CN112789053A

CN112789053A - 用于受控的卵巢刺激的组合物和方法

Info

Publication number: CN112789053A
Application number: CN201980064065.3A
Authority: CN
Inventors: 乔安-卡莱斯·阿尔塞赛斯; 莉丝贝特·黑尔姆加德; 本杰克·米尔奈尔·克莱因; 帕特里克·海泽
Original assignee: Firelink
Current assignee: Firelink; Ferring BV
Priority date: 2018-10-17
Filing date: 2019-10-17
Publication date: 2021-05-11
Also published as: IL280750A; CA3110205A1; SG11202102340RA; MA53909A; MX2021004383A; WO2020079127A1; AU2019363279A1; JP2022505191A; CL2021000928A1; US20210353717A1; TW202027780A; PH12021550417A1; BR112021005019A2; CO2021005872A2; JOP20210025A1; CL2022000779A1; KR20210079276A; EP3866833A1

Abstract

描述了用于治疗不育症的使用FSH的方法和包括FSH的组合物，其中基于患者年龄选择剂量以优化累积效率和/或降低OHSS风险。

Description

用于受控的卵巢刺激的组合物和方法

本发明涉及用于治疗不育症的方法、组合物和药物产品。

背景

辅助生殖技术(ART)如体外授精(IVF)和显微授精是众所周知的。ART通常需要受控的卵巢刺激(COS)步骤，其中一组滤泡被刺激至完全成熟。标准的COS方案包括促性腺激素，如促卵泡激素(FSH)，单独或与黄体生成激素(LH)活性组合施用，以刺激多卵泡发育。通常，COS需要在刺激前和/或刺激期间施用GnRH类似物或GnRH激动剂，以防止LH过早激增，这可以在计划的回收卵母细胞前诱导排卵。通常用于COS的药物组合物包括重组卵泡刺激素(rFSH)(包括

和

)、尿源FSH、重组FSH+LH制剂、尿源尿促性素[人更年期促性激素(hMG)]和高度纯化的人更年期促性激素(HP-hMG)。

在卵巢反应过高的情况下，COS可能与卵巢过度刺激综合征(OHSS)的风险有关，在严重的情况下这可能危及生命。预测女性对COS卵巢反应潜能的能力可以允许开发个人化或个体化的COS方案。例如，此类个体化的方案可以降低预测对COS具有过度卵巢反应的妇女中OHSS的风险，和/或提高被归类为不良反应者的妇女中妊娠的机会。AMH的水平与COS期间卵巢对促性腺激素的反应直接相关。因此，高水平的AMH是过度卵巢反应的良好的预测因子，并且是OHSS风险的指标，而低水平的AMH则预测对COS的不良卵巢反应。

临床研究集中在过去几年COS个体化给药方案的开发上，最初不使用AMH，但基于卵巢反应的其他预测因子。这些预测因子包括年龄、体重指数(BMI)、FSH和窦卵泡计数(AFC)。

如上所述，标准的COS方案需要每天施用FSH以诱导多个卵泡生长，从而获得足够的卵母细胞用于IVF。FSH是由垂体前叶分泌的天然激素。在健康女性中，FSH每月诱导单个优势卵泡的生长，该卵泡在每个天然周期期间排卵。从绝经后妇女的尿液中纯化的FSH已经在不育症治疗中使用多年，既促进自然生殖中的排卵，又诱导多个卵泡生长，以获得足够的卵母细胞用于ART。

到目前为止，唯一被批准用于卵巢刺激的rFSH产品，如促卵泡素α(

默克雪兰诺公司(Merck Serono/EMD Serono)和促卵泡素β

先灵葆雅公司(MSD/Schering-Plough))，均衍生自中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系。本申请者已经开发了人细胞系衍生的rFSH，其是国际专利申请号PCT/GB 2009/000978的主题，公开为WO 2009/127826 A。2016年12月13日，欧盟委员会(EC)批准了

(促卵泡素δ，也称为FE 999049)的上市许可，这是一种人细胞系衍生的重组卵泡刺激素(人rFSH)，用于在经受辅助生殖技术(ART)(如体外受精(IVF)周期)的女性中进行多个卵泡发育的受控的卵巢刺激中使用。

是第一个从人细胞系中衍生的rFSH。

(促卵泡素δ)产品通过国际专利申请号PCT/GB 2009/000978中披露的方法生产。

的剂量学针对每位患者进行了个体化，并且旨在获得与有利的安全性/功效特性相关的卵巢反应，即旨在获得足够数量的回收的卵母细胞，并减少预防OHSS的干预措施。

以微克(μg)的剂量计量。对于第一个治疗周期，个体每日剂量基于妇女的血清AMH浓度确定，并取决于血清AMH浓度、她的体重。剂量是基于最近通过

AMH Plus免疫测定(罗氏公司(Roche))测量而确定的AMH(即，最近12个月内)。在整个刺激时间段维持个体每日剂量。对于AMH<15pmol/L的女性，不管体重如何，

的日剂量为12μg。对于AMH≥15pmol/L的女性，

的日剂量较低，并且在AMH浓度为15至≥40pmol/L时，日剂量的范围从0.19μg/kg至0.10μg/kg。对于随后的治疗周期，根据患者在之前的周期中的卵巢反应维持或修改

的日剂量。如果患者在之前的周期中有足够的卵巢反应而没有发展为OHSS，则使用相同的日剂量。在之前的周期中的卵巢低反应的情况下，根据观察到的反应程度，在随后的周期中的日剂量增加25％或50％。在之前的周期中的卵巢高反应的情况下，根据观察到的反应程度，在随后的周期中的日剂量降低20％或33％。在之前的周期中发展为OHSS或处于OHSS风险的患者中，随后的周期的日剂量比发生OHSS或OHSS风险的周期的剂量低33％。

的最大日剂量为24μg。

尽管如此，仍然需要COS方案来提供对刺激的充分反应和/或降低的OHSS风险。

发明内容

根据一些方面，提供了包含重组卵泡刺激素(rFSH)的组合物，用于治疗年龄≥35岁的患者中的不育症，其中该组合物用于以每天15μg rFSH的(例如，起始)剂量或相当于每天15μg rFSH的(例如，起始)剂量施用。还提供了用于治疗年龄≥35岁的患者中的不育症的组合物，其中该组合物包含每天15μg rFSH的(例如，起始)剂量或相当于每天15μg rFSH的(例如，起始)剂量。该组合物可以每天15μg rFSH的(例如，起始)剂量施用。

根据一些方面，提供了包含rFSH的组合物，用于治疗年龄≥35岁的患者中的不育症，其中该组合物用于以每天15μg rFSH的起始剂量施用，其中该起始剂量在治疗的至少第1天(优选地在治疗的至少第1天和第2天，更优选地在治疗的第1天到第4天的每一天)施用，任选地，其中该剂量(i)在任何随后的治疗日增加3μg重组FSH的首次增量剂量增加；和/或(ii)在任何随后的治疗日降低3μg重组FSH的首次增量剂量降低。在治疗期间，可以将该剂量维持在起始剂量。可替代地，3μg rFSH的首次增量剂量增加可以(a)在先前剂量增量变化后至少两天，随后是3μg rFSH的至少一次另外的增量剂量增加；和/或(b)在先前剂量增量变化后至少一天，随后是3μg rFSH的至少一次增量剂量降低。另外地或可替代地，3μg rFSH的首次增量剂量降低可以(a)在先前增量剂量的剂量变化后至少两天，随后是3μg rFSH的至少一次增量剂量增加；和/或(b)在先前剂量变化后至少一天，随后是3μg rFSH的至少一次另外的增量剂量降低。该剂量可以增加至24μg的最大日剂量或降低至6μg的最小日剂量。

根据一些方面，提供了包含rFSH的组合物，用于治疗被鉴定为年龄≤34岁的患者中的不育症，其中该组合物用于以每天12μg rFSH的(例如，起始)剂量或相当于每天12μgrFSH的(例如，起始)剂量施用。还提供了用于治疗被鉴定为年龄≤34岁的患者中的不育症的组合物，其中该组合物包含每天12μg rFSH的(例如，起始)剂量或相当于每天12μg rFSH的(例如，起始)剂量。该组合物可以每天12μg rFSH的(例如，起始)剂量施用。

根据一些方面，提供了包含rFSH的组合物，用于治疗年龄≤34岁的患者中的不育症，其中该组合物用于以每天12μg rFSH的起始剂量施用，其中该起始剂量在治疗的至少第1天(优选地在治疗的至少第1天和第2天，更优选地在治疗的第1天到第4天的每一天)施用，任选地，其中该剂量(i)在任何随后的治疗日增加3μg rFSH的首次增量剂量增加；和/或(ii)在任何随后的治疗日降低3μg rFSH的首次增量剂量降低。

在治疗期间，可以将该剂量维持在起始剂量。另外地或可替代地，3μg rFSH的首次增量剂量增加可以(a)在先前剂量增量变化后至少两天，随后是3μg rFSH的至少一次另外的增量剂量增加；和/或(b)在先前剂量增量变化后至少一天，随后是3μg rFSH的至少一次增量剂量降低。另外地或可替代地，3μg rFSH的首次增量剂量降低可以(a)在先前增量剂量的剂量变化后至少两天，随后是3μg rFSH的至少一次增量剂量增加；和/或(b)在先前剂量变化后至少一天，随后是3μg rFSH的至少一次另外的增量剂量降低。该剂量可以增加至24μg的最大日剂量或降低至6μg的最小日剂量。

根据一些方面，提供了治疗年龄≥35岁的女性患者中的不育症的方法，该方法包括从治疗的第1天开始以每天15μg rFSH的剂量或相当于每天15μg rFSH的剂量施用重组卵泡刺激素(rFSH)。从治疗的第1天开始，可以以每天15μg rFSH的剂量施用rFSH。

根据一些方面，该方法包括以每天15μg的起始剂量施用rFSH至少1-4天；并且，任选地，在随后的任何一天，(i)使rFSH的剂量增加3μg rFSH的增量剂量增加或(ii)使rFSH的剂量降低3μg rFSH的增量剂量降低。在整个治疗中，可以以每天15μg的起始剂量维持rFSH剂量。另外地或可替代地，3μg rFSH的增量剂量增加可以随后是(a)在先前增量剂量增加后至少两天，3μg rFSH的另外的增量剂量增加或(b)在先前增量剂量增加后至少一天，3μgrFSH的增量剂量降低。另外地或可替代地，3μg rFSH的增量剂量降低可以随后是(a)在先前增量剂量降低后至少一天或至少两天，3μg rFSH的增量剂量增加或(b)在先前增量剂量降低后至少一天，3μg rFSH的另外的增量剂量降低。根据一些方面，在整个治疗中，rFSH的最大日剂量为24μg，并且最小日剂量为6μg。

根据一些方面，提供了治疗被鉴定为年龄≤34岁的女性患者中的不育症的方法，该方法包括从治疗的第1天开始以每天12μg rFSH的剂量或相当于每天12μg rFSH的剂量施用rFSH。从治疗的第1天开始，可以以每天12μg rFSH的剂量施用rFSH。

根据一些方面，该方法包括以每天12μg的起始剂量施用rFSH至少1-4天；并且，任选地，在随后的任何一天，(i)使rFSH的剂量增加3μg rFSH的增量剂量增加或(ii)使rFSH的剂量降低3μg rFSH的增量剂量降低。在整个治疗中，可以以每天12μg的起始剂量维持rFSH剂量。另外地或可替代地，3μg rFSH的增量剂量增加随后是(a)在先前增量剂量增加后至少两天，3μg rFSH的另外的增量剂量增加或(b)在先前增量剂量增加后至少一天，3μg rFSH的增量剂量降低。另外地或可替代地，3μg rFSH的增量剂量降低随后是(a)在先前增量剂量降低后至少一天或至少两天，3μg rFSH的增量剂量增加或(b)在先前增量剂量降低后至少一天，3μg rFSH的另外的增量剂量降低。根据一些方面，在整个治疗中，rFSH的最大日剂量为24μg，并且最小日剂量为6μg。

根据一些方面，提供了治疗女性患者中的不育症的方法，该方法包括确定患者的年龄；如果该患者年龄≥35岁，以每天15μg rFSH的起始剂量施用重组卵泡刺激素(rFSH)持续至少1-4天；如果该患者年龄≤34岁，以每天12μg rFSH的起始剂量施用rFSH持续至少1-4天；任选地，在随后的任何一天，(i)使rFSH的剂量增加3μg rFSH的增量剂量增加或(ii)使rFSH的剂量降低3μg rFSH的增量剂量降低，其中，在整个治疗中，rFSH的最大日剂量为24μg，并且最小日剂量为6μg。

根据任何实施例，该不育症的治疗可以包含确定患者年龄的步骤，以及向具有该定义年龄的患者施用该定义剂量的rFSH的步骤。根据任何实施例，该不育症的治疗可以包含确定患者的年龄，并且然后针对患者的年龄施用本文所述的rFSH的起始剂量。

根据任何实施例，该不育症的治疗进一步包含回收(例如，收获)一个或多个卵母细胞；使该一个或多个卵母细胞受精(例如，人工授精)；并且允许受精的卵母细胞发育到囊胚阶段。根据任何实施例，该不育症的治疗进一步包含评估在收获的卵母细胞受精后获得的囊胚的质量。

根据任何实施例，该不育症的治疗步骤为通过在治疗期间鉴定具有直径≥12mm的≥20个卵泡和/或血清雌二醇浓度≥3,000pg/mL的患者来监测患者对治疗的过度反应的步骤；并且任选地向在治疗期间被鉴定为具有直径≥12mm的≥20个卵泡和/或血清雌二醇浓度≥3,000pg/mL的患者施用GnRH激动剂(例如，4.0mg)的剂量。

根据任何实施例，患者可以是30岁以上和/或先前至少一个不育症治疗周期失败。

根据任何实施例，rFSH可包括α2,6-唾液酸化和α2,3-唾液酸化，任选地其中总唾液酸化的1％至50％为α2,6-唾液酸化，且总唾液酸化的50％至99％为α2,3-唾液酸化，任选地其中总唾液酸化的5％至20％为α2,6-唾液酸化，并且总唾液酸化的80％至95％为2,3-唾液酸化，任选地其中总唾液酸化的50％至80％为α2,6-唾液酸化，并且总唾液酸化的20％至50％为2,3-唾液酸化。

根据任何实施例，该不育症的治疗是为了在经受辅助生殖技术(ART)的排卵的女性中发育多个卵泡并在进行新鲜和/或冷冻保存的胚胎转移后妊娠。根据任何实施例，该不育症的治疗是用于优化累积效率和/或降低卵巢过度刺激综合征(OHSS)风险。

具体实施方式

本申请者目前已经开发了给药方案，其目的是最大化卵母细胞产率以及由此产生的累积妊娠率，同时维持安全性。诸位申请人已经设计了COS方案，其中基于患者的年龄使用特定剂量的治疗重组FSH治疗患者，从而增加对刺激的充分反应的可能性(例如，在具有低反应潜能的患者中)和/或降低OHSS的风险(例如，在归类为高反应者或过度反应者的患者中)。还提供了通过使用GnRH激动剂触发器和用于那些患者的仅冷冻保存的胚胎转移周期来治疗具有高卵巢反应的患者的方案和组合物。

就功效而言，决定ART成功的结果变量现在已经超出了胚胎/囊胚的初始新鲜转移。冷冻保存剩余的胚胎，用于在新鲜周期后的潜在使用，目前这是ART治疗的标准实践，用于提高单次刺激周期的妊娠机会。近年来，涉及冷冻保存的胚胎的转移周期的百分比稳定增加。因此，新鲜和随后冷冻保存周期的累积结果以更完整的方式提供了单个受控的卵巢刺激周期的临床功效的总体测量，并反映了不育症临床管理中的进展。

就安全性而言，促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂触发器的实施通过降低早期严重卵巢过度刺激综合征(OHSS)的风险提高了患者的安全性，从新鲜转移的角度来看，这损害了功效，但基于累积妊娠率的角度，没有损害总体功效。在过度反应的患者中实施GnRH激动剂触发以降低OHSS的风险，以及实施强制性单囊胚转移以最大化单胎发生率并降低多胎妊娠的风险，这解决了最常见的安全问题。

因此，本文提供了被构建用于通过安全高剂量同时最小化OHSS(尤其是中度和重度OHSS)的风险(例如，通过在过度反应的情况下使用GnRH激动剂触发)来建立高累积持续妊娠率的给药方案。

定义

除非另有定义，否则本文所用的技术和科学术语具有本发明所属的辅助生殖技术领域中的普通技术人员通常所理解的含义。本文参考了本领域普通技术人员已知的各种方法。本领域普通技术人员已知的任何适合的材料和/或方法可用于实施本发明。然而，描述了特定的材料和方法。除非另有说明，否则在以下说明书和实例中参考的材料、试剂等可从商业来源获得。

应当理解，除非另有明确说明，否则本文中定义的任何定义和术语意指在本发明的任何方面和实施例中具有相同的含义和目的。

如本文所使用的，单数形式“一个或一种(a/an)”和“该/这些(the)”既表示单数也表示复数，除非明确指出仅表示单数。

如本文所使用的，术语“约”意指将如本领域中普通技术人员所理解的，取决于所使用数字或范围的上下文，该数字或范围不限于所阐述的确切数字或范围，而是涵盖所列举的数字或范围附近的范围。除非从本领域的上下文或惯例中另外显而易见，否则“约”是指特定术语的正或负10％。

术语“患者”和“受试者”在本文中可互换地使用。

在卵泡早期，受试者可以具有1至16IU/L(例如1至15IU/L，例如1至12IU/L)的正常血清FSH水平。因此，如本文所述的组合物或药物可用于在卵泡早期具有1到16IU/L(例如1至15IU/L，例如1至12IU/L)的正常血清FSH水平的受试者中的不育症的治疗(和/或用于受控的卵巢刺激)。

受试者可以具有BMI>1且BMI<40kg/m²，例如BMI>17.5且BMI<38kg/m²，例如BMI>18且BMI<25kg/m²，例如BMI>20且BMI<25kg/m²。因此，如本文该的产品可以用于治疗具有BMI>1且BMI<40kg/m²的受试者中(例如具有BMI>17.5且BMI<38kg/m²的受试者中，例如具有BMI>18且BMI<25kg/m²的受试者中，例如具有BMI>20且BMI<25kg/m²的受试者中)的不育症(和/或用于受控的卵巢刺激)。

在本文中，术语“不育症的治疗”包括通过受控的卵巢刺激(COS)或包括受控的卵巢刺激(COS)的步骤或阶段的方法(例如体外受精(IVF)或胞浆内精子注射(ICSI))来治疗不育症。术语“不育症的治疗”包括治疗患有输卵管或不明原因的不育症的受试者中的不育症(包括治疗患有子宫内膜异位症(例如I期或II期子宫内膜异位症)的受试者中的不育症)，和/或伴侣患有男性因素不育症的受试者中的不育症。该组合物可用于治疗患有子宫内膜异位症的受试者中(例如在患有I期或II期子宫内膜异位症的受试者中)的不育症(和/或用于受控的卵巢刺激)，如美国生殖医学学会(ASRM)分类系统针对子宫内膜异位症的各个阶段所定义，(IV期最严重；I期最不严重[American Society for ReproductiveMedicine.[美国生殖医学学会]Revised American Society for Reproductive Medicineclassification of endometriosis:1996.[修订的美国生殖医学学会子宫内膜异位症分类：1996]Fertil Steril[生育和不育]1997；67,817 821]。

在本文中，术语“GnRH激动剂”意指促性腺激素释放激素激动剂。GnRH激动剂是一类作为促性腺激素释放激素受体(GnRH受体)激动剂的药物，该促性腺激素释放激素受体是促性腺激素释放激素的生物学靶标。

在本文中，术语“GnRH拮抗剂”意指促性腺激素释放激素拮抗剂。GnRH拮抗剂是一类拮抗促性腺激素释放激素受体(GnRH受体)的药物，从而拮抗促性腺激素释放激素(GnRH)的作用。

术语“卵泡”在本文中意指卵巢卵泡，该卵巢卵泡是含有未成熟卵或卵母细胞的充满液体的囊。

囊胚在人类(或其他哺乳动物)的早期发育中形成。在人类中，在受精后大约5天开始囊胚形成。使用在IVF中的囊胚通常涉及从妇女中回收(收获)多个源自受控的卵巢刺激周期的卵母细胞；使一个或多个卵母细胞受精(人工授精)并将受精卵(卵母细胞)培养五天以形成囊胚(即，允许受精的卵母细胞发育到囊胚阶段)；将囊胚植入子宫。

根据本文所述的所有方面，优选的是本文所述的不育症的治疗为COS的步骤或包括COS的步骤。不育症的原因可能是患有男性不育症的妇女的伴侣，尽管应当理解，根据本发明，被COS治疗的是妇女(女性)。

如本文所述的不育症的治疗可用于并且可有效用于在经受辅助生殖技术(ART)的排卵的女性中发育多个卵泡并在进行新鲜和/或冷冻保存的胚胎转移后妊娠。

如本文所述的不育症的治疗可用于，并且可有效地用于促进高质量囊胚(例如，类别3BB或更高类别囊胚，例如，在回收卵母细胞后第5天对不育症进行治疗以增加类别3BB或更高类别囊胚的数目)和/或改进胚胎植入。不育症的治疗可以是在回收卵母细胞后第5天进行不育症的治疗以增加类别3BB或更高类别囊胚的数量(例如，与使用

的治疗相比)。不育症的治疗可以是进行不育症的治疗以增加受精的(2PN)卵母细胞的数量(例如，与使用

的治疗相比)。

如本文所使用的，“治疗的第一天”，也称为“刺激的第一天”，是指向患者施用(例如，重组)FSH的剂量的第一天。治疗(刺激)的第一天可以发生在患者的月经周期的第1天、第2天或第3天，例如第2天或第3天。换言之，治疗(刺激)的第一天可以是患者开始月经出血后的一天、两天或三天，例如两天或三天，这与该术语在GnRH拮抗剂或GnRH激动剂方案的临床实践中的用法一致。术语“治疗期间”意指在向患者施用FSH的一天或几天。

在本文所述的治疗中，重组FSH的施用在治疗的第一天开始并且可以持续2到20天，例如持续2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20天。第1天施用的剂量在本文中称为“起始剂量”。重组FSH的施用从治疗的第一天开始并且可以持续四到二十天，例如七到十三天，例如九到十三天，例如10到13天，例如10到11天。剂量可以每天都一样。然而，剂量的变化更有可能取决于患者的卵巢反应(例如，通过超声测量)。

根据本文所述的所有方面，重组FSH可以是如下文更详细描述的人细胞系衍生的重组FSH。在所有方面，重组FSH可以是以商标

(促卵泡素δ)(辉凌有限公司(Ferring B.V.))出售的。在所有方面，重组FSH可通过注射施用，例如皮下注射。

根据本文所述的所有方面，重组FSH组合物(例如，药物组合物)或药物可在用(不同的)药物组合物(本文称为“组合物A”(其在使用rFSH治疗的第一天之前抑制了内源性促性腺激素的产生))对患者进行预治疗之后施用。换言之，组合物(例如，药物组合物)或药物可以在受试者已经用组合物A(预)治疗之后施用，其中组合物A为类固醇、GnRH激动剂、GnRH拮抗剂等。在本文中，术语“预治疗(pre-treated或pre-treatment)”是指在使用rFSH治疗的第一天之前(即，在治疗的第1天之前)施用抑制内源性促性腺激素产生的药物组合物，这与在具有长期GnRH激动剂方案的临床实践中该术语的用法一致。

因此，本文所述的使用的组合物(例如，药物组合物)或药物可用于在施用GnRH激动剂(例如，

)后(例如，开始施用GnRH激动剂后，例如，开始每日施用GnRH激动剂后)12至16天(例如，13至15天(例如，14天)施用。另外地或可替代地，本文所述的使用的重组FSH组合物可以与GnRH激动剂一起施用。

可替代地，重组FSH组合物(例如，药物组合物)或药物可以在施用GnRH拮抗剂(例如，

)之前施用或可以在施用GnRH拮抗剂(例如，

)之前进行施用，例如，在施用GnRH拮抗剂之前施用五至六天(即，施用使得刺激的第1天是施用GnRH拮抗剂前的5天或6天)。另外地或可替代地，本文所述的使用的重组FSH组合物(例如，药物组合物)可以与GnRH拮抗剂一起施用。

典型地，根据本文所述的所有方面，在施用高(排卵)剂量的人类绒毛膜促性腺激素(hCG)(例如，4,000至11,000IU hCG，例如，5,000IU hCG，10,000IU hCG，等；或150至500μg重组hCG，例如，250μg重组hCG)之前施用或进行施用重组FSH组合物(例如，药物组合物)或药物；以诱导最终卵泡成熟。因此，在一些实施例中，本文所述的方法进一步包括施用高(排卵)剂量的人类绒毛膜促性腺激素(hCG)。

根据本文所述的所有方面，本文所述的不育症的治疗可以进一步包含：回收(例如，收获)一个或多个卵母细胞；使该一个或多个卵母细胞受精(例如，人工授精)；并且允许受精的卵母细胞发育到囊胚阶段。受精(例如，人工授精)可以是体外受精，任选地是胞浆内精子注射(ICSI)。

根据本文所述的所有方面，本文所述的不育症的治疗可以进一步包含评估收获的卵母细胞受精后获得的囊胚的质量[例如，鉴定一个或多个高质量(即，级别3BB或更高级别)的囊胚]。囊胚质量的评估可以在回收卵母细胞后第5天发生，并且可以研究三个参数：囊胚扩张和孵化状态(级别1-6)、囊胚内细胞团分级(级别A-D)和滋养外胚层分级(级别A-D)，这在本领域是公知的。囊胚可以通过使用Gardner和Schoolcraft的系统给出数字得分，这在本领域是公知的，对于内细胞团和滋养外胚层添加了D-类别。

根据本文所述的所有方面，本文所述的不育症的治疗可以进一步包含转移通过评估囊胚的质量而鉴定的一个或多个囊胚(例如，新鲜囊胚转移)。在具体实施例中，转移单个囊胚。

根据本文所述的所有方面，本文所述的不育症的治疗可以进一步包含冷冻通过评估囊胚的质量而鉴定的一个或多个囊胚(用于以后转移)。

因此，根据本文所述的所有方面，本文所述的不育症的治疗可以进一步包含除了任选的施用GnRH激动剂或拮抗剂、施用重组FSH和施用排卵剂量的hCG之外，还包含回收(例如，收获)一个或多个卵母细胞；使一个或多个卵母细胞受精(例如，体外授精)-允许受精的卵母细胞发育到囊胚阶段，并冷冻保存一个或多个囊胚(例如，通过评估囊胚的质量鉴定的囊胚，例如，用于以后转移)。

本文所述的不育症的治疗可以用于并且可以有效地用于优化累积效率(即，在新鲜或随后冷冻保存的周期后使患者的成功妊娠的机会最大化)和/或降低OHSS风险(即，通过以下方式降低OHSS的风险，例如监测和/或控制对治疗的过度反应)。

降低OHSS风险的治疗

根据本文所述的所有方面，本文所述的不育症的治疗可以包括监测患者对治疗的过度反应的步骤。在本文中，“对治疗过度反应”被定义为患者对治疗的反应，该反应在治疗中的任何时间点导致具有≥12mm的直径的≥20个卵泡和/或具有≥3,000pg/mL的血清雌二醇浓度。该监测患者对治疗的过度反应的步骤可以包含在治疗期间鉴定具有直径≥12mm的≥20个卵泡和/或血清雌二醇浓度≥3,000pg/mL的患者。

根据本文所述的所有方面，本文所述的不育症的治疗可以进一步包含向在治疗期间被鉴定为具有直径≥12mm的≥20个卵泡和/或血清雌二醇浓度≥3,000pg/mL的患者施用GnRH激动剂(例如，4.0mg)的剂量。

根据本文所述的所有方面，本文所述的不育症的治疗可以进一步包含回收(例如，收获)一个或多个卵母细胞，其中该患者在治疗期间被鉴定为具有直径≥12mm的≥20个的卵泡和/或血清雌二醇浓度≥3,000pg/mL；使该一个或多个卵母细胞受精(例如，人工授精)；允许受精的卵母细胞发育到囊胚阶段；并且冷冻保存一个或多个囊胚(例如，通过评估囊胚的质量来鉴定的囊胚，例如，用于以后的转移)。以这种方式，被鉴定为过度反应者的患者(通过其过多数量的大卵泡和/或过多的血清雌二醇水平)在其从过度反应中恢复后，可以解冻冷冻保存的囊胚并转移(冷冻周期，仅冷冻保存的胚胎转移周期)。

本文所列的重组FSH剂量可用于通过本文所述的方法和治疗方案在患者(受试者)的第一刺激方案(第一刺激“周期”)中治疗不育症。因此，该一种或多种的组合物可以用于治疗先前未通过受控的卵巢刺激治疗不育症的患者(受试者)中的不育症；用于治疗先前未完成通过受控的卵巢刺激的不育症治疗的患者(受试者)中的不育症；或用于治疗在过去六个月中未通过受控的卵巢刺激治疗不育症的患者(受试者)，更优选地在过去十二个月中未通过受控的卵巢刺激治疗不育症的患者(受试者)中的不育症。应当理解，对于通过本文所述方法和治疗方案的进一步刺激周期(即，通过受控的卵巢刺激治疗不育症)，可以通过本文所述的方法和治疗方案根据第一周期中的实际卵巢反应来调整剂量。

年龄≥35岁的患者的治疗

在一些方面，患者是年龄≥35岁的女性患者，例如年龄35-42岁。患者可以是35岁或35岁以上。患者可以是36岁或36岁以上，或37岁或37岁以上，或38岁或38岁以上，或39岁或39岁以上，或40岁或40岁以上，或41岁或41岁以上，或42岁。

患者先前可能已至少一个不育症治疗周期失败(即，患者先前可能已完成通过受控的卵巢刺激的治疗但未怀孕)，例如先前通过不同方案和/或使用不同治疗剂(例如

代替rFSH)进行的不育症治疗。

在具体实施例中，该组合物用于治疗35岁以上的患者，该患者先前已至少一个不育症治疗周期失败(例如先前通过不同方案和/或使用不同治疗剂进行的不育症治疗)。患者可能先前已多达三个周期的不育症治疗失败(例如通过不同的方案和/或使用不同的治疗剂)。

该不育症的治疗可以包含确定患者年龄的步骤，以及向具有年龄≥35的患者施用如本文所述的重组FSH的剂量的步骤。基于患者的年龄鉴定患者(治疗前)的步骤可以发生在即将对患者首次施用rFSH的剂量之前(例如，之前0到2天)(例如，在施用rFSH的起始剂量之前)。

在第一方面，提供了一种包含重组卵泡刺激素(rFSH)的组合物(例如，药物组合物)，用于治疗(例如，被鉴定为)年龄≥35岁的患者中的不育症，其中该组合物用于以每天15μg重组FSH的剂量或相当于每天15μg重组FSH的剂量施用。例如，该组合物可以用于以每天15μg重组FSH的剂量施用。重组FSH的剂量可以以与上述日剂量相当的剂量施用。例如，该组合物可以以每天15μg重组FSH的剂量施用，或稍不典型地，以相当于每三天45μg重组FSH的剂量施用(例如，用于第1天、第4天、第7天等施用)。

在另一方面，提供了用于治疗(例如，被鉴定为)年龄≥35岁的患者中的不育症的组合物(例如，药物组合物)，其中该组合物包含每天15μg重组卵泡刺激素(FSH)的剂量或相当于每天15μg重组卵泡刺激素(FSH)的剂量。例如，该组合物可以用于以每天15μg重组FSH的剂量施用。

还提供了治疗(例如，被鉴定为)年龄≥35岁的有需要的患者中的不育症的方法，该方法包括以每天15μg重组FSH的剂量或相当于每天15μg重组FSH的剂量向该患者施用重组促卵泡激素(rFSH)。如以上所指出，重组FSH的施用从治疗的第一天开始，并且可以持续两到二十天。剂量可以每天都一样。然而，剂量的变化更有可能取决于患者的卵巢反应(例如，通过超声测量)。

如以上所指出，重组FSH组合物(例如，药物组合物)或药物可在用(不同的)药物组合物(本文称为“组合物A”(其在使用rFSH治疗的第一天之前抑制了内源性促性腺激素的产生，为例如类固醇、GnRH激动剂、GnRH拮抗剂等))对患者进行预治疗之后施用。

如以上所指出，典型地，在施用高(排卵)剂量的人类绒毛膜促性腺激素(hCG)(例如，4,000至11,000IU hCG，例如，5,000IU hCG，10,000IU hCG，等；或150至500μg重组hCG，例如，250μg重组hCG)之前施用或进行施用重组FSH组合物(例如，药物组合物)或药物；以诱导最终卵泡成熟。因此，在一些实施例中，本文所述的方法进一步包括施用高(排卵)剂量的人类绒毛膜促性腺激素(hCG)。

如以上所指出，不育症的治疗可以进一步包括：回收(例如，收获)一个或多个卵母细胞；使该一个或多个卵母细胞受精(例如，人工授精)；并且允许受精的卵母细胞发育到囊胚阶段。如以上所指出，不育症的治疗可以进一步包含评估囊胚的质量并且新鲜转移一个或多个囊胚或冷冻囊胚用于以后转移。

如以上所指出，治疗可以进一步包含监测和/或控制对治疗的过度反应(例如，OHSS)。

根据另一个方面，提供了治疗年龄≥35岁的患者中的不育症的方法，和包含重组卵泡刺激素(FSH)的组合物，用于治疗年龄≥35岁的患者中的不育症，其中该方法包括，或组合物用于以每天15μg重组FSH的起始剂量施用，其中该起始剂量在治疗的至少第1天(例如在治疗的至少第1天和第2天，例如在治疗的第1天到第4天的每一天)施用，任选地，其中该剂量是(i)在任何随后的治疗日增加2至4μg rFSH(包括3μg rFSH)的首次增量剂量增加；和/或(ii)在任何随后的治疗日降低2至4μg rFSH(包括3μg rFSH)的首次增量剂量降低。

在治疗期间，可以将该剂量维持在起始剂量。剂量可以每天都一样。然而，更有可能的是剂量的变化，例如取决于患者的卵巢反应(例如，取决于卵泡生长，例如，通过超声测量)。

治疗不育症的方法可以包括监测患者对施用rFSH的卵巢反应(例如，监测卵泡生长，例如，通过超声测量)。治疗不育症的方法可以包括监测患者对施用rFSH的卵巢反应(例如，监测卵泡生长，例如，通过超声测量)，并且取决于卵泡生长，将剂量增加或降低2至4μgrFSH(包括3μg rFSH)。治疗不育症的方法可以包括在整个治疗过程中的一天或多天(例如在治疗的第5天、第7天、第9天、第11天、第13天、第15天、第17天和第19天中的一天或多天)监测患者对施用rFSH的卵巢反应(例如，监测卵泡生长，例如通过超声测量)。治疗不育症的方法可以包括在整个治疗过程中的一天或多天(例如在治疗的第5天、第7天、第9天、第11天、第13天、第15天、第17天和第19天中的一天或多天)监测患者对施用rFSH的卵巢反应(例如，监测卵泡生长的步骤，例如通过超声测量)，并且取决于卵泡生长，将剂量增加或降低2至4μg rFSH(包括3μg rFSH)。即，在整个治疗过程中，例如在治疗的第5天、第7天、第9天、第11天、第13天、第15天、第17天和第19天中的一天或多天，剂量可以根据卵泡生长而增加或降低。

剂量可以在治疗期间增量增加，在治疗期间增量降低，或在治疗期间通过增量剂量增加和增量剂量降低来改变。典型地，剂量增加的实施频率不超过每2天一次；即，直到首次增量剂量增加后至少两天，才实施第二次增量剂量增加。这种逐渐增加构成了安全的方法，并且允许治疗医师在可能增加剂量之前评估卵巢对给定剂量水平的反应。例如，治疗医师可以降低具有卵泡生长的受试者的剂量，这表明剂量减少将是适当的行动方案。剂量降低能以每天的频繁实施。该剂量可以增加至24μg rFSH的最大日剂量或降低至6μg rFSH的最小日剂量。

因此，2至4μg rFSH(包括3μg rFSH)的首次增量剂量增加可以(a)在先前剂量增量增加后至少两天，随后是2至4μg rFSH(包括3μg rFSH)的另外的增量剂量增加；和/或(b)在先前剂量增量增加后至少一天，随后是2至4μg rFSH(包括3μg rFSH)的增量剂量降低。2至4μg rFSH(包括3μg rFSH)的首次增量剂量降低可以(a)在先前剂量增量降低后至少一天或至少两天，随后是2至4μg rFSH(包括3μg rFSH)的增量剂量增加；和/或(b)在先前剂量增量降低后至少一天，随后是2至4μg rFSH(包括3μg rFSH)的另外的增量剂量降低。

应理解的是，该方面设想，例如，从治疗第1天到治疗的第4天每天15μg重组FSH的剂量，该剂量在随后的治疗日中增加至少一个增量，例如，3μg rFSH至18μg rFSH(例如，在第5天或第6天)。18μg rFSH的剂量可以持续到治疗结束，或者可以有一个或两个另外的增量剂量增加，例如，3μg rFSH至21μg rFSH、或至21μg rFSH，并且然后至24μg rFSH的最大剂量，其中每个增量剂量增加是在先前增量剂量增加后的至少两天，或者通过增量剂量增加和增量剂量降低来改变剂量，每一个在先前增量剂量变化后的适当间隔处，例如，如上所讨论，鉴于患者的卵巢反应可以是有保证的。类似地，可以实施初始剂量减少(例如，3μgrFSH至12μg rFSH(例如，在第5天或第6天))并且该剂量持续到治疗结束，或者可以有一个或两个另外的增量剂量降低，例如，3μg rFSH至9μg rFSH、或至9μg rFSH，并且然后至6μg rFSH的最小剂量，其中每个降低在先前增量剂量降低后的至少一天，或者通过增量剂量增加和增量剂量降低来改变剂量，每一个在先前增量剂量变化后的适当间隔处，例如，如上所讨论，鉴于患者的卵巢反应可以是有保证的。此方面提供了基于患者的反应以安全方式改变FSH剂量的手段。

如上文所论述的第一方面，根据此方面的治疗可以进一步包含施用高(排卵)剂量的人类绒毛膜促性腺激素(hCG)，并且任选地，回收(例如，收获)一个或多个卵母细胞；使该一个或多个卵母细胞受精(例如，人工授精)；允许受精的卵母细胞发育到囊胚阶段，进一步任选地评估囊胚的质量并且新鲜转移一个或多个囊胚或冷冻囊胚用于以后转移。另外地或可替代地，治疗可以进一步包含监测和/或控制对治疗的过度反应(例如，OHSS)。

年龄≤34岁的患者的治疗

在一些方面，患者是年龄≤34岁的女性患者，例如从18-34岁。患者可以是34或34岁以下，例如33或33岁以下，例如30或30岁以下，例如28或28岁以下。

患者可能先前已至少一个不育症治疗周期失败，例如，如上所讨论的，先前通过不同的方案和/或使用不同的治疗剂的不育症治疗。在具体实例中，该组合物用于治疗≤34岁的患者，该患者先前已至少一个不育症治疗周期失败(例如先前通过不同方案和/或使用不同治疗剂进行的不育症治疗)。在具体实例中，该组合物用于治疗30至34岁的患者，该患者先前已至少一个不育症治疗周期失败(例如先前通过不同方案和/或使用不同治疗剂进行的不育症治疗)。患者可能先前已多达三个周期的不育症治疗失败(例如通过不同的方案和/或使用不同的治疗剂)。

该不育症的治疗可以包含确定患者年龄的步骤，以及向具有年龄≤34的患者施用重组FSH的剂量的步骤。基于患者年龄鉴定患者(治疗前)的步骤可以发生在即将对患者施用rFSH的首次剂量之前(例如，之前0到2天)(例如，以确定或确认rFSH的适当的起始剂量)。

在另一方面，提供了一种包含重组卵泡刺激素(FSH)的组合物(例如，药物组合物)，用于治疗被鉴定为年龄≤34岁的患者中的不育症，其中该组合物用于以每天12μg重组FSH的剂量或相当于每天12μg重组FSH的剂量施用。例如，该组合物用于以每天12μg重组FSH的剂量施用。

在另一方面，提供了用于治疗被鉴定为年龄≤34岁的患者中的不育症的组合物(例如，药物组合物)，其中该组合物包含每天12μg重组卵泡刺激素(FSH)的剂量或相当于每天12μg重组卵泡刺激素(FSH)的剂量。例如，该组合物可以以每天12μg重组FSH的剂量施用，或稍不典型地，以相当于每三天36μg重组FSH的剂量施用(例如，用于第1天、第4天、第7天等施用)。例如，该组合物用于以每天12μg重组FSH的剂量施用。

还提供了治疗(例如，被鉴定为)年龄≤35岁的有需要的患者中的不育症的方法，该方法包括以每天12μg重组FSH的剂量或相当于每天12μg重组FSH的剂量向该患者施用重组促卵泡激素(rFSH)。

如以上所指出，重组FSH的施用从治疗的第一天开始，并且可以持续两到二十天。如以上所指出，剂量可以每天都一样。然而，更有可能的是剂量的变化，例如取决于患者的卵巢反应(例如，取决于卵泡生长，例如，通过超声测量)。

如以上所指出，重组FSH组合物(例如，药物组合物)或药物可在用(不同的)药物组合物(本文称为“组合物A”(其在使用FSH治疗的第一天之前抑制了内源性促性腺激素的产生，为例如类固醇、GnRH激动剂、GnRH拮抗剂等))对患者进行预治疗之后施用。

如以上所指出，典型地，在施用高(排卵)剂量的hCG(例如，4,000至11,000IU hCG，例如，5,000IU hCG，10,000IU hCG，等；或150至500μg重组hCG，例如，250μg重组hCG)之前进行施用重组FSH组合物(例如，药物组合物)或药物，以诱导最终卵泡成熟。在一些实施例中，本文所述的方法进一步包括施用高(排卵)剂量的人类绒毛膜促性腺激素(hCG)。

在另一方面，提供了治疗年龄≤34岁的患者中的不育症的方法，和包含重组卵泡刺激素(FSH)的组合物，用于治疗年龄≤34岁的患者中的不育症，其中该方法包括，并且组合物用于以每天12μg重组FSH的起始剂量施用，其中该起始剂量在治疗的至少第1天(包括在治疗的至少第1天和第2天，包括在治疗的第1天到第4天的每一天)施用，任选地，其中该剂量是(i)在任何随后的治疗日增加2至4μg rFSH(包括3μg rFSH)的首次增量剂量增加；和/或(ii)在任何随后的治疗日降低2至4μg rFSH(包括3μg rFSH)的首次增量剂量降低。

在治疗期间，可以将该剂量维持在起始剂量。然而，更有可能的是剂量的变化，例如取决于患者的卵巢反应(例如，取决于卵泡生长，例如，通过超声测量)。

治疗不育症的方法可以包括监测患者对施用rFSH的卵巢反应(例如，监测卵泡生长，例如，通过超声测量)。治疗不育症的方法可以包括监测患者对施用rFSH的卵巢反应(例如，监测卵泡生长的步骤，例如，通过超声测量)，并且取决于卵泡生长(例如，通过超声测量)，将剂量增加或降低2至4μg rFSH(包括3μg rFSH)。治疗不育症的方法可以包括在整个治疗过程中的一天或多天(例如在治疗的第5天、第7天、第9天、第11天、第13天、第15天、第17天和第19天中的一天或多天)监测患者对施用rFSH的卵巢反应(例如，监测卵泡生长的步骤，例如通过超声测量)。治疗不育症的方法可以包括在整个治疗过程中的一天或多天(例如在治疗的第5天、第7天、第9天、第11天、第13天、第15天、第17天和第19天中的一天或多天)监测患者对施用rFSH的卵巢反应(例如，监测卵泡生长，例如，通过超声测量)，并且取决于卵泡生长(例如，通过超声测量)，将剂量增加或降低2至4μg rFSH(包括3μg rFSH)。即，在整个治疗过程中，例如在治疗的第5天、第7天、第9天、第11天、第13天、第15天、第17天和第19天中的一天或多天，剂量可以根据卵泡生长而增加或降低。

剂量可以在治疗期间增量增加，在治疗期间增量降低，或在治疗期间通过增量剂量增加和增量剂量降低来改变。典型地，剂量增加的实施频率不超过每2天一次；即，直到首次增量剂量增加后至少两天，才实施第二次增量剂量增加。这种逐渐增加构成了安全的方法，并且允许治疗医师在可能增加剂量之前评估卵巢对给定剂量水平的反应。剂量降低能以每天的频繁实施。例如，治疗医师可以降低具有卵泡生长的受试者的剂量，这表明剂量减少将是适当的行动方案。该剂量可以增加至24μg rFSH的最大日剂量或降低至6μg rFSH的最小日剂量。

因此，2至4μg FSH(包括3μg rFSH)的首次增量剂量增加可以(a)在先前剂量增量增加后至少两天，随后是2至4μg rFSH(包括3μg rFSH)的另外的增量剂量增加；和/或(b)在先前剂量增量增加后至少一天，随后是2至4μg rFSH(包括3μg FSH)的至少一次增量剂量降低。2至4μg rFSH(包括3μg rFSH)的首次增量剂量降低可以(a)在先前剂量增量降低后至少一天或至少两天，随后是2至4μg rFSH(包括3μg rFSH)的增量剂量增加；和/或(b)在先前剂量降低后至少一天，随后是2至4μg rFSH(包括3μg rFSH)的另外的增量剂量降低。

应理解的是，该方面设想，例如，从治疗第1天到治疗的第4天每天12μg重组FSH的起始剂量，该剂量在随后的治疗日中增加至少一个增量，例如，3μg rFSH至15μg rFSH(例如，在第5天或第6天)。15μg rFSH的剂量可以持续到治疗结束，或者可以有1-3个另外的增量剂量增加，例如，3μg rFSH(例如，至18μg；至18μg并且然后至21μg rFSH；或至18μg，至21μg并且然后至24μg rFSH的最大剂量)，其中每个增量剂量增加是在先前增量剂量增加后的至少两天，或者通过增量剂量增加和增量剂量降低来改变剂量，每一个在先前增量剂量变化后的适当间隔处，如上所讨论，鉴于患者的卵巢反应可以是有保证的。类似地，初始剂量减少(例如，3μg rFSH至9μg rFSH(例如，在第5天或第6天))可以持续到治疗结束，或者可以有一个另外的增量剂量降低，例如，3μg FSH(例如，至6μg rFSH的最小剂量)，其中每个增量剂量降低是在先前增量剂量降低后的至少一天，或者通过增量剂量增加和增量剂量降低来改变剂量，每一个在先前增量剂量变化后的适当间隔处，如上所讨论，鉴于患者的卵巢反应可以是有保证的。本发明的此方面提供了基于患者的反应以安全方式改变FSH剂量的手段。

重组FSH和rFSH组合物

如以上所指出，本文所述的方法和组合物使用重组FSH(rFSH)。FSH包含92个氨基酸的α亚基(也是其他糖蛋白激素LH和绒毛膜促性腺激素(CG)的共同的亚基)，以及FSH特有的111个氨基酸的β亚基(其赋予激素的生物学特异性)(Pierce和Parsons,1981)。每个亚基通过添加复合物碳水化合物残基进行翻译后修饰。这两个亚基都携带2个N连接的聚糖附接位点，氨基酸52和78处的α亚基和氨基酸残基7和24处的β亚基(Rathnam和Saxena,1975，Saxena和Rathnam,1976)。因此，FSH被糖基化至以质量计的约30％(Dias和VanRoey.2001.Fox等人2001)。

rFSH产物的糖基化反应了宿主细胞系中存在的糖基转移酶的范围。衍生自工程化CHO细胞的可商购的rFSH产物比天然产物中发现的那些具有更为有限的聚糖修饰范围。在CHO细胞衍生的rFSH中发现的减少的聚糖异质性的实例包括二等分葡萄糖胺的缺乏和核心岩藻糖基化和乙酰氨基乳糖延伸的含量的减少(Hard等人,1990)。此外，CHO细胞仅能够使用α2,3键添加唾液酸(Kagawa等人,1988，Takeuchi等人,1988，Svensson等人,1990)；CHO细胞衍生的rFSH仅包括α2,3-连接的唾液酸，并且不包括α2,6-连接的唾液酸。因此，CHO细胞衍生的rFSH不同于天然产生的FSH(例如，人垂体/血清/尿FSH)，该天然产生的FSH含有具有α2,3和α2,6-连接的唾液酸的混合物(其中前者占优势)的聚糖。

如以上所指出，本申请者已经开发了人细胞系衍生的rFSH，其是国际专利申请号PCT/GB 2009/000978的主题，公开为WO 2009/127826 A，并且还被EC批准为

(促卵泡素δ，也称为FE 999049)。通过将人细胞系工程化制备具有α2,3和α2,6-连接的唾液酸的混合物的重组FSH，以表达rFSH和α2,3唾液酸转移酶。人细胞系衍生的重组FSH的氨基酸序列(其是国际专利申请号PCT/GB 2009/000978的主题，公开为WO 2009/127826 A(例如，FE 999049))是天然人FSH序列，但产物具有不同的糖基化模式。所表达的产物是高度酸性的并且携带α2,3-和α2,6-连接的唾液酸的混合物；后者由内源性唾液酸转移酶活性提供。发现唾液酸键的类型α2,3-或α2,6-对FSH的生物清除具有显著影响。因此，与仅具有α2,3连接的唾液酸(Kagawa等人,1988，Takeuchi等人,1988，Svensson等人,1990)且具有降低的唾液酸含量(Ulloa-Aguirre等人1995.，Andersen等人2004)的CHO细胞衍生的重组产物相比，

(例如，FE 999049)在生物学上可能更适当。

因此，根据本文所述的方法和组合物使用的重组FSH可在人细胞系(例如，

细胞系)中产生或表达。重组FSH可以在

细胞系、

衍生的细胞系或经修饰的

细胞系中产生或表达。在

细胞系中产生或表达的重组FSH将包括由(细胞系的)内源性唾液酸转移酶活性提供的一些α2,6-连接的唾液酸(α2,6唾液酸化)，并且将包括由内源性唾液酸转移酶活性提供的一些α2,3-连接的唾液酸(α2,3唾液酸化)。可以使用α2,3-唾液酸转移酶修饰细胞系。可以使用α2,6-唾液酸转移酶修饰细胞系。可替代地或另外地，重组FSH可以包括由(细胞系的)内源性唾液酸转移酶活性提供的α2,6-连接的唾液酸(α2,6唾液酸化)。在本文中，术语“人衍生的重组FSH”意指在人细胞系中产生或表达的重组FSH(例如，通过将人细胞系工程化制备的重组FSH)。

本文所述的方法和组合物中使用的重组FSH可以包括α2,3-和α2,6-唾液酸化。根据本发明使用的重组FSH可以具有总唾液酸化的1％至99％为α2,3-唾液酸化。根据本发明使用的重组FSH可以具有总唾液酸化的1％至99％为α2,6-唾液酸化。重组FSH可以具有1％至50％的总唾液酸化为α2,6-唾液酸化，并且50％至99％的总唾液酸化为2,3-唾液酸化。例如，80％至95％，例如，80％至90％，例如，82％至89％，例如，85％至89％的总唾液酸化可以为α2,3-唾液酸化。例如，5％至20％，例如，10％至20％，例如，11％至18％，例如，11％至15％的总唾液酸化可以为α2,6-唾液酸化。在一个实例中，重组FSH具有5％至20％的总唾液酸化为α2,6-唾液酸化，并且80％至95％的总唾液酸化为2,3-唾液酸化。在另一个实例中，重组FSH具有50％至80％的总唾液酸化为α2,6-唾液酸化，并且20％至50％的总唾液酸化为2,3-唾液酸化。

在本文中，“唾液酸化”，它意指重组FSH碳水化合物结构上存在的唾液酸残基的量。与本领域中的用法一致，α2,3-唾液酸化意指2,3位置处的唾液酸化并且α2,6唾液酸化意指2,6位置处的唾液酸化。因此，“总唾液酸化的％可以是α2,3唾液酸化”是指存在于在2,3位置被唾液酸化的FSH(或hCG)中的唾液酸残基的总数量的％。术语“总唾液酸化的％为α2,6-唾液酸化”是指存在于在2,6位置被唾液酸化的FSH(或hCG)中的唾液酸残基总数量的％。

在所有方面，rFSH可作为单一同种型或同种型的混合物存在。

组合物可以是药物组合物。该药物组合物用于治疗不育症。不育症的治疗可以包含ART前COS。根据本文披露的方法和治疗方案，药物组合物可以例如在使用已知FSH制剂的医学适应证中使用。

重组FSH、组合物或药物组合物可以配制为熟知的用于任何药物施用途径的组合物，例如，口服、直肠、肠胃外、经皮(例如，贴片技术)、静脉内、肌内、皮下(例如，用于皮下注射)、脑池内、阴道内、腹腔内、局部(粉剂、软膏剂或滴剂)或作为口腔或鼻腔喷雾。典型的组合物包含药学上可接受的载体，例如水溶液、无毒赋形剂(包括盐和防腐剂、缓冲液等)，如Remington’s Pharmaceutical Sciences[雷明顿药物科学]第十五版(马克出版公司(MattPublishing Company)，1975)，1405至1412和1461-87页，和国家处方集XIV十四版(American Pharmaceutical Association[美国制药协会]，1975)中所述，等。例如，重组FSH、组合物或药物组合物可以被配制用于注射，例如用于皮下注射。

适合的水性和非水性药物载体、稀释剂、溶剂或媒介物的实例包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、羧甲基纤维素以及其适合的混合物、植物油(如橄榄油)、和可注射的有机酯(如油酸乙酯)。

本发明的组合物还可以包含添加剂，例如但不限于防腐剂、润湿剂、乳化剂、表面活性剂和分散剂。可以包括抗细菌剂和抗真菌剂以防止微生物生长，并且包括例如间甲酚、苯甲醇、对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等。如果包括防腐剂，则优选苯甲醇、苯酚和/或间甲酚；然而，防腐剂绝不限于这些实例。此外，可能需要包括等渗剂，如糖、氯化钠等。

例如，该组合物或药物可以包含重组FSH和聚山梨酯20、L-甲硫氨酸、苯酚和精氨酸盐酸盐中的一种或多种。这样的组合物可以被配制用于注射，例如用于皮下注射。例如，该组合物或药物可以是

配制品(具有赋形剂苯酚、聚山梨酯20、L-甲硫氨酸、十水硫酸钠、磷酸氢二钠、磷酸[浓缩的，用于pH调节]、氢氧化钠[用于pH调节]和注射用水的rFSH)。

可注射的配制品可例如通过细菌阻挡滤膜过滤、或将灭菌剂以无菌的固体组合物(它们在使用前可溶解或分散于无菌水或其他无菌可注射介质中)的形式加入而进行杀菌。可注射的配制品可在任何合适的容器(例如小瓶、预填充式注射器、注射盒等)中提供。

重组FSH、组合物或药物可被配制用于单次使用或用于多次使用(多剂量)。如果重组FSH、组合物或药物被配制用于多次使用，则典型地包括一种或多种防腐剂。如果包括防腐剂，则优选苯甲醇、苯酚或间甲酚；然而，防腐剂绝不限于这些实例。该单次使用或多次使用配制的组合物或药物可进一步包含氨基酸或氨基酸的组合。典型地，该氨基酸为精氨酸，例如添加为精氨酸或更典型地精氨酸盐酸盐。

重组FSH、组合物或药物可以包括在容器中，例如小瓶、预填充药筒(例如，用于单次施用或多次使用)或注射装置(如“笔”，用于例如多剂量施用)。

重组FSH、组合物或药物组合物可以是包括rFSH的配制品(例如，可注射配制品)。

重组FSH、组合物或药物可以以任何适当的包装提供。例如，组合物或药剂可以包括多个含有FSH的容器(例如，预先填充注射器或小瓶)。注射器或小瓶可以包装在泡罩包装物中或以其他手段保持无菌。任何组合物或药物可以任选地包括使用FSH配制品的说明书。

药物组合物的各种组分的pH和精确浓度是根据本领域中的常规实践来调节的。参见GOODMAN和GILMAN，THE PHARMACOLOGICAL BASIS FOR THERAPEUTICES[治疗的药理学基础]，第7版。在典型实施例中，重组FSH、组合物或药物作为用于肠胃外施用的组合物提供。制备肠胃外配制品的通用方法在本领域中是已知的并且描述于REMINGTON中；THE SCIENCEAND PRACTICE OF PHARMACY[药学的科学与实践]，同上，第780-820页。该肠胃外组合物可以以液体配制品形式或作为固体提供，该液体配制品或固体将恰在施用前与无菌可注射介质混合。可以剂量单位形式提供肠胃外组合物以易于施用和实现剂量均一性。

在另一方面，提供了重组卵泡刺激素(FSH)在制造用于治疗如本文所述的(例如，被鉴定为)年龄≥35岁的患者中的不育症的药物中的用途。

在另一方面，提供了重组卵泡刺激素(FSH)在制造用于治疗如本文所述的被鉴定为年龄≤34岁的患者中的不育症的药物中的用途。

在以下实例中展示了另外的方面，这些实例在任何方面都不是限制性的。

实例

实例1：一项随机化、双盲、安慰剂对照、平行组、多中心试验，该试验研究FE999049

在经受辅助生殖技术的年龄35-42岁妇女中的受控的卵巢刺激中的功效和安全性

剂量选择

剂量选择由申请人事先的临床试验告知，申请人的年龄不考虑作为剂量选择的因素。具体地，在265例年龄上至37岁的IVF/ICSI患者中进行了FE 999049的2期剂量反应试验。它评价了卵巢对5种不同剂量的FE 999049(5.2、6.9、8.6、10.3和12.1μg；固定剂量)以及150IU GONAL-F(其被包括在内作为参考治疗)的反应。主要终点是回收的卵母细胞的数量。针对5.2-12.1μg测试的剂量范围，建立了FE 999049相对于回收的卵母细胞数量的统计学上显著的(p<0.001)剂量反应。刺激结束时也看到了卵泡体积、雌二醇、抑制素B和抑制素A的剂量-反应关系(全部p<0.001)。在受试者水平上，回收的卵母细胞≥15个的妇女比例随着FE 999049剂量的增加而增加。12.1μg FE 999049的FE 999049剂量水平产生了最高的平均卵母细胞数量、回收的卵母细胞≥15个的妇女比例，最低的回收的卵母细胞<3个的患者的比例以及最高的受精的卵母细胞数量。

由于相对低的事件率，基于2期数据的OHSS风险的建模是不可行的。然而，OHSS的发生率与卵巢反应的程度相关，并且由此间接地在这些分析中解决。在2期试验中，早期中度OHSS仅发生在10.3和12.1μg FE 999049剂量(每组一名受试者)。有关其他安全性方面，12.1μg FE 999049的不良事件总发生率不高于的2期试验中观察到的10.3μg的不良事件总发生率。

基于以上基本原理，诸位申请人针对<35岁(例如，年龄≤34岁)的ART患者(例如，IVF/ICSI患者)的年龄组提出12μg FE 999049的起始剂量(参见以下实例2)。

针对年龄≥35岁的受试者(在上述试验中用12μg FE 999049刺激后具有4-7个回收的卵母细胞)的未公开数据进行回顾性内部分析指定在第二周期试验中剂量增加25％。如下表中所示，FE 999049剂量从12μg增加到15μg与平均增加1.2个卵母细胞和1.2个受精的卵母细胞相关，而没有伴随中/重度OHSS发生率的增加。这些数据向申请人表明，一些年龄≥35岁的妇女可以受益于接受15μg而不是12μg FE 999049，而没有安全问题。在这些用适度高于15μg的起始剂量治疗的大龄妇女中，过度反应可以通过GnRH激动剂触发管理而不损害累积功效结果。

≥35岁的受试者中的卵巢反应

在第1周期用12μg FE 999049治疗并在第2周期用15μg FE999049治疗

数据为平均值(SD)或百分比。N＝34

总之，上文所论述的第一次试验使申请人确定，对于<35岁妇女(例如，年龄≤34岁)，安全且有效的起始剂量为12μg FE 999049，并且上文所论述的回顾性分析向申请人表明，大龄妇女(例如，35-42岁)的安全且有效的起始剂量为15μg FE 999049。

在本文所述的年龄≥35岁的妇女的治疗中，允许以逐渐的方式增加剂量，最初四天的起始剂量固定为15μg，并且随后的剂量增加频率不超过每2天一次。该逐渐增加构成一种安全的方法，其中研究者在可能增加剂量之前判断卵巢对剂量水平的反应。在刺激期间，每日FE 999049剂量的降低将按照研究者的判断实施，例如对于具有卵泡生长的受试者，表明了剂量减少将是适当的行动方案。

申请人预期，该试验将表明，剂量方案将使卵母细胞产率和产生的累积妊娠率两者最大化，同时保持安全性。

该方案还提供了通过使用GnRH激动剂触发器和用于那些患者的仅冷冻保存的胚胎转移周期来治疗具有高反应的患者的组合物。

方法

这将是随机化、双盲、安慰剂对照、平行组、多中心的试验，该试验评估重组FSH制剂FE 999049在年龄35-42岁的受试者中的功效和安全性，这些受试者在促性腺激素释放激素(GnRH)拮抗剂方案后经受了IVF/ICSI的受控的卵巢刺激。主要终点是从受控的卵巢刺激开始12个月内开始的新鲜周期和冷冻保存周期后的累积持续妊娠率。因此，该试验旨在通过遵循来自新鲜和后续冷冻保存周期两者的结果，以更完整的方式捕获单个受控的卵巢刺激周期的临床功效。次要终点包括FSH作用的药代动力学参数以及与来自新鲜周期和随后冷冻保存周期的受控的卵巢刺激相关的功效和安全性参数。

受控的卵巢刺激和新鲜周期

受试者将在随机化前90天内进行筛选，以符合纳入和排除标准(参见下文)。在月经周期的第2-3天，受试者将以10:1的比率随机化至FE 999049或安慰剂，并且将开始受控的卵巢刺激。FE 999049和安慰剂将使用预填充的注射笔自我皮下施用。

分配至用FE 999049治疗的受试者将接受每日15μg的起始剂量，该剂量在最初四个刺激日是固定的。基于卵巢反应，可以将剂量调整3μg，其中实施的剂量增加频率不超过每2天一次和/或按照研究者的判断实施剂量降低。最小日剂量为6μg，并且最大日剂量为24μg。分配至安慰剂的受试者将注射笔拨到与施用FE 999049相同的数值(剂量)。受试者可以用FE 999049或安慰剂治疗最多20天。除GnRH激动剂用于触发最终卵泡成熟外，不允许靠岸疗法(Coasting)、使用多巴胺激动剂或任何其他药物来预防早期卵巢过度刺激综合征(OHSS)。

在刺激期间，受试者将在刺激第1天和第5天通过经阴道超声监测，并且此后至少每两天一次监测。当主要卵泡达到直径≥14mm时，每日进行经阴道超声。为防止黄体化激素(LH)过早激增，对于≥3个具有直径≥10mm的卵泡的受试者，将在刺激第5天开始250μgGnRH拮抗剂(醋酸加尼瑞克，

默沙东公司(Merck Sharp&Dohme))。在刺激第5天未能满足该GnRH拮抗剂标准的受试者将至少每两天一次继续监测，并且当/如果满足该标准，将开始使用GnRH拮抗剂。GnRH拮抗剂将持续整个刺激时间段。只要观察到≥2个具有直径≥17mm的卵泡，就将触发最终卵泡成熟。如果有<20个具有直径≥12mm的卵泡，将施用10,000IU人类绒毛膜促性腺激素(hCG；

辉凌制药(FerringPharmaceuticals))。如果有≥20个具有直径≥12mm的卵泡或血清雌二醇浓度≥3,000pg/mL(本领域所熟知的血液测试)，将施用4.0mg GnRH激动剂(醋酸亮丙瑞林，LEUPROLIDE

山德士公司(Sandoz))，并取消新鲜囊胚转移。如果在刺激8天后，研究者判断到第20天不太可能达到触发标准，周期将被取消。如果刺激的20天后未满足触发标准，则周期将被取消。

卵母细胞回收将在触发最终卵泡成熟后36h(±2h)发生，并且回收后4h(±1h)通过IVF或ICSI对卵母细胞进行人工授精。不允许进行补救ICSI(胞浆内精子注射)。受精和胚胎发育将被评估。对于经受用hCG触发最终卵泡成熟并具有<20个回收的卵母细胞的受试者，将在回收卵母细胞后第5天(囊胚期)进行转移。回收卵母细胞后第5天的囊胚质量的评估将评估三个参数：囊胚扩张和孵化状态(级别1-6)、囊胚内细胞团分级(级别A-D)和滋养外胚层分级(级别A-D)，这在本领域是公知的。囊胚将通过使用Gardner和Schoolcraft的系统给出数字得分，这在本领域是公知的，对于内细胞团和滋养外胚层添加了D-类别。如果至少有一个优质(即级别3BB或以上级别)囊胚可用，受试者将转移一个囊胚，或如果没有优质囊胚可用，则转移一个或两个囊胚。其余的囊胚将通过玻璃化冷冻保存。对于hCG施用后具有≥20个回收的卵母细胞的受试者和经受GnRH激动剂触发最终卵泡成熟的受试者，在新鲜周期中不会发生转移，并且替代地将囊胚冷冻保存。

对于因卵巢反应不良而未能达到触发标准的受试者或回收的卵母细胞≤3个的受试者，将在试验外使用经批准的促性腺激素制剂为ART周期提供药物和经济支持。

将提供阴道孕酮插入物(孕酮，

辉凌制药)100mg，每日三次(TID)，用于从回收卵母细胞后第二天的黄体期支持，并持续到月经、β人类绒毛膜促性腺激素阴性(βhCG测试)、妊娠终止或直到持续妊娠被记录。

转移后10-14天进行血清βhCG测试，转移后5-6周后经阴道超声证实临床及生命妊娠，并且转移后8-9周经阴道或腹部超声证实持续妊娠。

冷冻保存周期

该试验涵盖了从受控的卵巢刺激开始12个月内开始的冷冻保存周期。任何冷冻保存周期都可以选择程序化周期或天然周期。

任何程序化冷冻保存周期将在月经开始的3天内开始施用雌二醇(雌二醇片剂USP，美国梯瓦制药有限公司(Teva Pharmaceuticals USA,Inc.))，2mg TID或3mg每日两次(BID)(或基于研究者的判断3mg TID，如果在之前的周期中显示每日6mg的剂量不足)。如果在雌二醇治疗的10-12天后，子宫内膜厚度≥8mm，受试者将在接下来的5天内开始每日肌肉(IM)注射50mg孕酮(注射用孕酮(PROGESTERONE Injection)USP，西沃德制药集团(Westward Pharmaceutical Corp)或华生制药公司(Watson Pharma，Inc.))，联合雌二醇治疗。如果不符合子宫内膜厚度标准，可在7天内重复超声评估。在程序化的冷冻保存周期中，在升温和评估囊胚存活和再扩增后，一个或两个囊胚的转移将发生在孕酮开始的第6天。如果至少有一个优质(即级别3BB或以上级别)囊胚可用，受试者将转移一个囊胚，或如果没有优质囊胚可用，则转移一个或两个囊胚。将继续施用黄体期支持(雌二醇和IM孕酮)，直到月经、βhCG测试阴性、妊娠终止或直到持续妊娠被记录。

任何天然冷冻保存周期将在月经开始后7天开始，由受试者每日监测尿LH。在通过血清LH(当地实验室)和≥8mm的子宫内膜厚度确认LH激增后的第二天，受试者将使用100mgTID阴道孕酮插入物(孕酮，

辉凌制药)开始黄体期支持。在天然的冷冻保存周期中，在升温和评估囊胚存活和再扩增后，一个或两个囊胚的转移将发生在LH激增+7天。如果至少有一个优质(即级别3BB或以上级别)囊胚可用，受试者将转移一个囊胚，或如果没有优质囊胚可用，则转移一个或两个囊胚。将继续施用黄体期支持(阴道孕酮)，直到月经、βhCG测试阴性、妊娠终止或直到持续妊娠被记录。

在第一个冷冻保存周期中子宫内膜厚度达不到≥8mm将导致周期取消，并在程序化周期中，施用100mg IM孕酮(注射用孕酮USP，西沃德制药集团或华生制药公司)以诱导撤退性出血。在随后的冷冻保存周期中，囊胚转移可以基于研究者的判断进行，而不考虑子宫内膜的厚度。

在所有程序化和天然冷冻保存周期中，转移后10-14天进行血清βhCG测试，转移后5-6周后经阴道超声证实临床及生命妊娠，并且转移后8-9周经阴道或腹部超声证实持续妊娠。

试验完成后，允许受试者根据当地指南和/或法规使用冷冻保存的囊胚。

从受控的卵巢刺激开始12个月内开始的新鲜周期或冷冻周期中获得的所有持续妊娠的受试者将被随访直到分娩，以收集活胎出生率的信息。此外，还将收集新生儿健康的数据，包括出生时、出生后4周和1年内的轻微/重大先天性异常。

纳入标准

1.在任何试验相关程序之前签署的知情同意书。

2.由研究者判断处于良好的身体和心理健康。

3.35岁和42岁年龄之间的绝经前女性。受试者签署知情同意书时必须至少35岁(包括35岁生日)，随机化时不超过42岁(截至43岁生日前一天)。

4.筛查时的体重指数(BMI)在17.5和38.0kg/m²(包括端值)之间。

5.诊断为输卵管不育症、不明原因的不育症、I/II期子宫内膜异位症或伴侣诊断为男性因素不育症的不育症妇女，有资格使用男性伴侣或精子捐赠者的新鲜或射出的精子进行体外受精(IVF)和/或胞浆内精子注射(ICSI)。

6.随机化前至少有6个月的不育症的历史记录(不适用于输卵管或严重男性因素不育症，或当指示使用供体精子时的情况)。

7.24-35天(包括端值)的规律的月经周期。

8.子宫输卵管造影、宫腔镜或生理盐水输注超声，记录筛查时或筛查前1年内子宫与预期的正常功能一致(例如，没有临床干扰子宫肌瘤(定义为任何大小的粘膜下肌瘤或直径大于3cm的壁内肌瘤，无息肉且无先天性结构异常(这与妊娠机会降低相关))的证据)。

9.经阴道超声记录两个卵巢的存在和充分显像，筛查时无显著异常(如卵巢增大，这将禁止使用促性腺激素)且附件正常(例如，没有输卵管积水)的证据。两个卵巢都必须易于卵母细胞回收。

10.卵泡早期(周期第2-4天)卵泡刺激素(FSH)的血清水平在1和15IU/L之间(随机化前3个月内获得的结果)。

11.筛查时或筛查前6个月内血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒(HCV)和人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体测试呈阴性。

12.愿意接受从受控的卵巢刺激开始12个月内开始的新鲜周期和冷冻保存周期的囊胚转移政策(使用本试验获得的囊胚)，即转移一个囊胚(如果有优质囊胚可用)或转移一个或两个囊胚(如果没有优质囊胚可用)。

13.愿意并能够遵守试验程序，包括填写日记和参加预定随访，以及提供出生后长达1年的新生儿健康数据。

排除标准

1.针对IVF/ICSI多于一个之前的受控的卵巢刺激周期。

2.已知子宫内膜异位症III-IV期(由修订的美国生殖医学学会(ASRM)分类定义，2012年)。

3.已知的无排卵史。

4.在刺激第1天随机化前，经阴道超声观察到一个或多个≥10mm的卵泡(包括囊肿)。

5.已知的反复流产史(定义为超声证实妊娠[不包括异位妊娠]后和妊娠24周前连续三次流产)。

6.受试者或其伴侣/精子捐赠者的已知异常核型(如适用)，取决于本试验中用于人工授精的精子来源。如果将使用伴侣精子，并且精子产生严重受损(浓度<100万/mL)，必须记录正常核型，包括没有Y染色体微缺失。

7.任何已知的临床上显著的全身性疾病(例如，胰岛素依赖型糖尿病)。

8.已知的遗传性或获得性血栓形成倾向。

9.主动动脉或静脉血栓栓塞或严重血栓性静脉炎，或这些事件的病史。

10.任何已知的内分泌或代谢异常(垂体、肾上腺、胰腺、肝脏或肾脏)，药物控制的亚临床甲状腺功能减退症除外。

11.已知卵巢、乳腺、子宫、肾上腺、垂体或下丘脑的肿瘤，这将禁止使用促性腺激素。

12.已知的中度或重度肾功能或肝损害。

13.任何临床化学、血液学、促甲状腺激素(TSH)或催乳素、或筛查时的生命体征的异常发现，其由研究者判断有临床意义。

14.目前正在母乳喂养。

15.未确诊的阴道出血。

16.随机化前三年内观察到的具有临床意义的已知的异常宫颈细胞学检查(除非临床意义已得到解决)。

17.筛查妇科检查时的发现排除了促性腺激素刺激或与妊娠机会降低有关，如先天性子宫畸形或宫内节育器残留。

18.妊娠(筛查和随机化前必须记录尿妊娠测试阴性)或妊娠禁忌症。

19.目前已知的活动性盆腔炎疾病。

20.随机化前最后一个月经周期期间使用生育调节剂，包括脱氢表雄酮(DHEA)、二甲双胍或口服避孕药、孕激素或雌激素制剂的周期规划。

21.随机化前最后一个月经周期使用激素制剂(甲状腺药物除外)。

22.已知的化疗史(妊娠状况除外)或放疗史。

23.目前或过去(随机化前1年)酗酒或吸毒。

24.目前(上个月)每周摄入超过14单位的乙醇(一单位相当于12液盎司普通啤酒(5％乙醇)、5液盎司葡萄酒(12％乙醇)或1.5液盎司的80标准酒精度的蒸馏酒(40％乙醇)。

25.目前或过去(随机化前3个月)每天吸烟超过10支的习惯。

26.已知对本试验所用药物产品中的任何活性成分或赋形剂有超敏反应。

27.任何已知的将阻止使用雌激素或孕激素化合物的临床状况。

28.以前参加过该试验。

29.在随机化前的最后3个月期间使用任何未注册的研究性药物。

实例2：一项随机化、双盲、安慰剂对照、平行组、多中心试验，该试验研究FE999049在经受辅助生殖技术的年龄18-34岁妇女中的受控的卵巢刺激中的功效和安全性

剂量选择

实例1的“剂量选择”部分中解释了为该患者群体选择12μg FSH背后的基本原理。申请人预期，该试验将表明，剂量方案将使卵母细胞产率和产生的累积妊娠率两者最大化，同时保持安全性。该方案还提供了通过使用GnRH激动剂触发器和用于那些患者的仅冷冻保存的胚胎转移周期来治疗具有高反应的患者的组合物。

方法

这将是随机化、双盲、安慰剂对照、平行组、多中心的试验，该试验评估rFSH制剂FE999049在年龄18-34岁的受试者中的功效和安全性，这些受试者在促性腺激素释放激素(GnRH)拮抗剂方案后经受了IVF/ICSI的受控的卵巢刺激。主要终点是从受控的卵巢刺激开始12个月内开始的新鲜周期和冷冻保存周期后的累积持续妊娠率。因此，该试验旨在通过遵循来自新鲜和后续冷冻保存周期两者的结果，以更完整的方式捕获单个受控的卵巢刺激周期的临床功效。次要终点包括FSH作用的药代动力学参数以及与来自新鲜周期和随后冷冻保存周期的受控的卵巢刺激相关的功效和安全性参数。

受控的卵巢刺激和新鲜周期

受试者将在随机化前90天内进行筛选，以符合纳入和排除标准。除纳入标准3外，这些标准与实例1相似：在该实例2试验中，患者为年龄在18和34岁之间的绝经前女性。受试者签署知情同意书时必须至少18岁(包括18岁生日)，随机化时不超过34岁(截至35岁生日前一天)。在月经周期的第2-3天，受试者将以10:1的比率随机化至FE 999049或安慰剂，并且将开始受控的卵巢刺激。FE 999049和安慰剂将使用预填充的注射笔自我皮下施用。

分配至用FE 999049治疗的受试者将接受每日12μg的起始剂量，该剂量在最初四个刺激日是固定的。基于卵巢反应，可以将剂量调整3μg，其中实施的剂量增加频率不超过每2天一次和/或按照研究者的判断实施剂量降低。最小日剂量为6μg，并且最大日剂量为24μg。分配至安慰剂的受试者将注射笔拨到与施用FE 999049相同的数值(剂量)。受试者可以用FE 999049或安慰剂治疗最多20天。除GnRH激动剂用于触发最终卵泡成熟外，不允许靠岸疗法(Coasting)、使用多巴胺激动剂或任何其他药物来预防早期卵巢过度刺激综合征(OHSS)。

辉凌制药(FerringPharmaceuticals))。如果有≥20个具有直径≥12mm的卵泡或血清雌二醇浓度≥3,000pg/mL(当地实验室)，将施用4.0mg GnRH激动剂(醋酸亮丙瑞林，LEUPROLIDE ACETATE，山德士公司)，并取消新鲜囊胚转移。如果在刺激8天后，研究者判断到第20天不太可能达到触发标准，周期将被取消。如果刺激的20天后未满足触发标准，则周期将被取消。

卵母细胞回收将在触发最终卵泡成熟后36h(±2h)发生，并且回收后4h(±1h)通过IVF或ICSI对卵母细胞进行人工授精。不允许进行补救ICSI。受精和胚胎发育将被评估。对于经受用hCG触发最终卵泡成熟并具有<20个回收的卵母细胞的受试者，将在回收卵母细胞后第5天(囊胚期)进行转移。所有受试者将转移一个可获得的最高质量的囊胚，并且其余的囊胚将通过玻璃化冷冻保存。对于hCG施用后具有≥20个回收的卵母细胞的受试者和经受GnRH激动剂触发最终卵泡成熟的受试者，在新鲜周期中不会发生转移，并且替代地将囊胚冷冻保存。

将提供阴道孕酮插入物(孕酮，

冷冻保存周期

任何程序化冷冻保存周期将在月经开始的3天内开始施用雌二醇(雌二醇片剂USP，美国梯瓦制药有限公司(Teva Pharmaceuticals USA,Inc.))，2mg TID或3mg每日两次(BID)(或基于研究者的判断3mg TID，如果在之前的周期中显示每日6mg的剂量不足)。如果在雌二醇治疗的10-12天后，子宫内膜厚度≥8mm，受试者将在接下来的5天内开始每日肌肉(IM)注射50mg孕酮(注射用孕酮(PROGESTERONE Injection)USP，西沃德制药集团(Westward Pharmaceutical Corp)或华生制药公司(Watson Pharma，Inc.))，联合雌二醇治疗。如果不符合子宫内膜厚度标准，可在7天内重复超声评估。在程序化冷冻保存周期中，在升温和评估囊胚存活和再扩增后，一个可获得的最高质量的囊胚的转移将发生在孕酮开始的第6天。将继续施用黄体期支持(雌二醇和IM孕酮)，直到月经、βhCG测试阴性、妊娠终止或直到持续妊娠被记录。

任何天然冷冻保存周期将在月经开始后7天开始，由受试者每日监测尿LH。在通过血清LH(当地实验室)和≥8mm的子宫内膜厚度确认LH激增后的第二天，受试者将使用100mgTID阴道孕酮插入物(孕酮，ENDOMETRIN，辉凌制药)开始黄体期支持。在天然的冷冻保存周期中，在升温和评估囊胚存活和再扩增后，一个可获得的最高质量的囊胚的转移将发生在LH激增+7天。将继续施用黄体期支持(阴道孕酮)，直到月经、βhCG测试阴性、妊娠终止或直到持续妊娠被记录。

实例3-

是在

细胞系中表达的重组FSH，该细胞系通过在WO2013/020996和WO 2009/127826A中披露的方法工程化。

的生产许可证持有者是丹麦哥本哈根，凯·菲斯克花园(Kay Fiskers Plads)11,2300的辉凌制药A/S，并且在英国，可从英国UB7 7PS西德雷顿教堂路德雷顿大厅(Drayton Hall,Church Road,WestDrayton,UB 7 7PS,UK)的辉凌制药购买。在

中的活性物质是促卵泡素δ(FE 999049)。

高度唾液酸化并包括α2,3-和α2,6-唾液酸化，其中约85％至90％的总唾液酸化为α2,3-唾液酸化，并且约10％至15％的总唾液酸化为α2,6-唾液酸化。

是注射用透明无色的溶液。一毫升溶液含有33.3微克在每毫升溶液中的促卵泡素δ。其他成分是苯酚、聚山梨酯20、L-甲硫氨酸、十水合硫酸钠、磷酸氢二钠、浓磷酸、氢氧化钠和注射用水。

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上文已经披露了由下列编号的段落所定义的组合物、使用的组合物、用途和方法(例如，治疗方法)：

1.一种包含重组卵泡刺激素(FSH)的组合物，用于治疗年龄≥35岁的患者中的不育症，其中该组合物用于以每天15μg重组FSH的(例如，起始)剂量或相当于每天15μg重组FSH的(例如，起始)剂量施用。

2.一种用于治疗年龄≥35岁的患者中的不育症的组合物，其中该组合物包含每天15μg重组卵泡刺激素(FSH)的(例如，起始)剂量或相当于每天15μg重组卵泡刺激素(FSH)的(例如，起始)剂量。

3.用于根据段落1或段落2所述使用的组合物，其中该组合物以每天15μg重组FSH的(例如，起始)剂量施用。

4.一种包含重组卵泡刺激素(FSH)的组合物，用于治疗年龄≥35岁的患者中的不育症，其中该组合物用于以每天15μg重组FSH的起始剂量施用，其中该起始剂量在治疗的至少第1天(优选地在治疗的至少第1天和第2天，更优选地在治疗的第1天到第4天的每一天)施用，任选地，其中该剂量(i)在任何随后的治疗日增加3μg重组FSH的首次增量剂量增加；和/或(ii)在任何随后的治疗日降低3μg重组FSH的首次增量剂量降低。

5.用于根据段落4所述使用的组合物，其中在治疗期间，将该剂量维持在起始剂量。

6.用于根据段落4所述使用的组合物，其中3μg重组FSH的首次增量剂量增加(a)在先前剂量增量变化后至少两天，随后是3μg重组FSH的至少一次另外的增量剂量增加；和/或(b)在先前剂量增量变化后至少一天，随后是3μg重组FSH的至少一次增量剂量降低。

7.用于根据段落4所述使用的组合物，其中3μg重组FSH的首次增量剂量降低(a)在先前增量剂量的剂量变化后至少两天，随后是3μg重组FSH的至少一次增量剂量增加；和/或(b)在先前剂量变化后至少一天，随后是3μg重组FSH的至少一次另外的增量剂量降低。

8.用于根据段落4、6或7所述使用的组合物，其中该剂量增加至24μg的最大日剂量或降低至6μg的最小日剂量。

9.一种包含重组卵泡刺激素(FSH)的组合物，用于治疗被鉴定为年龄≤34岁的患者中的不育症，其中该组合物用于以每天12μg重组FSH的(例如，起始)剂量或相当于每天12μg重组FSH的(例如，起始)剂量施用。

10.一种用于治疗被鉴定为年龄≤34岁的患者中的不育症的组合物，其中该组合物包含每天12μg重组卵泡刺激素(FSH)的(例如，起始)剂量或相当于每天12μg重组卵泡刺激素(FSH)的(例如，起始)剂量。

11.用于根据段落9或段落10所述使用的组合物，其中该组合物以每天12μg重组FSH的(例如，起始)剂量施用。

12.一种包含重组卵泡刺激素(FSH)的组合物，用于治疗年龄≤34岁的患者中的不育症，其中该组合物用于以每天12μg重组FSH的起始剂量施用，其中该起始剂量在治疗的至少第1天(优选地在治疗的至少第1天和第2天，更优选地在治疗的第1天到第4天的每一天)施用，任选地，其中该剂量是

(i)在任何随后的治疗日增加3μg重组FSH的首次增量剂量增加；和/或

(ii)在任何随后的治疗日降低3μg重组FSH的首次增量剂量降低。

13.用于根据段落12所述使用的组合物，其中在治疗期间，将该剂量维持在起始剂量。

14.用于根据段落12所述使用的组合物，其中3μg重组FSH的首次增量剂量增加(a)在先前剂量增量变化后至少两天，随后是3μg重组FSH的至少一次另外的增量剂量增加；和/或(b)在先前剂量增量变化后至少一天，随后是3μg重组FSH的至少一次增量剂量降低。

15.用于根据段落12所述使用的组合物，其中3μg重组FSH的首次增量剂量降低(a)在先前增量剂量的剂量变化后至少两天，随后是3μg重组FSH的至少一次增量剂量增加；和/或(b)在先前剂量变化后至少一天，随后是3μg重组FSH的至少一次另外的增量剂量降低。

16.用于根据段落12、14或15所述使用的组合物，其中该剂量增加至24μg的最大日剂量或降低至6μg的最小日剂量。

17.用于根据段落1至16中任一项所述使用的组合物，其中该不育症的治疗包括确定患者年龄的步骤，以及向具有该定义年龄的患者施用该定义剂量的重组FSH的步骤。

18.用于根据任何前述段落所述使用的组合物，其中该重组FSH包括α2,6-唾液酸化和α2,3-唾液酸化，任选地其中1％至50％的总唾液酸化为α2,6-唾液酸化，并且50％至99％的总唾液酸化为α2,3-唾液酸化。

19.用于根据任何前述段落所述使用的组合物，其中该患者是30岁以上和/或先前已至少一个不育症治疗周期失败。

20.用于根据任何前述段落所述使用的组合物，其中该不育症的治疗进一步包括：回收(例如，收获)一个或多个卵母细胞；使该一个或多个卵母细胞受精(例如，人工授精)；并且允许受精的卵母细胞发育到囊胚阶段。

21.用于根据段落20所述使用的组合物，其中该不育症的治疗进一步包括评估在收获的卵母细胞受精后获得的囊胚的质量。

22.用于根据任何前述段落所述使用的组合物，其中该治疗包括通过在治疗期间鉴定具有直径为≥12mm的≥20个卵泡和/或血清雌二醇浓度≥3,000pg/mL的患者来监测患者对治疗的过度反应的步骤；并且任选地向在治疗期间被鉴定为具有直径≥12mm的≥20个卵泡和/或血清雌二醇浓度≥3,000pg/mL的患者施用GnRH激动剂(例如，4.0mg)的剂量。

23.用于根据任何前述段落所述使用的组合物，其中该不育症的治疗是为了在经受辅助生殖技术(ART)的排卵的妇女中发育多个卵泡并在进行新鲜和/或冷冻保存的胚胎转移后妊娠。

24.用于根据任何前述段落所述使用的组合物，其中该不育症的治疗是用于优化累积效率和/或降低卵巢过度刺激综合征(OHSS)风险。

25.一种治疗年龄≥35岁的女性患者中的不育症的方法，该方法包括从治疗的第1天开始以每天15μg rFSH的剂量或相当于每天15μg rFSH的剂量施用重组卵泡刺激素(rFSH)。

26.根据段落25所述的方法，其中从治疗的第1天开始，以每天15μg rFSH的剂量施用rFSH。

27.根据段落25所述的方法，其中该方法包括：

以每天15μg的起始剂量施用rFSH至少1-4天，

任选地，在随后的任何一天，(i)使rFSH的剂量增加3μg rFSH的增量剂量增加或(ii)使rFSH的剂量降低3μg rFSH的增量剂量降低。

28.根据段落27所述的方法，其中在整个治疗中，以每天15μg的起始剂量维持rFSH剂量。

29.根据段落27所述的方法，其中3μg rFSH的增量剂量增加随后是(a)在先前增量剂量增加后至少两天，3μg rFSH的另外的增量剂量增加或(b)在先前增量剂量增加后至少一天，3μg rFSH的增量剂量降低。

30.根据段落27所述的方法，其中3μg rFSH的增量剂量降低随后是(a)在先前增量剂量降低后至少两天，3μg rFSH的增量剂量增加或(b)在先前增量剂量降低后至少一天，3μg rFSH的另外的增量剂量降低。

31.根据段落27所述的方法，其中，在整个治疗中，rFSH的最大日剂量为24μg，并且最小日剂量为6μg。

32.根据段落25所述的方法，其中该rFSH包括α2,6-唾液酸化和α2,3-唾液酸化。

33.根据段落32所述的方法，其中1％至50％的总唾液酸化为α2,6-唾液酸化，并且50％至99％的总唾液酸化为α2,3-唾液酸化。

34.根据段落32所述的方法，其中5％至20％的总唾液酸化为α2,6-唾液酸化，并且80％至95％的总唾液酸化为2,3-唾液酸化。

35.根据段落32所述的方法，其中50％至80％的总唾液酸化为α2,6-唾液酸化，并且20％至50％的总唾液酸化为2,3-唾液酸化。

36.根据段落25所述的方法，该方法进一步包括在施用该rFSH之前，确定该患者的年龄。

37.根据段落25所述的方法，该方法进一步包括：回收一个或多个卵母细胞；使一个或多个卵母细胞受精；允许受精的一个或多个卵母细胞发育到囊胚阶段，并且任选地评估一个或多个囊胚的质量。

38.根据段落25所述的方法，该方法进一步包括监测该患者对治疗的过度反应，并且任选地向鉴定为具有直径≥12mm的≥20个卵泡和/或血清雌二醇浓度≥3,000pg/mL的患者施用GnRH激动剂的剂量。

39.根据段落25所述的方法，其中该患者先前已至少一个不育症治疗周期失败。

40.根据段落25所述的方法，其中该方法有效地用于优化累积效率和/或降低OHSS风险。

41.根据段落25所述的方法，其中该不育症的治疗是为了在经受辅助生殖技术(ART)的排卵的女性中发育多个卵泡并在进行新鲜和/或冷冻保存的胚胎转移后妊娠。

42.一种治疗被鉴定为年龄≤34岁的女性患者中的不育症的方法，该方法包括从治疗的第1天开始以每天12μg rFSH的剂量或相当于每天12μg rFSH的剂量施用重组卵泡刺激素(rFSH)。

43.根据段落42所述的方法，其中从治疗的第1天开始，以每天12μg rFSH的剂量施用rFSH。

44.根据段落42所述的方法，其中该方法包括：

以每天12μg的起始剂量施用rFSH至少1-4天，

45.根据段落44所述的方法，其中在整个治疗中，以每天12μg的起始剂量维持rFSH剂量。

46.根据段落44所述的方法，其中3μg rFSH的增量剂量增加随后是(a)在先前增量剂量增加后至少两天，3μg rFSH的另外的增量剂量增加或(b)在先前增量剂量增加后至少一天，3μg rFSH的增量剂量降低。

47.根据段落44所述的方法，其中3μg rFSH的增量剂量降低随后是(a)在先前增量剂量降低后至少两天，3μg rFSH的增量剂量增加或(b)在先前增量剂量降低后至少一天，3μg rFSH的另外的增量剂量降低。

48.根据段落44所述的方法，其中，在整个治疗中，rFSH的最大日剂量为24μg，并且最小日剂量为6μg。

49.根据段落42所述的方法，其中该rFSH包括α2,6-唾液酸化和α2,3-唾液酸化。

50.根据段落49所述的方法，其中该rFSH包括α2,6-唾液酸化和α2,3-唾液酸化，其中1％至50％的总唾液酸化为α2,6-唾液酸化，并且50％至99％的总唾液酸化为α2,3-唾液酸化。

51.根据段落49所述的方法，其中5％至20％的总唾液酸化为α2,6-唾液酸化，并且80％至95％的总唾液酸化为2,3-唾液酸化。

52.根据段落49所述的方法，其中50％至80％的总唾液酸化为α2,6-唾液酸化，并且20％至50％的总唾液酸化为2,3-唾液酸化。

53.根据段落42所述的方法，该方法进一步包括在施用该rFSH之前，确定该患者的年龄。

54.根据段落42所述的方法，该方法进一步包括：回收一个或多个卵母细胞；使一个或多个卵母细胞受精；允许受精的一个或多个卵母细胞发育到囊胚阶段，并且任选地评估一个或多个囊胚的质量。

55.根据段落42所述的方法，该方法进一步包括监测该患者对治疗的过度反应，并且任选地向鉴定为具有直径≥12mm的≥20个卵泡和/或血清雌二醇浓度≥3,000pg/mL的患者施用GnRH激动剂的剂量。

56.根据段落42所述的方法，其中该患者是30岁以上和/或先前已至少一个不育症治疗周期失败。

57.根据段落42所述的方法，其中该方法有效地用于优化累积效率和/或降低OHSS风险。

58.根据段落42所述的方法，其中该不育症的治疗是为了在经受辅助生殖技术(ART)的排卵的女性中发育多个卵泡并在进行新鲜和/或冷冻保存的胚胎转移后妊娠。

59.一种治疗女性患者中的不育症的方法，该方法包括：

确定该患者的年龄；

如果该患者年龄≥35岁，以每天15μg rFSH的起始剂量施用重组卵泡刺激素(rFSH)持续至少1-4天；

如果该患者年龄≤34岁，以每天12μg rFSH的起始剂量施用重组卵泡刺激素(rFSH)持续至少1-4天；

任选地，在随后的任何一天，(i)使rFSH的剂量增加3μg rFSH的增量剂量增加或(ii)使rFSH的剂量降低3μg rFSH的增量剂量降低，

其中，在整个治疗中，rFSH的最大日剂量为24μg，并且最小日剂量为6μg。

Claims

3.用于根据权利要求1或权利要求2所述使用的组合物，其中该组合物以每天15μg重组FSH的(例如，起始)剂量施用。

5.用于根据权利要求4所述使用的组合物，其中在该治疗期间，将该剂量维持在该起始剂量。

6.用于根据权利要求4所述使用的组合物，其中该3μg重组FSH的首次增量剂量增加(a)在先前剂量增量变化后至少两天，随后是3μg重组FSH的至少一次另外的增量剂量增加；和/或(b)在先前剂量增量变化后至少一天，随后是3μg重组FSH的至少一次增量剂量降低。

7.用于根据权利要求4所述使用的组合物，其中该3μg重组FSH的首次增量剂量降低(a)在先前增量剂量的剂量变化后至少两天，随后是3μg重组FSH的至少一次增量剂量增加；和/或(b)在先前剂量变化后至少一天，随后是3μg重组FSH的至少一次另外的增量剂量降低。

8.用于根据权利要求4、6或7所述使用的组合物，其中该剂量增加至24μg的最大日剂量或降低至6μg的最小日剂量。

11.一种包含重组卵泡刺激素(FSH)的组合物，用于治疗年龄≤34岁的患者中的不育症，其中该组合物用于以每天12μg重组FSH的起始剂量施用，其中该起始剂量在治疗的至少第1天(优选地在治疗的至少第1天和第2天，更优选地在治疗的第1天到第4天的每一天)施用，任选地，其中该剂量是

12.用于根据权利要求1至11中任一项所述使用的组合物，其中该不育症的治疗包括确定该患者的年龄的步骤，以及向具有该定义年龄的患者施用该定义剂量的重组FSH的步骤。

13.用于根据任一前述权利要求所述使用的组合物，其中该重组FSH包括α2,6-唾液酸化和α2,3-唾液酸化，任选地其中1％至50％的总唾液酸化为α2,6-唾液酸化，并且50％至99％的总唾液酸化为α2,3-唾液酸化；和/或其中该患者是30岁以上和/或先前已至少一个不育症治疗周期失败；和/或其中该不育症的治疗进一步包括：回收(例如，收获)一个或多个卵母细胞；使该一个或多个卵母细胞受精(例如，人工授精)；并且允许这些受精的卵母细胞发育到囊胚阶段，任选地，其中该不育症的治疗进一步包括评估收获的卵母细胞受精后获得的囊胚的质量。

14.用于根据任一前述权利要求所述使用的组合物，其中该治疗包括通过在治疗期间鉴定具有直径≥12mm的≥20个卵泡和/或血清雌二醇浓度≥3,000pg/mL的患者来监测该患者对治疗的过度反应的步骤；并且任选地向在治疗期间被鉴定为具有直径≥12mm的≥20个卵泡和/或血清雌二醇浓度≥3,000pg/mL的患者施用GnRH激动剂(例如，4.0mg)的剂量；和/或其中该不育症的治疗是为了在经受辅助生殖技术(ART)的排卵的女性中发育多个卵泡并在进行新鲜和/或冷冻保存的胚胎转移后妊娠；和/或其中该不育症的治疗是用于优化累积效率和/或降低卵巢过度刺激综合征(OHSS)风险。

15.一种包含重组卵泡刺激素(FSH)的组合物，用于治疗女性患者中的不育症，其中该治疗包括：

确定该患者的年龄；

16.用于根据任一前述权利要求所述使用的组合物，其中该重组FSH是该组合物中唯一的活性药物成分。

17.用于根据任一前述权利要求所述使用的组合物，用于治疗先前未通过受控的卵巢刺激治疗不育症的患者中的不育症；用于治疗先前未完成通过受控的卵巢刺激的不育症治疗的患者中的不育症；或用于治疗在过去六个月中未通过受控的卵巢刺激治疗不育症的患者中的不育症。