CN112807316A

CN112807316A - 米替福新及其药学上可接受的盐在制备用于治疗阿尔茨海默病的药物中的应用

Info

Publication number: CN112807316A
Application number: CN202110165497.2A
Authority: CN
Inventors: 沈旭; 王佳颖; 沈星意; 吕建璐
Original assignee: Nanjing University of Chinese Medicine
Current assignee: Nanjing University of Chinese Medicine
Priority date: 2021-02-06
Filing date: 2021-02-06
Publication date: 2021-05-18

Abstract

本发明公开了米替福新及其药学上可接受的盐在制备用于治疗与记忆、认知功能和焦虑相关的神经退行性疾病，包括阿尔茨海默病的药物中的应用。本发明通过大量实验筛选表明，米替福新及其药学上可接受的盐可以改善3xTg‑AD模型小鼠在新事物识别、Y‑迷宫、高架十字迷宫和Morris水迷宫行为学实验中表现的记忆、认知功能障碍和焦虑状态。

Description

米替福新及其药学上可接受的盐在制备用于治疗阿尔茨海默病的药物中的应用

技术领域

本发明涉及药物技术领域，具体涉及米替福新及其药物组合物在制备用于治疗阿尔茨海默病的药物中的应用，更具体地，本发明涉及米替福新及其药学上可接受的盐或其药物组合物具有改善3xTg-AD模型小鼠记忆、认知功能障碍和焦虑状态，用于制备治疗阿尔茨海默病等神经退行性疾病的药物中的应用。

背景技术

阿尔茨海默病 (Alzheimer's Disease，AD) 是一种进行性神经退行性疾病，又称老年痴呆症，是一种年龄相关的神经系统退行性疾病。临床表现为记忆障碍、失语、失认、视空间技能损害、执行功能障碍以及人格和行为的改变。目前已知，主要病理特征为细胞外β-淀粉样蛋白斑块的堆积，神经元内微管相关蛋白tau的过度磷酸化引起的神经纤维缠结。随着全球人口老龄化进程加快，大脑退行性疾病逐渐成为公共卫生领域面临的最大挑战之一。

至今，AD药物研发困难，且药价较高，主要原因之一是该病的致病机理尚不明确。目前存在几种假说：首先，20世纪80年代，Aβ级联假说占具中心地位，提出21号染色体上的β淀粉样前体蛋白（APP）基因突变，是APP代谢异常和β淀粉样沉积主要原因，进而导致AD中神经元丢失，引起认知障碍 (Hardy J, Allsop D. Amyloid deposition as the centralevent in the aetiology of Alzheimer's disease. Trends Pharmacol Sci. 1991.)；其次，随着研究发现神经纤维缠结（NFTs）是由磷酸化tau蛋白组成的 (Kosik KS, JoachimCL, Selkoe DJ. Microtubule-associated protein tau (tau) is a major antigeniccomponent of paired helical filaments in Alzheimer disease. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986.)，tau蛋白假说也引发学者广泛探索。Aβ淀粉斑块和tau蛋白过度磷酸化，都是AD脑内主要病理特征，并且也有很多假说提出Aβ和tau联合作用，推动健康的神经细胞病变 (Bloom GS. Amyloid-β and tau: the trigger and bullet in Alzheimerdisease pathogenesis. JAMA Neurol. 2014.)。但是随着各项靶向Aβ和tau蛋白的新药临床试验的失败，这些假说也时刻饱受着质疑，越来越多人提出Aβ可能只是AD疾病的结果，而不是致病的原因。更多假说，线粒体功能障碍、内质网应激、氧化应激等也被关注。近年来，神经炎症 (Pereira CF, Santos AE, Moreira PI, et al. Is Alzheimer's disease aninflammasomopathy. Ageing Res Rev. 2019)被认为在AD及其他神经退行性疾病中发挥重要作用，大脑胶质细胞中免疫应答相关基因突变与AD相关 (Naj AC, Jun G, BeechamGW, et al. Common variants at MS4A4/MS4A6E, CD2AP, CD33 and EPHA1 areassociated with late-onset Alzheimer's disease. Nat Genet. 2011)，暗示这些细胞可能在致病过程中发挥重要作用。小胶质细胞作为中枢神经系统常驻的免疫细胞，监测并调控大脑微环境的稳态。

米替福新，其结构式为：

米替福新，临床常用于抗肿瘤和抗利什曼原虫感染的治疗。目前对于其改善3xTg-AD模型小鼠记忆、认知功能障碍和焦虑状态，从而起到抗阿尔茨海默病（Alzheimer'sdisease，AD）的作用未见报道。本发明进一步发现米替福新具有改善3xTg-AD模型小鼠记忆、认知功能障碍和焦虑状态，因此本发明进一步发现了它对新的适应症治疗的潜在性。

发明内容

本发明的一个目的是提供米替福新及其药学上可接受的盐的新的医药应用，即其在制备用于治疗阿尔茨海默病的药物中的应用。

在所述应用中，米替福新及其药学上可接受的盐可以作为改善3xTg-AD模型小鼠记忆、认知功能障碍和焦虑状态的小分子化合物。

本发明的另一目的是提供包含米替福新或其药学上可接受的盐的药物组合物在制备用于治疗阿尔茨海默病的药物中的应用，所述药物组合物包含米替福新或其药学上可接受的盐及药学上可接受的各种辅料。

本发明还公开了该药物组合物在制备与记忆、认知功能和焦虑相关的神经退行性疾病的药物中的应用。

有益效果：本发明通过大量实验，发现了米替福新的新的作用机制和药效，具有改善3xTg-AD模型小鼠记忆、认知功能障碍和焦虑状态的作用。该化合物可用于治疗阿尔茨海默病及与记忆、认知功能和焦虑相关的疾病治疗。

附图说明

图1 为米替福新能够明显改善3xTg-AD模型小鼠在新事物识别实验中表现的记忆功能障碍。*代表p<0.05，**代表p<0.01，***代表P<0.001。单因素方差分析。

图2 为米替福新能够明显改善3xTg-AD模型小鼠在Y-迷宫实验中表现的空间识别记忆能力下降。*代表p<0.05，**代表p<0.01，***代表P<0.001。单因素方差分析。

图3为米替福新能够明显改善3xTg-AD模型小鼠在高架十字迷宫实验中表现的焦虑状态。*代表p<0.05，**代表p<0.01，***代表P<0.001。单因素方差分析。

图4 为米替福新能够明显改善3xTg-AD模型小鼠在水迷宫潜伏期表现的学习记忆和空间识别能力下降。*代表p<0.05，**代表p<0.01，***代表P<0.001。双因素方差分析。

图5 为米替福新能够明显改善3xTg-AD模型小鼠在水迷宫穿台期表现的学习记忆和空间识别能力下降。*代表p<0.05，**代表p<0.01，***代表P<0.001。单因素方差分析。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但这些实施例不应解释为限制本发明。

实施例1：米替福新改善3xTg-AD模型小鼠在新事物识别、Y-迷宫、高架十字迷宫和Morris水迷宫行为学实验中表现的记忆、认知功能障碍和焦虑状态。

本发明在3xTg-AD模型小鼠中以检测米替福新对小鼠记忆、认知功能障碍和焦虑状态改善的影响，实验表明米替福新具有明显改善3xTg-AD模型小鼠在新事物识别、Y-迷宫、高架十字迷宫和Morris水迷宫行为学实验中表现的记忆、认知功能障碍和焦虑状态。

1、实验原理

1）新事物识别实验（New object recognition, NOR）：利用动物对新物体有探索倾向的原理而建立的学习记忆测试方法，让小鼠在自由活动状态下进行学习记忆测试，更近地模拟人类的学习记忆行为。

2）Y-迷宫实验（Y-maze）：Y-迷宫自主交替实验利用啮齿类动物对新异环境的天然探究的自然习性，来评价动物的空间识别记忆能力。

3）高架十字迷宫实验（Elevated plus maze, EPM）：利用动物对新异环境的探究特性和对高悬敞开臂的恐惧心理，形成动物矛盾冲突来考察动物的焦虑状态。

4）Morris水迷宫实验（Morris water maze, MWM）：利用小鼠有强烈的逃避水环境的动机，通过强迫小鼠游泳，记录其学习寻找隐藏在水中平台的一种实验，主要用于测试小鼠对空间位置感和方向感（空间定位）的学习记忆能力。

2、实验材料与方法

1）动物分组：3xTg-AD小鼠购于美国Jackson实验室，雄性7月龄小鼠分组为模型组，低剂量给药组（米替福新miltefosine: 1.5mg/kg/day），高剂量给药组（米替福新miltefosine: 2.5mg/kg/day）,腹腔注射100天。行为学实验：新事物识别、Y-迷宫、高架十字迷宫和Morris水迷宫。

2）新事物识别实验：先将小鼠置于测试装置内熟悉环境5分钟。在测试装置内放入两个外观（颜色、形状）一致的积木A和B，将小鼠背向积木放入测试装置中央，开启录像设备，让小鼠自由探索5分钟。16小时后，将其中一个积木B换成新物体C（外观不一致），将小鼠背向积木放入测试装置中央，开启录像设备，让小鼠自由探索5分钟。分析小鼠探索新物体的次数比例（鼻子嗅物体，舔物体，前爪搭在物体上均属于探索行为），认知指数计算公式为：新物体（%）=新物体次数/（新物体次数+旧物体次数）*100%。

3）Y-迷宫实验：Y迷宫测试装置由三个等长的臂和一个中间区域组成，各臂互成120度。将小鼠置于测试装置中间区域，开启录像设备。自主交替定义为小鼠连续依次进入三个不同臂，分析5分钟内，小鼠自主交替程度及进臂总次数，自主交替率计算公式为：自主交替率（%）=交替次数/（总次数-2）*100%。

4）高架十字迷宫实验：高架十字迷宫测试装置包括两个开放臂（Open arm）和两个闭合臂（Close arm），以及相交的中间区域。将小鼠置于测试装置中间区域，头朝开臂，开启录像设备。记录5分钟，分析小鼠进入开放臂和闭合臂的次数，计算公式为：开放臂（%）=开放臂次数/（开放臂次数+闭合臂次数）*100%。

5）Morris水迷宫实验：水迷宫实验测试装置是一个直径为1.5米，深60厘米的圆形水池，在水池中倒入食用白色素，保持水温23℃，将直径为10厘米的圆形平台放置在水面下面1.5厘米，水池分均为1,2,3,4象限，其中圆形平台为5象限（在4象限范围内），在1,2,3,4象限上方贴有不同标志物，方便小鼠记忆。首先，潜伏期训练，实验时间为5天，训练时，让小鼠识别标志物后，面向池壁放入对应象限水池，开启录像设备，记录小鼠从入水到找到水下隐藏平台，并站立在上面10秒所需的时间（以秒记录），作为潜伏期，如果90秒内，小鼠未找到平台，则轻轻将其引到平台上，并学习10秒，依次进行每个象限的学习训练（共5天），并记录找到平台的时间。第六天，撤去水下隐藏平台，将小鼠从里平台最远的象限放入水中，开启录像设备，记录小鼠90秒内的运动轨迹，分析其穿过平台所在象限（第5象限）的次数，通过穿台次数（Crossing times）来评价小鼠的学习记忆能力。

3、实验结果

结果如图1所示，给予米替福新治疗能够增加3xTg-AD模型小鼠对新事物的探索程度，表明米替福新具有改善小鼠记忆能力的作用；如图2所示，给予米替福新治疗能够增加3xTg-AD模型小鼠自主交替率，表明米替福新具有改善小鼠空间工作记忆能力的作用；如图3所示，给予米替福新治疗能够增加3xTg-AD模型小鼠探索开放臂的次数，表明米替福新具有改善小鼠焦虑程度的作用；如图4和图5所示，给予米替福新治疗能够减少3xTg-AD模型小鼠潜伏期寻找隐藏平台的时间，撤去平台后，增加穿台次数，表明米替福新具有改善3xTg-AD模型小鼠学习能力、空间记忆、工作记忆和空间辨别能力的作用。

Claims

1.米替福新及其药学上可接受的盐在制备用于治疗与记忆、认知功能和焦虑相关的神经退行性疾病疾病的药物中的应用

根据权利要求1所述的应用，其特征在于，米替福新及其药学上可接受的盐能够改善3xTg-AD模型小鼠记忆、认知功能障碍和焦虑状态。

2.含有米替福新或其药学上可接受的盐的药物组合物在制备用于治疗与记忆、认知功能和焦虑相关的神经退行性疾病的药物中的应用。

3.米替福新及其药学上可接受的盐在制备用于治疗阿尔茨海默病的药物中的应用。

4.一种药物组合物在制备用于治疗阿尔茨海默病的药物中的应用，所述药物组合物包含米替福新或其药学上可接受的盐及药学上可接受的辅料。