时间相较于本发明的色谱条件大大延长，检测效率低下。
本发明通过在流动相中加入三乙胺，并配合以一定的梯度洗脱程序，可以把β-胡萝卜素与杂质完全分离开，且叶黄素的峰型好，烟丝中两种质体色素的分离、测定时间缩短至22min，提高了分析测定的时间，同时流动相组成简单、成本低廉。
虽然通过参照本发明的某些优选实施方式，已经对本发明进行了图示和描述，但本领域的普通技术人员应该明白，以上内容是结合具体的实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。本领域技术人员可以在形式上和细节上对其作各种改变，包括做出若干简单推演或替换，而不偏离本发明的精神和范围。

Claims (9)

1.一种烟丝中质体色素含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)标准曲线的制作
配制待测质体色素的一系列标准工作液，进行高效液相色谱测试：
流动相，包括A相和B相：
A相为三乙胺、甲醇、异丙醇组成的混合溶液，三乙胺的体积百分比为0.18～0.22％，甲醇和异丙醇的体积比为1：1；
B相为超纯水；
洗脱方式为梯度洗脱，所述梯度洗脱包括以下三个阶段：
0-10min：流动相A的体积分数为90％，流动相B的体积分数为10％；
10-20min：流动相A的体积分数为100％，流动相B的体积分数为0；
20-25min：流动相A的体积分数为90％，流动相B的体积分数为10％；
根据所述高效液相色谱的测试结果，制作待测质体色素的线性回归方程；
(2)烟丝中质体色素含量的测定
按照步骤(1)的色谱条件对烟丝提取液进行高效液相色谱测试，将所述测试结果带入对应的线性回归方程中，计算得到所述烟丝中质体色素的含量。
2.如权利要求1所述的烟丝中质体色素含量的测定方法，其特征在于，所述质体色素为以下各质体色素中的至少一种：叶黄素、β-胡萝卜素。
3.如权利要求1所述的烟丝中质体色素含量的测定方法，其特征在于，所述步骤(2)还包括：将所述烟丝制成烟末样品，将所述烟末样品溶解于丙酮水溶液中，超声萃取，经定性滤纸过滤后，再经有机相滤膜过滤。
4.如权利要求3所述的烟丝中质体色素含量的测定方法，其特征在于，所述烟丝制成烟末样品包括以下步骤：将所述烟丝置于不高于40℃的烘箱内烘干2小时，取出研磨，过40目筛，得到所述烟末样品。
5.如权利要求3所述的烟丝中质体色素含量的测定方法，其特征在于，所述丙酮水溶液为丙酮和水按照体积分数9：1混合而成，所述丙酮水溶液体积为25mL，所述超声萃取时间为20min，所述有机相滤膜的膜孔为0.45μm。
6.如权利要求1所述的烟丝中质体色素含量的测定方法，其特征在于，步骤(1)中，所述高效液相色谱测试的高效液相色谱的仪器型号为Waters NOVA-Park，色谱柱为C18高效液相色谱柱，所述高效液相色谱柱规格为3.9mm×50mm，填料直径为4.0μm。
7.如权利要求6所述的烟丝中质体色素含量的测定方法，其特征在于，所述高效液相色谱柱的柱温为45℃，进样体积为10μL，所述流动相流速为1mL/min。
8.如权利要求1所述的烟丝中质体色素含量的测定方法，其特征在于，步骤(1)中，所述高效液相色谱的测试结果为待测质体色素一系列标准工作液的每个浓度对应的峰面积；所述制作待测质体色素的线性回归方程包括：分别以各质体色素的峰面积为纵坐标，以各质体色素的浓度为横坐标，制作各质体色素的线性回归方程。
9.如权利要求1至8中任一项所述的烟丝中质体色素含量的测定方法，其特征在于，所述烟丝中质体色素含量的测定时间不大于22min。
CN202110306297.4A 2021-03-23 2021-03-23 一种烟丝中质体色素含量的测定方法 Active CN112858533B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110306297.4A CN112858533B (zh) 2021-03-23 2021-03-23 一种烟丝中质体色素含量的测定方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110306297.4A CN112858533B (zh) 2021-03-23 2021-03-23 一种烟丝中质体色素含量的测定方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112858533A true CN112858533A (zh) 2021-05-28
CN112858533B CN112858533B (zh) 2022-09-30

Family

ID=75992158

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110306297.4A Active CN112858533B (zh) 2021-03-23 2021-03-23 一种烟丝中质体色素含量的测定方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112858533B (zh)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004043163A2 (en) * 2002-11-12 2004-05-27 Water Solutions, Inc. Process for extracting carotenoids from fruit and vegetable processing waste
CN101487820A (zh) * 2008-01-18 2009-07-22 河南中烟工业公司 烟草及烟草制品中质体色素快速提取及测定方法
WO2011074317A1 (ja) * 2009-12-15 2011-06-23 サントリーホールディングス株式会社 カロテノイド類の定量方法
CN104297407A (zh) * 2014-10-23 2015-01-21 中国农业科学院作物科学研究所 小麦中类胡萝卜素含量的超高效液相色谱测定方法
CN108037086A (zh) * 2017-11-29 2018-05-15 宁夏农林科学院枸杞工程技术研究所 一种基于枸杞表皮颜色值测定枸杞玉米黄素双棕榈酸酯含量的方法
CN108752355A (zh) * 2018-06-28 2018-11-06 大连理工大学 新鲜烟叶中多种产物的联产方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004043163A2 (en) * 2002-11-12 2004-05-27 Water Solutions, Inc. Process for extracting carotenoids from fruit and vegetable processing waste
CN101487820A (zh) * 2008-01-18 2009-07-22 河南中烟工业公司 烟草及烟草制品中质体色素快速提取及测定方法
WO2011074317A1 (ja) * 2009-12-15 2011-06-23 サントリーホールディングス株式会社 カロテノイド類の定量方法
CN104297407A (zh) * 2014-10-23 2015-01-21 中国农业科学院作物科学研究所 小麦中类胡萝卜素含量的超高效液相色谱测定方法
CN108037086A (zh) * 2017-11-29 2018-05-15 宁夏农林科学院枸杞工程技术研究所 一种基于枸杞表皮颜色值测定枸杞玉米黄素双棕榈酸酯含量的方法
CN108752355A (zh) * 2018-06-28 2018-11-06 大连理工大学 新鲜烟叶中多种产物的联产方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHRISTINE M. BRADISH 等: "Anthocyanin,Carotenoid, Tocopherol, andEllagitannin Content of Red Raspberry Cultivars Grown under Field or High Tunnel Cultivation in the Southeastern United States", 《J. AMER. SOC. HORT. SCI.》 *
刘少民 等: "反相高效液相色谱法测定烟草中的类胡萝卜素及其异构体", 《中国烟草学报》 *
田海英 等: "RP-HPLC法测定烟草中的质体色素", 《烟草科技》 *
陈珊珊 等: "二氧化碳施肥对樱桃番茄果实发育和品质的影响", 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN112858533B (zh) 2022-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Tomaz et al. Simultaneous determination of phenolic compounds in different matrices using phenyl-hexyl stationary phase
Rodríguez-Bonilla et al. Development of a reversed phase high performance liquid chromatography method based on the use of cyclodextrins as mobile phase additives to determine pterostilbene in blueberries
CN101620206B (zh) 一种检测黄酒中氨基甲酸乙酯的方法
Silva et al. A sensitive microextraction by packed sorbent-based methodology combined with ultra-high pressure liquid chromatography as a powerful technique for analysis of biologically active flavonols in wines
CN106290682B (zh) 一种茶叶中烟碱的手性分析方法
Gonda et al. Quantification of main bioactive metabolites from saffron (Crocus sativus) stigmas by a micellar electrokinetic chromatographic (MEKC) method
CN105403630A (zh) 一种检测再造烟叶用辅料中九种合成着色剂浓度的方法
CN115792018A (zh) 一种测定甘薯中13种类胡萝卜素含量的方法
Klötzel et al. Comparison of different clean-up procedures for the analysis of deoxynivalenol in cereal-based food and validation of a reliable HPLC method
Allen et al. Analysis of free and bound phenolics in wine and grapes by GC–MS after automated SPE
Bian et al. Progress in the pretreatment and analysis of N-nitrosamines: an update since 2010
CN111610276A (zh) 一种基于烟草特征性成分的烟支原料掺兑比例分布测定方法
CN106353434A (zh) 一种定量测定烟草中Amadori化合物的分析方法
CN113267588A (zh) 一种同时检测塑料制品中7种丙烯酸及丙烯酸酯类单体的方法
CN112858533B (zh) 一种烟丝中质体色素含量的测定方法
Tong et al. Simultaneous quantification of crocetin esters and picrocrocin changes in Chinese saffron by high-performance liquid chromatography-diode array detector during 15 years of storage
CN108445098B (zh) 一种检测维生素a棕榈酸酯中杂质的分析方法
CN113030333B (zh) 一种烟丝中质体色素含量的测定方法
CN103149311A (zh) 一种烟用香精香料中芝麻酚含量的测定方法
CN110455951B (zh) 一种烟草质体色素分析方法
CN103558174B (zh) 一种利用紫外分光光度法测定来苏儿中甲酚含量的方法
CN115792025A (zh) 化妆品中的酸性红92的检测方法
CN115993408A (zh) 一种烟用香精香料中四种有机酸的测定方法
CN113267589B (zh) 一种头发中16种合成大麻素类物质及其代谢物的分析方法
CN106404955B (zh) 一种测定高粱红色素中槲皮素-7-葡萄糖苷含量的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant