CN112839711A - 作为血浆激肽释放酶抑制剂的苯基四唑衍生物 - Google Patents

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Abstract

式(I)的苯基四唑衍生物及其药学上可接受的盐是血浆激肽释放酶抑制剂，其可用于治疗眼部疾病，特别是用于治疗糖尿病性黄斑水肿、年龄相关黄斑变性和脉络膜血管新生。

Description

作为血浆激肽释放酶抑制剂的苯基四唑衍生物
技术领域
本发明涉及作为血浆激肽释放酶抑制剂的新型苯基四唑衍生物及其药学上可接受的盐。另外，本发明涉及包含所述化合物的药物组合物和组合以及它们在用于治疗可能受血浆激肽释放酶的抑制影响的疾病的方法中的用途。特别地，本发明的药物组合物适用于预防和/或治疗糖尿病并发症、眼部疾病和水肿相关疾病，特别是糖尿病性黄斑水肿、年龄相关黄斑变性、脉络膜血管新生和遗传性血管性水肿。
背景技术
血浆激肽释放酶(PKK)是作为无活性的血浆前激肽释放酶由肝脏中的肝细胞分泌的胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶，所述血浆前激肽释放酶作为游离酶原或作为与高分子量激肽原结合的异二聚体复合物在血浆中循环，其被激活以给出活性PKK，所述活性PKK除了处理其他底物外，还可以从激肽原中释放激肽。激肽是有效的炎症介质，其通过G蛋白偶联受体(诸如缓激肽受体)起作用。
PKK被认为在许多炎性障碍中起作用并且可能在障碍中具有多种影响，所述障碍诸如遗传性血管性水肿(HAE)、视网膜病变或糖尿病性视网膜病变、增殖性和非增殖性视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿(DME)、临床显著性黄斑水肿(CSME)、黄斑囊样水肿(CME)、白内障摘除术后的CME、冷冻疗法诱导的CME、葡萄膜炎诱导的CME、眼内炎、血管阻塞(例如中央视网膜静脉阻塞、分支视网膜静脉阻塞或半视网膜静脉阻塞)后的CME、视网膜水肿、与糖尿病性视网膜病变中白内障手术相关的并发症、高血压性视网膜病变、视网膜创伤、干性和湿性年龄相关黄斑变性(AMD)、息肉状脉络膜血管病变(PCV)、脉络膜血管新生(CNV；例如非渗出性脉络膜血管新生)、玻璃体后脱离(PVD)、缺血再灌注损伤(例如在与组织和/或器官移植、手术诱导的脑损伤、局灶性脑缺血、全脑缺血相关的所有情况下)、神经胶质瘤相关水肿、脊髓损伤、疼痛、缺血、局灶性脑缺血、神经和认知缺陷、深静脉血栓形成、中风、心肌梗塞、获得性血管性水肿、药物相关(ACE抑制剂)水肿、高海拔脑水肿、细胞毒性脑水肿、渗透性脑水肿、阻塞性脑积水、辐射诱导的水肿、淋巴水肿、创伤性脑损伤、出血性中风(例如，脑中风或蛛网膜下腔中风)、脑内出血、缺血性中风的出血性转化、与损伤或手术相关的脑创伤、脑动脉瘤、动静脉畸形、手术程序(例如心胸外科手术，诸如心肺旁路或冠状动脉旁路移植术)中失血减少、凝血障碍(诸如血栓形成)、瘙痒、具有炎性组分的障碍(诸如多发性硬化症)、癫痫、脑炎、阿尔茨海默病、过度日间嗜睡、原发性高血压、与糖尿病或高脂血症相关的血压升高、肾功能不全、慢性肾脏疾病、心力衰竭、微量白蛋白尿、白蛋白尿、蛋白尿、与血管通透性增加相关的疾病(例如，视网膜血管通透性增加；腿、脚、踝血管通透性增加)、脑出血、深静脉血栓形成、纤溶治疗后凝血、心绞痛、血管性水肿、败血症、关节炎(例如类风湿性关节炎、骨关节炎、感染性关节炎)、狼疮、痛风、银屑病、炎性肠、糖尿病、糖尿病并发症、由代谢综合征引起的并发症、感染性疾病、星形胶质细胞激活相关疾病(例如阿尔茨海默病或多发性硬化症)、帕金森病、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、克鲁兹佛得-雅克病、中风、癫痫和创伤(例如脑创伤)、过敏性水肿(例如慢性过敏性鼻窦炎或常年性鼻炎的气流阻塞；急性哮喘的气流阻塞)；与系统性红斑狼疮(SLE)相关的浆膜炎、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)和其他疾病。
PKK抑制剂被认为可用于治疗多种多样的障碍，特别是治疗疾病中的水肿形成(例如与缺血性再灌注损伤相关的水肿形成)、视网膜病变或水肿相关疾病(诸如遗传性血管性水肿、黄斑水肿和脑水肿)。PKK抑制剂被认为尤其可用于治疗视网膜病变(例如与糖尿病和/或高血压相关的视网膜病变)和治疗黄斑水肿(例如与糖尿病和/或高血压相关的黄斑水肿)。
适用于治疗用途的PKK抑制剂应当有效地并且高选择性地与PKK结合。它们应从胃肠道吸收良好，代谢足够稳定，并且具有良好的药代动力学特性。它们应当是无毒的，并且展示出很少副作用。
本发明的化合物是PKK抑制剂，并且因此潜在地可用于治疗上文提及的障碍，特别应当具有作为降低与糖尿病性视网膜病变和糖尿病性黄斑水肿视网膜病变或水肿相关疾病相关的视网膜血管通透性的治疗的效用。
都与PKK相关的其他糖尿病并发症，诸如脑出血、肾病、心肌病和神经病，也可以被认为是PKK抑制剂的目标。
低分子量血浆激肽释放酶抑制剂是本领域已知的，例如公开于WO 2013/111108、WO 2013/111107、WO 2014/188211、WO 2017/072020和WO 2017/072021中的化合物。
发明内容
在第一方面，本发明涉及一种式(I)的化合物
Figure BDA0003010445950000031
其中
A选自由以下组成的组A-G1：N、CH、C-F、C-Cl、C-Br、C-CN、和C-CH3；
R1选自由以下组成的组R1-G1：H和任选地被1至3个F取代的C1-3-烷基；
R2选自由以下组成的组R2-G1：
含有1至3个N原子作为环成员和任选地1至2个选自C＝O、O、S、S＝O和SO2的环成员的饱和6-12元双环环系，
条件是所述环系在环成员之间不含任何杂原子-杂原子键，
其中所述环系经由N原子与式(I)中的杂芳族环附接，并且
其中所述环系任选地被1至6个F取代，任选地被1个取代基R3取代并且任
选地被1或2个CH3基团取代；
X选自由以下组成的组X-G1：
含有1至3个N原子的5元杂芳基，和
由与6元环稠合的5元环组成并且含有1至3个N原子的9元杂芳基，
其中所述杂芳基经由所述5元环的C原子与式(I)中的羰基附接并且经由所述5元环的不相邻C或N原子与式(I)中的CH2基团附接，并且
其中所述杂芳基任选地被1个取代基R4取代；
R3选自由以下组成的组R3-G1：
C1-3-烷基、C1-3-亚烷基-OH、C1-3-亚烷基-O-CH3、-CN、-NH2、-OH、和-O-C1-3-烷基；
R4选自由以下组成的组R4-G1：
F、Cl、Br、C1-3-烷基、C1-3-亚烷基-OH、C1-3-亚烷基-O-CH3、-CN、-NH2、-OH、-O-C1-3-烷基、和含有1个-NH-、-N<、-O-或-S-环成员和任选地另外1或2个＝N-环成员并且任选地被1或2个CH3基团取代的5元杂芳基，其中所述C1-3-烷基任选地被1至3个F取代；
R’选自由以下组成的组R’-G1：
F、Cl、C1-3-烷基、C3-4-环烷基、-CN、-O-C1-3-烷基、和-SO2-C1-3-烷基，其中所述C1-3-烷基和-O-C1-3-烷基任选地被1至3个F取代；
R”在每次出现时独立地选自由以下组成的组R”-G1：
F、Cl和CH3；并且
n是选自由以下组成的组n-G1的整数：0、1和2；
其中在上文中提到的任何定义中并且如果没有另外指定，则任何烷基或亚烷基或子基团可以是直链的或支链的，
其同种型、互变异构体、立体异构体、代谢物、前药、溶剂化物、水合物和盐(特别是药学上可接受的盐)或其组合。
在第二方面，本发明涉及一种药物组合物，其包含如上文或下文所定义的一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，任选地连同一种或多种惰性载体和/或稀释剂。
在第三方面，本发明涉及一种药物组合物，其包含如上文或下文所定义的一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种另外的治疗剂，任选地连同一种或多种惰性载体和/或稀释剂。
在第四方面，本发明涉及如上文或下文所定义的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用作药剂。
在第五方面，本发明涉及一种用于治疗有需要的患者的可能受血浆激肽释放酶抑制影响的疾病或病症的方法，所述方法的特征在于向所述患者施用如上文或下文所定义的一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
此外，本发明涉及如上文或下文所定义的一种或多种式(I)的化合物在制造用于治疗可能受血浆激肽释放酶抑制影响的疾病或病症的药剂中的用途。
此外，本发明涉及如上文或下文所定义的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，其用于在用于治疗有需要的患者的可能受血浆激肽释放酶的抑制的影响的疾病或病症的方法中的用途。
对于本领域技术人员而言，本发明的其他方面将直接从前述和以下描述和实施例中变得显而易见。
通用术语和定义
在本文中没有明确定义的术语应当被给出本领域技术人员根据本公开文本和上下文而给出的含义。然而，如本说明书所用，除非有相反的规定，否则以下术语具有所指示的含义并且遵守以下约定。
术语“根据本发明的化合物”、“式(I)的化合物”、“本发明的化合物”等表示根据本发明的式(I)的化合物，包括它们的互变异构体、立体异构体及其混合物及其盐(特别是其药学上可接受的盐)、以及此类化合物的溶剂化物和水合物(包括此类互变异构体、立体异构体及其盐的溶剂化物和水合物)。
同样，除非明确指示，否则贯穿整个说明书和所附权利要求书，给定的化学式或名称应当包括互变异构体和所有立体异构体、光学异构体和几何异构体(例如对映异构体、非对映异构体、E/Z异构体等…)及其外消旋体以及处于不同比例的单独的对映异构体的混合物、非对映异构体的混合物、或任何前述形式的混合物，其中存在此类异构体和对映异构体，以及盐，包括其药学上可接受的盐及其溶剂化物，例如像水合物，包括游离化合物的溶剂化物或化合物的盐的溶剂化物。
短语“药学上可接受的”在本文中用于指代在合理的医学判断范围内适用于与人和动物组织接触而没有过多的毒性、刺激性、过敏反应、或其他问题或并发症，并且与合理的效益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
如本文所用，“药学上可接受的盐”是指所公开的化合物的衍生物，其中母体化合物通过制备其酸盐或碱盐而被修饰。药学上可接受的盐的例子包括但不限于碱性残基(诸如胺)的矿物酸盐或有机酸盐；酸性残基(诸如羧酸)的碱盐或有机盐等。
例如，此类盐包括来自苯磺酸、苯甲酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、龙胆酸、氢溴酸、盐酸、马来酸、苹果酸、丙二酸、扁桃酸、甲磺酸、4-甲基-苯磺酸、磷酸、水杨酸、琥珀酸、硫酸和酒石酸的盐。
本发明的药学上可接受的盐可以通过常规化学方法由含有碱性或酸性部分的母体化合物合成。通常，此类盐可以通过在水中或有机稀释剂(如醚、EtOAc、EtOH、异丙醇或ACN或其混合物)中使这些化合物的游离酸或碱形式与足够量的适当碱或酸反应来制备。
除上文所提及那些之外的其他酸的盐(其例如可用于纯化或分离本发明的化合物，例如三氟乙酸盐)也构成本发明的一部分。
在本发明的化合物以化学名称的形式和作为式描绘的情况下，如果有任何差异，则应以式为准。
在下文所定义的基团、自由基或部分中，碳原子的数目通常指定在基团之前，例如，C1-6-烷基意指具有1至6个碳原子的烷基或自由基。
星号可以在子式中使用以指示与如所定义的核心分子或与取代基连接的键。在子式中多于一个附接点(即多于一个的星号)的情况下，可以通过核心分子或取代基的连接部分的括号指定来进一步指定星号。
取代基的原子的编号开始于与核心或与取代基所附接的基团最靠近的原子。
例如，术语“3-羧基丙基-基团”代表以下取代基：
Figure BDA0003010445950000061
其中所述羧基与所述丙基的第三碳原子附接。术语“1-甲基丙基-”、“2,2-二甲基丙基-”或“环丙基甲基-”基团代表以下基团：
Figure BDA0003010445950000062
如本文所用，术语“经取代的”意指在指定的原子、自由基或部分上的任何一个或多个氢被来自指示组的选择替代，条件是不超过原子的正常化合价，并且取代产生可接受的稳定的化合物。
在基团的定义中，术语“其中每个X、Y和Z基团任选地被……取代”等表示每个基团X、每个基团Y和每个基团Z各自作为单独的基团或各自作为所构成基团的一部分可以如所定义的进行取代。例如，定义“Rex表示H、C1-3-烷基、C3-6-环烷基、C3-6-环烷基-C1-3-亚烷基或C1-3-烷基-O-，其中每个烷基和亚烷基任选地被一个或多个Lex取代。”等意指在前面提及的包含术语烷基或亚烷基的基团中的每一个中，即在基团C1-3-烷基、C3-6-环烷基-C1-3-亚烷基和C1-3-烷基-O-中的每一个中，烷基和亚烷基部分可以被如所定义的Lex取代。
单独的或与另一个自由基组合的术语“C1-n-烷基”(其中n是从1至n的整数)表示具有1个至n个C原子的无环的、饱和的、支链的或直链的烃自由基。例如，术语C1-5-烷基涵盖自由基H3C-、H3C-CH2-、H3C-CH2-CH2-、H3C-CH(CH3)-、H3C-CH2-CH2-CH2-、H3C-CH2-CH(CH3)-、H3C-CH(CH3)-CH2-、H3C-C(CH3)2-、H3C-CH2-CH2-CH2-CH2-、H3C-CH2-CH2-CH(CH3)-、H3C-CH2-CH(CH3)-CH2-、H3C-CH(CH3)-CH2-CH2-、H3C-CH2-C(CH3)2-、H3C-C(CH3)2-CH2-、H3C-CH(CH3)-CH(CH3)-以及H3C-CH2-CH(CH2CH3)-。
术语“C1-n-亚烷基”(其中n是选自2、3、4、5或6，优选4或6的整数)单独地或与另一个自由基组合地表示含有从1至n个碳原子的无环、直链或支链二价烷基自由基。例如，术语C1-4-亚烷基包括-CH2-、-CH2-CH2-、-CH(CH3)-、-CH2-CH2-CH2-、-C(CH3)2-、-CH(CH2CH3)-、-CH(CH3)-CH2-、-CH2-CH(CH3)-、-CH2-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH(CH3)-、-CH(CH3)-CH2-CH2-、-CH2-CH(CH3)-CH2-、-CH2-C(CH3)2-、-C(CH3)2-CH2-、-CH(CH3)-CH(CH3)-、-CH2-CH(CH2CH3)-、-CH(CH2CH3)-CH2-、-CH(CH2CH2CH3)-、-CH(CH(CH3))2-和-C(CH3)(CH2CH3)-。
术语“C3-n-环烷基”(其中n是3至n的整数)单独地或与另一个自由基组合地表示含有3至n个C原子的环状的饱和的非支链碳氢自由基。环状基团可以是单环、双环、三环或螺环，最优选地是单环。此类环烷基的例子包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环壬基、环十二烷基、双环[3.2.1]辛基、螺[4.5]癸基、降菔烷基(norpinyl)、降冰片基、降蒈烷基(norcaryl)、金刚烷基等。
如本文所用的术语“芳基”单独地或与另一个自由基组合地表示含有6个碳原子的碳环芳族单环基团，所述碳环芳族单环基团任选地进一步与第二个5元或6元碳环基团(任选地是芳族的、饱和的或不饱和的)稠合。术语“芳基”包括但不限于苯基、茚满基、茚基、萘基、蒽基、菲基、四氢萘基和二氢萘基。
术语“杂芳基”意指含有一个或多个选自N、O或S(O)r的杂原子的单环或多环芳族环系，其中r＝0、1或2，所述环系由5至14个环原子组成，其中至少一个杂原子是芳族环的一部分。术语“杂芳基”旨在包括所有可能的异构体形式。
因此，术语“杂芳基”包括以下示例性结构；它们不被描绘为自由基，因为只要保持适当的化合价，每种形式都任选地通过共价键与任何原子附接：
Figure BDA0003010445950000081
术语“双环环系”意指由2个连接的环状子结构组成的基团，所述环状子结构包括螺环系、稠合环系和桥环系。
术语卤素通常表示氟、氯、溴和碘。
上文给出的许多术语可以在式或基团的定义中重复使用，并且在每种情况下彼此独立地具有上文给出的含义之一。
如本文所用，术语“治疗”(“treatment”和“treating”)包括治疗性(即治愈性和/或姑息性)和预防性(preventive，即prophylactic)治疗。
治疗性治疗是指对已经以明显、急性或慢性形式发展了一种或多种所述病症的患者进行的治疗。治疗性治疗可以是对症治疗，以便减轻特定适应症的症状，或因果治疗，以便逆转或部分逆转适应症的状况或者停止或减缓疾病的进展。
预防性治疗(“预防”)是指对在疾病临床发作之前处于发展所述病症中的一种或多种的风险中的患者进行的以便降低所述风险的治疗。
术语“治疗”(“treatment”和“treating”)包括施用一种或多种活性化合物以便预防或延迟所述症状或并发症的发作，以及预防或延迟所述疾病、病症或障碍的发展，和/或以便消除或控制所述疾病、病症或障碍以及减轻与所述疾病、病症或障碍相关的症状或并发症。
当本发明涉及需要治疗的患者时，它主要涉及对哺乳动物(特别是人)的治疗。
术语“治疗有效量”意指本发明化合物的这样的量，所述量的本发明化合物(i)治疗或预防特定疾病或病症，(ii)减弱、改善或消除特定疾病或病症的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文所述特定疾病或病症的一种或多种症状的发作。
缩写
Ac 乙酰基
ACN 乙腈
AMC 7-氨基-4-甲基香豆素
Boc 叔丁氧羰基
BSA 牛血清白蛋白
Bzl 苄基
d 天
DAD 二极管阵列检测器
DBAD 偶氮二甲酸二叔丁酯
DBU 1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一-7-烯
DCM 二氯甲烷
DEAD 偶氮二甲酸二乙酯
DIAD 偶氮二甲酸二异丙酯
DMEM 杜尔贝科改良伊格尔培养基
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
EDTA 乙二胺四乙酸
ESI 电喷雾电离(在MS中)
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
h 小时
HATU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
HPLC 高效液相色谱法
HPLC-MS 偶联高效液相色谱-质谱法
LC 液相色谱法
LC-MS 偶联液相色谱-质谱法
LG 离去基团
M 摩尔(mol/L)
MeOH 甲醇
min 分钟
MS 质谱法
NADPH 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸
NMR 核磁共振
PET 聚对苯二甲酸乙二醇酯
PyBop (苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻鎓六氟磷酸盐
Rf 延迟因子(TLC)
RFU 相对荧光单位
RP 反相
rt 室温
tR 保留时间(在HPLC/LC中)
TBTU O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓四氟硼酸盐
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱法
UV 紫外线
具体实施方式
本发明公开了新型苯基四唑衍生物，其是有效的血浆激肽释放酶(PKK)抑制剂，并且具有合适的药理学和药代动力学特性，以将它们用作用于治疗可能受PKK抑制影响的疾病和/或病症的药剂，所述疾病和/或病症包括但不限于糖尿病并发症、眼部疾病和水肿相关疾病，特别是糖尿病性黄斑水肿、年龄相关黄斑变性，脉络膜血管新生和遗传性血管性水肿。
本发明的化合物可以提供若干优点，诸如增强的效力、高代谢和/或化学稳定性、高选择性、安全性和耐受性、增强的溶解度、增强的渗透性、所希望的血浆蛋白结合、增强的生物利用度、改善的药代动力学特征曲线、和形成稳定盐的可能性。
本发明的化合物
在本发明的第一方面，发现式(I)的化合物
Figure BDA0003010445950000111
其中A、R1、R2、X、R’、R”和n是如上文和下文所定义的，是有效的PKK抑制剂并且关于选择性、安全性和耐受性、代谢和/或化学稳定性、药代动力学和物料化学特征、溶解度、渗透性、血浆蛋白结合、生物利用度和形成盐的可能性方面展现出良好的特性。特别地，它们提供了对人PKK的高效力、显著的选择性(例如，相对于各种丝氨酸蛋白酶，诸如人组织激肽释放酶1(TK1))以及安全特征(诸如低的诱变性潜力和对基于机制的细胞色素P4503A4的抑制的低倾向)的有利组合。
因此，预期如上文或下文所定义的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可用于治疗可能受PKK抑制影响的疾病和/或病症。
因此，根据本发明的一个方面，提供了一种式(I)的化合物
Figure BDA0003010445950000121
其中A、R1、R2、X、R’、R”和n是如上文或下文所定义的，
以及其异构体、互变异构体、立体异构体、代谢物、前药、溶剂化物、水合物及盐，特别是药学上可接受的盐。
除非另外说明，否则基团、残基和取代基(特别是A、R1、R2、X、R3、R4、R’、R”和n)是如上文和下文所定义的。取代基A、R1、R2、X、R3、R4、R'、R”和n的一些优选的含义将在下文中作为本发明的实施方案给出。这些定义和实施方案中的任何和每个可以彼此组合。
A：
根据一个实施方案，A选自由以下组成的组A-G1：N、CH、C-F、C-Cl、C-Br、C-CN和C-CH3。
根据另一个实施方案，A是选自由以下组成的组A-G2：N、CH和C-Br。
根据另一个实施方案，A选自由N组成的组A-G3。
根据另一实施方案，A选自由CH组成的组A-G4。
根据另一个实施方案，A选自由C-Br组成的组A-G5。
R1：
根据一个实施方案，R1选自由以下组成的组R1-G1：H和任选地被1至3个F取代的C1-3-烷基。
根据另一个实施方案，R1选自由以下组成的组R1-G2：H和CH3。
根据另一实施方案，R1选自由H组成的组R1-G3。
根据另一个实施方案，R1选自由CH3组成的组R1-G4。
R2：
根据一个实施方案，R2选自由以下组成的组R2-G1：
含有1至3个N原子作为环成员和任选地1至2个选自C＝O、O、S、S＝O和SO2的环成员的饱和6-12元双环环系，
条件是所述环系在环成员之间不含任何杂原子-杂原子键，
其中所述环系经由N原子与式(I)中的杂芳族环附接，并且
其中所述环系任选地被1至6个F取代，任选地被1个取代基R3取代并且任选地被1或2个CH3基团取代。
根据另一实施方案，R2选自由以下组成的组R2-G2：
含有1至2个N原子作为环成员和任选地1个选自C＝O和O的环成员的饱和6-10元双环环系，
条件是所述环系在环成员之间不含任何杂原子-杂原子键，
其中所述环系经由N原子与式(I)中的杂芳族环附接，并且
其中所述环系任选地被1或2个F取代，任选地被1个取代基R3取代并且任选地被1个CH3基团取代。
根据另一实施方案，R2选自由以下组成的组R2-G3：
Figure BDA0003010445950000131
其中，如星号所指示，所述环系经由N原子与式(I)中的杂芳族环附接。
根据另一实施方案，R2选自由以下组成的组R2-G4：
Figure BDA0003010445950000141
根据另一实施方案，R2选自由以下组成的组R2-G5：
Figure BDA0003010445950000142
根据另一实施方案，R2选自由以下组成的组R2-G6：
Figure BDA0003010445950000143
根据另一实施方案，R2选自由以下组成的组R2-G7：
Figure BDA0003010445950000144
根据另一实施方案，R2选自由以下组成的组R2-G8：
Figure BDA0003010445950000145
根据另一实施方案，R2选自由以下组成的组R2-G9：
Figure BDA0003010445950000146
根据另一实施方案，R2选自由以下组成的组R2-G10：
Figure BDA0003010445950000151
X：
根据一个实施方案，X选自由以下组成的组X-G1：
含有1至3个N原子的5元杂芳基，和
由与6元环稠合的5元环组成并且含有1至3个N原子的9元杂芳基，
其中所述杂芳基经由所述5元环的C原子与式(I)中的羰基附接并且经由所述5元环的不相邻C或N原子与式(I)中的CH2基团附接，并且
其中所述杂芳基任选地被1个取代基R4取代。
根据另一实施方案，X选自由以下组成的组X-G2：
Figure BDA0003010445950000152
其中每个任选地被1个取代基R4取代，并且
其中具有星号和括号的键指示式(I)的基团C＝O和CH2的附接位点。
根据另一个实施方案，X选自由以下组成的组X-G3：
Figure BDA0003010445950000153
其中每个任选地被1个取代基R4取代，并且
其中具有星号和括号的键指示式(I)的基团C＝O和CH2的附接位点。
根据另一个实施方案，X选自由以下组成的组X-G4：
Figure BDA0003010445950000154
其中每个任选地被1个取代基R4取代，并且
其中具有星号和括号的键指示式(I)的基团C＝O和CH2的附接位点。
根据另一个实施方案，X选自由以下组成的组X-G5：
Figure BDA0003010445950000161
其中每个任选地被1个取代基R4取代，并且
其中具有星号和括号的键指示式(I)的基团C＝O和CH2的附接位点。
根据另一个实施方案，X选自由以下组成的组X-G6：
Figure BDA0003010445950000162
其任选地被1个取代基R4取代，并且
其中具有星号和括号的键指示式(I)的基团C＝O和CH2的附接位点。
根据另一个实施方案，X选自由以下组成的组X-G7：
Figure BDA0003010445950000163
其在与-N＝相邻的C原子处任选地被1个取代基R4取代，并且
其中具有星号和括号的键指示式(I)的基团C＝O和CH2的附接位点。
R3：
根据一个实施方案，R3选自由以下组成的组R3-G1：C1-3-烷基、C1-3-亚烷基-OH、C1-3-亚烷基-O-CH3、-CN、-NH2、-OH、和-O-C1-3-烷基。
根据另一个实施方案，R3选自由以下组成的组R3-G2：CH3、CH(CH3)2、CH2-OCH3、NH2、-OH、和-O-CH3。
根据另一个实施方案，R3选自由以下组成的组R3-G3：CH3和CH(CH3)2。
根据另一个实施方案，R3选自由以下组成的组R3-G4：CH2-OCH3和-O-CH3。
根据另一个实施方案，R3选自由以下组成的组R3-G5：NH2和-OH。
R4：
根据一个实施方案，R4选自由以下组成的组R4-G1：F、Cl、Br、C1-3-烷基、C1-3-亚烷基-OH、C1-3-亚烷基-O-CH3、-CN、-NH2、-OH、-O-C1-3-烷基、和含有1个-NH-、-N<、-O-或-S-环成员和任选地另外1或2个＝N-环成员并且任选地被1或2个CH3基团取代的5元杂芳基，其中所述C1-3-烷基任选地被1至3个F取代。
根据一个实施方案，R4选自由以下组成的组R4-G2：F、Cl、Br、C1-3-烷基、C1-3-亚烷基-OH、C1-3-亚烷基-O-CH3、-CN、-NH2、-OH、-O-C1-3-烷基、和含有1个-NH-或-N<环成员和任选地另外1或2个＝N-环成员并且被1或2个CH3基团取代的5元杂芳基，其中所述C1-3-烷基任选地被1至3个F取代。
根据另一个实施方案，R4选自由以下组成的组R4-G3：Cl、Br、C1-3-烷基、C1-3-亚烷基-O-CH3、-NH2、-O-CH3、和含有1个-NH-环成员和任选地另外1或2个＝N-环成员并且任选地被1个CH3基团取代的5元杂芳基，其中所述C1-3-烷基任选地被1至3个F取代。
根据另一个实施方案，R4选自由以下组成的组R4-G4：Cl、Br、CH3、CHF2、CH2-O-CH3、NH2、O-CH3、和N-甲基-吡唑-4-基。
根据另一个实施方案，R4选自由以下组成的组R4-G5：Cl和Br。
根据另一个实施方案，R4选自由以下组成的组R4-G6：CH3和CHF2。
根据另一个实施方案，R4选自由以下组成的组R4-G7：CH2-O-CH3和O-CH3。
根据另一个实施方案，R4选自由NH2组成的组R4-G8。
根据另一个实施方案，R4选自由N-甲基-吡唑-4-基组成的组R4-G9。
R’：
根据一个实施方案，R’选自由以下组成的组R’-G1：F、Cl、C1-3-烷基、C3-4-环烷基、-CN、-O-C1-3-烷基、和-SO2-C1-3-烷基，其中所述C1-3-烷基和-O-C1-3-烷基任选地被1至3个F取代。
根据另一个实施方案，R’选自由以下组成的组R’-G2：F、Cl、C1-3-烷基、CHF2、CF3、环丙基、C1-3-亚烷基-OH、C1-3-亚烷基-O-CH3、-CN、-OH、-O-CH3、-O-CHF2、O-CF3、和-SO2-CH3。
根据另一个实施方案，R’选自由以下组成的组R’-G3：F、Cl、CH3、CHF2、CF3和-CN。
根据另一个实施方案，R’选自由以下组成的组R’-G4：F、Cl和CH3。
根据另一个实施方案，R’选自由F组成的组R’-G5。
根据另一个实施方案，R’选自由Cl组成的组R’-G6。
根据另一个实施方案，R’选自由CH3组成的组R’-G7。
R”：
根据一个实施方案，R”在每次出现时独立地选自由以下组成的组R”-G1：F、Cl和CH3。
根据另一个实施方案，R”选自由F组成的组R”-G2。
根据另一个实施方案，R”选自由Cl组成的组R”-G3。
根据另一个实施方案，R”选自由CH3组成的组R”-G4。
n：
根据一个实施方案，n是选自由0、1和2组成的组n-G1的整数。
根据另一个实施方案，n是选自由0和1组成的组n-G2的整数。
根据另一个实施方案，n是选自由0组成的组n-G3的整数。
根据另一个实施方案，n是选自由1组成的组n-G4的整数。
式(I)的化合物的其他优选子实施方案是如下表1中的实施方案(I-a)至(I-q)所阐述的，其中使用上述取代基定义。例如，R1列和(I-a)行中的条目-G1意指在实施方案(I-a)中，取代基R1选自指定为R1-G1的定义。这同样类似地适用于通式中包含的其他变量。
表1：
Figure BDA0003010445950000181
Figure BDA0003010445950000191
特别优选的化合物(包括它们的互变异构体、其盐、或其任何溶剂化物或水合物)是在实施例和实验数据部分中描述的那些。
制备
根据本发明的化合物及其中间体可以使用本领域技术人员已知且描述于有机合成文献中的合成方法获得，例如使用描述于“Comprehensive Organic Transformations”,第2版,Richard C.Larock,John Wiley&Sons,2010和“March’s Advanced OrganicChemistry”,第7版,Michael B.Smith,John Wiley&Sons,2013中的方法。优选地，化合物类似地通过在下文中更加全面解释(特别是如在实验部分中所述)的制备方法获得。在一些情况下，进行反应方案所采用的顺序可以变化。也可以使用技术人员已知但未在这里详细描述的这些反应的变体。用于制备根据本发明的化合物的通用方法对于正在研究以下方案的技术人员而言将变得清楚。起始化合物是可商购的，或可以通过文献或本文中描述的方法制备或可以以类似或相似方式制备。在进行反应之前，可以使用常规保护基团保护起始化合物中的任何相应官能团。这些保护基团可以在反应顺序内的合适阶段使用技术人员熟悉且描述于文献中(例如描述于“Protecting Groups”,第3版,Philip J.Kocienski,Thieme,2005和“Protective Groups in Organic Synthesis”,第4版,Peter G.M.Wuts,TheodoraW.Greene,John Wiley&Sons,2006中)的方法再次裂解。
方案1
Figure BDA0003010445950000192
方案1：可以通过以下方式来制备式(I’)的化合物：在合适的偶联剂(例如，O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TBTU)、(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻鎓六氟磷酸盐(PyBOP)、碳二亚胺试剂等)和碱(例如，三乙胺、N,N-二异丙基-乙胺、吡啶等)的存在下，在合适的溶剂(例如，DCM、THF、1,4-二噁烷、DMF、N,N-二甲基乙酰胺、和1-甲基-2-吡咯烷酮)中使合适的式(II)的酸(作为游离酸或与诸如Li+、Na+、K+等合适的阳离子的羧酸盐)与合适的式(III)的胺(作为游离胺或诸如盐酸盐、氢溴酸盐等盐)反应以形成酰胺键；方案1中的A、R1、R2、X、R’、R”和n具有如上文所定义的含义。可替代地，将羧酸转化为羧酸氯化物(使用例如在DCM中的草酰氯或亚硫酰氯)，并且照此在合适的碱(例如，三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、吡啶等)的存在下与胺(III)偶联。
方案2
Figure BDA0003010445950000201
R5＝C1-4-烷基、苄基
方案2：取决于R5的性质，优选地通过水解或氢解由相应的酯(IV)制备式(II)的酸，其中A、R1、R2和X具有如上文所定义的含义。优选地通过在环境温度或升高的温度下在水和合适的可混溶溶剂(例如，THF、MeOH、EtOH、1,4-二噁烷、或它们的混合物)的混合物中用氢氧化物盐(诸如NaOH、LiOH或KOH)水解来裂解低级烷基酯，诸如乙酯或甲酯。酸可以作为与金属阳离子的盐或作为游离酸分离。优选地通过在合适的溶剂(例如，DCM、1,4-二噁烷、THF、水或它们的混合物)中用酸(例如，盐酸或TFA)处理来裂解叔丁酯。优选地通过在氢气气氛(优选地1至5巴)下在合适的溶剂(例如，EtOH、MeOH、THF、DCM或EtOAc)中用合适的催化剂(例如，钯碳)氢解来裂解苄基酯。
方案3
Figure BDA0003010445950000211
T1和T2彼此独立地是N、C-H或C-R4；或T1和T2一起形成环状的苯并环吡啶并环或嘧啶并环，所述环任选地被R4单取代
R5＝C1-4烷基或苄基
方案3：可以通过以下方式来制备一些化合物(II’)：采用光延(Mitsunobu)反应的条件(例如，在溶剂(诸如THF、1，4-二噁烷、甲苯等)中将三苯基膦或三正丁基膦与例如偶氮二甲酸二乙酯(DEAD)、偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)或偶氮二甲酸二叔丁酯(DBAD)组合)使醇(V)和酯(VI)反应；方案3中的A、R1、R2和R4具有如上文所定义的含义。醇(V)可以在杂芳族环上携带所希望的残基R2，或代替地携带离去基团以随后引入R2。可替代地，可以通过以下方式获得一些化合物(II)：在升高的温度(20℃至120℃)下在合适的溶剂(例如，ACN)中在路易斯酸或布朗斯特酸(例如，4-甲苯磺酸)的存在下使醇(V)与酯(VI)反应。
方案4
Figure BDA0003010445950000212
T1和T2彼此独立地是N、C-H或C-R4；或T1和T2一起形成环状的苯并环
吡啶并环或嘧啶并环，所述环任选地被R4单取代
R5＝C1-4-烷基或苄基
Hal＝离去基团，诸如Cl、Br、I、OSO2CH3
方案4：也可以通过以下方式制备一些化合物(II’)：在合适的溶剂(例如，THF、DMF等)中在合适的碱(例如，氢化钠、碳酸铯、碳酸钾等)的存在下使化合物(VII)(在杂芳基甲基位置处携带离去基团，诸如Cl、Br或甲磺酰氧基)与酯(VI)反应；方案4中的A、R1、R2和R4具有如上文所定义的含义。化合物(VII)可以在杂芳族环上携带所希望的残基R2，或代替地携带离去基团以随后引入R2引入。
方案5
Figure BDA0003010445950000221
R5＝C14-烷基或苄基
Hal＝离去基团，诸如OH、Cl、Br、I、OSO2CH3
方案5：可以通过以下方式制备一些式(II”)的酯(其中A、R1和R2具有上文所定义的含义)：在DMF或另一种合适的溶剂中将式(VII)的相应烷基卤化物(溴化物或氯化物)或磺酸盐(例如，甲磺酸盐)用叠氮源(例如，叠氮化钠)处理以给出式(VIII)的中间体，然后在铜催化的条件下使所述中间体与合适的丙炔酸酯反应(例如，在水/叔丁醇中，丙炔酸乙酯或丙炔酸叔丁酯与催化硫酸铜和抗坏血酸钠)以给出化合物(II”)。可替代地，可以通过以下方式获得叠氮化物(VIII)：在合适的溶剂(例如，THF或DMF)中在合适的碱(诸如DBU)的存在下从式(V)的醇(在化合物(VII)中的Hal是OH)通过用二苯基磷酰基叠氮化物进行处理。化合物(VII)可以在杂芳族环上携带所希望的残基R2，或代替地携带离去基团以随后引入R2引入。
方案6
Figure BDA0003010445950000222
LG＝离去基团，诸如F、Cl、Br、I
Y＝CO2R5、CHO、CH2OH、
Figure BDA0003010445950000223
R5＝C1-4-烷基或苄基
方案6：可以经由在杂芳族环上的亲核取代反应或过渡金属催化的偶联反应从杂芳族化合物(XIII)和胺(XIV)制备式(XV)的中间体；方案6中的A、X、R1和R2具有上文所定义的含义。用化合物(XIV)中的N亲核取代在(XIII)中的杂芳族环上的离去基团可以在环境温度或升高的温度下在合适的溶剂(例如，THF、1，4-二噁烷、DMF或DMSO)中在合适的碱(例如，氢化钠、碳酸铯、碳酸钾或N，N-二异丙基-乙胺)的存在下进行。过渡金属催化的偶联反应优选与有机化学文献中报道的称为Ullmann或Buchwald/Hartwig偶联反应的程序类似地，在碱的存在下和在合适的溶剂中使用合适的钯或铜盐或其复合物(任选地与另外的配体组合)，来进行。
方案7
Figure BDA0003010445950000231
方案7：式(III)的苄胺可以在如方案7中所描绘的四步合成顺序中从苯甲酸制备；方案7中的R’、R”和n具有上文所定义的含义。在乙酸中将羧酸(IX)用叠氮化物源(例如，叠氮化钠)和甲酸的邻酯(例如，原甲酸三甲酯)处理可以提供四唑(X)。可以通过以下方式制备酰胺(XI)：在合适的溶剂(例如，DCM、THF、1,4-二噁烷、DMF、N,N-二甲基乙酰胺、和1-甲基-2-吡咯烷酮)中在合适的偶联剂(例如，O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TBTU)、(苯并三唑-1-基氧基)三吡啶烷基鏻鎓六氟磷酸盐(PyBOP)、碳二亚胺试剂等)和碱(例如，三乙胺、N,N-二异丙基-乙胺、吡啶等)的存在下使酸(X)与氨源(例如，氨水、在有机溶剂中的氨、或氯化铵)反应。在惰性溶剂(例如，DCM、THF、1,4-二噁烷、或甲苯)中任选地在碱(例如，三乙胺、N,N-二异丙基-乙胺、或吡啶)的存在下使用脱水试剂(例如，Burgess试剂、三氟乙酸酐、或亚硫酰氯)完成酰胺(XI)的脱水以给出腈(XII)。可以在合适的溶剂(例如，醇、THF、EtOAc或它们的混合物)中任选地在氨的存在下在过渡金属(例如，雷尼Ni或钯碳)的存在下，将腈(XII)用氢(优选1至5巴)还原以提供胺(III)。可替代地，在氢化过程中将胺用酰化试剂(例如，二碳酸二叔丁酯)拦截以给出N-酰化形式的胺(III)(例如，叔丁氧羰基化的)，然后可以通过采用适合各自酰基的条件从酰基中释放出所述N-酰化形式的胺(III)(例如，优选将叔丁氧羰基在DCM或二噁烷中用酸(例如，TFA或氯化氢)裂解)。
如下文所提及，可以将式(I)的化合物拆分成它们的对映异构体和/或非对映异构体。因此，例如，可以将顺式/反式混合物拆分成它们的顺式和反式异构体，并且可以将外消旋化合物分离成它们的对映异构体。
可以例如通过色谱法将顺式/反式混合物拆分成其顺式和反式异构体。作为外消旋体出现的式(I)的化合物可以通过本身已知的方法分离成它们的旋光对映体，并且通式I的化合物的非对映异构体混合物可以通过利用它们不同的物理化学性质使用本身已知的方法(例如色谱法和/或分级结晶)拆分成它们的非对映异构体；如果此后获得的化合物是外消旋体，则可以如下文所提及将它们拆分成对映异构体。
外消旋体优选地通过在手性相上的柱色谱法或通过从光学活性溶剂中结晶或通过与光学活性物质(其与外消旋化合物形成盐或衍生物如酯或酰胺)的反应来进行拆分。对于碱性化合物，可以与对映异构体纯的酸形成盐，并且对于酸性化合物，可以与对映异构体纯的碱形成盐。与对映异构体纯的辅助化合物(例如酸、它们的活化衍生物或醇)形成非对映异构体衍生物。通过利用它们不同的物理化学性质，例如溶解性差异，可以实现对如此获得的盐或衍生物的非对映异构体混合物的分离；通过合适的试剂的作用，游离对映体可以从纯的非对映异构体盐或衍生物中释放出来。通常用于这样的目的的光学活性酸以及可用作辅助残基的光学活性醇是本领域技术人员已知的。
如上文所提及，可以将式(I)的化合物转化成盐，特别是针对药物用途转化成药学上可接受的盐。如本文所用，“药学上可接受的盐”是指所公开的化合物的衍生物，其中母体化合物通过制备其酸盐或碱盐而被修饰。
有利地，还可使用以下实施例中描述的方法获得根据本发明的化合物，所述方法也可以与技术人员根据文献已知的方法组合用于此目的。
药理学活性
可以使用以下测定来证明本发明的化合物的活性：
生物学方法
在1％(v/v)DMSO的存在下在测定缓冲液(100mM Tris，150mM NaCL，用HCl调节至7.8的pH，并且含有0.1％(w/v)BSA和0.05％(v/v)Tween 20)中使用以下生物化学测定法确定式(I)的化合物抑制血浆激肽释放酶(PKK)、因子XIIa(FXIIa)、因子XIa(FXIa)、因子Xa(FXa)、因子IIa(α-凝血酶；FIIa)、纤溶酶、胰蛋白酶、组织激肽释放酶1(TK1)、因子VIIa(FVIIa)、或与组织因子、磷脂和CaCl2复合的FVIIa(FVIIa/TF/PL/CaCl2)的能力：
使用终点测定法评估PKK的抑制
将人PKK(0,01U/mL；Enzyme Research Laboratories)或大鼠PKK(0.625nM；内部生产)与0.10μM荧光底物H-Pro-Phe-Arg-AMC(来自Bachem的I1295)和在测定缓冲液中各种浓度的测试化合物一起在室温下孵育1h。随后，将PPACK II(Calbiochem)作为停止溶液添加，以达到1μM的最终浓度，并且使用Envision读板仪(PerkinElmer)测量荧光，其中激发波长设置为355nm并且发射波长设置为460nm。
根据本发明的化合物的IC50值如下表所示。化合物的编号对应于实验部分中的实施例的编号。
Figure BDA0003010445950000251
高岭土激活的人PPP中的PKK的抑制的评估
将用柠檬酸钠抗凝的从人全血中获得的贫血小板血浆(PPP)与在测试缓冲液中多种浓度的测试化合物连同25、75、250或750μg/mL高岭土一起在37℃下孵育20min，使得对于所使用的每种高岭土剂量，获得对于测试化合物的浓度响应。之后，将0.25mM荧光底物H-Pro-Phe-Arg-AMC(来自Bachem的I1295)添加到混合物中，并且使用Spectramax M5(Molecular Devices)用以下设置以每2分钟的动力学间隔持续12min进行测量：激发波长为350nm，并且发射波长为450nm。pIC50和pIC90值是从用GraphPad prism 7.0拟合的4个x/y曲线图(x＝log M，化合物；y＝δRFU/min)获得的(等式：log(激动剂)与响应之间的关系--找到EC任何；使用全局拟合程序拟合针对测试化合物所获得的四个浓度响应曲线(每个使用不同的高岭土剂量而获得)，产生共用pIC50或pIC90值)。
根据本发明的化合物的IC90值如下表所示。化合物的编号对应于实验部分中的实施例的编号。
Figure BDA0003010445950000261
PKK的抑制的评估(Ki)
将人PKK(1,78nM或0,025U/mL；Enzyme Research Laboratories)与0.25mM荧光底物H-Pro-Phe-Arg-AMC(来自Bachem的I1295)和在测定缓冲液中多种浓度的测试化合物一起在24℃下孵育。使用Spectramax M5(Molecular Devices)用以下设置以每2分钟的动力学间隔在16min内进行测量：激发波长为350nm，并且发射波长为450nm。
根据本发明的化合物的Ki值如下表所示。化合物的编号对应于实验部分中的实施例的编号。
Figure BDA0003010445950000262
Figure BDA0003010445950000271
FXIIa的抑制的评估(Ki)
将人FXIIa(47.5nM或1.1U/mL；Enzyme Research Laboratories)与0.5mM显色底物S2302(Chromogenix)和在测定缓冲液中多种浓度的测试化合物一起在24℃下孵育。使用Spectramax M5(Molecular Devices)测量在405nm处的吸光度，以每2分钟的动力学间隔在16min内进行测量。
FXIa的抑制的评估(Ki)
将人FXIa(0.5nM或0,016U/mL；Enzyme Research Laboratories)与0.25mM荧光底物Boc-Glu(OBzl)-Ala-Arg-AMC·HCl(来自Bachem的I1575)和在测定缓冲液中多种浓度的测试化合物一起在24℃下孵育。使用Spectramax M5(Molecular Devices)用以下设置以每2分钟的动力学间隔在16min内进行测量：激发波长为350nm，并且发射波长为450nm。
FXa的抑制的评估(Ki)
将人FXa(0.86nM或0.01U/mL；Enzyme Research Laboratories)与0.5mM显色底物S2765(Chromogenix)和在测定缓冲液中多种浓度的测试化合物一起在24℃下孵育。使用Spectramax M5(Molecular Devices)测量在405nm处的吸光度，以每2分钟的动力学间隔在16min内进行测量。
FIIa的抑制的评估(Ki)
将人FIIa(44.6nM或5U/mL；Enzyme Research Laboratories)与0.5mM显色底物S2238(Chromogenix)和在测定缓冲液中多种浓度的测试化合物一起在24℃下孵育。使用Spectramax M5(Molecular Devices)测量在405nm处的吸光度，以每2分钟的动力学间隔在16min内进行测量。
纤溶酶的抑制的评估(Ki)
将人纤溶酶(64.1nM或0.0275U/mL；Enzyme Research Laboratories)与0.3mM显色底物S2251(Chromogenix)和在测定缓冲液中多种浓度的测试化合物一起在24℃下孵育。使用Spectramax M5(Molecular Devices)测量在405nm处的吸光度，以每2分钟的动力学间隔在16min内进行测量。
胰蛋白酶的抑制的评估(Ki)
将人胰蛋白酶(4.54nM或250U/mL；Calbiochem)与0.5mM显色底物S2222(Chromogenix)和在测定缓冲液中多种浓度的测试化合物一起在24℃下孵育。使用Spectramax M5(Molecular Devices)测量在405nm处的吸光度，以每2分钟的动力学间隔在16min内进行测量。
TK1的抑制的评估(Ki)
在测定前，将人TK1(R&D Systems)通过在37℃下与人胰蛋白酶(Calbiochem)以1:10,000的比率一起孵育15min进行激活。对于测定TK1抑制活性，将激活的TK1(31.25nM或1U/mL)与0.1mM荧光底物H-Pro-Phe-Arg-AMC(来自Bachem的I1295)和在测定缓冲液中多种浓度的测试化合物一起在24℃下孵育。使用Spectramax M5(Molecular Devices)用以下设置以每2分钟的动力学间隔在16min内进行测量：激发波长为350nm，并且发射波长为450nm。
FVIIa的抑制的评估(Ki)
将人FVIIa(0.86nM或0.01U/mL；Enzyme Research Laboratories)与1.5mM显色
Figure BDA0003010445950000281
FVIIa(Loxo)和在测定缓冲液中多种浓度的测试化合物一起在24℃下孵育。使用Spectramax M5(Molecular Devices)测量在405nm处的吸光度，以每2分钟的动力学间隔在16min内进行测量。
FVIIa/TF/PL/CaCl2的抑制的评估(Ki)
将人FVIIa(300nM或585U/mL；Enzyme Research Laboratories)连同10mM CaCl2*2H2O和13.3％(v/v)
Figure BDA0003010445950000282
(Siemens；OQUMI94E0002(5534)(其含有重组人组织因子合成磷脂(促凝血酶原激酶)与1.5mM显色
Figure BDA0003010445950000283
FVIIa(Loxo)和在测定缓冲液中多种浓度的测试化合物一起在24℃下孵育。使用Spectramax M5(Molecular Devices)测量在405nm处的吸光度，以每2分钟的动力学间隔在16min内进行测量。
pIC50和pKi值的计算
绘制在测定开始后对于时间间隔从2至12min的平均V最大值(分别对于使用显色底物的测定表示为ΔOD/min或对于使用荧光底物的测定表示为ΔRFU/min)相对于所评估的抑制剂化合物的摩尔浓度的对数的曲线图。然后使用GraphPad Prism(版本6；GraphPadSoftware,Inc.)使用四参数拟合程序拟合pIC50值。使用下式通过针对所使用的底物的各自KM值(所使用的底物的KM值参见表A)对IC50值进行校正来获得各自的Ki值：
Figure BDA0003010445950000291
其中IC50以mol/L为单位，并且KM值以mmol/L为单位。
表A：针对酶测定中所使用的底物而获得的KM值。
Figure BDA0003010445950000292
渗透性评估
将Caco-2细胞(1-2x 105个细胞/1cm2面积)接种于过滤器插入物(Costartranswell聚碳酸酯或PET过滤器，0.4μm孔径)上，并且培养(DMEM)10至25d。
将化合物溶解于适当的溶剂(如DMSO，1-20mM储备溶液)中。将储备溶液用HTP-4缓冲液(128.13mM NaCl、5.36mM KCl、1mM MgSO4、1.8mM CaCl2、4.17mM NaHCO3、1.19mMNa2HPO4 x 7H2O、0.41m M NaH2PO4xH2O、15mM HEPES、20mM葡萄糖，pH 7.2)稀释以制备运输溶液(0.1-300μM化合物，最终DMSO<＝0.5％)。将运输溶液(TL)分别应用于顶端或基底侧供体侧以测量A-B或B-A渗透性(3个过滤器重复)。接收器侧含有补充有2％BSA的HTP-4缓冲液。在实验开始和结束时从供体收集样品，并且以不同的时间间隔在长达2h内还从接收器侧收集样品用于通过HPLC-MS/MS或闪烁计数进行浓度测量。将采样的接收器体积用新鲜的接收器溶液替代。
在人或大鼠肝微粒体中的代谢稳定性的评估
用合并的人或大鼠肝微粒体在37℃下测定测试化合物的代谢降解。100μL的最终孵育体积/时间点含有TRIS缓冲液pH 7.6(在室温下)(0.1M)、氯化镁(5mM)、微粒体蛋白(1mg/mL)和最终浓度为1μM的测试化合物。
在37℃下的短的预孵育期后，通过添加还原形式的β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH，1mM)使反应开始，并且通过在不同时间点后将等分试样转移到溶剂中使反应终止。此外，在没有NADPH的孵育中监测NADPH非依赖性降解，并且在最后的时间点终止。通过离心(10000g，5min)将淬灭的孵育物沉淀。通过LC-MS/MS测定上清液的等分试样的母体化合物量。通过浓度-时间特征曲线的半对数曲线图的斜率确定半衰期(t1/2INVITRO)。
在人或大鼠肝细胞中的代谢稳定性的评估
在肝细胞悬浮液中测定测试化合物的代谢降解。将肝细胞(典型地是冷冻保存的)在含有5％物种血清的适当缓冲系统(例如，杜尔贝科改良伊格尔培养基加3.5μg胰高血糖素/500mL、2.5mg胰岛素/500mL和3.75mg/500mL氢化可的松)中孵育。
在培养箱(37℃，10％CO2)中预孵育(典型地)30min后，将5μL测试化合物溶液(80μM；从在DMSO储备溶液中2mM，用培养基稀释1:25)添加到395μL肝细胞悬浮液中(细胞密度在0.25-5Mio细胞/mL范围内，典型地为1Mio细胞/mL；测试化合物的最终浓度为1μM，最终DMSO浓度为0.05％)。
将细胞孵育6h(培养箱，定轨摇床)，并且在0、0.5、1、2、4和6h时采集样品(25μL)。将样品转移到ACN中并且通过离心(5min)沉淀。将上清液转移到新的96深孔板上，在氮气下蒸发并且重新悬浮。
通过HPLC-MS/MS分析母体化合物的下降，CLint计算如下：CL_INTRINSIC＝剂量/AUC＝(C0/CD)/(AUD+clast/k)x 1000/60。C0：孵育中的初始浓度[μM]，CD：活细胞的细胞密度[10e6个细胞/mL]，AUD：数据下面积[μM x h]，clast：最后数据点的浓度[μM]，k：母体下降的回归线的斜率[h-1]。
血浆蛋白结合的评估
这种平衡透析(ED)技术用于确定测试化合物与血浆蛋白的近似体外部分结合。使用Dianorm特氟隆透析池(micro 0.2)。每个池由被具有5kDa截留分子量的超薄半透膜分开的供体室和受体室组成。以1mM在DMSO中制备每种测试化合物的储备溶液，并且稀释至1.0μM的最终浓度。在来自雄性和雌性供体的合并人或大鼠血浆(具有NaEDTA)中制备随后的透析溶液。将200μL透析缓冲液(100mM磷酸钾，pH 7.4)的等分试样分配到缓冲液室中。将200μL测试化合物透析溶液的等分试样分配到血浆室中。在37℃下在旋转下进行孵育2h。
在透析阶段结束时，将透析液转移到反应管中。缓冲液部分的管含有0.2mL ACN/水(80/20)。将25μL血浆透析物的等分试样转移到深孔板中，并且与25μL ACN/水(80/20)、25μL缓冲液、25μL校准溶液和25μL内标溶液混合。通过添加200μL ACN完成蛋白质沉淀。
将50μL缓冲透析物的等分试样转移到深孔板中，并且与25μL空白血浆、25μL内标溶液和200μL ACN混合。
在HPLC-MS/MS系统上测量样品，并且使用分析软件进行评估。
用下式计算结合百分比：％结合＝(血浆浓度-缓冲液浓度/血浆浓度)X 100
溶解度评估
通过将溶解在缓冲液中的量与在ACN/水(1/1)溶液中的量进行比较来确定测试化合物的水溶解度。从10mM DMSO储备溶液开始，将等分试样分别用ACN/水(1/1)或缓冲液稀释。摇动24h后，将溶液过滤并且通过LC-UV分析。将溶解在缓冲液中的量与溶解在ACN溶液中的量进行比较。
在2.5％的DMSO浓度下，溶解度通常将被测量为从0.001至0.125mg/mL。如果超过90％的化合物溶解在缓冲液中，则所述值用“>”标记。
在啮齿动物中的药代动力学特征的评估
向饲喂的大鼠静脉内施用或向禁食的大鼠口服施用测试化合物。在应用测试化合物后的几个时间点采集血液样品，进行抗凝和离心。
在血浆样品中定量分析物-施用的化合物和/或代谢物-的浓度。
使用非隔室方法计算PK参数。将AUC和Cmax归一化至1μmol/kg的剂量。
治疗方法
在本发明的另一方面，发现式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以用于治疗哺乳动物的由不需要的PKK活性介导的疾病或病症。
由不需要的PKK活性介导的疾病和病症包括糖尿病并发症、糖尿病性视网膜病变、增殖性和非增殖性视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿(DME)、临床显著性黄斑水肿(CSME)、黄斑囊样水肿(CME)、白内障摘除术后的CME、冷冻疗法诱导的CME、葡萄膜炎诱导的CME、眼内炎、血管阻塞(例如视网膜中央静脉阻塞、分支视网膜静脉阻塞或半视网膜静脉阻塞)后的CME、视网膜水肿、与糖尿病性视网膜病变中白内障手术相关的并发症、高血压性视网膜病变、视网膜创伤、干性和湿性年龄相关黄斑变性(AMD)、息肉状脉络膜血管病变(PCV)、脉络膜血管新生(CNV；例如非渗出性脉络膜血管新生)、遗传性血管性水肿和急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。
因此，本发明的化合物和药物组合物特别适用于治疗眼部疾病，包括糖尿病性视网膜病变、增殖性和非增殖性视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿(DME)、视网膜静脉阻塞、年龄相关黄斑变性(AMD)、息肉状脉络膜血管病变(PCV)和脉络膜血管新生(CNV；例如非渗出性脉络膜血管新生)。
此外，根据本发明的化合物和药物组合物特别适用于治疗水肿，诸如遗传性血管性水肿。
特别地，根据本发明的化合物和药物组合物适用于治疗糖尿病性视网膜病变、增殖性和非增殖性视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿(DME)、年龄相关黄斑变性(AMD)、息肉状脉络膜血管病变(PCV)、脉络膜血管新生(CNV)和遗传性血管性水肿。
根据本发明的化合物和药物组合物最特别适用于治疗糖尿病性黄斑水肿(DME)、湿性年龄相关黄斑变性(AMD)、非渗出性脉络膜血管新生(CNV)和遗传性血管性水肿。
每天可应用的式(I)的化合物的剂量范围通常是从0.01至10mg/kg体重。
当然，实际治疗有效量或治疗剂量将取决于本领域技术人员已知的因素，诸如患者的年龄和体重、施用途径和疾病的严重程度。在任一种情况下，均应根据患者的独特病症以允许递送治疗有效量的剂量及方式施用所述化合物或组合物。
可以通过口服、玻璃体内、经皮、吸入、肠胃外或舌下途径施用根据本发明的化合物、组合物，包括与一种或多种另外的治疗剂的任何组合。在可能的施用方法中，口服或静脉内施用是优选的。在玻璃体内注射的情况下，优选的剂量不应超过5mg/眼。
因此，在其他方面，本发明提供了式(I)的新化合物(包括其药学上可接受的盐)，所述化合物抑制血浆激肽释放酶并且具有用于疗法(即用作药剂)的合适的药理学和药代动力学特性。
在其他方面，本发明提供了式(I)的新化合物(包括其药学上可接受的盐)，其用于在治疗疾病或病症的方法中使用，所述疾病或病症可以通过抑制血浆激肽释放酶以有益的方式受影响。
在其他方面，本发明提供了式(I)的新化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗眼科适应症(诸如糖尿病性视网膜病变、增殖性和非增殖性视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿(DME)、年龄相关黄斑变性(AMD)、息肉状脉络膜血管病变(PCV)和脉络膜血管新生(CNV))以及水肿相关疾病(诸如遗传性血管性水肿)。
在另一方面，本发明提供了式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗其中抑制血浆激肽释放酶是有益的疾病或病症的药剂中的用途。
在其他方面，本发明提供了式(I)的化合物或其药学上可接受的盐在制造用于治疗眼科适应症和水肿相关疾病的药剂中的用途，所述眼科适应症诸如糖尿病性视网膜病变、增殖性和非增殖性视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿(DME)、年龄相关黄斑变性(AMD)、息肉状脉络膜血管病变(PCV)和脉络膜血管新生(CNV)，所述水肿相关疾病诸如遗传性血管性水肿。
因此，本发明涉及作为药剂的式(I)的化合物。
此外，本发明涉及式(I)的化合物在用于治疗患者(优选地人)的由不需要的血浆激肽释放酶活性介导的疾病或病症的方法中的用途。
此外，本发明涉及式(I)的化合物在用于治疗眼科适应症和与肿相关疾病的方法中的用途，所述眼科适应症诸如糖尿病性视网膜病变、增殖性和非增殖性视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿(DME)、年龄相关黄斑变性(AMD)、息肉状脉络膜血管病变(PCV)和脉络膜血管新生(CNV)，所述水肿相关疾病诸如遗传性血管性水肿。
在又另一方面，本发明涉及一种用于治疗哺乳动物的可能受抑制激肽释放酶影响的疾病或病症的方法，所述方法包括向需要这样的治疗的患者(优选地人)施用治疗有效量的本发明化合物或药物组合物的步骤。
在其他方面，本发明提供了一种用于治疗受试者的可以通过抑制血浆激肽释放酶以有益方式受影响的疾病或病症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
在其他方面，本发明提供了一种用于治疗患者的眼科适应症和水肿相关疾病的方法，所述眼科适应症诸如糖尿病性视网膜病变、增殖性和非增殖性视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿(DME)、年龄相关黄斑变性(AMD)、息肉状脉络膜血管病变(PCV)和脉络膜血管新生(CNV)，所述水肿相关疾病诸如遗传性血管性水肿，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
根据本发明的另一方面，提供了一种用于治疗有需要的患者的糖尿病并发症，特别是与糖尿病性视网膜病变和糖尿病性黄斑水肿相关的视网膜血管通透性的方法，所述方法的特征在于向所述患者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐。
药物组合物
在本发明的另一方面，描述了本发明的化合物或其药学上可接受的盐可以用作药物组合物中的活性成分。
用于施用本发明化合物(任选地与一种或多种其他治疗剂组合)的合适制剂对于本领域普通技术人员而言将是显而易见的，并且包括例如片剂、丸剂、胶囊、栓剂、锭剂、糖锭剂、溶液、糖浆、酏剂、小袋、注射剂、吸入剂和粉末等。优选口服制剂，特别是固体形式，诸如例如片剂或胶囊。对于玻璃体内注射，优选溶液。一种或多种药物活性化合物的含量有利地在整个组合物的从0.1wt.-％至90wt.-％、例如从1wt.-％至70wt.-％的范围内。
合适的片剂可以例如通过将根据式(I)的一种或多种化合物与已知的赋形剂(例如惰性稀释剂、载体、崩解剂、佐剂、表面活性剂、粘合剂和/或润滑剂)混合而获得。片剂也可以由若干层组成。技术人员根据其专业知识将熟知适用于所希望的制剂的特定赋形剂、载体和/或稀释剂。优选的那些是适用于所希望的特定配制品和施用方法的那些。根据本发明的制剂或配制品可以使用技术人员所熟悉的本身已知的方法制备，例如像通过将根据本发明的至少一种式(I)的化合物或这样的化合物的药学上可接受的盐与一种或多种赋形剂、载体和/或稀释剂混合或组合。
因此，根据本发明的另一方面，提供了药物组合物，其包含一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，任选地连同一种或多种惰性载体和/或稀释剂。
同样，提供了包含一种或多种上述化合物或其药学上可接受的盐，任选地连同一种或多种惰性载体和/或稀释剂的药物组合物，其用于在治疗可能受PKK抑制影响的疾病或病症的方法中使用。
特别地，本发明提供了根据本发明的药物组合物，其用于在治疗眼科适应症和水肿相关疾病的方法中使用，所述眼科适应症诸如糖尿病性视网膜病变、增殖性和非增殖性视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿(DME)、年龄相关黄斑变性(AMD)、息肉状脉络膜血管病变(PCV)和脉络膜血管新生(CNV)，所述水肿相关疾病诸如遗传性血管性水肿。
此外，本发明涉及根据本发明的药物组合物，其用于治疗患者(优选地人)的由不需要的PKK活性介导的疾病或病症的用途。
同样，本发明涉及根据本发明的药物组合物，其用于治疗患者(优选地人)的可能受PKK抑制影响的疾病或病症的用途。
根据另一个实施方案，提供了一种药物组合物，其包含一种或多种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种另外的治疗剂，任选地连同一种或多种惰性载体和/或稀释剂。优选地，此组合物包含一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种另外的治疗剂。
组合疗法
本发明的化合物可以进一步与一种或多种、优选地一种另外的治疗剂组合。根据一个实施方案，另外的治疗剂选自可用于治疗上文所述疾病或病症(特别是与代谢疾病或病症相关的，例如像糖尿病、肥胖症、糖尿病并发症、高血压、高脂血症)的治疗剂或可用于治疗眼部疾病的治疗剂。适用于此类组合的另外的治疗剂特别包括例如关于所提及适应症之一增强一种或多种活性物质的治疗作用和/或允许一种或多种活性物质的剂量减少的那些。
因此本发明的化合物可以与一种或多种另外的治疗剂组合，所述一种或多种另外的治疗剂选自抗糖尿病剂、用于治疗超重和/或肥胖症的药剂、用于治疗高血压、心力衰竭和/或动脉粥样硬化的药剂和用于治疗眼部疾病的药剂。
抗糖尿病剂是例如二甲双胍、磺酰基脲、那格列奈、瑞格列奈、噻唑烷二酮、PPAR-(α、γ或α/γ)激动剂或调节剂、α-葡萄糖苷酶抑制剂、DPPIV抑制剂、SGLT2-抑制剂、胰岛素及胰岛素类似物、GLP-1及GLP-1类似物或淀粉素及淀粉素类似物、塞克洛瑟(cycloset)、11β-HSD抑制剂。其他合适的组合配偶体是蛋白质酪氨酸磷酸酶1的抑制剂；影响肝脏中葡萄糖产生失调的物质，例如像葡萄糖-6-磷酸酶或果糖-1,6-二磷酸酶、糖原磷酸化酶的抑制剂，胰高血糖素受体拮抗剂以及磷烯醇丙酮酸羧激酶、糖原合成酶激酶或丙酮酸脱氢酶的抑制剂，α2-拮抗剂，CCR-2拮抗剂或葡糖激酶激活剂。一种或多种降脂质剂也适合作为组合配偶体，例如像HMG-CoA-还原酶抑制剂、纤维酸酯、烟酸及其衍生物、PPAR-(α、γ或α/γ)激动剂或调节剂、PPAR-δ激动剂、ACAT抑制剂或胆固醇吸收抑制剂(诸如胆汁酸结合物质，诸如回肠胆汁酸转运抑制剂)、MTP抑制剂或HDL升高化合物，诸如CETP抑制剂或ABC1调节剂。
用于治疗超重和/或肥胖症的治疗剂是例如类大麻素1受体拮抗剂、MCH-1受体拮抗剂、MC4受体激动剂、NPY5或NPY2拮抗剂、β3-激动剂、瘦素或瘦素模拟物、5HT2c受体激动剂。
用于治疗高血压、慢性心力衰竭和/或动脉粥样硬化的治疗剂是例如A-II拮抗剂或ACE抑制剂、ECE抑制剂、利尿剂、β-阻断剂、Ca-拮抗剂、中枢作用性抗高血压药、α-2-肾上腺素能受体拮抗剂、中性肽链内切酶抑制剂、血小板聚集抑制剂及其他药剂或者它们的组合是适合的。血管收缩素II受体拮抗剂优选用于治疗或预防高血压及糖尿病并发症，所述拮抗剂通常与利尿剂(诸如氢氯噻嗪)组合。
用于治疗眼部疾病的治疗剂可以包括例如玻璃体内施用的皮质类固醇、玻璃体内施用的抗VEGF疗法、抗Ang2抑制剂、双重抗VEGF/抗Ang2抑制剂、抗PDGF、双重抗VEGF/抗PDGF、VAP-1(AOC3)抑制剂、补体抑制剂(例如补体因子3、5、B和D抑制剂)，缓激肽受体1拮抗剂、CCR-2拮抗剂。
用于眼部疾病的另外的治疗可以包括激光凝固疗法。
上文所提及的组合配偶体的剂量通常是正常推荐的最低剂量的1/5至正常推荐剂量的1/1。
优选地，本发明的化合物和/或包含本发明化合物(任选与一种或多种另外的治疗剂组合)的药物组合物与运动和/或饮食结合施用。
因此，在另一方面，本发明涉及根据本发明的化合物与上文和下文所述的一种或多种另外的治疗剂的组合用于治疗可能受不需要的血浆激肽释放酶活性影响或由不需要的血浆激肽释放酶活性介导的疾病或病症(特别是如上文和下文所述的疾病或病症)的用途。
在又一方面，本发明涉及一种用于治疗患者的可能受血浆激肽释放酶抑制影响的疾病或病症的方法，所述方法包括向需要这样的治疗的所述患者施用治疗有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐与治疗有效量的一种或多种另外的治疗剂的组合的步骤。
在又一方面，本发明涉及式(I)的化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种另外的治疗剂的组合用于治疗有需要的患者的可能受血浆激肽释放酶的抑制影响的疾病或病症的用途。
在又另一方面，本发明涉及一种用于治疗患者的由不需要的血浆激肽释放酶活性介导的疾病或病症的方法，所述方法包括向需要这样的治疗的患者(优选地人)施用治疗有效量的本发明的化合物与治疗有效量的上文和下文所述的一种或多种另外的治疗剂的组合的步骤。
根据本发明的化合物与另外的治疗剂组合的使用可以同时地或以交错的时间进行。
根据本发明的化合物和一种或多种另外的治疗剂可以两者一起存在于一种配制品中，例如片剂或胶囊，或分别存在于两种相同或不同配制品中，例如作为所谓的试剂盒。
因此，在另一方面，本发明涉及药物组合物，其包含根据本发明的化合物和上文和下文所述的一种或多种另外的治疗剂、任选地连同一种或多种惰性载体和/或稀释剂。
根据以下更详细的实施例(其通过举例的方式阐明了本发明的原理)，本发明的其他特征和优点将变得清楚。
实施例和实验数据
以下实施例仅用于说明本发明的目的，并且不旨在以任何方式限制本发明的范围。
术语“环境温度”和“室温”可互换使用，并且指定约20℃(例如15℃至25℃)的温度。
通常，已经获得了所制备化合物的1H-NMR和/或质谱。
除非另外规定，否则含有手性中心的化合物具有所描绘的立体化学。已经通过使用立体化学已知的手性起始材料、通过立体化学已知的立体选择性合成或通过生物活性进行了立体化学的分配。
分析方法
Figure BDA0003010445950000381
Figure BDA0003010445950000382
Figure BDA0003010445950000391
Figure BDA0003010445950000392
Figure BDA0003010445950000393
Figure BDA0003010445950000394
Figure BDA0003010445950000401
Figure BDA0003010445950000402
Figure BDA0003010445950000403
中间体的合成
中间体1
(2-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲醇
Figure BDA0003010445950000411
步骤1：2-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-甲酸乙酯
将2-氯-4-甲基嘧啶-5-甲酸乙酯(5.0g)、6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己烷盐酸盐(4.26g)和K2CO3(10.3g)悬浮于DMF(50mL)中，并且加热至90℃持续1h。将混合物冷却，在水与EtOAc之间分配并且分离各相。将有机相用盐水洗涤。干燥(MgSO4)后，在真空中蒸发溶剂以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝1.065min；质谱(ESI+)：m/z＝284[M+H]+。
步骤2：(2-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲醇
向2-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-甲酸乙酯(7.15g)在THF(20mL)中的溶液中添加LiBH4(16.62mL；在THF中的2M溶液)。将混合物搅拌20min，添加MeOH(2.0mL)并且在室温下继续搅拌16h。冷却至0℃后，将混合物缓慢地用水处理并且搅拌10min。然后将混合物用EtOAc萃取并且在真空中蒸发溶剂以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.64min；质谱(ESI+)：m/z＝242[M+H]+。
中间体2
(2-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲醇
Figure BDA0003010445950000412
步骤1：2-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-甲酸乙酯
将2-氯-4-甲基嘧啶-5-甲酸乙酯(1.0g)、6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己烷盐酸盐(0.66g)和K2CO3(2.1g)悬浮于DMF(15mL)中，并且加热至100℃持续1h。将混合物冷却，在水与EtOAc之间分配并且分离各相。将有机相用盐水洗涤。干燥(MgSO4)后，在真空中蒸发溶剂以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝1.04min；质谱(ESI+)：m/z＝248[M+H]+。
步骤2：(2-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲醇
将2-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-4-甲基嘧啶-5-甲酸乙酯(1.2g)在THF(10mL)中的溶液在冰/丙酮浴中冷却并且添加二异丁基氢化铝(10mL；在THF中的1M溶液)。将混合物在冷却下搅拌1h。将混合物缓慢地用水(0.75mL)和4M NaOH(0.75mL)处理，搅拌30min并且通过硅藻土垫过滤。干燥(MgSO4)后，将混合物在真空中浓缩并且将残余物经硅胶(EtOAc/MeOH100:0→50:50)进行色谱分离。在真空中蒸发溶剂以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.58min；质谱(ESI+)：m/z＝206[M+H]+。
中间体3
(2-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲醇
Figure BDA0003010445950000421
与中间体2类似地制备中间体3。
起始材料步骤1：在DMF(10mL)中的2-氯-4-甲基嘧啶-5-甲酸乙酯(1g)、5-氮杂螺[2.3]己烷三氟乙酸盐(1.1g)、K2CO3(1.45g)。
LC(方法1)：tR＝1.00min；质谱(ESI+)：m/z＝248[M+H]+。
起始材料步骤2：在5mL THF中的2-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-4-甲基嘧啶-5-甲酸乙酯(0.659g)、二异丁基氢化铝(7mL，在THF中的1M溶液)。
LC(方法1)：tR＝0.60min；质谱(ESI+)：m/z＝206[M+H]+。
中间体4
(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}吡啶-3-基)甲醇
Figure BDA0003010445950000422
步骤1：6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}吡啶-3-甲酸甲酯
将6-氯吡啶-3-甲酸甲酯(3.0g)、3-氮杂双环[3.1.0]己烷盐酸盐(2.93g)和K2CO3(7.25g)悬浮于DMF(20mL)中，并且加热至90℃持续16h。将混合物冷却，倒入水中，搅拌1h，并且将沉淀物滤除，并且干燥以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.68min；质谱(ESI+)：m/z＝219[M+H]+。
步骤2：(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}吡啶-3-基)甲醇
向6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}吡啶-3-甲酸甲酯(3.3g)在THF(25mL)中的溶液中添加LiBH4(8.32mL；在THF中的2M溶液)和MeOH(1.22mL)。将混合物在65℃下搅拌16h并且在真空中浓缩。将水添加到残余物中，用DCM萃取并且在真空中浓缩。将粗品经硅胶(EtOAc/MeOH 65:35→30:70)进行色谱分离。在真空中蒸发溶剂以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.52min；质谱(ESI+)：m/z＝190[M+H]+。
中间体5
(5-溴-6-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}吡啶-3-基)甲醇
Figure BDA0003010445950000431
步骤1：5-溴-6-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}吡啶-3-甲酸甲酯
将5-溴-6-氯吡啶-3-甲酸甲酯(2.0g)、6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己烷盐酸盐(1.36g)和K2CO3(3.3g)悬浮于DMF(30mL)中并且加热至50℃持续2h。将混合物冷却，倒入水中，搅拌1h，并且将沉淀物滤除，并且干燥以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝1.13min；质谱(ESI+)：m/z＝333[M+H]+。
步骤2：(5-溴-6-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}吡啶-3-基)甲醇
向5-溴-6-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}吡啶-3-甲酸甲酯(2.4g)在THF(30mL)中的溶液中添加LiBH4(10.8mL；在THF中的2M溶液)和MeOH(1.74mL)。将混合物在室温下搅拌1h并且在50℃下搅拌3h。冷却至室温后，添加K2CO3溶液(在水中的10％)并且在真空中浓缩。将EtOAc添加到残余物中，用水洗涤，用MgSO4干燥并且在真空中浓缩以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.84min；质谱(ESI+)：m/z＝305[M+H]+。
中间体6
(1R,5S,6R)-6-(甲氧基甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷
Figure BDA0003010445950000441
步骤1：(1R,5S,6S)-6-(羟基甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯
将[(1R,5S,6S)-3-苄基-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基]甲醇(1.39g)溶解于EtOH(50mL)中，添加二碳酸二叔丁酯(1.55g)和Pd/C(10％；730mg)并且将混合物在50psi氢气压力下摇动6h。将混合物过滤并且在真空中浓缩以给出标题化合物。
LC(方法8)：tR＝0.82min；质谱(ESI+)：m/z＝214[M+H]+。
步骤2：(1R,5S,6S)-6-(甲氧基甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯
将(1R,5S,6S)-6-(羟基甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(300mg)溶解于DMF(3mL)中，添加氢化钠(60％；61mg)，在室温下搅拌30min，添加碘化甲烷(在叔丁基甲基醚中的2M溶液；2.1mL)并且在室温下搅拌3d。将氯化铵溶液添加到混合物中，用EtOAc萃取，将有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并且在真空中浓缩以给出标题化合物。
质谱(ESI+)：m/z＝228[M+H]+。
步骤3：(1R,5S,6R)-6-(甲氧基甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷
将(1R,5S,6S)-6-(甲氧基甲基)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-甲酸叔丁酯(531mg)溶解于DCM(4mL)中，添加TFA(1mL)，在室温下搅拌2h并且在真空中浓缩以给出标题化合物。
质谱(ESI+)：m/z＝128[M+H]+。
中间体7
[5-氯-4-氟-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯基]甲胺
Figure BDA0003010445950000451
步骤1：5-氯-4-氟-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯甲酸
向在乙酸(600mL)中的2-氨基-5-氯-4-氟苯甲酸(40.0g)中添加叠氮化钠(41.2g)和原甲酸三甲酯(67.1g)并且在室温下搅拌2h。将混合物倒入水(500mL)中并且过滤以得到标题化合物。
TLC(DCM:MeOH 10:1)：Rf＝0.2
步骤2：5-氯-4-氟-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯甲酰胺
将5-氯-4-氟-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯甲酸(16.5g)、氯化铵(7.2g)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(18.4g)、N,N-二异丙基乙胺(26.3g)和[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-醇(18.5g)在DMF(150mL)中的混合物在室温下搅拌12h。将混合物倒入氯化铵(150mL)中，用EtOAc萃取并且将有机相浓缩。将粗产物通过硅胶(石油醚:EtOAc)纯化以得到标题化合物。
TLC(石油醚:EtOAc 1:1)：Rf＝0.2
步骤3：5-氯-4-氟-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯甲腈
将5-氯-4-氟-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯甲酰胺(200mg)和N-(三乙铵-磺酰基)氨基甲酸甲酯(240mg)在THF(2mL)中的混合物在室温下搅拌12h并且在真空中浓缩。将粗产物通过硅胶(石油醚:EtOAc)纯化以得到标题化合物。
TLC(石油醚:EtOAc 1:1)：Rf＝0.7
步骤4：N-{[5-氯-4-氟-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯基]甲基}氨基甲酸叔丁酯
将5-氯-4-氟-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯甲腈(3.4g)、镍(500mg)和二碳酸二叔丁酯(4.0g)在MeOH(50mL)中的混合物在15psi氢气压力下在室温下搅拌5h，过滤并且在真空中浓缩。将粗产物通过硅胶(石油醚:EtOAc)纯化以得到标题化合物。
TLC(石油醚:EtOAc 1:1)：Rf＝0.4
步骤5：[5-氯-4-氟-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯基]甲胺
将N-{[5-氯-4-氟-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯基]甲基}氨基甲酸叔丁酯(1.2g)在EtOAc；盐酸(10mL)中的混合物在室温下搅拌2h并且在真空中浓缩以得到标题化合物
TLC(DCM:MeOH 10:1)：Rf＝0.1；质谱(ESI+)：m/z＝228[M+H]+。
中间体8
3-氯-2-氟-6-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯基]甲胺
Figure BDA0003010445950000461
步骤1：3-氯-2-氟-6-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯甲酸
向在乙酸(500mL)中的6-氨基-3-氯-2-氟苯甲酸(50.0g)中添加叠氮化钠(51.4g)和原甲酸三甲酯(83.9g)并且在室温下搅拌12h。将混合物倒入水(400mL)中并且过滤以得到标题化合物。
TLC(DCM:MeOH 3:1)：Rf＝0.4
步骤2：3-氯-2-氟-6-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯甲酰胺
将3-氯-2-氟-6-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯甲酸(11.0g)、氯化铵(4.8g)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(12.2g)、N,N-二异丙基乙胺(17.5g)和[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-醇(12.3g)在DMF(110mL)中的混合物在室温下搅拌12h。将混合物倒入氯化铵(50mL)中，用EtOAc萃取并且将有机相浓缩。将粗产物通过硅胶(石油醚:EtOAc)纯化以得到标题化合物。
TLC(石油醚:EtOAc 1:1)：Rf＝0.2
步骤3：3-氯-2-氟-6-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯甲腈
将3-氯-2-氟-6-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯甲酰胺(6.0g)和N-(三乙铵-磺酰基)氨基甲酸甲酯(7.1g)在THF(60mL)中的混合物在室温下搅拌12h并且在真空中浓缩。将粗产物通过硅胶(石油醚:EtOAc)纯化以得到标题化合物。
TLC(石油醚:EtOAc 1:1)：Rf＝0.3
步骤4：N-{[3-氯-2-氟-6-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯基]甲基}氨基甲酸叔丁酯
将3-氯-2-氟-6-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯甲腈(4.0g)、镍(1.0g)和二碳酸二叔丁酯(4.7g)在MeOH(100mL)中的混合物在15psi氢气压力下在室温下搅拌5h，过滤并且在真空中浓缩。将粗产物通过硅胶(石油醚:EtOAc)纯化以得到标题化合物。
TLC(石油醚:EtOAc 1:1)：Rf＝0.6
步骤5：[3-氯-2-氟-6-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯基]甲胺
将N-{[3-氯-2-氟-6-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯基]甲基}氨基甲酸叔丁酯(550mg)在EtOAc；盐酸(5mL)中的混合物在室温下搅拌2h并且在真空中浓缩以得到标题化合物
TLC(DCM:MeOH 10:1)：Rf＝0.1；质谱(ESI+)：m/z＝228[M+H]+。
中间体9
5-氯-3-甲基-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯基]甲胺
Figure BDA0003010445950000471
步骤1：5-氯-3-甲基-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯甲酸
向在乙酸(200mL)中的2-氨基-5-氯-3-甲基苯甲酸(20.0g)中添加叠氮化钠(21.0g)和原甲酸三甲酯(34.3g)并且在室温下搅拌12h。将混合物倒入水(400mL)中并且过滤以得到标题化合物。
TLC(DCM:MeOH 3:1)：Rf＝0.2
步骤2：5-氯-3-甲基-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯甲酰胺
将5-氯-3-甲基-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯甲酸(15.0g)、氯化铵(6.7g)、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(17.0g)、N,N-二异丙基乙胺(24.3g)和[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-醇(17.1g)在DMF(150mL)中的混合物在室温下搅拌12h。将混合物倒入氯化铵(150mL)中，用EtOAc萃取并且将有机相浓缩。将粗产物通过硅胶(石油醚:EtOAc)纯化以得到标题化合物。
TLC(石油醚:EtOAc 1:1)：Rf＝0.4
步骤3：5-氯-3-甲基-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯甲腈
将5-氯-3-甲基-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯甲酰胺(5.0g)和N-(三乙铵-磺酰基)氨基甲酸甲酯(7.5g)在THF(50mL)中的混合物在室温下搅拌12h并且在真空中浓缩。将粗产物通过硅胶(石油醚:EtOAc)纯化以得到标题化合物。
TLC(石油醚:EtOAc 1:1)：Rf＝0.6
步骤4：N-{[5-氯-3-甲基-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯基]甲基}氨基甲酸叔丁 酯
将5-氯-3-甲基-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯甲腈(4.0g)、镍(4.0g)和二碳酸二叔丁酯(4.8g)在MeOH(40mL)中的混合物在15psi氢气压力下在室温下搅拌5h，过滤并且在真空中浓缩。将粗产物通过硅胶(石油醚:EtOAc)纯化以得到标题化合物。
TLC(石油醚:EtOAc 1:1)：Rf＝0.7
步骤5：[5-氯-3-甲基-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯基]甲胺
将N-{[5-氯-3-甲基-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯基]甲基}氨基甲酸叔丁酯(500mg)在EtOAc；盐酸(5mL)中的混合物在室温下搅拌2h并且在真空中浓缩以得到标题化合物
TLC(DCM:MeOH 10:1)：Rf＝0.1；质谱(ESI+)：m/z＝224[M+H]+。
中间体10
1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸
Figure BDA0003010445950000491
步骤1：6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-甲醛
将6-氯-2-甲基吡啶-3-甲醛(15g)、3-氮杂双环[3.1.0]己烷盐酸盐(14g)和KHCO3(22.5g)悬浮于DMSO(70mL)中并且加热至60℃持续12h。将混合物冷却，在水与DCM之间分配并且分离各相。将水相用DCM萃取三次并且将合并的有机相用盐水洗涤。干燥(MgSO4)后，在真空中蒸发溶剂以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.59min；质谱(ESI+)：m/z＝203[M+H]+。
步骤2：(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲醇
向6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-甲醛(19.5g)在EtOH(300mL)中的溶液中在冰冷却下添加NaBH4(4g)。将混合物在室温下搅拌2h。冷却至0℃后，将混合物用4M HCl水溶液(72mL)缓慢处理并且搅拌15min。然后将混合物通过添加4M NaOH水溶液碱化。在真空中蒸馏出EtOH。将残余物用DCM萃取。将有机相用盐水洗涤，并且干燥(MgSO4)。在真空中蒸发溶剂以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.55min；质谱(ESI+)：m/z＝205[M+H]+。
步骤3：1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑- 4-甲酸乙酯
将(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲醇(19.2g)溶解于THF(150mL)中并且冷却至0℃。添加1H-吡唑-4-甲酸乙酯(14.5g)和三丁基膦(30mL)。逐批缓慢添加偶氮二甲酸二叔丁酯(26g)并且将混合物搅拌45min。添加饱和NaHCO3水溶液，将混合物剧烈搅拌10min并且然后用EtOAc萃取。将有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并且在真空中浓缩。将残余物在硅胶(石油醚:EtOAc 80:20→50:50)上进行色谱分离以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.73min；质谱(ESI+)：m/z＝327[M+H]+。
步骤4：1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑- 4-甲酸
将1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(15.5g)、1M KOH在EtOH(100mL)和THF(250mL)中的混合物在50℃下搅拌48h。冷却至室温后添加乙酸(5.5mL)并且在真空中蒸发溶剂。将残余物在水与DCM/异丙醇9:1之间分配。将有机相用盐水洗涤，并且干燥(MgSO4)。在真空中蒸发溶剂并且将残余物从ACN中结晶以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.60min；质谱(ESI+)：m/z＝299[M+H]+。
中间体11
1-[(6-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡 唑-4-甲酸
Figure BDA0003010445950000501
步骤1：6-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-甲醛
将6-氯-2-甲基吡啶-3-甲醛(19.6g)、6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己烷盐酸盐(19.6g)和KHCO3(58g)悬浮于DMSO(70mL)中并且加热至75℃持续48h。将混合物冷却在水与EtOAc之间分配并且分离各相。将有机相用盐水洗涤。干燥(MgSO4)后，在真空中蒸发溶剂以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.66min；质谱(ESI+)：m/z＝239[M+H]+。
步骤2：(6-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲醇
向6-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-甲醛(41.6g)在EtOH(600mL)中的溶液在冰冷却下添加NaBH4(9g)。将混合物在室温下搅拌12h。冷却至0℃后，将混合物用4M HCl水溶液(150mL)缓慢处理并且搅拌15min。然后将混合物通过添加4MNaOH水溶液碱化。在真空中蒸馏出EtOH。将残余物用DCM萃取。将有机相用盐水洗涤，并且干燥(MgSO4)。在真空中蒸发溶剂并且将残余物从二异丙基醚中磨碎以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.54min；质谱(ESI+)：m/z＝241[M+H]+。
步骤3：1-[(6-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲 基]-1H-吡唑-4-甲酸乙酯
将(6-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲醇(24.4g)溶解于THF(500mL)中并且冷却至0℃。添加1H-吡唑-4-甲酸乙酯(15.3g)、三丁基膦(28mL)。逐批缓慢添加偶氮二甲酸二叔丁酯(24.6g)并且将混合物搅拌45min。添加饱和NaHCO3水溶液，将混合物剧烈搅拌10min并且然后用EtOAc萃取。将有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并且在真空中浓缩。将残余物在硅胶上进行色谱分离(环己烷:EtOAc 50:50→20:80)以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.75min；质谱(ESI+)：m/z＝363[M+H]+。
步骤4：1-[(6-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲 基]-1H-吡唑-4-甲酸
将1-[(6-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(24.5g)、4M NaOH水溶液(30mL)和EtOH(220mL)的混合物在60℃下搅拌4h。冷却至室温后，添加4M HCl水溶液(30mL)并且在真空中蒸发溶剂。将残余物吸收在水中。将沉淀物通过过滤分离以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.61min；质谱(ESI+)：m/z＝335[M+H]+。
中间体12
7-[(6-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-7H-吡 咯并[2,3-d]嘧啶-5-甲酸甲酯
Figure BDA0003010445950000511
将(6-{6,6-二氟-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲醇(150mg)溶解于THF(8mL)中并且冷却至-10℃。添加7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-甲酸甲酯(120mg)、三丁基膦(585μL)。逐批缓慢添加偶氮二甲酸二叔丁酯(480mg)并且将混合物在室温下搅拌直到反应完成。添加水并且将混合物用EtOAc萃取。将有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并且在真空中浓缩。将残余物在硅胶(石油醚:EtOAc 80:20→0:100)上进行色谱分离以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.67min；质谱(ESI+)：m/z＝400[M+H]+。
与中间体12类似地制备中间体13-40：
Figure BDA0003010445950000521
Figure BDA0003010445950000531
Figure BDA0003010445950000541
Figure BDA0003010445950000551
Figure BDA0003010445950000552
Figure BDA0003010445950000561
Figure BDA0003010445950000571
Figure BDA0003010445950000581
中间体40b
3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡唑-4-甲酸甲酯
Figure BDA0003010445950000582
将3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H-吡唑-4-甲酸(1g)溶解于MeOH(50mL)中，添加亚硫酰氯(3mL)，在50℃下搅拌16h并且在真空中浓缩。将残余物溶解于MeOH，通过PL-HCO3 MPSPE柱筒过滤，用MeOH洗涤并且在真空中浓缩以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.73min；质谱(ESI+)：m/z＝207(Cl)[M+H]+。
中间体41
1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-3-氯-1H-吡唑- 4-甲酸
Figure BDA0003010445950000583
将1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-3-氯-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(124mg)、1M NaOH在水(2mL)、EtOH(2mL)和1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在50℃下搅拌约2h。冷却至室温后添加4M HCl水溶液(0.5mL)并且在真空中蒸发溶剂以给出标题化合物(含NaCl)。
LC(方法1)：tR＝0.71min；质谱(ESI+)：m/z＝333/335(Cl)[M+H]+。与中间体41类似地制备中间体42-69：
Figure BDA0003010445950000591
Figure BDA0003010445950000601
Figure BDA0003010445950000611
Figure BDA0003010445950000621
Figure BDA0003010445950000631
Figure BDA0003010445950000632
Figure BDA0003010445950000641
Figure BDA0003010445950000651
Figure BDA0003010445950000661
中间体70
3-氨基-1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸
Figure BDA0003010445950000662
步骤1：N'-[(6-氟吡啶-3-基)甲基](叔丁氧基)碳酰肼
将6-氟吡啶-3-甲醛(1.1g)溶解于THF(10mL)中，添加(叔丁氧基)碳酰肼(1.28g)和乙酸(1mL)并且在室温下搅拌5min。添加氰基硼氢化钠(0.83g)并且在室温下搅拌3h和在40℃下搅拌16h。将混合物过滤，添加DCM，用水洗涤并且在真空中浓缩。将残余物在硅胶(环己烷/EtOAc)上进行色谱分离以给出标题化合物。
LC(方法2)：tR＝0.82min；质谱(ESI+)：m/z＝242[M+H]+。
步骤2：(2E)-3-({[(叔丁氧基)羰基]氨基}[(6-氟吡啶-3-基)甲基]氨基)-2-氰基 丙-2-烯酸乙酯
将N'-[(6-氟吡啶-3-基)甲基](叔丁氧基)碳酰肼(650mg)和(2E)-2-氰基-3-乙氧基丙-2-烯酸乙酯(478mg)溶解于二噁烷中并且在80℃下搅拌16h和在90℃下搅拌24h。将混合物在反相(ACN，水)上通过HPLC纯化以给出标题化合物。
LC(方法2)：tR＝0.91min；质谱(ESI+)：m/z＝365[M+H]+。
步骤3：3-氨基-1-[(6-氟吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸乙酯
(2E)-3-({[(叔丁氧基)羰基]氨基}[(6-氟吡啶-3-基)甲基]氨基)-2-氰基丙-2-烯酸乙酯(469mg)溶解于DMSO中并且在80℃下搅拌3d。将混合物在反相(ACN，水)上通过HPLC纯化以给出标题化合物。
LC(方法2)：tR＝0.78min；质谱(ESI+)：m/z＝265[M+H]+。
步骤4：3-氨基-1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑- 4-甲酸乙酯
将3-氨基-1-[(6-氟吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(53mg)溶解于DMSO(1mL)中，添加3-氮杂双环[3.1.0]己烷盐酸盐(60mg)和N,N-二异丙基乙胺(0.15mL)并且将混合物在90℃下搅拌2d。将混合物在反相(ACN，水)上通过HPLC纯化以给出标题化合物。
LC(方法2)：tR＝0.93min；质谱(ESI+)：m/z＝328[M+H]+。
步骤5：3-氨基-1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑- 4-甲酸
将3-氨基-1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(70mg)溶解于在水(1mL)和EtOH(4mL)中的1M NaOH中并且在60℃下搅拌3h。冷却至室温后，添加1M HCl水溶液(1mL)并且在真空中蒸发溶剂以给出标题化合物(含NaCl)。
LC(方法3)：tR＝0.56min；质谱(ESI+)：m/z＝300[M+H]+。
中间体71
1-[(6-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸
Figure BDA0003010445950000671
步骤1：1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸乙酯
将(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲醇(4.12g)溶解于THF(50mL)中并且冷却至-10℃。添加1H-吡唑-4-甲酸乙酯(4.43g)和三丁基膦(9mL)。逐批缓慢添加偶氮二甲酸二叔丁酯(7.4g)并且将混合物在室温下搅拌45min并且在真空中浓缩。将残余物在硅胶(环己烷/EtOAc)上进行色谱分离以给出标题化合物。
LC(方法2)：tR＝0.88min；质谱(ESI+)：m/z＝264[M+H]+。
步骤2：1-[(6-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲 酸
将1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(0.5g)溶解于DMSO(2mL)中，添加5-氮杂螺[2.3]己烷三氟乙酸盐(1.2g)和N,N-二异丙基乙胺(2mL)并且将混合物在100℃下搅拌16h和在120℃下搅拌另外5h。冷却至室温后，除去N,N-二异丙基乙胺相，添加4M NaOH(4mL)并且在60℃下搅拌2h。添加4M HCl水溶液(4mL)并且将混合物在反相(ACN，水)上通过HPLC纯化以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.68min；质谱(ESI+)：m/z＝299[M+H]+。
中间体72
1-[(6-{1,1-二氟-5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑- 4-甲酸
Figure BDA0003010445950000681
将1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(263mg)溶解于DMSO(2mL)中，添加1,1-二氟-5-氮杂螺[2.3]己烷盐酸盐(180mg)和N,N-二异丙基乙胺(0.6mL)并且将混合物在100℃下搅拌16h和在120℃下搅拌另外5h。冷却至室温后，添加4M NaOH(1.5mL)并且在60℃下搅拌2h。添加4M HCl水溶液(1.5mL)并且将混合物在反相(ACN，水)上通过HPLC纯化以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.69min；质谱(ESI+)：m/z＝335[M+H]+。
与中间体72类似地制备中间体73-75：
Figure BDA0003010445950000682
Figure BDA0003010445950000691
Figure BDA0003010445950000692
中间体76
7-[(2-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧 啶-5-甲酸
Figure BDA0003010445950000693
步骤1：(2-氯-4-甲基嘧啶-5-基)甲醇
将2-氯-4-甲基嘧啶-5-甲酸(7g)溶解于二甲氧基乙烷(200mL)中，并且添加和N-甲基吗啉(4.2mL)。将混合物冷却至0℃，添加氯甲酸异丁酯(5.1mL)并且将混合物在0℃下搅拌30min。然后将混合物通过硅藻土过滤，冷却至0℃，添加NaBH4(1.6g)在水(20mL)中的溶液，并且搅拌15min。添加水并且将混合物用EtOAc萃取。将有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并且在真空中浓缩。将残余物在硅胶(DCM/MeOH 97:3→50:50)上进行色谱分离以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.50min；质谱(ESI+)：m/z＝159/161(Cl)[M+H]+。
步骤2：7-[(2-氯-4-甲基嘧啶-5-基)甲基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-甲酸甲酯
将(2-氯-4-甲基嘧啶-5-基)甲醇(475mg)溶解于THF(10mL)和DMSO(2mL)中，冷却至-10℃。添加7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-甲酸甲酯(530mg)、三丁基膦(890μL)。逐批缓慢添加偶氮二甲酸二叔丁酯(750mg)并且将混合物在室温下搅拌约30min。将混合物在反相(ACN，水)上通过HPLC纯化以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.80min；质谱(ESI+)：m/z＝318/320(Cl)[M+H]+。
步骤3：7-[(2-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-4-甲基嘧啶-5-基)甲基]-7H-吡咯并[2, 3-d]嘧啶-5-甲酸
将7-[(2-氯-4-甲基嘧啶-5-基)甲基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-甲酸甲酯(200mg)溶解于DMSO(2mL)中，添加5-氮杂螺[2.3]己烷三氟乙酸盐(250mg)和N,N-二异丙基乙胺(0.35mL)并且将混合物在80℃下搅拌6h。冷却至室温后，添加4M NaOH(1mL)并且在60℃下搅拌2h。添加4M HCl水溶液(1mL)并且将混合物在反相(ACN，水)上通过HPLC纯化以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.72min；质谱(ESI+)：m/z＝351[M+H]+。
中间体77
N-{[5-氯-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯基]甲基}-1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基) 甲基]-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0003010445950000701
步骤1：1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸
将1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(9.1g)溶解于THF(150mL)中，添加LiOH(1.7g)在水(15mL)中的溶液，并且将混合物在60℃下搅拌3d。添加乙酸(3.8mL)并且将混合物在真空中浓缩。添加水并且将混合物用DCM/异丙醇9:1萃取。将有机相用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并且在真空中浓缩以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.72min；质谱(ESI+)：m/z＝236[M+H]+。
步骤2：N-{[5-氯-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯基]甲基}-1-[(6-氟-2-甲基吡 啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酰胺
向1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸(1.68g)在DMF(10mL)中的溶液添加N,N-二异丙基乙胺(3mL)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲脲鎓-六氟磷酸盐(HATU，2.85g)并且将混合物搅拌5min。添加[5-氯-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯基]-甲胺盐酸盐(1.8g)并且将混合物搅拌1h。将混合物在反相(ACN，水)上通过HPLC纯化以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.93min；质谱(ESI+)：m/z＝427/429(Cl)[M+H]+。
实施例的合成
实施例1
1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-N-{[5-氯-2- (1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯基]-甲基}-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0003010445950000711
向1-[(6-{3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酸(30mg)在DMF(2mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(50μL)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU，40mg)，搅拌5min。添加[5-氯-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)-苯基]甲胺盐酸盐(21mg)并且将混合物搅拌16h。将混合物在反相(ACN，水)上通过HPLC纯化以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.76min；质谱(ESI+)：m/z＝490[M+H]+。
与实施例1类似地制备实施例2-57：
Figure BDA0003010445950000712
Figure BDA0003010445950000721
Figure BDA0003010445950000731
Figure BDA0003010445950000741
Figure BDA0003010445950000751
Figure BDA0003010445950000761
Figure BDA0003010445950000771
Figure BDA0003010445950000781
Figure BDA0003010445950000791
Figure BDA0003010445950000801
Figure BDA0003010445950000811
Figure BDA0003010445950000812
Figure BDA0003010445950000821
Figure BDA0003010445950000831
Figure BDA0003010445950000841
Figure BDA0003010445950000851
Figure BDA0003010445950000861
Figure BDA0003010445950000871
Figure BDA0003010445950000881
实施例58
1-({6-[(1R,5S,6R)-6-氨基-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基]-2-甲基吡啶-3-基}甲基)-N-{[5-氯-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯基]甲基}-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0003010445950000882
向1-({6-[(1R,5S,6R)-6-{[(叔丁氧基)羰基]氨基}-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基]-2-甲基吡啶-3-基}甲基)-1H-吡唑-4-甲酸三氟乙酸盐(16mg)在DMF(2mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(30μL)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐(HATU，13mg)并且搅拌5min。添加[5-氯-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯基]甲胺盐酸盐(10mg)并且将混合物搅拌16h。将混合物通过氧化铝B垫过滤，用DMF:MeOH＝9:1洗涤并且在真空中浓缩。将残余物溶解于DCM(1mL)和TFA(1mL)中，在室温下搅拌1h并且在真空中浓缩。将粗产物在反相(ACN，水)上通过HPLC纯化以给出标题化合物。
LC(方法6)：tR＝0.58min；质谱(ESI+)：m/z＝505[M+H]+。
实施例59
1-[(6-{2-氮杂螺[3.3]己-2-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-N-{[5-氯-2-(1H-1, 2,3,4-四唑-1-基)苯基]甲基}-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0003010445950000891
将N-{[5-氯-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯基]甲基}-1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酰胺(43mg)溶解于DMSO(1mL)中，添加2-氮杂螺[3.3]己烷盐酸盐(20mg)和N,N-二异丙基乙胺(50μL)并且将混合物在60℃下搅拌7d并且将混合物在反相(ACN，水)上通过HPLC纯化以给出标题化合物。
LC(方法1)：tR＝0.83min；质谱(ESI+)：m/z＝504[M+H]+。
与实施例59类似地制备实施例60-87：
Figure BDA0003010445950000892
Figure BDA0003010445950000901
Figure BDA0003010445950000911
Figure BDA0003010445950000921
Figure BDA0003010445950000931
Figure BDA0003010445950000932
Figure BDA0003010445950000941
实施例88
1-({6-[(1R,5S)-1-氨基-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基]-2-甲基吡啶-3-基}甲 基)-N-{[5-氯-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯基]甲基}-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0003010445950000942
将N-{[5-氯-2-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)苯基]甲基}-1-[(6-氟-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-1H-吡唑-4-甲酰胺(43mg)溶解于DMSO(1mL)中，添加N-[(1R,5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己-1-基]氨基甲酸叔丁酯(20mg)和N,N-二异丙基乙胺(50μL)，将混合物在60℃下搅拌7d并且将混合物在反相(ACN，水)上通过HPLC纯化。将残余物溶解于DCM(1mL)中，添加TFA(1mL)，在室温下搅拌1h并且在真空中浓缩以给出作为三氟乙酸盐的标题化合物。
LC(方法2)：tR＝0.85min；质谱(ESI+)：m/z＝505[M+H]+。
与实施例88类似地制备实施例89-93：
Figure BDA0003010445950000951
Figure BDA0003010445950000952
实施例94
1-[(6-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-N-{[2-氟-6-(1H-1, 2,3,4-四唑-1-基)苯基]甲基}-1H-吡唑-4-甲酰胺
Figure BDA0003010445950000961
将1-[(6-{5-氮杂螺[2.3]己-5-基}-2-甲基吡啶-3-基)甲基]-N-{[3-氯-2-氟-6-(1H-1,2,3,4-四唑-1-基)-苯基]甲基}-1H-吡唑-4-甲酰胺(29mg)溶解于MeOH(3mL)中，添加三乙胺(8mg)和Pd/C(10％)并且将混合物在50psi氢气压力下在室温下摇动。将混合物过滤并且在真空中浓缩。将残余物在反相(ACN，水)上通过HPLC纯化以给出标题化合物。
LC(方法2)：tR＝0.93min；质谱(ESI+)：m/z＝474[M+H]+。

Claims (15)

1.一种式(I)的化合物
Figure FDA0003010445940000011
其中
A选自由以下组成的组A-G1：N、CH、C-F、C-Cl、C-Br、C-CN、和C-CH3；
R1选自由以下组成的组R1-G1：H和任选地被1至3个F取代的C1-3-烷基；
R2选自由以下组成的组R2-G1：
含有1至3个N原子作为环成员和任选地1至2个选自C＝O、O、S、S＝O和SO2的环成员的饱和6-12元双环环系，
条件是所述环系在环成员之间不含任何杂原子-杂原子键，
其中所述环系经由N原子与式(I)中的杂芳族环附接，并且
其中所述环系任选地被1至6个F取代，任选地被1个取代基R3取代并且任选地被1或2个CH3基团取代；
X选自由以下组成的组X-G1：
含有1至3个N原子的5元杂芳基，和
由与6元环稠合的5元环组成并且含有1至3个N原子的9元杂芳基，其中所述杂芳基经由所述5元环的C原子与式(I)中的羰基附接并且经由所述5元环的不相邻C或N原子与式(I)中的CH2基团附接，并且
其中所述杂芳基任选地被1个取代基R4取代；
R3选自由以下组成的组R3-G1：
C1-3-烷基、C1-3-亚烷基-OH、C1-3-亚烷基-O-CH3、-CN、-NH2、-OH、和-O-C1-3-烷基；
R4选自由以下组成的组R4-G1：
F、Cl、Br、任选地被1至3个F取代的C1-3-烷基、C1-3-亚烷基-OH、C1-3-亚烷基-O-CH3、-CN、-NH2、-OH、-O-C1-3-烷基、和含有1个-NH-、-N<、-O-或-S-环成员和任选地另外1或2个＝N-环成员并且任选地被1或2个CH3基团取代的5元杂芳基；
R’选自由以下组成的组R’-G1：F、Cl、任选地被1至3个F取代的C1-3-烷基、C3-4-环烷基、-CN、任选地被1至3个F取代的-O-C1-3-烷基、和-SO2-C1-3-烷基；
R”在每次出现时选自由以下组成的组R”-G1：F、Cl合CH3；并且
n是选自由以下组成的组n-G1的整数：0、1和2；
或其盐。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中
A选自由以下组成的组A-G2：N、CH和C-Br，
或其盐。
3.根据权利要求1至2中的一项或多项所述的化合物，其中
R1选自由以下组成的组R1-G2：H和CH3，
或其盐。
4.根据权利要求1至3中的一项或多项所述的化合物，其中
R2选自由以下组成的组R2-G2：
含有1至2个N原子作为环成员和任选地1个选自C＝O和O的环成员的饱和6-10元双环环系，
条件是所述环系在环成员之间不含任何杂原子-杂原子键，
其中所述环系经由N原子与式(I)中的杂芳族环附接，并且
其中所述环系任选地被1或2个F取代，任选地被1个取代基R3取代并且选地被1个CH3基团取代，
或其盐。
5.根据权利要求1至4中的一项或多项所述的化合物，其中
X选自由以下组成的组X-G2：
Figure FDA0003010445940000021
其中每个任选地被1个取代基R4取代，并且
其中具有星号和括号的键指示式(I)的基团C＝O和CH2的附接位点，或其盐。
6.根据权利要求1至5中的一项或多项所述的化合物，其中
R3选自由以下组成的组R3-G2：CH3、CH(CH3)2、CH2-OCH3、NH2、-OH、和-O-CH3，
或其盐。
7.根据权利要求1至6中的一项或多项所述的化合物，其中
R4选自由以下组成的组R4-G3：Cl、Br、任选地被1至3个F取代的C1-3-烷基、C1-3-亚烷基-O-CH3、-NH2、-O-CH3、和含有1个-NH-环成员和任选地另外1或2个＝N-环成员并且任选地被1个CH3基团取代的5元杂芳基，或其盐。
8.根据权利要求1至7中的一项或多项所述的化合物，其中
R’选自由以下组成的组R’-G3：F、Cl、CH3、CHF2、CF3、和-CN，或其盐。
9.一种根据权利要求1至8中的一项或多项所述的化合物的药学上可接受的盐。
10.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至9中的一项或多项所述的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐、任选地连同一种或多种惰性载体和/或稀释剂。
11.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至9中的一项或多项所述的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种另外的治疗剂、任选地连同一种或多种惰性载体和/或稀释剂。
12.根据权利要求11所述的药物组合物，
其中所述一种或多种另外的治疗剂选自抗糖尿病剂、用于治疗超重和/或肥胖症的药剂、用于治疗高血压、心力衰竭和/或动脉粥样硬化的药剂和用于治疗眼部疾病的药剂。
13.根据权利要求1至9中的一项或多项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用作药剂。
14.一种用于治疗有需要的患者的眼部疾病，优选地用于治疗糖尿病性黄斑水肿、年龄相关黄斑变性和/或脉络膜血管新生的方法，所述方法的特征在于向所述患者施用根据权利要求1至9中的一项或多项所述的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐。
15.根据权利要求1至9中的一项或多项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于在治疗眼部疾病，优选地治疗糖尿病性黄斑水肿、年龄相关黄斑变性和/或脉络膜血管新生的方法中使用，所述方法的特征在于向所述患者施用根据权利要求1至9中的一项或多项所述的一种或多种化合物或其药学上可接受的盐。
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