CN112725162B - 一种全自动微生物核酸提取检测装置及提取检测方法 - Google Patents
一种全自动微生物核酸提取检测装置及提取检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112725162B CN112725162B CN202110055239.9A CN202110055239A CN112725162B CN 112725162 B CN112725162 B CN 112725162B CN 202110055239 A CN202110055239 A CN 202110055239A CN 112725162 B CN112725162 B CN 112725162B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tube
- nucleic acid
- reagent
- liquid
- mechanical arm
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
- C12N15/1006—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers
- C12N15/1013—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers by using magnetic beads
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
- G01N35/02—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor using a plurality of sample containers moved by a conveyor system past one or more treatment or analysis stations
- G01N35/04—Details of the conveyor system
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
- G01N35/02—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor using a plurality of sample containers moved by a conveyor system past one or more treatment or analysis stations
- G01N35/04—Details of the conveyor system
- G01N2035/0401—Sample carriers, cuvettes or reaction vessels
- G01N2035/0412—Block or rack elements with a single row of samples
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
- G01N35/02—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor using a plurality of sample containers moved by a conveyor system past one or more treatment or analysis stations
- G01N35/04—Details of the conveyor system
- G01N2035/0474—Details of actuating means for conveyors or pipettes
- G01N2035/0475—Details of actuating means for conveyors or pipettes electric, e.g. stepper motor, solenoid
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
本发明涉及一种全自动微生物核酸提取检测装置及提取检测方法。包括机械臂、若干试剂管、低温等离子体发生装置、磁针探头、加热棒、导液管,机械臂包括若干机械手臂,机械臂分别与试剂管的端口、低温等离子体发生装置、磁针探头、加热棒配合连接,低温等离子体发生装置、磁针探头、加热棒分别配合伸入试剂管中,若干试剂管的底部分别与导液管连接,试剂管与导液管之间活动连接,连接处设置开关,使试剂管与导液管之间连通或闭合。高效快速高通量完成样品核酸的提取与分析,可用于各种场地气体、固体、液体样品中微生物核酸的提取与分析,提高工作效率。
Description
技术领域
本发明属于检测装置技术领域,具体涉及一种全自动微生物核酸提取检测装置及提取检测方法。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解,而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
在核酸检测试验中,获得高纯度的核酸是最重要的步骤之一,和后续的基因扩增、测序、杂交和克隆等应用分析紧密相关。常用的微生物核酸提取技术,包括苯酚-氯仿法、盐析法、硅相吸附法、离子交换法等。这些传统的核酸提取方法有耗时较长、提取效率较低、繁琐的劳力操作等不足,很大程度限制了操作人员的工作效率和核酸产物质量。此外,这些提取技术需要频繁的离心步骤,既不适用于核酸快速自动化提取,也不适用于样品较多时的高通量提取。
近年来,基于纳米磁珠吸附的核酸自动提取技术受到广泛关注和应用。该方法的原理是:核酸可以依靠静电作用、疏水作用和氢键作用结合到磁珠上,尤其是经过表面修饰的超顺磁性氧化硅纳米磁珠可与核酸进行快速“特异性结合”,形成“核酸-磁珠复合物”;在外加磁场的作用下,复合物分离出来;最后经过洗脱液洗去非特异性吸附的杂质、去盐、纯化后,得到目标核酸物质。此外,低温等离子体因其含有可以快速破坏微生物结构的带电粒子流等物质,故在核酸提取裂解的过程中,可以通过低温等离子体来破坏微生物结构,使其释放核酸物质,且不损坏核酸。虽然目前国内外都有商业化的等离子体设备。但由于这些仪器体积较大、需外接电源等,目前主要还是应用于实验室消杀研究。
发明内容
针对上述现有技术中存在的问题,本发明的目的是提供一种全自动微生物核酸提取检测装置及提取检测方法。
为了解决以上技术问题,本发明的技术方案为:
第一方面,一种全自动微生物核酸提取检测装置,包括机械臂、若干试剂管、低温等离子体发生装置、磁针探头、加热棒、导液管,机械臂包括若干机械手臂,机械臂分别与试剂管的端口、低温等离子体发生装置、磁针探头、加热棒配合连接,低温等离子体发生装置、磁针探头、加热棒分别配合伸入试剂管中,若干试剂管的底部分别与导液管连接,试剂管与导液管之间活动连接,连接处设置开关,使试剂管与导液管之间连通或闭合。
将磁珠法DNA提取流程进行精细化和机械化,通过机械臂将核酸提取分析不同功能区自动串联运行,并加以等离子体处理裂解样品,高效快速高通量完成样品核酸的提取与分析,可用于各种场地气体、固体、液体样品中微生物核酸的提取与分析,提高工作效率。
第二方面,利用上述的全自动微生物核酸提取检测装置进行提取检测方法,具体步骤为:
利用机械臂将样品放入低温等离子体裂解管,在等离子体的作用下,细胞发生裂解,释放其中的核酸物质,得到混合溶液;
混合溶液进入到磁珠吸附管,核酸物质与磁珠进行接触吸附,磁珠吸附管控制排出液体;
机械臂利用磁针探头伸入到磁珠吸附管内,将磁珠吸附到磁针探头中,然后转移到洗涤管中进行洗涤,然后转移到洗脱管中进行洗脱;
洗脱后的核酸液体转移到DNA产物存放管,然后利用机械臂转移到DNA检测装置进行检测。
本发明一个或多个技术方案具有以下有益效果:
将磁珠法DNA提取检测流程分为裂解加热、磁珠吸附、洗涤、洗脱、检测四步,可自动完成采样和检测过程,实现快速高效的自动化提取检测过程。本发明的核酸提取方法利用等离子体射流代替裂解液,同时优化漂洗液和洗脱液成分,可实现快速裂解微生物细胞壁,释放核酸并进行洗涤洗脱。操作安全高效、简单易行,提高提取效率,只需输入指令即可实现自动化运行,从而快速得到样品微生物核酸并进行检测分析。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本申请的进一步理解,本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明,并不构成对本发明的不当限定。
图1为本发明系统框架示意图;
图2为本发明各组成部分相对位置示意图;
图3为低温等离子体发生器示意图;
图4为本发明九连排活口试剂管示意图;
图5为试管底部弹簧橡胶塞开关装置演示示意图;
其中,11、试剂管,12、固定装置,13、气泵,14、固定端口,15、支撑腿,111、气体采样管,112、液体样品存放管,113、低温等离子体裂解管,114、磁珠吸附管,115、第一洗涤管,116、第二洗涤管,117、乙醇洗涤管,118、洗脱管,119、DNA产物存放管,21、移动电源,22、机械臂,26、低温等离子体发生装置,27、磁针探头,271、等离子体发生区,2711、石英管,2712、黄铜铜棒,273、空气进出口,28、加热棒,110、弹簧橡胶塞开关,1101、弹簧,1102、限位框,1103、橡胶塞,31、废液收集台,32、半球体收集器,321、圆形平台,322、架体结构,34、导液管,35、废液收集装置,41、荧光DNA检测仪。
具体实施方式
应该指出,以下详细说明都是例示性的,旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明,本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是,这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式,而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的,除非上下文另外明确指出,否则单数形式也意图包括复数形式,此外,还应当理解的是,当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时,其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
第一方面,一种全自动微生物核酸提取检测装置,包括机械臂、若干试剂管、低温等离子体发生装置、磁针探头、加热棒、导液管,机械臂包括若干机械手臂,机械臂分别与试剂管的端口、低温等离子体发生装置、磁针探头、加热棒配合连接,低温等离子体发生装置、磁针探头、加热棒分别配合伸入试剂管中,若干试剂管的底部分别与导液管连接,试剂管与导液管之间活动连接,连接处设置开关,使试剂管与导液管之间连通或闭合。
在本发明的一些实施方式中,若干试剂管依次包括依次排列的低温等离子体裂解管、磁珠吸附管、第一洗涤管、第二洗涤管、乙醇洗涤管、洗脱管、DNA产物存放管。
可选的,磁珠吸附管内装有磁珠;第一洗涤管和第二洗涤管内装有洗涤液;乙醇洗涤管内装有乙醇溶液;洗脱管内装有洗脱液。
在本发明的一些实施方式中,还包括液体样品存放管,液体样品存放管排列在低温等离子体裂解管的前端。
在本发明的一些实施方式中,试剂管还包括气体采样管,气体采样管排列在液体样品存放管的一侧。
可选的,还包括气泵,气泵的一端伸入到气体采样管中。
在本发明的一些实施方式中,若干试剂管之间并排排列,通过固定装置进行固定,试剂管与固定装置之间通过螺纹连接。
可选的,还包括固定端口,固定端口与固定装置固定连接,固定端口与机械臂的采抓端的形状相配合。
在本发明的一些实施方式中,机械臂的夹爪设置为T型,低温等离子体发生装置、磁针探头、加热棒的端部设置为与T型相配合的形状。
在本发明的一些实施方式中,试剂管底部设置弹簧橡胶塞开关,弹簧橡胶塞开关包括限位框、弹簧、橡胶塞,限位框与试剂管的底部固定密封连接,限位框的内部设置弹簧,橡胶塞设置在限位框的底部、与弹簧底部相对的位置,弹簧与橡胶塞相抵设置,试剂管的底部与橡胶塞底部对应的位置设置开口,橡胶塞抵住开口的位置,试剂管的开口与支撑平台形状配合。
在本发明的一些实施方式中,试剂管的底部分别与导液管之间设置半球体收集器,半球体收集器包括半球状的壳体、支撑平台,半球状的壳体的底部中心位置开口,开口处与导液管的一端连接,支撑平台位于导液管的顶部、半球状壳体的内部,试剂管的底部配合落在支撑平台上。
在本发明的一些实施方式中,支撑平台包括圆锥型状的架体结构及其顶部的圆形平台。
在本发明的一些实施方式中,低温等离子体发生装置包括等离子体发生区、空气进出口,等离子体发生区与空气进出口连接,等离子体发生区的底部为低温等离子体射流的出口。
在本发明的一些实施方式中,还包括废液收集装置,导液管倾斜设置,导液管的液体出口端与废液收集装置连接。
在本发明的一些实施方式中,还包括DNA检测装置,DNA检测装置与机械臂配合连接。
第二方面,利用上述的全自动微生物核酸提取检测装置进行提取检测方法,具体步骤为:
利用机械臂将样品放入低温等离子体裂解管,在等离子体的作用下,细胞发生裂解,释放其中的核酸物质,得到混合溶液;
混合溶液进入到磁珠吸附管,核酸物质与磁珠进行接触吸附,磁珠吸附管控制排出液体;
机械臂利用磁针探头伸入到磁珠吸附管内,将磁珠吸附到磁针探头中,然后转移到洗涤管中进行洗涤,然后转移到洗脱管中进行洗脱;
洗脱后的核酸液体转移到DNA产物存放管,然后利用机械臂转移到DNA检测装置进行检测。
可选的,等离子体发生装置输出电压12-24V,产生的低温等离子体射流长度在3-5cm。可以用来击破微生物的膜结构使其释放核酸物质。
可选的,第一洗涤管中的洗涤液包括无水乙醇50%(v/v),乙二胺四乙酸(EDTA)2-8mM,盐酸胍、异硫氰酸胍或氯化锂中的一种或多种,浓度为0.5-5M。
可选的,第二洗涤管中的洗涤液无水乙醇50%-80%(v/v),Nacl0.1-2M。
可选的,洗脱管中的洗脱液为去离子水或Tris-HCl,浓度为10-20mM,PH为7.0-8.0。
下面结合图1至图5对全自动微生物核酸提取检测装置进行阐述。
如图2所示,全自动微生物核酸提取检测装置,包括机械臂22、若干试剂管11、低温等离子体发生装置26、磁针探头27、加热棒28、导液管。若干试剂管11分为不同功能,利用机械臂来控制、抓取不同的试剂管11,然后依次进入下一个试剂管11,进行试验,提取检测装置包括低温等离子体发生装置26、磁针探头27、加热棒28。
低温等离子体发生装置27生成射流低温等离子体,该低温等离子体可以根据需要处理样品不同时间(0.01s-10min),破坏样品中微生物细胞结构从而释放其中的核酸物质。操作过程中可依据环境温度情况和微生物细胞裂解需求进行不同时间不同温度的加热,加热过程由机械臂抓取控制加热棒完成。向试剂管内放入低温等离子体发生装置或加热棒通过机械臂进行切换,机械臂可以设置为若干个,每个机械臂可以独立操作控制,便于实现对试剂管内样品的处理。
其中一个试管中可以放入磁珠,当样品经过等离子体处理后,进入到放入磁珠的试管中,磁珠吸附DNA后,机械臂利用磁针探头伸入试剂管中,吸附磁珠,然后转移到洗涤管中,进行洗涤、洗脱。最后机械臂将处理后的DNA转移去检测,完成了DNA的检测过程。
在一种实施方式中,加热棒为具有可以和试剂管及机械臂的采抓进行配合的形状的加热结构。可以包括电阻丝和石英材料,电阻丝外层用石英材料包裹,内部设有感温元件,可进行装置温度调控。
上述过程,能够实现自动采样和检测的过程,实现快速高效的自动化磁珠法DNA提取检测过程。利用等离子体射流代替裂解液,同时优化漂洗液和洗脱液成分,可实现快速裂解微生物细胞壁,释放核酸并进行洗涤洗脱。
如图4所示,若干试剂管依次包括依次并排排列的低温等离子体裂解管113、磁珠吸附管114、第一洗涤管115、第二洗涤管116、乙醇洗涤管117、洗脱管118、DNA产物存放管119。
若干试剂管并排排列,如果设置若干排,则可以同时实现多组样品的提取和检测。
可选的,磁珠吸附管内装有磁珠;第一洗涤管115、第二洗涤管116内装有洗涤液;乙醇洗涤管117内装有乙醇溶液;洗脱管118内装有洗脱液。
低温等离子体裂解管113中进行细胞的裂解,使细胞释放核酸物质;
磁珠吸附管114中放有磁珠,裂解后的液体,经过磁珠吸附,磁珠与DNA进行吸附结合。
磁珠与DNA结合后,依次经过第一洗涤管115、第二洗涤管116进行洗涤,去除杂质,然后进入到洗脱管,实现磁珠与DNA的分离,然后将得到的纯净核酸溶液转移去进行检测。
试剂管的材质可以为聚四氟乙烯等材质。试剂管的外壁设置有螺纹能够和固定装置配合进行螺纹连接,然后可以通过机械臂调节试剂管的高度,使试剂管处于悬空状态或按压状态。在运行的过程中,试剂管可以用铝箔封装,保持无菌环境。试剂管等使用之后,可以利用低温等离子体进行净化,然后直接排出废液,可以再利用。
机械臂22具有旋转试剂管的作用、具有抓取和移动低温等离子体发生装置、磁针探头、加热棒的作用、具有定量移液功能等。所以不同的试剂管之间的液体的移动通过机械臂完成。实现自动的检测过程。
还包括液体样品存放管112,液体样品存放管排列在低温等离子体裂解管的前端。液体样品存放管用于液体样品的暂时存放。
试剂管还包括气体采样管111,气体采样管11排列在液体样品存放管的一侧。可选的,还包括气泵13,气泵的一端伸入到气体采样管中。气体采样管用于通过洗气方法采集气体样品。可以用于气体采样。气泵13为微型气泵,气泵用于向气体采样管中供入气体。
若干试剂管11之间成排排列,通过固定装置12进行固定,试剂管11与固定装置12之间通过螺纹连接。若干试剂管与固定装置之间固定不动,起到稳定试剂管的作用。固定装置12包括支撑板和支撑腿15。
还包括固定端口14,固定端口14与固定装置12固定连接,固定端口14与机械臂22的采抓端的形状相配合。机械臂22通过夹爪抓住固定端口,固定端口14与固定装置固定连接,因此机械臂可以使整个固定装置发生晃动,进而使试剂管内部的液体发生晃动,实现震荡均匀的作用。在细胞裂解、磁珠吸附、洗涤等过程中,通过震荡的作用,有助于提高DNA的提取效果。
机械臂22的夹爪设置为T型,低温等离子体发生装置26、磁针探头27、加热棒28的端部设置为与T型相配合的形状。机械臂22的夹爪可以为其它形状,方便与低温等离子体发生装置、磁针探头、加热棒等进行配合。方便夹住之后进行伸入和伸出试剂管的操作。
机械臂与移动电源21连接,提供动力。机械臂能通过示教再现和三维坐标完成相应动作,通过影像系统识别配件和不同的试剂管,灵活度高,根据操作程序指令可以实现360°全方位循环操作。通过与不同配件结合自动完成全等离子体处理、液体加热、磁珠洗脱、样品震荡混匀、样品检测分析等流程。机械臂可同时运行1-9个手臂,每一手臂末端夹爪内有可伸缩结构,能推动配件按钮,内侧有电路触点,可以给其配件供电,机械臂夹爪内部连接震动模块,机械臂与试剂管固定板上的T形端口结合后,震动模块以50Hz的振动频率工作可以带动悬空状态试剂管震动,使内部液体充分震荡混匀。机械臂自身还具有定量移液功能。
如图5所示,试剂管11底部设置弹簧橡胶塞开关110,弹簧橡胶塞开关110包括限位框1102、弹簧1101、橡胶塞1103,限位框1102与试剂管11的底部固定密封连接,限位框的内部设置弹簧,橡胶塞设置在限位框的底部、与弹簧底部相对的位置,弹簧与橡胶塞相抵设置,试剂管11的底部与橡胶塞1103底部对应的位置设置开口,橡胶塞抵住开口的位置,试剂管的开口与支撑平台形状配合。
试剂管11底部设置弹簧橡胶塞开关110可以实现自动闭合,避免液体漏出,可以实现打开,排出液体,这样避免移动试剂管,方便操作。限位框与试剂管的底部固定相接,所以限位框1102不动,限位框1102的内部设置弹簧1101,下方设置橡胶塞1103,弹簧1101抵住橡胶塞1103,当试剂管悬空时,弹簧抵住橡胶塞,使橡胶塞封住试剂管底部的开口,避免液体漏出。当橡胶塞的底部被顶住上移后,液体顺着分析就会流出试剂管。
试剂管11的底部分别与导液管34之间设置半球体收集器32,半球体收集器32包括半球状的壳体、支撑平台,半球状的壳体的底部中心位置开口,开口处与导液管34的一端连接,支撑平台位于导液管的顶部、半球状壳体的内部,试剂管的底部配合落在支撑平台上。
所述半球体收集器32,用于排出试剂管11中的液体和支撑试剂管的作用。半球体收集器包括半球状的壳体、支撑平台,半球状的壳体包住试剂管的底部,当试剂管的底部流出液体后,液体不会溢出壳体。支撑平台支撑住试剂管,并且当支撑平台顶住橡胶塞的时候,会使橡胶塞被压缩,使液体流出。实现了试剂管中的液体自动排出的作用,想要排出液体时,只需要机械臂旋转试剂管,使试剂管下移,因为试剂管与固定装置是螺纹连接,所以在下移的过程中也比较稳定。
支撑平台包括圆锥型状的架体结构322及其顶部的圆形平台321。支撑平台为架体结构,所以当试剂管中的液体流出后,可以直接通过壳体底部的开口流入到导液管中。圆形平台321可以顶住橡胶塞。
如图3所示,低温等离子体发生装置27包括等离子体发生区271、空气进出口273,等离子体发生区271与空气进出口连接,等离子体发生区的底部为低温等离子体射流的出口。低温等离子体发生装置的形状是配合试剂管的大小的,可以伸入到试剂管中,然后释放等离子体,使细胞发生裂解,释放DNA。等离子体发生区271内设置石英管2711和黄铜铜棒2712。发生装置输出电压12-24V,产生的低温等离子体射流274长度在3-5cm,可以用来击破微生物的膜结构使其释放核酸物质。
还包括废液收集装置35,导液管倾斜设置,导液管的液体出口端与废液收集装置35连接。可以实现自动收集废液,废液收集装置可以为一个容器等。导液管倾斜设置,然后液体自由流动到废液收集装置中。在DNA检测的过程中,实现了自动检测、自动排液,避免了试剂管使用后需要取出,然后进行排液的过程。
还包括废液收集台31,废液收集台31具有固定导液管的作用。
还包括DNA检测装置,DNA检测装置与机械臂配合连接。DNA检测装置用于DNA的检测,机械臂移取核酸溶液,然后送入DNA检测装置中进行检测,DNA检测装置可以为荧光DNA检测仪41等。
如图1所示,全自动微生物核酸提取检测装置可以实现自动化控制和运作,机械手可以通过控制平台进行控制,DNA检测装置可以和控制平台连接传递检测结果。通过机械臂控制等离子体发生装置、加热棒的移动的运行,实现细胞裂解和温度控制。
上述可以得到实现了DNA的自动处理和检测过程。
基于上述核酸快速提取装置实现的核酸快速提取与检测方法,依次包括如下步骤:
(1)样品采集:气体采样管可以通过洗气方法采集气体样品,或将待测液体样品或附着有待测样品的检测材料放入液体样品存放管中。
(2)低温等离子体裂解加热:机械臂控制等离子体发生器生成射流低温等离子体,该低温等离子体可以根据需要处理样品不同时间(0.01s-10min),破坏样品中微生物细胞结构从而释放其中的核酸物质。操作过程中可依据环境温度情况和微生物细胞裂解需求进行不同时间不同温度的加热,加热过程由机械臂抓取控制加热棒完成。
(3)磁珠吸附:利用机械臂收集转移步骤2)中低温等离子体处理后的样品加入磁珠吸附管中,充分震荡混匀。
(4)洗涤洗脱过程:样品依次转移至第一洗涤管和第二洗涤管进行两次洗涤液洗涤,再加入到乙醇洗涤管中进行一次80%乙醇洗涤。最后转移到洗脱管内进行一次洗脱液洗脱,磁珠与DNA分离后将纯净核酸溶液加入DNA产物存放管中。
(5)DNA浓度检测分析:利用机械臂收集转移一定量体积(如5微升)步骤4)中所得纯净核酸溶液加入荧光DNA检测仪中,获得核酸浓度信息,检测结果可进行打印。
震荡的频率可以进行设置,可以为50HZ等。
所述漂洗液A含有如下含量的成分:无水乙醇50%(v/v),乙二胺四乙酸(EDTA)2-8mM,盐酸胍、异硫氰酸胍或氯化锂中的一种或多种,浓度为0.5-5M。所述漂洗液B含有如下含量的成分:无水乙醇50%-80%(v/v),Nacl0.1-2M。所述洗脱液为去离子水或Tris-HCl,浓度为10-20mM,PH为7.0-8.0。
实施例1
使用自动化核酸提取及检测装置提取检测大肠杆菌样品核酸DNA。
(1)实验前准备
将九连排活口试剂管封装铝箔纸撕掉,放置在试剂管支撑腿上,打开系统电源和机械臂电源,在电脑或手机端输入操作指令,开启机械臂的运行。
(2)裂解
机械臂自动移取1ml大肠杆菌菌液加入液体样品存放试管中,混合振荡摇匀30s后机械臂操作移液,将菌液加入低温等离子体裂解管,随后机械臂抓取低温等离子体笔处理试管内菌液20s。
(3)结合
机械臂操作移液,自动吸取处理后菌液移取至磁珠吸附管内,振荡摇匀30s。
(4)漂洗洗脱
随后机械臂夹取磁针探头,吸附磁珠DNA结合物,移取至第一洗涤管,振荡摇匀30s。继续将磁珠DNA结合物转移到第二洗涤管,振荡混匀30s,随后将磁珠DNA结合物转移到乙醇洗涤管,最后将磁珠DNA结合物转移到洗脱管。最后将洗脱管内样品转移至DNA产物存放管中。
(5)检测分析
将该纯净病原体核酸溶液加入荧光染色剂,取5微升溶液放入荧光DNA检测仪器中,并进行结果的打印。
处理完成后第一洗涤管、第二洗涤管、乙醇洗涤管内存有废液,机械臂依次顺时针旋转第一试剂管、第二试剂管、乙醇洗涤管使试剂管处于按压状态,废液经废液收集平台流至废液收集皿中。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,对于本领域的技术人员来说,本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (17)
1.一种全自动微生物核酸提取检测装置,其特征在于:包括机械臂、若干试剂管、低温等离子体发生装置、磁针探头、加热棒、导液管,机械臂包括若干机械手臂,机械臂分别与试剂管的端口、低温等离子体发生装置、磁针探头、加热棒配合连接,低温等离子体发生装置、磁针探头、加热棒分别配合伸入试剂管中,若干试剂管的底部分别与导液管连接,试剂管与导液管之间活动连接,连接处设置开关,使试剂管与导液管之间连通或闭合;
所述低温等离子体发生装置包括等离子体发生区、空气进出口,等离子体发生区与空气进出口连接,等离子体发生区的底部为低温等离子体射流的出口,等离子体发生区内设置石英管和黄铜铜棒;发生装置输出电压12-24V,产生的低温等离子体射流长度在3-5cm。
2.如权利要求1所述的全自动微生物核酸提取检测装置,其特征在于:若干试剂管包括依次排列的低温等离子体裂解管、磁珠吸附管、第一洗涤管、第二洗涤管、乙醇洗涤管、洗脱管、DNA产物存放管。
3.如权利要求2所述的全自动微生物核酸提取检测装置,其特征在于:磁珠吸附管内装有磁珠;第一洗涤管和第二洗涤管内装有洗涤液;乙醇洗涤管内装有乙醇溶液;洗脱管内装有洗脱液。
4.如权利要求2所述的全自动微生物核酸提取检测装置,其特征在于:还包括液体样品存放管,液体样品存放管排列在低温等离子体裂解管的前端。
5.如权利要求2所述的全自动微生物核酸提取检测装置,其特征在于:试剂管还包括气体采样管,气体采样管排列在液体样品存放管的一侧。
6.如权利要求2所述的全自动微生物核酸提取检测装置,其特征在于:还包括气泵,气泵的一端伸入到气体采样管中。
7.如权利要求1所述的全自动微生物核酸提取检测装置,其特征在于:若干试剂管之间并排排列,通过固定装置进行固定,试剂管与固定装置之间通过螺纹连接;
还包括固定端口,固定端口与固定装置固定连接,固定端口与机械臂的采抓端的形状相配合。
8.如权利要求7所述的全自动微生物核酸提取检测装置,其特征在于:机械臂的夹爪设置为T型,低温等离子体发生装置、磁针探头、加热棒的端部设置为与T型相配合的形状。
9.如权利要求1所述的全自动微生物核酸提取检测装置,其特征在于:试剂管底部设置弹簧橡胶塞开关,弹簧橡胶塞开关包括限位框、弹簧、橡胶塞,限位框与试剂管的底部固定密封连接,限位框的内部设置弹簧,橡胶塞设置在限位框的底部、与弹簧底部相对的位置,弹簧与橡胶塞相抵设置,试剂管的底部与橡胶塞底部对应的位置设置开口,橡胶塞抵住开口的位置,试剂管的开口与支撑平台形状配合。
10.如权利要求1所述的全自动微生物核酸提取检测装置,其特征在于:试剂管的底部分别与导液管之间设置半球体收集器,半球体收集器包括半球状的壳体、支撑平台,半球状的壳体的底部中心位置开口,开口处与导液管的一端连接,支撑平台位于导液管的顶部、半球状壳体的内部,试剂管的底部配合落在支撑平台上。
11.如权利要求10所述的全自动微生物核酸提取检测装置,其特征在于:支撑平台包括圆锥型状的架体结构及其顶部的圆形平台。
12.如权利要求1所述的全自动微生物核酸提取检测装置,其特征在于:还包括废液收集装置,导液管倾斜设置,导液管的液体出口端与废液收集装置连接。
13.如权利要求12所述的全自动微生物核酸提取检测装置,其特征在于:还包括DNA检测装置,DNA检测装置与机械臂配合连接。
14.利用权利要求1-13任一所述的全自动微生物核酸提取检测装置进行提取检测方法,其特征在于:具体步骤为:
利用机械臂将样品放入低温等离子体裂解管,在等离子体的作用下,细胞发生裂解,释放其中的核酸物质,得到混合溶液;
混合溶液进入到磁珠吸附管,核酸物质与磁珠进行接触吸附,磁珠吸附管控制排出液体;
机械臂利用磁针探头伸入到磁珠吸附管内,将磁珠吸附到磁针探头中,然后转移到洗涤管中进行洗涤,然后转移到洗脱管中进行洗脱;
洗脱后的核酸液体转移到DNA产物存放管,然后利用机械臂转移到DNA检测装置进行检测。
15.如权利要求14所述的提取检测方法,其特征在于:第一洗涤管中的洗涤液包括无水乙醇50%,乙二胺四乙酸2-8mM,盐酸胍、异硫氰酸胍、氯化锂中的一种或多种,浓度为0.5-5M。
16.如权利要求14所述的提取检测方法,其特征在于:第二洗涤管中的洗涤液无水乙醇50%-80%,Nacl0.1-2M。
17.如权利要求14所述的提取检测方法,其特征在于:洗脱管中的洗脱液为去离子水或Tris-HCl,浓度为10-20mM,PH为7.0-8.0。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110055239.9A CN112725162B (zh) | 2021-01-15 | 2021-01-15 | 一种全自动微生物核酸提取检测装置及提取检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202110055239.9A CN112725162B (zh) | 2021-01-15 | 2021-01-15 | 一种全自动微生物核酸提取检测装置及提取检测方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN112725162A CN112725162A (zh) | 2021-04-30 |
CN112725162B true CN112725162B (zh) | 2022-03-01 |
Family
ID=75591656
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202110055239.9A Active CN112725162B (zh) | 2021-01-15 | 2021-01-15 | 一种全自动微生物核酸提取检测装置及提取检测方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN112725162B (zh) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114058498B (zh) * | 2022-01-11 | 2022-04-19 | 至美时代生物智能科技(北京)有限公司 | 一种全自动空气微生物检测系统及检测方法 |
CN114032173B (zh) * | 2022-01-11 | 2022-03-15 | 至美时代生物智能科技(北京)有限公司 | 一种密闭式空气采样瓶 |
Citations (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002159844A (ja) * | 2000-11-22 | 2002-06-04 | Nomura Denshi Kogyo Kk | 低温プラズマ発生装置 |
CN102404927A (zh) * | 2010-09-07 | 2012-04-04 | 廖峻德 | 微等离子体产生装置及其灭菌系统 |
CN203715614U (zh) * | 2013-12-30 | 2014-07-16 | 西安天隆科技有限公司 | 一种单样本核酸封闭式提取仪 |
CN104830957A (zh) * | 2015-04-24 | 2015-08-12 | 中山大学 | 一种等离子体灭菌紫外线作用因子的定量分析方法 |
CN105368820A (zh) * | 2015-12-22 | 2016-03-02 | 南京先进激光技术研究院 | 一种基于磁珠法的全血dna提取试剂盒及其应用 |
RU167645U1 (ru) * | 2015-12-02 | 2017-01-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственный центр "ПЛАЗМА" (ООО "НПЦ "ПЛАЗМА") | Устройство генерирования низкотемпературной плазмы |
CN108642052A (zh) * | 2018-07-09 | 2018-10-12 | 张家口健垣科技有限公司 | 一种自动化分子检测装置 |
CN108841818A (zh) * | 2018-03-13 | 2018-11-20 | 融智生物科技(青岛)有限公司 | 一种核酸提取方法及装置 |
CN109321585A (zh) * | 2018-09-30 | 2019-02-12 | 山东大学 | 一种利用t4脱氧核糖核酸连接酶提高原核微生物诱变育种效率的方法 |
CN110819623A (zh) * | 2019-11-08 | 2020-02-21 | 珠海迪尔生物工程有限公司 | 核酸提取仪及提取方法 |
CN111286450A (zh) * | 2020-04-13 | 2020-06-16 | 蔡勇平 | 一种便携式样品密闭操作的全自动核酸提取检测仪 |
CN111440703A (zh) * | 2020-05-19 | 2020-07-24 | 广州高盛生物科技股份有限公司 | 一种双提取模式核酸提取工作站及核酸提取方法 |
CN113577338A (zh) * | 2021-08-21 | 2021-11-02 | 西藏神猴药业有限责任公司 | 一种灭菌装置 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20030059823A1 (en) * | 2001-09-21 | 2003-03-27 | Juki Corporation | Hybridization apparatus and method for detecting nucleic acid in sample using the same |
FR2906035B1 (fr) * | 2006-09-15 | 2008-11-28 | Commissariat Energie Atomique | Procede de mesure quantitative de cibles biomoleculaires deposees sur une biopuce, et dispositif pour sa mise en oeuvre. |
ES2329637B1 (es) * | 2006-11-10 | 2010-09-22 | Universidad Autonoma De Madrid | Procedimiento para la determinacion de la fragmentacion del adn en microorganismos. |
US20110312503A1 (en) * | 2010-01-23 | 2011-12-22 | Artemis Health, Inc. | Methods of fetal abnormality detection |
US11260386B2 (en) * | 2015-06-05 | 2022-03-01 | The Emerther Company | Component of a device, a device, and a method for purifying and testing biomolecules from biological samples |
-
2021
- 2021-01-15 CN CN202110055239.9A patent/CN112725162B/zh active Active
Patent Citations (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002159844A (ja) * | 2000-11-22 | 2002-06-04 | Nomura Denshi Kogyo Kk | 低温プラズマ発生装置 |
CN102404927A (zh) * | 2010-09-07 | 2012-04-04 | 廖峻德 | 微等离子体产生装置及其灭菌系统 |
CN203715614U (zh) * | 2013-12-30 | 2014-07-16 | 西安天隆科技有限公司 | 一种单样本核酸封闭式提取仪 |
CN104830957A (zh) * | 2015-04-24 | 2015-08-12 | 中山大学 | 一种等离子体灭菌紫外线作用因子的定量分析方法 |
RU167645U1 (ru) * | 2015-12-02 | 2017-01-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственный центр "ПЛАЗМА" (ООО "НПЦ "ПЛАЗМА") | Устройство генерирования низкотемпературной плазмы |
CN105368820A (zh) * | 2015-12-22 | 2016-03-02 | 南京先进激光技术研究院 | 一种基于磁珠法的全血dna提取试剂盒及其应用 |
CN108841818A (zh) * | 2018-03-13 | 2018-11-20 | 融智生物科技(青岛)有限公司 | 一种核酸提取方法及装置 |
CN108642052A (zh) * | 2018-07-09 | 2018-10-12 | 张家口健垣科技有限公司 | 一种自动化分子检测装置 |
CN109321585A (zh) * | 2018-09-30 | 2019-02-12 | 山东大学 | 一种利用t4脱氧核糖核酸连接酶提高原核微生物诱变育种效率的方法 |
CN110819623A (zh) * | 2019-11-08 | 2020-02-21 | 珠海迪尔生物工程有限公司 | 核酸提取仪及提取方法 |
CN111286450A (zh) * | 2020-04-13 | 2020-06-16 | 蔡勇平 | 一种便携式样品密闭操作的全自动核酸提取检测仪 |
CN111440703A (zh) * | 2020-05-19 | 2020-07-24 | 广州高盛生物科技股份有限公司 | 一种双提取模式核酸提取工作站及核酸提取方法 |
CN113577338A (zh) * | 2021-08-21 | 2021-11-02 | 西藏神猴药业有限责任公司 | 一种灭菌装置 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
Devices and approaches for generating specific high-affinity nucleic acid aptamers;Kylan Szeto等;《APPLIED PHYSICS REVIEWS 1》;20140910;全文 * |
低温等离子体灭活核糖核酸酶研究;江敏等;《集成技术》;20180731;第7卷(第4期);全文 * |
集成核酸提取的实时荧光PCR微全分析系统;赵树弥等;《分析化学(FENXI HUAXUE)》;20141031;第42卷(第10期);全文 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN112725162A (zh) | 2021-04-30 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN112725162B (zh) | 一种全自动微生物核酸提取检测装置及提取检测方法 | |
US6281008B1 (en) | Nucleic acid extraction apparatus | |
US8597878B2 (en) | Device and procedure for automated isolation and purification of nucleic acids from complex starting materials of the users choice | |
CN104450498B (zh) | 一种核酸提取仪 | |
JP4856831B2 (ja) | 磁性粒子を流体と混合するための装置および方法 | |
CN101990639B (zh) | 自动提纯设备、多井板试样盒以及用于从生物试样提取核酸的方法 | |
US20020132354A1 (en) | Automated centrifuge and method of using same | |
JP2002504232A (ja) | チャージされた生体分子を単離し又は/及び分析するための方法と装置 | |
CN106404508A (zh) | 一种核酸检测前处理自动化处理装置 | |
WO2021254519A1 (zh) | 样品处理和检测装置及其应用 | |
JP4468817B2 (ja) | 生体物質導入装置、生体物質導入方法およ生体物質導入用磁性担体 | |
CN103602582A (zh) | 自动质粒提取装置 | |
JPWO2016031705A1 (ja) | 可変ピッチ分注装置を利用した磁性粒子反応制御装置およびその反応制御方法 | |
CN106399055A (zh) | 一种用于核酸检测自动化前处理的试剂盘 | |
CN216837995U (zh) | 一种一体化核酸快提试管以及快提和检测装置 | |
CN210119382U (zh) | 全自动菌体膜片制备系统 | |
CN207516132U (zh) | 一种高通量超微量的多功能Tip SPE | |
WO2015126340A1 (en) | A laboratory equipment utilized to isolate nucleic acids manually via magnetic particles and to prepare them for molecular genetic analyses | |
CN212532816U (zh) | 磁性分离装置 | |
CN108315243A (zh) | 自动化加样系统 | |
CN212713454U (zh) | 一种抽真空法过柱核酸提取组合装置 | |
CN111948000A (zh) | 全自动菌体膜片制备系统 | |
CN113186097A (zh) | 一种细胞外囊泡的自动分离装置 | |
CN111500439A (zh) | 一种电磁法高通量核酸提取装置及核酸提取方法 | |
CN206940863U (zh) | 一种自动固液分离的24孔样品消化板 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |