CN112770645A - 性别特异性合成营养组合物以及包含其的营养体系 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了性别特异性合成营养组合物以及包含其的营养体系,该性别特异性合成营养组合物包含一定浓度的叶黄素,该浓度反映了在对应的年龄/泌乳阶段处存在于由对应性别的婴儿的母亲所产生的人乳中所发现的叶黄素浓度。
Description
技术领域
本发明涉及性别特异性合成营养组合物、包含性别特异性合成营养组合物的营养体系,以及其用于为婴儿提供最佳量的叶黄素和/或一种或多种健康益处的用途。
背景技术
虽然母乳喂养对于婴儿是最佳的,但某些状况的存在可能意味着母乳喂养是有禁忌的。在唯一营养来源对于婴儿不可用的此类情况下,必须设计喂养它们的替代策略。其中一种替代策略是用合成营养组合物(例如婴儿配方食品)喂养婴儿。
前述合成营养组合物(例如婴儿配方食品)的组成旨在复制人乳(下文中称作HM)的组成。然而,复制人乳并非易事。人乳不仅含有多种组分,其组成极具动态性,并且这些动态变化大部分还未被探究和表征。
本发明人现已出人意料地发现,人乳中叶黄素的浓度可根据泌乳的阶段和母亲的婴儿的性别而不同。因为先前从未鉴定出人乳的叶黄素浓度的此类年龄和性别差异,所以这些差异未反映在当今可用于婴儿的合成营养组合物的组成中。考虑到人乳被视为婴儿营养的黄金标准,因此仍然需要为特定年龄和性别的婴儿定制更好地反映这些被鉴定出的差异的合成营养组合物。
发明内容
本发明在权利要求书中陈述。本发明人已开发出用于婴儿的性别特异性合成营养组合物,该性别特异性合成营养组合物包含一定浓度的叶黄素,该浓度模拟了存在于为相同年龄(对应泌乳阶段)和性别的婴儿所产生的人乳中所发现的叶黄素的浓度。
该性别特异性合成营养组合物可例如为婴儿配方食品或旨在加入人乳或用人乳稀释的用于婴儿的组合物。
本发明的性别特异性合成营养组合物可从不分性别的合成营养组合物通过以下方式制备:称量出适量的所述不分性别的合成营养组合物,并且将其与添加剂和/或稀释剂(例如,叶黄素和/或水)混合。
可将本发明的性别特异性合成营养组合物包含在营养体系中。所述营养体系可包含用于女性婴儿的性别特异性合成营养组合物和/或用于相同年龄的男性婴儿的性别特异性组合物。用于男性婴儿的性别特异性合成营养组合物包含的叶黄素可比用于相同年龄的女性婴儿的性别特异性合成营养组合物包含的叶黄素多。所述性别特异性合成营养组合物可用于选自以下年龄的婴儿:至多4月龄以及4月龄或以上。
本发明的性别特异性合成营养组合物的叶黄素浓度反映了存在于为相同性别和年龄(对应泌乳阶段处)的婴儿所产生的人乳中所发现的叶黄素浓度。因为人乳被认为对于婴儿营养是最佳的,因此本发明的性别特异性合成营养组合物以及因此包含该性别特异性合成营养组合物的营养体系可向婴儿(例如与该合成营养组合物所针对的性别和年龄具有相同性别和年龄的婴儿)提供最佳量的叶黄素。性别特异性合成营养组合物可用于确保最佳的叶黄素摄入量和水平,从而优化抗氧化能力以及皮肤健康和视网膜发育。
具体实施方式
本发明人进行了一项纵向研究,评估了在不同泌乳阶段(产后30天(1个月)、60天(2个月)和120天(4个月))从母亲收集的人乳的营养组成。出人意料的是,该研究的结果表明存在于人乳中所发现的叶黄素的浓度可根据泌乳阶段和/或母亲的婴儿的性别而不同。具体地,该研究表明在相同泌乳阶段处,由母亲对男孩所产生的人乳中的叶黄素的浓度可比由母亲对女孩所产生的人乳中的叶黄素的浓度高。该研究的细节、分析技术和结果在实施例1中给出。
基于该研究的发现,本发明人已设计出包含一定浓度的叶黄素的性别特异性合成营养组合物,该浓度反映了(在对应的泌乳阶段处)存在于为相同性别和年龄的婴儿所产生的人乳中所发现的叶黄素浓度。
在本发明的一方面,提供了为婴儿定制的性别特异性合成营养组合物,该性别特异性合成营养组合物包含一定浓度的叶黄素,该浓度反映了在对应泌乳阶段处(例如,至多4个月、至多2个月、4个月及之后)存在于为相同性别和年龄的婴儿所产生的人乳中所发现的浓度。
在一个实施方案中,为特定性别/年龄的婴儿定制的性别特异性合成营养组合物在重构后包含一定浓度的叶黄素,该浓度反映了存在于为相同性别/年龄(在对应的哺乳期年龄)的婴儿所产生的人乳中所发现的叶黄素浓度。
在一个实施方案中,所述性别特异性合成营养组合物可被定制用于选自以下年龄的婴儿:至多4月龄以及4月龄或以上。
本文所用的术语“性别特异性合成营养组合物”,是指特别符合女性或男性婴儿的营养需求、供婴儿食用的任何合成营养组合物。用于从出生至4个月的婴儿的性别特异性合成营养组合物的非限制性示例包括;婴儿配方食品和旨在添加到人乳中或用人乳稀释的用于婴儿的组合物(例如人乳强化剂)。用于4个月至12个月的婴儿的性别特异性合成营养组合物的非限制性示例包括婴儿配方食品、旨在添加到人乳中或用人乳稀释的用于婴儿的组合物(例如,人乳强化剂),或者旨在供婴儿单独食用或与人乳结合食用的食品(例如辅食)。
本文所用的术语“婴儿”,是指不超过12月龄的人类婴儿。
在一个实施方案中,根据本发明的婴儿对叶黄素有需要。
在另一个实施方案中,婴儿需要叶黄素并且摄入非最佳/欠佳的叶黄素水平。
在一个实施方案中,提供了性别特异性合成营养组合物,其中叶黄素的浓度是为至多4月龄的男性婴儿定制的,并且该浓度在0.02至0.17μg/mL的范围内,例如在0.03至0.12、0.05至0.09、0.06至0.08μg/mL的范围内。
在一个实施方案中,提供了性别特异性合成营养组合物,其中叶黄素的浓度是为至多4月龄的女性婴儿定制的,并且该浓度在0.02至0.22μg/mL的范围内,例如在0.03至0.11、0.05至0.09、0.04至0.08μg/mL的范围内。
至多4月龄的年龄的非限制性示例包括至多2月龄、2至3月龄、2月龄和3月龄。至多2月龄的年龄的非限制性示例包括:至多2周龄、至多1月龄、1月龄、以及2周龄至至多1月龄。
在一个实施方案中,提供了性别特异性合成营养组合物,其中叶黄素的浓度是为4月龄以以上的男性婴儿定制的,并且该浓度在0.02至0.1μg/mL的范围内,例如在0.04至0.08、0.05至0.06μg/mL的范围内。
在一个实施方案中,提供了性别特异性合成营养组合物,其中叶黄素的浓度是为4月龄以以上的女性婴儿定制的,并且该浓度在0.02至0.15μg/mL的范围内,例如在0.025至0.062、0.04至0.06μg/mL的范围内。
4月龄和以上的年龄的非限制性示例包括;4、5、6、7、8、9、10、11、以及12月龄、4至6月龄、4至12月龄、6至12月龄、6至9月龄、以及9至12月龄。
本文定义的性别特异性合成营养组合物的叶黄素浓度以μg/mL表示。这可指(例如,在水中)重构的性别特异性合成营养组合物的叶黄素浓度。
如本文所用,术语“叶黄素”是指游离叶黄素、叶黄素酯、叶黄素盐和/或前述的任何组合。游离叶黄素是指β,ε-胡萝卜素-3,3'-二醇。叶黄素酯和叶黄素盐分别指β,ε-胡萝卜素-3,3'-二醇的酯或盐。如本文所指的β,ε-胡萝卜素-3,3'-二醇可为顺式或反式或它们的混合物。
组合物的叶黄素浓度可通过本领域中熟知的方法来测量。例如,人乳或本发明的性别特异性组合物的叶黄素浓度可通过用有机溶剂(例如BHT/己烷/乙酸乙酯)萃取叶黄素来测量。这些萃取的分子的分析性测量可分两步来完成。第一步骤可为通过HPLC进行色谱分离,例如使用异辛烷/乙酸乙酯。该步骤之后进行通过二极管阵列检测器和UV检测器进行检测的第二步骤。用于测量人乳或本文所公开的性别特异性组合物中的叶黄素的方法在本文所包括的实施例中列出。
适于施用于性别特异性合成营养组合物所针对的婴儿的任何形式的叶黄素可包含在本发明的性别特异性合成营养组合物内。叶黄素可例如作为游离叶黄素、叶黄素酯、叶黄素盐和/或前述的任何组合添加。
所使用的任何形式的叶黄素可源于天然来源,具体地讲,其可源于游离形式或酯化形式的动物或植物或藻类来源的叶黄素。
本发明的性别特异性合成营养组合物还可包含已知用于所考虑的性别特异性合成营养组合物类型中的任何其他成分或赋形剂,例如:婴儿配方食品、旨在添加到人乳中或用人乳稀释的用于婴儿的组合物、人乳强化剂、较大婴儿配方食品或旨在供婴儿食用的食品(例如,辅食)。
在本发明的一个实施方案中,性别特异性合成营养组合物选自:婴儿配方食品和旨在添加到人乳或用人乳稀释的用于婴儿的组合物。
已知用于所考虑的性别特异性合成营养组合物类型中的成分的非限制性示例包括:蛋白质、氨基酸、碳水化合物、低聚糖、脂质、益生元或益生菌、必需脂肪酸、核苷酸、核苷、维生素、矿物质和其它微量营养素。
蛋白质的非限制性示例包括酪蛋白、α-乳白蛋白、乳清、大豆蛋白、大米蛋白、玉米蛋白、燕麦蛋白、大麦蛋白、小麦蛋白、黑麦蛋白、豌豆蛋白、卵蛋白、葵花籽蛋白、马铃薯蛋白、鱼蛋白、肉蛋白、乳铁蛋白、血清白蛋白、免疫球蛋白以及它们的组合。
氨基酸的非限制性示例包括亮氨酸、苏氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、精氨酸、丙氨酸、组氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、缬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、丝氨酸、精氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸以及它们的组合。
碳水化合物的非限制性示例包括乳糖、蔗糖(saccharose)、麦芽糖糊精、淀粉以及它们的组合。
脂质的非限制性示例包括棕榈油精、高油酸葵花油、高油酸红花油、芥花油、鱼油、椰子油、牛乳脂肪以及它们的组合。
必需脂肪酸的非限制性示例包括亚油酸(LA)、α-亚麻酸(ALA)和多不饱和脂肪酸(PUFA)。本发明的性别特异性合成营养组合物还可包含神经节苷脂(单唾液酸神经节苷脂3(GM3)和双唾液酸神经节苷脂3(GD3))、磷脂(诸如鞘磷脂、磷脂磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷酯酰丝氨酸)以及它们的组合。
益生元的非限制性示例包括:任选地含有果糖、半乳糖、甘露糖的低聚糖;膳食纤维,特别是可溶纤维、大豆纤维;菊粉;以及它们的组合。优选的益生元为低聚果糖(FOS)、低聚半乳糖(GOS)、低聚异麦芽糖(IMO)、低聚木糖(XOS)、低聚阿拉伯木聚糖(AXOS)、低聚甘露糖(MOS)、大豆低聚糖、葡糖基蔗糖(GS)、乳蔗糖(LS)、乳酮糖(LA)、低聚帕拉金糖(PAO)、低聚麦芽糖、树胶和/或其水解产物、果胶和/或其水解产物以及前述的组合。
低聚糖的进一步示例描述于Wrodnigg,T.M.;Stutz,A.E.(1999)Angew.Chem.Int.Ed.38:827-828和WO 2012/069416中。
益生菌的非限制性示例包括:双歧杆菌属、乳杆菌属、乳球菌属、肠球菌属、链球菌属、克鲁维酵母菌属、酵母属、假丝酵母属,具体地选自由以下项组成的组:长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、乳酸双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)、动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)、婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)、青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、乳酸乳杆菌(Lactobacillus lactis)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、布拉酵母(Saccharomyces boulardii)或这些益生菌的混合物。
核苷酸的非限制性示例包括:胞苷一磷酸(CMP)、尿苷一磷酸(UMP)、腺苷一磷酸(AMP)、鸟苷一磷酸(GMP)以及它们的组合。
维生素和矿物质的非限制性示例包括:维生素E、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素K、维生素C、维生素D、叶酸、肌醇、烟酸、生物素、泛酸、胆碱、钙、磷、碘、铁、镁、铜、锌、锰、氯、钾、钠、硒、铬、钼、牛磺酸、L-肉碱以及它们的组合。矿物质通常以盐的形式添加到本发明的性别特异性组合物中。
可用于本发明的性别特异性合成营养组合物的合成营养组合物的其它合适成分和期望成分在食品法典委员会(Codex Alimentarius)颁布的有关所涉及的合成营养组合物类型(例如,婴儿配方食品、人乳强化剂、较大婴儿配方食品或旨在供婴儿食用的食品(例如,辅食))的指南中有述。
本发明的性别特异性合成营养组合物可通过本领域用于制备所涉及的该类型性别特异性合成营养组合物(例如,婴儿配方食品、较大婴儿配方食品、旨在添加到人乳中或用人乳稀释的用于婴儿的组合物(例如,人乳强化剂)、或旨在供婴儿单独食用或与人乳组合食用的食品(例如,辅食))的熟知方法来制备。
用于制备性别特异性粉状婴儿配方食品的示例性方法如下。可以适当的比例将蛋白质来源、碳水化合物来源和脂肪来源混合。可向混合物中添加乳化剂。此时可添加维生素和矿物质(包括叶黄素,例如作为维生素预混物的一部分),但通常稍后添加以避免热降解。在共混之前,可先将任何亲脂性维生素、乳化剂等溶解于脂肪源中。然后可混入水(优选经受反渗透的水),以形成液体混合物。
随后可对液体混合物进行热处理,以降低细菌载量。例如,可将液体混合物迅速加热到约80℃至约110℃的范围内的温度,保持约5秒至约5分钟。这可通过蒸汽喷射或热交换器(例如板式热交换器)来进行。
然后,可例如通过急速冷却将液体混合物冷却到约60℃至约85℃。接着可将液体混合物均质化;例如分两个阶段进行:第一阶段在约7MPa至约40MPa下进行,并且第二阶段在约2MPa至约14MPa下进行。然后可进一步冷却均质化的混合物以添加任何热敏组分,诸如维生素和矿物质(如果不提前添加,则可在该阶段添加叶黄素,例如作为维生素预混物的一部分)。此刻便利地将均质化混合物的pH和固体含量标准化。
可将匀化的混合物转移进合适的干燥装置(诸如喷雾干燥器或冷冻干燥器),将其转变成粉末。该粉末应具有小于约3重量%的含水量。
如果期望可以添加一种或多种益生菌,则可根据任何合适的方法培养所述益生菌,然后例如通过冷冻干燥或喷雾干燥制成,以供添加到婴儿配方食品中。另选地,可从专业供应商诸如Christian Hansen和Morinaga购买已被制成合适的形式的细菌制品,以供添加到食物产品(诸如婴儿配方食品)中。此类细菌制品可通过干混方式添加到性别特异性粉状婴儿配方食品中。
本发明的性别特异性合成营养组合物还可从不分性别的合成营养组合物制备。在本发明的一个方面,提供了制备性别特异性合成营养组合物的方法,该方法包括:称量出适量的所述不分性别的合成营养组合物并将其与添加剂和/或稀释剂(例如,叶黄素和/或水)混合,以便获得根据本发明的性别特异性合成营养组合物。
在一个实施方案中,添加剂包含叶黄素。
添加剂可为以特定浓度包含叶黄素的性别特异性添加剂,使得当与不分性别的合成营养组合物以及任选地稀释剂混合时,所得的混合物为根据本发明的性别特异性合成营养组合物。
可通过本领域针对所涉及的组合物类型(例如,如上文针对婴儿配方食品所列出的)熟知的方法制备不分性别的合成营养组合物。
本文使用的术语“不分性别的”与男女通用同义。
可将本发明的性别特异性合成营养组合物中的一种或多种包括在营养体系中。
本文所用的术语“营养体系”是指作为同一产品系列的一部分做广告宣传或销售的超过一种合成营养组合物的集合,例如以同一品牌销售并且适合不同年龄和/或性别和/或不同分娩方式(例如,剖腹产)的婴儿的营养需求/针对所述营养需求定制的婴儿配方食品的集合。在一个实施方案中,构成营养体系的合成营养组合物可独立包装在例如胶囊或盒子中。所述包装可独立销售,可结合在一起(例如,用塑料膜包裹或在盒子中结合)销售,也可采用这两种方式的组合销售。营养体系还可包含适于12月龄以上儿童的合成营养组合物。
在本发明的又一方面,提供了包含本发明的性别特异性合成营养组合物的营养体系。
在一个实施方案中,营养体系包含用于如本文所定义的男性婴儿的性别特异性合成营养组合物以及用于如本文所定义的女性婴儿的性别特异性合成营养组合物。在一个更具体的实施方案中,所述男性性别特异性合成营养组合物和所述女性性别特异性合成营养组合物用于相同年龄的婴儿,并且用于男性婴儿的所述性别特异性合成营养组合物中的叶黄素浓度高于用于女性婴儿的所述性别特异性合成营养组合物中的叶黄素浓度。
所述男性性别合成营养组合物中的叶黄素的浓度可高出任何量。
在一个实施方案中,营养体系包含用于至多4月龄男性婴儿的性别特异性合成营养组合物以及用于至多4月龄女性婴儿的性别特异性合成营养组合物,其中所述男性性别特异性合成营养组合物中的叶黄素浓度高于所述女性性别特异性合成营养组合物中的叶黄素浓度。
所述男性性别特异性合成营养组合物可包含例如比女性性别特异性合成营养组合物多0.03至0.85μg/mL的叶黄素,例如比女性性别特异性合成营养组合物多0.05至0.25、0.05至0.07μg/mL的叶黄素。
在另一个具体的实施方案中,营养体系包含用于4月龄或以上男性婴儿的性别特异性合成营养组合物以及用于4月龄或以上女性婴儿的性别特异性合成营养组合物,其中所述男性性别特异性合成营养组合物中叶黄素的浓度高于所述女性性别特异性合成营养组合物的叶黄素浓度。
所述男性性别合成营养组合物中的叶黄素的浓度可高出任何量。
所述男性性别特异性合成营养组合物可包含例如比男性性别特异性合成营养组合物多0.01至0.3μg/mL的叶黄素,例如比男性性别特异性合成营养组合物多0.01至0.04、0.02至0.03μg/mL的叶黄素。
本发明的营养体系可还包含用于12月龄以上儿童的营养组合物。
根据本发明的性别特异性合成营养组合物特别地适于使用胶囊来制备单份婴儿配方食品的方法,每个胶囊装有单位剂量的浓缩形式的合成营养组合物(例如,性别特异性合成营养组合物),并且胶囊内部配备有开启工具,用于将重构的合成营养组合物直接从胶囊排入接收容器(诸如奶瓶)。这种方法在WO2006/077259中有描述。
不同的合成营养组合物(包括为特定年龄和/或性别的婴儿定制的合成营养组合物)可被包装成独立的胶囊,并以含有足够数量的胶囊的合装包提供给消费者,以满足特定年龄/年龄范围和/或性别的婴儿例如一周的需求。合适的胶囊构造在WO2003/059778中公开。
可包含在营养体系产品中的不同合成营养组合物(包括性别特异性和不分性别的合成营养组合物)可包装成独立的胶囊并以合装包的形式提供给消费者,所述合装包中包含数量足够多的胶囊,以满足特定年龄或范围的婴儿长达例如一周的需求。合适的胶囊构造在WO2003/059778中公开。
胶囊可装有粉末形式或浓缩液体形式的所述合成营养组合物(性别特异性和不分性别的),在这两种情况下,所述合成营养组合物都可用适量的水重构。胶囊中婴儿配方食品的组成和量均可依据婴儿的性别和/或年龄而有所变化。必要时,可提供不同尺寸的胶囊来制备用于不同性别和/或年龄的婴儿的婴儿配方食品。
因为当涉及婴儿营养时,人乳是黄金标准,并且由于本发明的性别特异性合成营养组合物的叶黄素浓度更好地反映了存在于对应性别婴儿的母亲在对应泌乳阶段处的人乳中所发现的叶黄素浓度,因此该性别特异性合成营养组合物以及包含该性别特异性合成营养组合物的营养体系可用于为婴儿提供最佳量的叶黄素,以及确保最佳叶黄素水平,以及预防与非最佳叶黄素水平相关联的病症。
叶黄素是视网膜发育所必需的亲脂性营养物质。它还在认知发育和皮肤健康中起作用。它还具有抗氧化能力。
在本发明的另一方面,提供了本发明的性别特异性合成营养组合物,其用于在婴儿例如至多4月龄、或者4月龄或以上的婴儿中预防和/或治疗非最佳/欠佳叶黄素水平、抗氧化能力、皮肤健康和/或视网膜发育。
在本发明的另一方面,提供了本发明的性别特异性合成营养组合物和/或本发明的营养体系用于为婴儿提供最佳量的叶黄素、优化抗氧化能力、优化皮肤健康和/或优化例如至多4月龄、或者4月龄或以上的婴儿的视网膜发育的用途。
在本发明的另一方面,提供了本发明的营养体系用于为婴儿提供最佳量的叶黄素、优化抗氧化能力、优化皮肤健康和/或优化例如至多4月龄、或者4月龄以上的婴儿的视网膜发育的用途。
营养体系可向至多12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1月龄和/或至多2周龄的婴儿提供最佳量的叶黄素。
在本发明的另一方面,提供了用于治疗和/或预防婴儿的欠佳叶黄素水平或为婴儿提供最佳量的叶黄素的方法,该方法包括:
a)任选地,从不分性别的合成营养组合物制备本发明的性别特异性合成营养组合物;
b)向婴儿喂食根据本发明的性别特异性合成营养组合物,例如向对应性别和年龄的婴儿,例如具体地向至多4月龄、或者4月龄或以上的婴儿。
如本文所述。性别特异性合成营养组合物可从不分性别的合成营养组合物制备。因此,在本发明的另一方面,提供了用于向婴儿(例如向至多4月龄、或者4月龄或以上的婴儿)提供最佳量的叶黄素的套盒,该套盒包含:
a)不分性别的合成营养组合物;
b)标签,该标签标明婴儿的剂量需求,以便获得根据本发明的性别特异性营养组合物。
所述剂量需求可与所述不分性别的合成营养组合物的用量和/或食用频率(例如每天4次)有关。
应当理解,可自由组合本文所公开的本发明的所有特征,而且在不脱离权利要求书所定义的本发明范围的前提下,可对这些特征作出变型和修改。此外,如果特定的特征存在已知的等同物,则应将这些等同物并入本说明书中,如同在本说明书中明确提到这些等同物。
下面是用于举例说明本发明的一系列非限制性示例。
实施例
实施例1:
纵向临床试验:
本发明人设计了一项涉及50位哺乳母亲的纵向临床试验,分别在产后30天(访视1)、60天(访视2)和120天(访视3)采集乳汁样品。定量分析乳样品中的叶黄素。
人乳采集:人乳收集方案由新加坡当地伦理委员会审核并批准。本项研究在新加坡国立大学进行。术语婴儿的志愿者母亲明显是健康的并且是不吸烟者(n=50;31.1±3.1岁),提供了母乳样品(大约30mL)。使用吸奶器充分挤压一侧乳房收集样品,同时用另一侧乳房给婴儿哺乳。尽量收集整个哺乳过程的乳汁(包括前乳、中乳和后乳),用其代表一次哺乳过程,以避免哺乳过程中脂质含量变化。分离大约30mL等分试样置于锥形聚丙烯管内用于本研究,剩下乳汁喂给婴儿。将收集以供研究的样品存储在-80℃,直至分析。数据收集点为产后30天(1个月)、60天(2个月)和120天(4个月)。
样品中叶黄素浓度的测量:
每个样品的叶黄素浓度可通过由有机溶剂萃取脂质和亲脂分子来测量。这些萃取的分子的分析性测量分两个步骤来完成。第一步骤是通过HPLC进行色谱分离,之后是通过二极管阵列检测器和UV检测器进行检测的第二步骤。
材料和方法
化学品
叶黄素(≥75%)购自Merck/Sigma-Aldrich(Darmstadt,Germany)。由Biosolve生产的ULC/MS级水和无水甲醇购自Chemie Brunschwig AG(Basel,Switzerland)。使用Millipore Milli-Q纯化系统(EMD Millipore,Billerica,MA)制备HPLC-级水。所有其它HPLC-级溶剂和试剂购自Merck/Sigma-Aldrich(Darmstadt,Germany)。
标准溶液的制备
标准溶液。通过将叶黄素溶解在适当的溶剂中以目标浓度单独制备标准储存溶液(参见表A)。
表A
将所有溶液以2mL等分试样在-18℃储存,直到就标记内标而言使用最多3个月或1年。通过分光光度法在分光光度计上测定每种标准储存溶液的浓度。为此,将每种溶液的等分试样单独吸移到琥珀色玻璃容量瓶中,在氮气流下蒸发至干并溶解于适当的溶剂中(表A)。相对于参考溶剂测量所得溶液的UV吸光度,并且消光系数用于反算储存溶液的浓度。还测定了色谱纯度。将200μL用于分光光度纯度测定的溶液在HLPC小瓶中干燥,并溶解于100μL的异辛烷-乙酸乙酯(90:10)中以用于注入LC系统中。
将标准储存溶液合并到标准中间溶液中,将各个储存溶液中的每一种吸移到20-mL琥珀色玻璃容量瓶中,在室温下在氮气流下干燥并溶解于异辛烷-乙酸乙酯中。叶黄素的最终浓度为0.5μg/mL。
用于校准的标准溶液。通过将一系列不同体积的工作标准溶液和固定体积(20μL)的内标工作溶液吸移到单独的2-mLHPLC琥珀色小瓶中来制备校准溶液,以提供扩展的校准范围。蒸发至干后,将残余物溶解于100μL的异辛烷-乙酸乙酯(90:10)中用于叶黄素的分析。
样品制备
在8-mL玻璃管中,将5μL丁基化羟基甲苯(BHT)的乙醇溶液(79g/L)、10μL甲磺酸去铁胺水溶液(10mg/mL)、1mL乙醇和25μL内标工作溶液依次加入750μL人乳中并混合。然后,加入2.5mL含有350mg/L BHT的正己烷:乙酸乙酯(90:10)(v/v),并在多管摇动器中以脉冲模式剧烈混合2分钟并以连续模式剧烈混合2分钟。将管在4℃以2500rpm/min离心10min,并将上部有机相收集到干净的玻璃管中。重复液体/液体萃取过程,将上清液在相同的8mL管中合并,并在氮气流下降低至几乎干燥。使用一小部分正己烷/乙酸乙酯90:10(v/v)将残余物定量转移到2mL微量离心管中,干燥并溶解于125μL的异辛烷:乙酸乙酯90:10(v/v)中。将萃取物在室温处以11'000rpm/min离心10分钟并转移到低体积HPLC小瓶中用于叶黄素的分析。
色谱分析
使用配备有0.2μm内嵌式过滤器(Thermo,Switzerland)的Hypersil GOLDTM二氧化硅,1.9μm,200×2.1mm柱以正相LC模式分析叶黄素。色谱系统由配备有光电二极管阵列(PDA)eLambda和荧光检测器(Waters,Baden,Switzerland)的Waters Acquity 系统组成。在分析中将色谱柱保持在35℃。溶剂A为用于色谱法的正己烷,并且溶剂B为包含0.01%乙酸的正己烷-二氧杂环己烷50:50(V/V)的混合物。以0.4mL/min的恒定流速施加溶剂B的梯度,从时间=0min时的28%斜升至2分钟时的40%,至5分钟时的40%。之后1分钟渐变至100%溶剂B,以及降低的0.3mL/min的流量,进行2分钟清洁步骤。通过在2分钟内将溶剂A和流速增加至初始条件持续10分钟的总运行时间来缓慢平衡分析柱。使用WatersEmpowerTM软件收集并处理数据。使用线性回归进行校准和定量,并分析外标。以0.4mL/min的恒定流速施加溶剂B的梯度,从时间=0分钟时的0.5%斜升至2分钟时的2%,至5分钟时的10%,10分钟时的45%和12分钟时的50%。该时间段之后是1分钟斜升至100%溶剂B和0.3ml/min的降低的流速,进行2分钟的清洁步骤。通过在2分钟内将溶剂A和流速增加至初始条件来缓慢平衡分析柱,并且在22分钟的总运行时间内稳定5分钟。进样体积为5μL。PDA检测器记录叶黄素在450nm处的信号。使用Waters EmpowerTM软件收集并处理数据。使用胡萝卜醛的线性回归进行校准和定量。
有关叶黄素浓度的人乳分析结果在表1a和表1b中示出。
表1a
表1b
统计分析:然后采用以下统计模型对组成分析结果进行统计分析:
叶黄素=B0+B1年龄+B2年龄2+B3性别+B4年龄*性别+B5年龄2*性别+ε
年龄同时体现于线性项和二次项并且以天数测量。ε是指控制在个体波动内的模型的随机效果。
不同的后缀(B0、B1、B2…)代表系于对应变量(年龄、线性和二次、性别和/或其相互作用)的不同估计斜率。
表II示出了针对不同时间段的估计值及对应的P值。
统计分析结果(统计推断)在表II中示出。
表II
实施例2
为至多4月龄的婴儿定制的性别特异性合成营养组合物(婴儿配方食品)的实施例在表III中给出。结合起来,这些是本发明的营养体系的实施例。
表III
Claims (17)
1.为婴儿定制的性别特异性合成营养组合物,所述性别特异性合成营养组合物包含一定浓度的叶黄素,所述浓度反映了存在于为相同性别和年龄的婴儿所产生的人乳中所发现的浓度。
2.根据权利要求1所述的性别特异性合成营养组合物,其中所述组合物是为选自至多4月龄以及4月龄或以上的年龄的婴儿定制的。
3.根据权利要求2所述的性别特异性合成营养组合物,其中当所述叶黄素的浓度是为至多4月龄的男性婴儿定制时,则所述浓度在0.02至0.17μg/mL的范围内,并且当所述叶黄素的浓度是为至多4月龄的女性婴儿定制时,则所述浓度在0.02至0.22μg/mL的范围内;当所述叶黄素的浓度是为4月龄或以上的男性婴儿定制时,则所述浓度在0.02至0.1μg/mL的范围内,并且当所述叶黄素的浓度是为4月龄或以上的女性婴儿定制时,则所述浓度在0.02至0.15μg/mL的范围内。
4.根据权利要求1、2或3所述的性别特异性合成营养组合物,其中所述性别特异性合成营养组合物选自:婴儿配方食品,以及旨在添加到人乳中或用人乳稀释的用于婴儿的组合物,例如人乳强化剂,或旨在供婴儿单独食用或与人乳组合食用的食品,例如辅食。
5.制备根据权利要求1至4中任一项所述的性别特异性合成营养组合物的方法,所述方法包括:称量出适量的不分性别的合成营养组合物并将所述不分性别的合成营养组合物与添加剂例如叶黄素和/或稀释剂混合。
6.营养体系,所述营养体系包含根据权利要求1至4中任一项所述的性别特异性合成营养组合物。
7.根据权利要求6所述的营养体系,所述营养体系包含根据权利要求1至4中任一项所述的用于男性婴儿的性别特异性合成营养组合物和根据权利要求1至4中任一项所述的用于女性婴儿的性别特异性营养组合物。
8.根据权利要求7所述的营养体系,其中所述男性性别特异性合成营养组合物和所述女性性别特异性合成营养组合物用于相同年龄的婴儿,并且用于男性婴儿的所述性别特异性合成营养组合物中的叶黄素浓度高于用于女性婴儿的所述性别特异性合成营养组合物中的叶黄素浓度。
9.根据权利要求8所述的营养体系,其中所述营养体系包含用于至多4月龄男性婴儿的性别特异性合成营养组合物和用于至多4月龄女性婴儿的性别特异性合成营养组合物,并且其中用于男性婴儿的所述性别特异性合成营养组合物包含的叶黄素比所述女性性别特异性合成营养组合物包含的叶黄素多0.03至0.85μg/mL。
10.根据权利要求8所述的营养体系,其中所述营养体系包含用于4月龄或以上的男性婴儿的性别特异性合成营养组合物和用于4月龄或以上的女性婴儿的性别特异性合成营养组合物,其中用于男性婴儿的所述性别特异性合成营养组合物包含的叶黄素比所述女性性别特异性合成营养组合物包含的叶黄素多0.01至0.3μg/mL。
11.根据权利要求1至3中任一项所述的性别特异性合成营养组合物用于向婴儿提供最佳量的叶黄素的用途。
12.根据权利要求1至4中任一项所述的性别特异性合成营养组合物,所述性别特异性合成营养组合物用于治疗或预防欠佳的叶黄素水平、抗氧化能力、皮肤健康和/或视网膜发育。
13.用于向婴儿提供最佳量的叶黄素的方法,所述方法包括:
a.任选地从不分性别的合成营养组合物制备根据权利要求1至4中任一项所述的性别特异性合成营养组合物;
b.向婴儿喂食根据权利要求1至4中任一项所述的性别特异性合成营养组合物。
14.根据权利要求5至10中任一项所述的营养体系,所述营养体系用于确保婴儿的最佳叶黄素水平并且优化抗氧化能力、皮肤健康和/或视网膜发育。
15.用于向婴儿提供最佳量的叶黄素的套盒,所述套盒包括:
a.不分性别的合成营养组合物;
b.标签,所述标签标明婴儿的剂量需求,以便获得根据权利要求1至4中任一项所述的性别特异性合成营养组合物。
16.根据权利要求12所述的性别特异性合成营养组合物、根据权利要求14所述的营养体系,其用于确保对其有需要的婴儿的最佳叶黄素水平。
17.根据权利要求13所述的用于为婴儿提供最佳量的叶黄素的方法,其中所述婴儿是对其有需要的婴儿。
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