CN112710836A - 人类白细胞抗原g标志物的用途及试剂盒 - Google Patents
人类白细胞抗原g标志物的用途及试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112710836A CN112710836A CN201911024269.2A CN201911024269A CN112710836A CN 112710836 A CN112710836 A CN 112710836A CN 201911024269 A CN201911024269 A CN 201911024269A CN 112710836 A CN112710836 A CN 112710836A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- human leukocyte
- leukocyte antigen
- pregnancy
- kit
- marker
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 100
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 100
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 100
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 99
- 239000003550 marker Substances 0.000 title claims abstract description 24
- 206010070538 Gestational hypertension Diseases 0.000 claims abstract description 58
- 201000005624 HELLP Syndrome Diseases 0.000 claims abstract description 57
- 208000005347 Pregnancy-Induced Hypertension Diseases 0.000 claims abstract description 57
- 208000036335 preeclampsia/eclampsia 1 Diseases 0.000 claims abstract description 57
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims abstract description 29
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 14
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 10
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 8
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 claims description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 7
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 5
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 4
- 229940078916 carbamide peroxide Drugs 0.000 claims description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 4
- AQLJVWUFPCUVLO-UHFFFAOYSA-N urea hydrogen peroxide Chemical compound OO.NC(N)=O AQLJVWUFPCUVLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 25
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 13
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 12
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 11
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 11
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 6
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 abstract description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 abstract description 5
- 230000006872 improvement Effects 0.000 abstract description 4
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 14
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 13
- 230000009984 peri-natal effect Effects 0.000 description 8
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 5
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 5
- 201000001474 proteinuria Diseases 0.000 description 5
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 4
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 210000002993 trophoblast Anatomy 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000003785 decidua Anatomy 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 3
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 3
- 230000008447 perception Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 102000011786 HLA-A Antigens Human genes 0.000 description 2
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 2
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 206010053155 Epigastric discomfort Diseases 0.000 description 1
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 1
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 1
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 208000005392 Spasm Diseases 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 230000007488 abnormal function Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000003145 cytotoxic factor Substances 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000004438 eyesight Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 201000011461 pre-eclampsia Diseases 0.000 description 1
- 230000000250 revascularization Effects 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000013212 standard curve analysis Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 230000036266 weeks of gestation Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/32—Cardiovascular disorders
- G01N2800/321—Arterial hypertension
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/50—Determining the risk of developing a disease
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
人类白细胞抗原G标志物的用途及试剂盒，涉及医学检测技术领域。主要针对人类白细胞抗原G标志物在制备用于预测妊娠高血压综合征风险的诊断剂中的用途。试剂盒包括人类白细胞抗原G标志物。其能够准确地对患妊高征的风险进行预测，为妊高征的筛查提供很大的便利，同时大大简化了检测流程，排除了干扰因素，准确度和效率大大提高，孕妇和医护人员的劳动强度大大降低，有助于医护质量和执行效率的提高。本方案是对人类白细胞抗原G进行检测，灵敏度非常高，能在妊娠前期完成诊断筛查，为预防妊高征提供了充分的应对时间，对于预防和减少妊高征具有积极作用，从预防学的角度来说具有深远实际意义。
Description
技术领域
本发明涉及医学检测技术领域，具体而言，涉及人类白细胞抗原G标志物的用途及试剂盒。
背景技术
妊娠高血压综合征(以下简称：妊高征)是指在妊娠24周左右，在高血压、蛋白尿基础上，出现头痛、眼花、恶心、呕吐、上腹不适等症状。是妊娠期特有疾病，产科四大重症之一。其发病率约为5-10％。严重危及母婴安全。对妊高征的早期筛查有助减少母婴危害。
但是目前临床上对妊高征的筛查基本上都是通过测量血压的方式来进行，为了使测量结构具有可信度，一般需要长时间多次测量，孕妇与医护人员的工作量都很大，强度高。此外，引起血压升高的原因多种多样，为了排除其他干扰，还需要辅助对其他可能引起血压升高的病症进行筛除，工作量非常大，且环节众多，也直接削弱了最终结果的可信度，检测精度较低。
此外，目前临床确诊的金标准为：1.高血压；2.蛋白尿。两个条件同时具备才能确诊。妊高征的临床发病时间大部分在怀孕21周以后，利用传统方法确诊即发病，并不能起到提前预防的作用。
需要说明的是，通过血压变化来进行筛查，也具有一定的滞后性，不利于早期预防工作的开展。
有鉴于此，特提出本申请。
发明内容
本发明的第一个目的在于提出人类白细胞抗原G标志物在制备用于预测妊娠高血压综合征风险的诊断剂中的用途，其将人类白细胞抗原G标志物应用到诊断剂中，从发病机理的角度，对人类白细胞抗原G的含量进行定量表征，通过测定人类白细胞抗原G的量来预测妊高征的发病风险。其使得检测剂对人类白细胞抗原G的检测灵敏度变得非常高，且准确率也更高，从而对患妊高征的风险的感知灵敏度和精确度大大提高。不仅大大简化了检测流程，而且排除了干扰因素，使得效率大大提高，孕妇和医护人员的劳动强度大大降低，同时提高了医护质量和执行效率。更高重要的是，本方案是对人类白细胞抗原G进行检测，其灵敏度非常高，并且能够在妊娠前期(例如：10～12周)完成诊断筛查，为预防妊高征提供了充分的应对时间，对于预防和减少妊高征具有积极作用，从预防学的角度来说具有深远实际意义，使得妊高症的提前预防和治疗成为可能，能够实际地减少妊高症的疾病率，保障孕妇和围产儿的安全。
本发明的第二个目的在于提供一种用于预测妊娠高血压综合征风险的试剂盒，其能够准确地对患妊高征的风险进行预测，为妊高征的筛查提供很大的便利，同时大大简化了检测流程，排除了干扰因素，准确度和效率大大提高，孕妇和医护人员的劳动强度大大降低，有助于医护质量和执行效率的提高。更高重要的是，本方案是对人类白细胞抗原G进行检测，其灵敏度非常高，并且能够在妊娠前期(例如：10～12周)完成诊断筛查，为预防妊高征提供了充分的应对时间，对于预防和减少妊高征具有积极作用，从预防学的角度来说具有深远实际意义，使得妊高症的提前预防和治疗成为可能，能够实际地减少妊高症的疾病率，保障孕妇和围产儿的安全。
本发明的实施例是这样实现的：
人类白细胞抗原G标志物在制备用于预测妊娠高血压综合征风险的诊断剂中的用途。
进一步地，人类白细胞抗原G标志物包括：人类白细胞抗原G特异性抗体。
一种用于预测妊娠高血压综合征风险的试剂盒，其包括：人类白细胞抗原G标志物。可选地，人类白细胞抗原G标志物包括人类白细胞抗原G特异性抗体。
进一步地，人类白细胞抗原G特异性抗体的分子量为37.5KD～39KD。可选地，人类白细胞抗原G特异性抗体的分子量为37.9KD～38.5KD。进一步可选地，人类白细胞抗原G特异性抗体的分子量为38.2KD。
进一步地，人类白细胞抗原G特异性抗体包括单克隆抗体。
进一步地，人类白细胞抗原G特异性抗体包括鼠抗人抗体。
进一步地，试剂盒还包括：HRP标记鼠IgG二抗。
进一步地，试剂盒还包括：第一显色液、第二显色液和终止液。第一显色液包括四甲基联苯胺和二甲基亚砜。第二显色液包括过氧化脲和柠檬酸缓冲液。终止液包括盐酸。
进一步地，试剂盒还包括标准品和稀释液。标准品为人类白细胞抗原G。稀释液包括磷酸盐缓冲液和牛血清白蛋白。
本发明实施例的有益效果是：
本申请的发明人经过长期研究发现：胎盘不正常植入和不正常发育是妊娠高血压综合征的主要病因。分娩后，胎盘排出，妊娠高血压综合征的症状即可消失。
而胎盘不正常植入和不正常发育则与母亲的免疫功能相关。围产儿基因的一半来自母亲，一半来自父亲。对母体免疫系统来讲，围产儿是一个同种、半异体。但成功的妊娠，母亲免疫系统并没有将其排斥清除，这种现象称之为母体对围产儿的免疫耐受。如果这种免疫耐受机制失调，即可引起母亲的免疫排斥反应增强而导致胎盘着床浅、胎盘的滋养叶细胞功能受损、胎盘缺血和胎盘代谢障碍。同时，胎盘源血浆细胞毒性因子增加，从而使血管内皮细胞损伤，全身小动脉痉挛，最终导致妊娠高血压综合征。
人类白细胞G(HLA-G)是一种非经典的人类白细胞I类抗原。HLA-G的基因同经典I类白细胞抗原的基因(HLA-A，-B和-C)均位于第6对染色体的短臂上；基因和表达的产物与经典I类白细胞抗原有86％雷同。但是，HLA-G与经典I类白细胞抗原相比，在正常生理情况下，HLA-G仅在胎盘的绒毛膜滋养细胞有较高的表达。而HLA-A,-B和-C在所有的有核细胞均有表达，但在胎盘的绒毛膜细胞经典I类白细胞抗原表达则是缺失的。组织和细胞缺乏或降低经典I类白细胞抗原的表达，可以降低抗原提呈功能和免受细胞毒性T淋巴细胞(CTL)攻击，但极容易受到自然杀伤细胞(NK)的攻击。HLA-G则具有抑制自然杀伤细胞，细胞毒性T淋巴细胞和抗原提呈细胞(APC)的功能。因此，胎盘绒毛膜细胞经典I类白细胞抗原的表达的缺失和HLA-G的高表达构成了母体对围产儿免疫耐受关键的环节。
HLA-G与经典I类白细胞抗原相比，在正常生理情况下，HLA-G仅在胎盘的绒毛膜滋养细胞有较高的表达，也就是说，HLA-G仅在孕血中特异表达。
本申请的发明人通过大量实验研究发现：妊高征患者的胎盘HLA-G mRNA和蛋白、以及血清中可溶性HLA-G蛋白表达明显降低。妊高征患者HLA-G在胎盘绒毛外细胞滋养细胞簇上呈孤岛样缺失。由于滋养细胞表达的HLA-G分子在细胞侵入母胎蜕膜中起到保护作用，HLA-G表达的缺陷，使绒毛滋养细胞易受母体免疫系统的攻击，让其侵蚀能力低下，侵入底蜕膜中的滋养细胞数量明显不足，侵蚀仅达子宫螺旋动脉蜕膜段，不能有效地完成血管重建。与正常妊娠相比，妊高征患者的胎盘种植较浅，导致血管内皮细胞受损和功能发生异常。测定血清或其他体液中HLA-G的含量变化并能够用于妊娠高血压综合征的表达在怀孕周期的改变，HLA-G在血清中表达的量也发生改变。HLA-G的表达具有高度的特异性，因此，测定血清中HLA-G的含量的变化能够明确地帮助妊娠高血压综合征的诊断。
本发明实施例提出的人类白细胞抗原G标志物在制备用于预测妊娠高血压综合征风险的诊断剂中的用途，其将人类白细胞抗原G标志物应用到诊断剂中，从发病机理的角度，对人类白细胞抗原G的含量进行定量表征，通过测定人类白细胞抗原G的量来预测妊高征的发病风险，进行特定表征。其使得检测剂对人类白细胞抗原G的检测灵敏度变得非常高，且准确率也更高，从而对患妊高征的风险的感知灵敏度和精确度大大提高。不仅大大简化了检测流程，而且排除了干扰因素，使得效率大大提高，孕妇和医护人员的劳动强度大大降低，同时提高了医护质量和执行效率。
需要说明的是，临床确诊的金标准为：1.高血压；2.蛋白尿。两个条件同时具备才能确诊。妊高征的临床发病时间大部分在怀孕21周以后，利用传统方法确诊即发病。本发明的技术方案是对人类白细胞抗原G进行检测，其灵敏度非常高，并且能够在妊娠前期(例如：10～12周)完成诊断筛查，为预防妊高征的发生提供了充分应对时间。对于预防和减少妊高征具有积极作用，从预防学的角度来说具有深远实际意义，使得妊高症的提前预防和治疗成为可能，能够实际地减少妊高症的疾病率，保障孕妇和围产儿的安全。
而本发明实施例提供的用于预测妊娠高血压综合征风险的试剂盒，其以人类白细胞抗原G标志物为基本媒介，对人类白细胞抗原G的量来进行准确表征，能够准确地对患妊高征的风险进行预测，为妊高征的筛查提供很大的便利，同时大大简化了检测流程，排除了干扰因素，准确度和效率大大提高，孕妇和医护人员的劳动强度大大降低，有助于医护质量和执行效率的提高。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为不同对象在相应时期的人类白细胞抗原G浓度相对情况。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例提出的“人类白细胞抗原G标志物在制备用于预测妊娠高血压综合征风险的诊断剂中的用途”以及“用于预测妊娠高血压综合征风险的试剂盒”进行具体说明。
本发明实施例提出了人类白细胞抗原G标志物在制备用于预测妊娠高血压综合征风险的诊断剂中的用途。通过利用人类白细胞抗原G标志物对样本中的人类白细胞抗原G进行定量检测，测定人类白细胞抗原G的含量。
以未发病孕妇在整个孕期中的人类白细胞抗原G含量变化曲线作为标准曲线，用待测样本的人类白细胞抗原G含量与标准曲线在特定时期的含量进行比对，得出评定结果，从而对待测对象患妊娠高血压综合征的风险进行预测。
这种方式将人类白细胞抗原G标志物应用到诊断剂中，从发病机理的角度，对人类白细胞抗原G的含量进行定量表征，通过测定人类白细胞抗原G的量来预测妊高征的发病风险，使得检测剂对人类白细胞抗原G的检测灵敏度变得非常高，且准确率也更高，从而对患妊高征的风险的感知灵敏度和精确度大大提高。
需要说明的是，临床确诊的金标准为：1.高血压；2.蛋白尿。两个条件同时具备才能确诊。妊高征的临床发病时间大部分在怀孕21周以后，利用传统方法确诊即发病，传统方法对于预防和减少妊高征并没有太大作用，从预防学的角度来说并没有实际意义。更高重要的是，本方案是对人类白细胞抗原G进行检测，其灵敏度非常高，并且能够在妊娠前期(例如：10～12周)完成诊断筛查，为预防妊高征提供了充分的应对时间，对于预防和减少妊高征具有积极作用，从预防学的角度来说具有深远实际意义，使得妊高症的提前预防和治疗成为可能，能够实际地减少妊高症的疾病率，保障孕妇和围产儿的安全。
整个过程仅仅需要对离体样本中的人类白细胞抗原G的含量进行测定，无需进行其他检测工作，大大简化了检测流程，排除了大量干扰因素，效率大大提高，而且孕妇和医护人员在检测过程中的劳动强度大大降低，提高了医护质量和执行效率。
进一步地，人类白细胞抗原G标志物包括：人类白细胞抗原G特异性抗体。利用人类白细胞抗原G特异性抗体与人类白细胞抗原G进行特异性结合，对人类白细胞抗原G进行定量表征，最后通过检测已经结合的人类白细胞抗原G特异性抗体的含量即可得到原来样本中人类白细胞抗原G的含量。
其中，人类白细胞抗原G特异性抗体可以选择鼠抗人抗体(抗体来源是大鼠，交叉反应是人；中文名称：人白细胞抗原G抗体；英文名称：Rabbit Anti-HLAG antibody)，并利用HRP标记鼠IgG二抗来对鼠抗人抗体进行定量表征，但选择方式不限于此。
在此种情况下，先利用人类白细胞抗原G特异性抗体与人类白细胞抗原G进行特异性结合，再利用HRP标记鼠IgG二抗来对人类白细胞抗原G特异性抗体进行定量表征，最后测定待测样本的OD值。利用同样的方法来测定已知浓度的标准品(人类白细胞抗原G)的OD值，绘制标准曲线，并利用待测样本的OD值换算得出待测样品中人类白细胞抗原G的浓度。
需要说明的是，检测样品取自9～12周的孕血，也可以在9～12周这个时间段内多次检测，持续监测。如果检测结果的人类白细胞抗原G浓度低于未发病孕妇在对应时期的人类白细胞抗原G浓度，则表明人类白细胞抗原G的表达受阻，具有较高患病风险，差值越大风险就越高。而如果浓度与未发病孕妇持平或者更高，则表明患病风险较低，在一定范围内是安全的。如果在整个检测期内均处于合格水平，那么该孕妇患妊娠高血压综合征的风险就很低了，因为胎盘着床基本已经完成了。
此外，人类白细胞抗原G特异性抗体可以选择单克隆抗体。这样选择的人类白细胞抗原G特异性抗体可以通过夹心式酶联免疫方法精确地对样本中的人类白细胞抗原G的含量进行测量，保证测量结果的准确。
本发明实施例还提供一种用于预测妊娠高血压综合征风险的试剂盒。包括：人类白细胞抗原G标志物。其中，人类白细胞抗原G标志物可以选择人类白细胞抗原G特异性抗体(同前述)。具体的，可以选择鼠抗人抗体，并且对应配套HRP标记鼠IgG二抗。但具体选择并不局限于此。
其中，选择的鼠抗人抗体的分子量为37.5KD～39KD。可选地，人类白细胞抗原G特异性抗体的分子量可以进一步限定在37.9KD～38.5KD的范围内。进一步可选地，为了确保特异性结合的准确性，尽量规避误差，人类白细胞抗原G特异性抗体的分子量可以选择为38.2KD的单克隆抗体。
进一步地，试剂盒还包括：第一显色液、第二显色液和终止液。第一显色液包括四甲基联苯胺和二甲基亚砜。第二显色液包括过氧化脲和柠檬酸缓冲液。终止液包括盐酸。
试剂盒还包括标准品和稀释液。标准品为人类白细胞抗原G。稀释液包括磷酸盐缓冲液和牛血清白蛋白。
本试剂盒采用竞争法法检测样本中人类白细胞抗原G(HLA-G)的含量。向预先包被了抗体的酶标孔中加入样本，再加入辣根过氧化物酶标记的识别抗原，在37℃下孵育1小时，两者与固相抗体竞争结合形成免疫复合物，经PBST洗涤后，结合的HRP催化TMB(四甲基联苯胺)成蓝色，随后在酸的作用下转化成黄色，在450nm波长下有吸收峰，吸光值与样本中抗原的浓度成负相关。
其中，可行的检测方法可以是(酶联反应方法，但不仅限于此)：
一、试剂准备
1.使用前所有试剂置于室温平衡至少30分钟(此处我们选择45分钟)，酶标板包被了鼠抗人单克隆抗体(抗体来源是大鼠，交叉反应是人；中文名称：人白细胞抗原G抗体；英文名称：Rabbit Anti-HLA G antibody；分子量38.2KD)。
2.空白孔不加样，只加第一显色液(四甲基联苯胺、二甲基亚砜、保护剂)、第二显色液(过氧化脲、柠檬酸缓冲液、保护剂)和终止液(1M盐酸)用于调零。
3.对于标准品孔：每孔加入稀释好的标准品(人白细胞抗原G蛋白冻干粉)，零孔加入稀释液(磷酸盐缓冲液、牛血清白蛋白、保护剂)，然后加入酶标试剂(磷酸盐缓冲液、HRP标记鼠IgG二抗、保护剂)。
4.对于样品孔：加入样品(可以直接加样，如果浓度高可以用稀释液稀释)，然后加入酶标试剂。
5.盖上封板膜，37℃培养箱中孵育60min。
6.揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液(吐温20溶于磷酸盐缓冲液)，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
7.显色：每孔先加入第一显色液，再加入第二显色液，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。
8.终止：每孔加终止液，终止反应(此时蓝色转变为黄色)。
9.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后10分钟以内进行。
10.计算：根据浓度和OD值计算出标准曲线的回归方程，可以用专用计算软件(例如：ELISAcalc，拟合模型可以选用logistic曲线)进行计算。进而进一步得出每个样品的人类白细胞抗原G浓度情况。
下面结合具体例子进行详细说明。
请参阅图1，为利用本发明实施例所提供的试剂盒采用上述的酶联反应方法测得的未怀孕女性、未发病女性在妊娠期(头3个月、中3个月、后3个月)以及发病孕妇(子痫患者)的检测样本中人类白细胞抗原G的浓度相对情况(平均水平)。
选取了大量孕妇，采取其孕期为9～12周中的孕血，进行检测，具体数据见其他证明文件1～8页。需要说明的是：
“ABSORBANCES”一栏的数据为各个检测对象对应检测出的OD值；
“检测样本对应表”一栏列出了与“ABSORBANCES”一栏中各个OD值对应的样本编号，其中，S0～S4为标准品样，S5为空白对照，其余为待测样品；
“标准曲线分析”一栏示出了被作为标准品的OD值以及对应的浓度，并以此为依据绘制了标准曲线；
“样本数据分析”一栏为根据标准曲线计算出的各个待测样品的人类白细胞抗原G浓度。
通过与图1对比分析，并跟踪每位孕妇后续的发病情况(出现蛋白尿并伴有高血压者认定为发病)，汇总得到“待测样本诊断性试验统计数据”，见其他证明文件9～10页。从统计数据中可知，测定值小于或等于5.861可认定为阳性(发病)，且可靠度较高，达到了91.11％，且能够保证基本排除假阳性和假阴性。
此外，分别采用分子量为37.5KD、37.9KD、38.5KD和39KD的鼠抗人单克隆抗体，分别进行相同测定试验，其在达到相同可靠度的情况下，假阳性和假阴性比率均有上升，可见，采用分子量为38.2KD的可靠度更高。
综上所述，本发明实施例所提供的技术方案能够准确地对患妊高征的风险进行预测，为妊高征的筛查提供很大的便利，同时大大简化了检测流程，排除了干扰因素，准确度和效率大大提高，孕妇和医护人员的劳动强度大大降低，有助于医护质量和执行效率的提高。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.人类白细胞抗原G标志物在制备用于预测妊娠高血压综合征风险的诊断剂中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述人类白细胞抗原G标志物包括：人类白细胞抗原G特异性抗体。
3.一种用于预测妊娠高血压综合征风险的试剂盒，其特征在于，包括：人类白细胞抗原G标志物；可选地，所述人类白细胞抗原G标志物包括人类白细胞抗原G特异性抗体。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述人类白细胞抗原G特异性抗体的分子量为37.5KD～39KD；可选地，所述人类白细胞抗原G特异性抗体的分子量为37.9KD～38.5KD；进一步可选地，所述人类白细胞抗原G特异性抗体的分子量为38.2KD。
5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述人类白细胞抗原G特异性抗体包括单克隆抗体。
6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述人类白细胞抗原G特异性抗体包括鼠抗人抗体。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：HRP标记鼠IgG二抗。
8.根据权利要求3～7任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：第一显色液、第二显色液和终止液；所述第一显色液包括四甲基联苯胺和二甲基亚砜；所述第二显色液包括过氧化脲和柠檬酸缓冲液；所述终止液包括盐酸。
9.根据权利要求3～7任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标准品和稀释液；所述标准品为人类白细胞抗原G；所述稀释液包括磷酸盐缓冲液和牛血清白蛋白。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911024269.2A CN112710836A (zh) | 2019-10-25 | 2019-10-25 | 人类白细胞抗原g标志物的用途及试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201911024269.2A CN112710836A (zh) | 2019-10-25 | 2019-10-25 | 人类白细胞抗原g标志物的用途及试剂盒 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112710836A true CN112710836A (zh) | 2021-04-27 |
Family
ID=75541533
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201911024269.2A Pending CN112710836A (zh) | 2019-10-25 | 2019-10-25 | 人类白细胞抗原g标志物的用途及试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112710836A (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105675883A (zh) * | 2016-02-22 | 2016-06-15 | 叶尚勉 | 一种检测人类白细胞抗原hla-g的方法 |
| CN107155350A (zh) * | 2014-07-30 | 2017-09-12 | 马修·库珀 | 用于诊断、预后和确认先兆子痫的方法与组合物 |
-
2019
- 2019-10-25 CN CN201911024269.2A patent/CN112710836A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107155350A (zh) * | 2014-07-30 | 2017-09-12 | 马修·库珀 | 用于诊断、预后和确认先兆子痫的方法与组合物 |
| CN105675883A (zh) * | 2016-02-22 | 2016-06-15 | 叶尚勉 | 一种检测人类白细胞抗原hla-g的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 余亮等: "妊娠高血压疾病与HLA-G,KIR相关性的分析", 《当代医学》 * |
| 孔庆波: "HLA-G与妊娠疾病", 《榆林学院学报》 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Delbos et al. | Fetal and neonatal alloimmune thrombocytopenia: predictive factors of intracranial hemorrhage | |
| Mozena et al. | Lack of a role for cross-reacting anti-thyroid antibodies in chronic idiopathic urticaria | |
| AU2007312960A1 (en) | Assay for the detection of biomarkers associated with pregnancy related conditions | |
| Marchetti et al. | Antiphospholipid antibodies and the risk of severe and non‐severe pre‐eclampsia: the NOHA case‐control study | |
| Padma et al. | Renal markers in normal and hypertensive disorders of pregnancy in Indian women: a pilot study | |
| EP1722226A1 (en) | Method of distinguishing type a and type b acute aortic dissection and acute myocardial infarction and kit for distinguishment | |
| CN105917232B (zh) | 用于选择性确定胎盘生长因子2的方法 | |
| CN110361547B (zh) | 一种化学发光定量检测粪便潜血的试剂及其检测方法和其在检测下消化道健康的用途 | |
| EP1914553A1 (en) | Method for identifying women with an increased risk of foetal growth retardation | |
| Le Sage et al. | Detection of S-100β protein in plasma and urine after a mild traumatic brain injury | |
| Haggerty et al. | Chlamydia trachomatis infection may increase the risk of preeclampsia | |
| CN108717123A (zh) | 一种联合检测sFlt-1/PLGF和HLA-G检测先兆子痫的方法 | |
| CN112710836A (zh) | 人类白细胞抗原g标志物的用途及试剂盒 | |
| US20170122959A1 (en) | Early placenta insulin-like peptide (pro-epil) | |
| JP2009162616A (ja) | オートタキシン測定による妊娠および妊娠高血圧症候群の検査方法および検査薬 | |
| Kanagawa et al. | Clinical characteristics of Jra Alloimmunization in pregnancy: a case series | |
| Mokhtar et al. | Maternal serum perlecan and ischemia modified albumin levels as biomarkers of preeclampsia severity | |
| KR20140023260A (ko) | Cartilage Acidic Protein 1 단백질에 의한 뇌경색의 검사 방법 | |
| JP5413863B2 (ja) | 劇症１型糖尿病の検査方法及び検査試薬 | |
| JP5831723B2 (ja) | オートタキシン測定による妊娠および妊娠高血圧症候群の検査方法および検査薬 | |
| Khalil et al. | How accurate are placental growth factor, urate, lactate dehydrogenase and proteinuria in diagnosing preeclampsia and its severity? | |
| Mach et al. | Evaluation of carcinoembryonic antigen‐related cell adhesion molecule 1 blood serum levels in women at high risk for preeclampsia | |
| CN116735888B (zh) | 一种特异性多克隆抗体检测cog5的间接elisa方法 | |
| RU2239189C1 (ru) | Способ выявления степени риска акушерских осложнений | |
| Alecsandru et al. | Individualized Immunological Testing in Recurrent Implantation Failure |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20210427 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |