CN112730677A - 一种检测鸡矢藤中多种化学成分的uplc-q-tof/ms方法 - Google Patents

一种检测鸡矢藤中多种化学成分的uplc-q-tof/ms方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种检测鸡矢藤中多种化学成分的UPLC‑Q‑TOF/MS方法，其特征在于：它包括如下步骤：(1)供试品溶液的制备：取待测鸡矢藤样品，粉碎过筛，加乙醇回流提取，过滤，滤液干燥得浸膏，浸膏加乙醇稀释至含原药粉0.05～1g·mL‑1，制备得供试品溶液；(2)检测：取供试品溶液，注入快速液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪进行检测。本发明采用UPLC‑Q‑TOF/MS技术首次对民间所用鸡矢藤药材中主流品种鸡矢藤P.scandens、毛鸡矢藤P.scandens var.tomentosa、狭叶鸡矢藤P.stenophylla及臭鸡矢藤P.foetida化学成分进行快速分析。

Description

一种检测鸡矢藤中多种化学成分的UPLC-Q-TOF/MS方法
技术领域
本发明属于检测领域，具体涉及一种检测鸡矢藤中多种化学成分的UPLC-Q-TOF/MS方法。
背景技术
《中国植物志》载鸡矢藤属植物多为柔弱缠绕灌木或藤本，全球约有20～30种，大部产于亚洲热带地区，其他热带地区亦有少量分布；我国有11种、1变种，分布于西南、中南至东部，而以西南部为多。研究发现：鸡矢藤属多种植物在民间作鸡矢藤药用，多用于小儿疳积、消化不良等症，称之为“鸡屎藤”或“臭藤”。鸡矢藤在临床使用广泛，目前有用鸡矢藤煎水擦洗法治疗疥疮，发现不论病情轻重和病程长短其疗效颇佳；有以鸡矢藤为主药在治疗消化系统疾病及清洁肠道应用中均取得较好效果，还有研究发现鸡矢藤汤在促进剖宫产术后胃肠功能恢复方面效果较好；《中华人民共和国药典》(2015年版)中收载含“鸡矢藤”的中成药如达立通颗粒、复方夏天无片、消眩止晕片亦在临床使用较广。
本发明研究前期就产地和药材市场大量调研后，厘清了目前作鸡矢藤药用的基原有4种，经鉴定分别为茜草科植物鸡矢藤Paederia scandens(Lour.)Merr.、毛鸡矢藤Paederia scandens(Lour.)Merr.var.tomentosa(Bl.)
Hand.-Mazz.、狭叶鸡矢藤Paederia stenophylla Merr.及臭鸡矢藤Paederiafoetida L.。文献考证发现这4种植物的功效却不尽相同，《中华人民共和国药典临床用药须知》(2015年版)中载鸡矢藤P.scandens功能消食、止痛、解毒、祛湿，可用于食积不化、胸胁脘腹疼痛、湿疹、疮疡肿痛等症；《中国药用植物》载：毛鸡矢藤P.scandensvar.tomentosa功能长于清热解毒、祛痰止咳、理气化积、活血化瘀，可用于治疗偏正头痛、湿热黄疸、肝炎、痢疾、食积饱胀及中暑等症；臭鸡矢藤P.foetida，功能为祛风利湿、消食化积、止咳、止痛，可用于治疗风湿筋骨痛，黄疸型肝炎，痢疾，消化不良，小儿疳积等症。而狭叶鸡矢藤P.stenophylla，亦可药用。鸡矢藤类药材具有抗炎镇痛、抗风湿、抗肿瘤、抑菌、抗痛风和调节胃肠道功能等多种药理作用；在临床上用于治疗多种疼痛、类风湿性关节炎及消化系统疾病等症，取得了良好的疗效且未发现明显毒性作用；但鸡矢藤类药材的化学成分检测多集中于挥发油的检测，且集中在鸡矢藤P.scandens和毛鸡矢藤P.scandensvar.tomentosa这两种，目前未见鸡矢藤属多种植物的全化学成分检测的相关报道。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种检测鸡矢藤中多种化学成分的UPLC-Q-TOF/MS方法，它包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：
取待测鸡矢藤样品，粉碎过筛，加乙醇回流提取，过滤，滤液干燥得浸膏，浸膏加乙醇稀释至含原药粉0.05～1g·mL-1，制备得供试品溶液；
(2)检测：取供试品溶液，注入快速液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪进行检测；
色谱条件如下：
色谱柱：C18色谱柱；
流动相：流动相A：乙腈，流动相B为0.1％甲酸；
梯度洗脱条件为：
Figure BDA0002854551070000021
质谱条件如下：
离子源：电喷雾离子源；
检测方式：正负离子模式。
进一步地，步骤(1)中，所述加10倍量乙醇回流提取3次，每次1h，合并3次煎出液。
更进一步地，所述乙醇浓度为75％，v/v。
进一步地，步骤(1)中，所述浸膏加乙醇稀释至含原药粉0.05g·mL-1。
进一步地，步骤(2)中，所述色谱条件中色谱柱为Waters Acquity BEH-C18，规格为2.1×100mm，1.7μm。
更进一步地，所述色谱条件中柱温为35℃，检测波长为254nm，进样体积为1μL。
进一步地，步骤(2)中，所述质谱条件中毛细管电压：2.5kv，锥孔电压：25V，离子源温度：120℃，脱溶剂温度：400℃，脱溶剂气流速度：1000L·hr-1，扫描范围：100～1200amu，扫描模式：MSe。
进一步地，所述鸡矢藤为茜草科植物鸡矢藤Paederia scandens(Lour.)Merr.、毛鸡矢藤Paederia scandens(Lour.)Merr.var.tomentosa(BI.)Hand.-Mazz.、狭叶鸡矢藤Paederia stenophylla Merr.和/或臭鸡矢藤Paederia foetida L.。
进一步地，所述化学成分为环烯醚萜苷类化合物、奎宁酸类化合物、黄酮苷类化合物和金线莲苷。
更进一步地，所述环烯醚萜苷类化合物为水晶兰苷异构体、水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸、羟基去乙酰车叶草苷酸、京尼平苷酸、车叶草苷酸、车叶草苷、车叶草苷酸甲酯、鸡矢藤苷酸、脱氧车叶草苷酸甲酯、鸡矢藤苷和鸡矢藤苷酸甲酯；所述奎宁酸类化合物为3，5，6-三羟基环己-1-烯-1，3-二羧酸、1-O-咖啡酰奎宁酸、新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸；所述黄酮类化合物为槲皮素-3-O-芸香糖-7-O-葡萄糖苷、葡萄糖基芦丁、槲皮素二葡萄糖苷、槲皮素-3-O-葡萄糖-7-O-木糖苷和芦丁。
本发明采用UPLC-Q-TOF/MS技术首次对民间所用鸡矢藤药材中主流品种鸡矢藤P.scandens、毛鸡矢藤P.scandens var.tomentosa、狭叶鸡矢藤P.stenophylla及臭鸡矢藤P.foetida化学成分进行快速分析，根据色谱峰在质谱中的精确相对分子质量、碎片离子信息、质谱裂解规律及色谱保留规律，并结合对照品的质谱信息和参考文献，鉴定化合物结构并对鸡矢藤属不同植物间的成分差异进行比较分析，为鸡矢藤药材成分鉴定提供一种快速、简便、可靠的手段，进而为鸡矢藤药材不同功效与其药效物质基础研究方面提供参考。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1混合对照品的UPLC-Q-TOF-MS图(从左到右依次为车叶草苷酸、车叶草苷、鸡矢藤苷、鸡矢藤苷酸)
图2鸡矢藤(S1)、毛鸡矢藤(S2)、狭叶鸡矢藤(S3)及臭鸡矢藤(S4)醇提物负离子模式下的UPLC-Q-TOF/MS总离子流图
图3京尼平苷酸在负离子模式下的一、二级质谱及裂解规律
图4绿原酸在负离子模式下的一、二级质谱及裂解规律
图5芦丁在负离子模式下的一、二级质谱及裂解规律
图6 23种化合物在负离子模式下的一级、二级质谱图(1a-1,1a-2,1b-1,1b-2为水晶兰苷异构体；2a-1,2a-2为3，5，6-三羟基环己-1-烯-1，3-二羧酸；3a-1，3a-2为水晶兰苷；4a-1,4a-2为去乙酰车叶草苷酸；5a-1，5a-2为羟基去乙酰车叶草苷酸；6a-1,6a-2为京尼平苷酸；7a-1,7a-2为1-O-咖啡酰奎宁酸；8a-1,8a-2为新绿原酸，9a-1，9a-2为金线莲苷；10a-1,10a-2,10b-1,10b-2为车叶草苷酸；11a-1,11a-2为绿原酸；12a-1,12a-2为槲皮素-3-O-芸香糖-7-O-葡萄糖苷；13a-1,13a-2为葡萄糖基芦丁；14a-1,14a-2为车叶草苷；15a-1,15a-2为隐绿原酸；16a-1,16a-2为车叶草苷酸甲酯；17a-1,17a-2为槲皮素二葡萄糖苷；18a-1,18a-2，18b-1,18b-2为鸡矢藤苷酸；19a-1,19a-2为脱氧车叶草苷酸甲酯；20a-1,20a-2为槲皮素-3-O-葡萄糖-7-O-木糖苷；21a-1,21a-2为芦丁；22a-1,22a-2为鸡矢藤苷；23a-1,23a-2为鸡矢藤苷酸甲酯)
具体实施方式
实施例1本发明检测鸡矢藤多种成分的方法
1、制备供试品溶液
取鸡矢藤粉末(过三号筛)各10g，精密称定，加10倍量75％乙醇加热回流3次，每次1h，合并3次煎出液，过滤，滤液减压旋转蒸发至流浸膏状，用75％乙醇将流浸膏稀释为含原生粉末0.05g·mL-1浓度的样品溶液。
2、检测
将供试品溶液注入快速液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪进行检测；
气相色谱条件：色谱柱：Waters Acquity BEH-C18(2.1×100mm，1.7μm)；流动相为乙腈(A)-0.1％甲酸溶液(B)；柱温：35℃；检测波长：254nm；进样体积：1μL；梯度洗脱：0～2min，5％～14％A，流速为0.4mL·min-1；2～4min，14％～17％A，流速为0.4mL·min-1；4～6min，17％～20％A，流速为0.4mL·min-1；6～10min，20％～26％A，流速为0.4mL·min-1；10～12min，26％～90％A，流速为0.4mL·min-1；12～13min，90％～5％A，流速为0.5mL·min-1；13～15min，5％A，流速为0.5mL·min-1。
质谱条件：电离模式：电喷雾电离，正离子模式/负离子模式；毛细管电压：2.5kv；锥孔电压：25V；离子源温度：120℃；脱溶剂温度：400℃；脱溶剂气流速度：1000L·hr-1；扫描范围：100～1200amu；扫描模式：MSe。
3、检测结果
分析总离子流图和质谱图(图6)，从图中分离得到四类化合物，分别为环烯醚萜苷类化合物、奎宁酸类化合物、黄酮苷类化合物和金线莲苷；
其中环烯醚萜苷类化合物为水晶兰苷异构体、水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸、羟基去乙酰车叶草苷酸、京尼平苷酸、车叶草苷酸、车叶草苷、车叶草苷酸甲酯、鸡矢藤苷酸、脱氧车叶草苷酸甲酯、鸡矢藤苷和鸡矢藤苷酸甲酯；
奎宁酸类化合物为3，5，6-三羟基环己-1-烯-1，3-二羧酸、1-O-咖啡酰奎宁酸、新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸；
黄酮类化合物为槲皮素-3-O-芸香糖-7-O-葡萄糖苷、葡萄糖基芦丁、槲皮素二葡萄糖苷、槲皮素-3-O-葡萄糖-7-O-木糖苷和芦丁。
以下用试验例的方式来证明本发明的有益效果
试验例1
1材料
1.1材料与试剂
4种鸡矢藤药材S1～S4信息详见表1，经成都中医药大学蒋桂华教授鉴定分别为茜草科植物鸡矢藤Paederia scandens(Lour.)Merr.、毛鸡矢藤Paederia scandens(Lour.)Merr.var.tomentosa(BI.)Hand.-Mazz.、狭叶鸡矢藤Paederia stenophylla Merr.及臭鸡矢藤Paederia foetida L.。
表1样品信息
Figure BDA0002854551070000051
分析级乙醇(成都市科龙化工试剂厂)；乙腈为色谱纯(美国Fisher公司)，水为怡宝纯净水。对照品鸡矢藤苷(批号：CHB180320，纯度>98％)、鸡矢藤苷酸(批号：CHB180522，纯度>98％)、车叶草苷(批号：CHB180522，纯度>98％)及车叶草苷酸(批号：CHB180620，纯度>98％)均购于成都克洛玛生物科技有限公司。
1.2仪器与设备
SQP万分之一分析天平、T125D十万分之一分析天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司)，Agilent 1290Infinity LC超高效液相色谱仪、Xevo G2-XS QTof飞行时间质谱仪(Agilent，美国)。
2方法
2.1样品及对照品的制备
样品的制备：取S1～S4样品粉末(过三号筛)各10g，精密称定，加10倍量75％乙醇加热回流3次，每次1h。合并3次煎出液，过滤，滤液减压旋转蒸发至流浸膏状，用75％乙醇将流浸膏稀释为含原生粉末0.05g·mL-1浓度的样品溶液。
混合对照品溶液配制：取车叶草苷酸、车叶草苷、鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷对照品各1mg，精密称定，加50％甲醇水20mL制成。
2.2色谱条件
色谱柱：Waters Acquity BEH-C18(2.1×100mm，1.7μm)；流动相为乙腈(A)-0.1％甲酸溶液(B)；柱温：35℃；检测波长：254nm；进样体积：1μL；梯度洗脱：0～2min，5％～14％A，流速为0.4mL·min-1；2～4min，14％～17％A，流速为0.4mL·min-1；4～6min，17％～20％A，流速为0.4mL·min-1；6～10min，20％～26％A，流速为0.4mL·min-1；10～12min，26％～90％A，流速为0.4mL·min-1；12～13min，90％～5％A，流速为0.5mL·min-1；13～15min，5％A，流速为0.5mL·min-1。
2.3质谱条件
电离模式：电喷雾电离，正离子模式/负离子模式；毛细管电压：2.5kv；锥孔电压：25V；离子源温度：120℃；脱溶剂温度：400℃；脱溶剂气流速度：1000L·hr-1；扫描范围：100～1200amu；扫描模式：MSe。
2.4数据处理
在分析检测方面，在色谱分离方面4种鸡矢藤提取液样品均得到了比较良好的总离子流色谱图，各峰的分离度均比较良好，4种鸡矢藤提取液样品在色谱图上直观的差异均能清晰看到；在质谱数据方面，总离子流图中主成分均在负离子扫描模式下响应值好于正离子模式(负离子模式下响应强度约为正离子模式下的5倍)，同时正负离子模式下总离子流图对应良好，因此结构鉴定主要在负离子模式下进行，以正离子模式数据进行复核。
对经UPLC-Q-TOF/MS技术获得的数据采用人工解析加数据库匹配的方式进行处理：①根据准分子离子、二级碎片等信息鉴定的4种鸡矢藤中化学成分，结合文献报道的部分化合物进行自建鸡矢藤化合物数据库。②将自建化合物数据库结构导入UNIFY软件。③再通过软件进行匹配并比较4种鸡矢藤中各化合物的选择离子响应强度，对4种鸡矢藤中化学成分进行结构鉴定及比较其成分差异。
3结果
从鸡矢藤提取液的总离子流图中观察到主要色谱峰29个，鉴定出其中23个化合物，包括12个环烯醚萜苷类成分，5个奎宁酸类化合物(绿原酸及其类似物)，5个黄酮苷类化合物及1个其他简单化合物。对响应强度最高的4个峰进行对照品溶液比对验证发现相应强度最高的4个成分依次为车叶草苷酸、车叶草苷、鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷(见图1)，均为环烯醚萜苷类成分。
图2中自上而下依次为鸡矢藤、毛鸡矢藤、狭叶鸡矢藤和臭鸡矢藤75％乙醇提取物的UPLC-Q-TOF/MS总离子流色谱图，从图2中看出UPLC分离条件可以有效地将鸡矢藤中的主要成分分开，在UPLC-Q-TOF/MS条件下得到质谱图，化学成分在ESI离子源负离子谱中黄酮类、奎宁酸类化合物主要出现[M-H]-准分子离子峰，而环烯醚萜苷类在ESI离子源负离子谱中除了出现[M-H]-准分子离子峰外，还存在部分[M+HCOO]-准分子离子峰。
3.1环烯醚萜苷类化合物
比较出峰时间及分析质谱裂解规律，结合参考文献等数据信息，在负离子模式下从4种鸡矢藤药材中共鉴定出包括京尼平苷酸、车叶草苷酸、车叶草苷、车叶草苷酸甲酯等12种环烯醚萜类化合物，详见表2。水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸、京尼平苷酸等均为环烯醚萜结构单元与糖形成的苷类化合物，主要裂解途径就是苷键断裂(脱糖基)；由于环烯醚萜结构单元中，还含有羟基、羧基等基团，所以还存在次要的脱水、脱羧等次要裂解途径。车叶草苷、车叶草苷酸、鸡矢藤苷、鸡矢藤苷酸在结构上进一步有酯键等取代，所以在上述苷键断裂(脱糖基)的主要裂解途径之外，还有脱甲基、脱乙酰基、脱水、脱羧等次要裂解途径。
如化合物6在负离子模式下准分子离子峰m/z 431.1189[M-H]-，确定化合物分子量为432，根据元素组成分析分子式为C18H24O12，失去一分子甲酸(HCOOH，m/z 46)，参照文献并结合出峰时间推测化合物6为车叶草苷酸。化合物7在负离子模式下准分子离子峰m/z459.1173[M+HCOO]-，2倍分子量m/z 873.2319[2M+HCOO]-，失去一分子甲酸(HCOOH，m/z 46)产生碎片为413.1146，确定化合物分子量为414，根据元素组成分析分子式为C18H22O11，参照文献并结合出峰时间推测化合物7为车叶草苷。化合物11在负离子模式下准分子离子峰m/z491.0863[M+HCOO]-，2倍分子量m/z 937.1676[2M+HCOO]-，确定化合物分子量为446，失去一分子甲酸(HCOOH，m/z 46)产生碎片为445.0858，根据元素组成分析分子式为C18H22O11S，参照文献并结合出峰时间推测化合物11为鸡矢藤苷。现以化合物5(京尼平苷酸)为例说明环烯醚萜苷类化合物的质谱裂解途径，见图3。
表2 UPLC-Q-TOF/MS鉴定鸡矢藤属4种植物环烯醚萜苷类成分
Figure BDA0002854551070000081
3.2奎宁酸类化合物
本发明从4种鸡矢藤药材中共鉴定了1-O-咖啡酰奎宁酸、新绿原酸、绿原酸等5个奎宁酸类衍生物，详见表3。绿原酸、新绿原酸及隐绿原酸等咖啡酰基奎宁酸类化合物易先失去咖啡酰残基，得到碎片离子[M-H-caffeoyl]-或[M+H-caffeoyl]+，而绿原酸在负离子模式下易失去一分子H2O，同时咖啡酰基碎片易失去一分子CO得到[caffeoyl-H-CO]-碎片离子。
化合物13在负离子模式下准分子离子峰m/z 217.0329[M-H]-，确定化合物分子量为217，根据元素组成分析分子式为C8H10O7，失去一分子水(H2O，m/z 18)，失去一分子水(H2O，m/z 18)，失去两分子水(2H2O，m/z 36)，并结合出峰时间推测化合物13为3，5，6-三羟基环己-1-烯-1，3-二羧酸。
化合物16在负离子模式下准分子离子峰m/z 353.0927[M-H]-，确定化合物分子量为354，根据元素组成分析分子式为C16H18O9，参照文献并结合出峰时间推测化合物16为绿原酸。现以绿原酸为例说明该类化合物的质谱裂解途径，见图4。
表3 UPLC-Q-TOF/MS鉴定鸡矢藤属4种植物奎宁酸类化合物
Figure BDA0002854551070000091
3.3黄酮类化合物
从4种鸡矢藤药材中共鉴定了5个黄酮类化合物，详见表4。黄酮苷类化合物的结构特点主要是与葡萄糖或鼠李糖等形成氧苷，在质谱高能碰撞下连续苷键的断裂，丢失糖基，生成高强度的黄酮苷元碎片，二级黄酮苷元质谱主要裂解方式有-CO、-CO2、C2H2O、H2O等中性离子的丢失等以及黄酮C环开环断裂模式。
化合物18在负离子模式下准分子离子峰m/z 771.1970[M-H]-，确定化合物分子量为772，根据元素组成分析分子式为C33H40O21，失去一分子C6H12O5(m/z 146)，参照文献并结合出峰时间推测化合物18为槲皮素-3-O-芸香糖-7-O-葡萄糖苷。
化合物22在负离子模式下准分子离子峰m/z 609.1437[M-H]-，确定化合物分子量为610，根据元素组成分析分子式为C27H30O16，二级、三级质谱碎片中有碳苷的常见碎片丢失，参照文献并结合出峰时间推测化合物22为芦丁。其裂解过程见图5。
表4UPLC-Q-TOF/MS鉴定鸡矢藤属4种植物黄酮类化合物
Figure BDA0002854551070000101
3.4其他化合物
本发明从鸡矢藤、毛鸡矢藤、狭叶鸡矢藤及臭鸡矢藤中还鉴定出1个其他类化合物，即金线莲苷。化合物23在负离子模式下准分子离子峰m/z263.0821[M-H]-，确定化合物分子量为264，根据元素组成分析分子式为C10H16O8，失去一分子甲酸(HCOOH，m/z 46)，参照文献并结合出峰时间(tR＝3.72min)推测化合物23为金线莲苷。
3.5四种鸡矢藤中成分差异
通过对鸡矢藤、毛鸡矢藤、狭叶鸡矢藤及臭鸡矢藤中主要成分选择离子响应强度的对比，进而比对同一个化合物在S1～S4中的相对含量高低。
由表5可知，除脱氧车叶草苷酸甲酯及3，5，6-三羟基环己-1-烯-1，3-二羧酸在4种植物中主要成分选择离子响应强度太低而无法比较其含量高低外，环烯醚萜苷类成分中：水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸、车叶草苷酸、车叶草苷、车叶草苷酸甲酯、鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷及鸡矢藤苷酸甲酯在臭鸡矢藤(S4)中的含量高于S1～S3；京尼平苷酸、羟基去乙酰车叶草苷酸及水晶兰苷异构体在狭叶鸡矢藤(S3)中的含量高于S1、S2及S4；水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸、水晶兰苷异构体、羟基去乙酰车叶草苷酸及京尼平苷酸在鸡矢藤(S1)中的含量低于S2～S4；车叶草苷酸、车叶草苷、车叶草苷酸甲酯、鸡矢藤苷酸及鸡矢藤苷在毛鸡矢藤(S2)中的含量低于S1、S3及S4。奎宁酸类成分中：1-O-咖啡酰奎宁酸、新绿原酸、绿原酸及隐绿原酸均在S4中含量最高，在S1中含量最低。黄酮类成分中：槲皮素-3-O-芸香糖-7-O-葡萄糖苷、葡萄糖基芦丁、槲皮素二葡萄糖苷及芦丁在S4中含量最高，槲皮素-3-O-葡萄糖-7-O-木糖苷在S3中含量最高、在S4中最低；而槲皮素-3-O-芸香糖-7-O-葡萄糖苷及葡萄糖基芦丁在S1中含量最低，槲皮素二葡萄糖苷及芦丁在S1中含量最低。此外，金线莲苷在S3中含量最高，在S4中含量最低。
表5 4种鸡矢藤中主要成分选择离子响应强度
Figure BDA0002854551070000111
注：“—”表示选择离子的响应强度响应值过低，未能准确积分出具体响应值。
4结论
本发明采用UPLC-Q-TOF/MS技术对4种基原的鸡矢藤药材化学成分进行快速、全面的定性分析，对所得的数据进行人工解析并进行数据库及文献匹配，进而鉴定出含鸡矢藤苷等12种环烯醚萜苷类成分、芦丁等5种黄酮类化合物、绿原酸等5种奎宁酸及其衍生物以及其他类成分金线莲苷，共23种成分；该方法能够快速准确地鉴定鸡矢藤药材中的多种化学成分，为鸡矢藤属其他植物成分的全面定性分析提供了新方法。通过4种鸡矢藤中主要成分选择离子响应强度的对比进而对4种鸡矢藤化学成分之间的差异进行了比较分析，所鉴定成分在鸡矢藤、毛鸡矢藤、狭叶鸡矢藤及臭鸡矢藤4种植物间存在含量差异，为其临床使用提供了参考。

Claims (10)

1.一种检测鸡矢藤中多种化学成分的UPLC-Q-TOF/MS方法，其特征在于：它包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：
取待测鸡矢藤样品，粉碎过筛，加乙醇回流提取，过滤，滤液干燥得浸膏，浸膏加乙醇稀释至含原药粉0.05～1g·mL-1，制备得供试品溶液；
(2)检测：取供试品溶液，注入快速液相色谱串联四极杆飞行时间质谱仪进行检测；
色谱条件如下：
色谱柱：C18色谱柱；
流动相：流动相A：乙腈，流动相B为0.1％甲酸；
梯度洗脱条件为：
Figure FDA0002854551060000011
质谱条件如下：
离子源：电喷雾离子源；
检测方式：正负离子模式。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述加10倍量乙醇回流提取3次，每次1h，合并3次煎出液。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述乙醇浓度为75％，v/v。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述浸膏加乙醇稀释至含原药粉0.05g·mL-1。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述色谱条件中色谱柱为Waters Acquity BEH-C18，规格为2.1×100mm，1.7μm。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述色谱条件中柱温为35℃，检测波长为254nm，进样体积为1μL。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述质谱条件中毛细管电压：2.5kv，锥孔电压：25V，离子源温度：120℃，脱溶剂温度：400℃，脱溶剂气流速度：1000L·hr-1，扫描范围：100～1200amu，扫描模式：MSe。
8.根据权利要求1～7任意一项所述的方法，其特征在于：所述鸡矢藤为茜草科植物鸡矢藤Paederia scandens(Lour.)Merr.、毛鸡矢藤Paederia scandens(Lour.)Merr.var.tomentosa(Bl.)Hand.-Mazz.、狭叶鸡矢藤Paederia stenophylla Merr.和/或臭鸡矢藤Paederia foetida L.。
9.根据权利要求1～7任意一项所述的方法，其特征在于：所述化学成分为环烯醚萜苷类化合物、奎宁酸类化合物、黄酮苷类化合物和金线莲苷。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述环烯醚萜苷类化合物为水晶兰苷异构体、水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸、羟基去乙酰车叶草苷酸、京尼平苷酸、车叶草苷酸、车叶草苷、车叶草苷酸甲酯、鸡矢藤苷酸、脱氧车叶草苷酸甲酯、鸡矢藤苷和鸡矢藤苷酸甲酯；所述奎宁酸类化合物为3，5，6-三羟基环己-1-烯-1，3-二羧酸、1-O-咖啡酰奎宁酸、新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸；所述黄酮类化合物为槲皮素-3-O-芸香糖-7-O-葡萄糖苷、葡萄糖基芦丁、槲皮素二葡萄糖苷、槲皮素-3-O-葡萄糖-7-O-木糖苷和芦丁。
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