CN112710653A - 一种快速检测潜在血渍的专用试剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种快速检测潜在血渍的专用试剂及其制备方法，属于检测试剂技术领域。解决了现有技术中检测潜在血渍的试剂对非渗透性客体的显现效果不佳，特异性较差，显色的效果和持续状态都不稳定，不方便观察记录等技术问题。本发明的专用试剂，包括配比为(90‑100)mL：(3‑5)g的淡棕色液体与过碳酸钠粉末；其中，淡棕色液体为含有有机固体产物和保护剂的水溶液，保护剂的浓度为0.2‑3wt％的水溶液，有机固体产物的浓度为1‑2wt％，结构式如下。该专用试剂可以在非亮青色背景下，实现对渗透性和非渗透性潜在血渍的显现，遇到血渍能在30s内显示出特殊的亮青色，随着时间推移，亮青色会越来越深，不会褪色。
Description
技术领域
本发明属于检测试剂技术领域，具体涉及一种快速检测潜在血渍的专用试剂及其制备方法。
背景技术
血渍是凶杀、伤害等重大刑事案件中最常见最重要的物证。血渍检测法的出发点是对血液中的血红蛋白及其衍生物或血液中的蛋白质及氨基酸进行检测。
现有技术中，用于检测血红蛋白的试剂有联苯胺、四甲基联苯胺、孔雀绿、红汞、鲁米诺等；而检测蛋白质及氨基酸的试剂有酰胺黑、考马斯亮蓝、茚三酮、邻苯二甲醛等。其中，检测蛋白质及氨基酸的试剂的效果并不理想，较为常用的为检测血红蛋白的试剂—四甲基联苯胺和鲁米诺。四甲基联苯胺接触血液后，血液中产生的初生态氧可以氧化四甲基联苯胺，产生蓝绿色醌类物质四甲基联苯胺兰，从而使血痕、血指纹等显现而出。但是，四甲基联苯胺对非渗透性客体的显现效果不佳，显色后的颜色也会很快褪去，不方便观察记录；此外，各类氧化剂都可能氧化四甲基联苯胺使其变色，造成该方法的特异性较差，同时引起没有血渍的区域也出现变色，影响判定。鲁米诺试剂的发光原理与四甲基联苯胺类似，只是其不是显色而是遇到血渍发出微弱的蓝色荧光光，所以需要一个非常暗的环境才能看见荧光，还往往需要微光拍照设备进行辅助观察，其最强亮度发光仅仅能持续约30秒，随后快速褪色，不容易记录，另外鲁米诺对各种重金属都能发生反应，具有很大概率的假阳性反应，显色的效果和持续状态都不稳定。
对于现场潜在血渍的显现来说，有可能血渍被清洗导致稀释，还需要考虑承受客体表面的复杂环境，还需要保护遗留血渍的痕迹形状和细节，对于以上两种检测试剂来说就有相当大的难度了。所以非常有必要对潜血显现试剂进行研究和开发，以便于在实际案件工作中更好地对潜血进行发现。
发明内容
本发明为解决现有技术中检测潜在血渍的试剂对非渗透性客体的显现效果不佳，特异性较差，显色的效果和持续状态都不稳定，不方便观察记录等技术问题，提供一种快速检测潜在血渍的专用试剂及其制备方法。
本发明解决上述技术问题采取的技术方案如下。
本发明提供一种快速检测潜在血渍的专用试剂，包括配比为(90-100)mL：(3-5)g的淡棕色液体与过碳酸钠粉末；
所述淡棕色液体为含有有机固体产物和保护剂的水溶液，保护剂的浓度为0.2-3wt％，有机固体产物的浓度为1-2wt％，有机固体产物的结构式为；
本发明还提供上述快速检测潜在血渍的专用试剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、在惰性气氛或还原性气体保护下，以无机酸为催化剂催化对氯苯甲醛和N-乙基-N-(3'-磺酸基苄基)苯胺进行缩合反应，分离，得到反应产物；
所述无机酸、对氯苯甲醛、N-乙基-N-(3'-磺酸基苄基)苯胺的物质的量比0.01：1:
2；
步骤二、在惰性气体或者还原性气体的保护下，将步骤一得到的反应产物与对氨基苯乙醚按物质的量比为1:1反应，得到磺化混合物；
步骤三、在惰性气氛保护下，先使用氢氧化钠溶液或者氢氧化钾溶液调节步骤二中得到的磺化混合物的pH值至中性，然后使用盐析法析出有机固体产物；
步骤四、取步骤三中的有机固体产物和保护剂，配成有机固体产物的浓度为1-2wt％，保护剂浓度为0.2-3wt％的水溶液，得到淡棕色液体；
步骤五、将步骤四得到的淡棕色液体与过碳酸钠粉末按照(90-100)mL：(3-5)g的配比混合均匀，得到快速检测潜在血渍的专用试剂。
优选的是，所述步骤一中，无机酸为盐酸或者硫酸。
优选的是，所述步骤一和步骤二中，惰性气氛分别为氮气、氩气、氦气中的一种或者几种的混合物，还原性气体分别为氢气。
优选的是，所述步骤一和步骤二中，反应溶剂分别为乙醇。
优选的是，所述步骤一中，反应温度是50-100℃，反应时间10-40h。
优选的是，所述步骤一中，分离的过程为：先使用旋转蒸发仪蒸发出溶剂，然后使用柱沉析的方法分离。
优选的是，所述步骤二中，反应温度为80-100℃，反应时间2-10h。
优选的是，所述步骤三中，氢氧化钠溶液或者氢氧化钾溶液的浓度为0.1M。
优选的是，使用氢氧化钠溶液或者氢氧化钾溶液调节步骤二中得到的磺化混合物
的pH值至中性的时间为10min。
优选的是，所述步骤三中，盐析采用的是加入硫酸钠和氯化钠，或者加入硫酸钾和氯化钾。
优选的是，所述步骤三在室温下进行。
优选的是，所述步骤四中，保护剂为柠檬酸、抗坏血酸、乳酸钠、次亚磷酸钠中的一种或者几种的混合物。
本发明的原理：有机固体产物是一种易溶于水的有机物，可以吸附蛋白质，因此能使血渍中的蛋白质固定，避免在鉴定血渍过程中，血渍发生扩散。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明提供的快速检测潜在血渍的专用试剂可以在非亮青色背景下检测案发现场的潜在血渍，可实现对渗透性和非渗透性的潜在血渍进行显现，使用方便，试剂遇到血渍能在30秒内显示出特殊的亮青色，随着时间推移，亮青色会越来越深，不会褪色，血液稀释20000倍以上仍可显色；且试剂能长时间稳定保存，六个月后仍具有非常好的显色效果。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
图1中，a和b分别为白墙上的血渍喷洒本发明实施例1的快速检测潜在血渍的专用试剂的前后效果。
图2中，a和b分别为1年陈旧血渍上喷洒本发明实施例1的快速检测潜在血渍的专用试剂的前后效果。
图3中，a和b分别为黑色皮革上的血渍喷洒本发明实施例1的快速检测潜在血渍的专用试剂的前后效果。
图4为黑色渗透性纸张上的血渍喷洒本发明实施例1的快速检测潜在血渍的专用试剂后的效果。
图5为白色滤纸上不同浓度的血渍喷洒本发明实施例2的快速检测潜在血渍的专用试剂后的效果。
图6中，a和b分别为透明塑料薄膜表面上的血渍喷洒本发明实施例2的快速检测潜在血渍的专用试剂的前后效果。
图7中，a和b分别为餐巾纸上自然晾干的血渍刚刚喷洒实施例3的快速检测潜在血渍的专用试剂和喷洒实施例3的快速检测潜在血渍的专用试剂后放置1年后的效果。
图8中，a、b、c分别为刚配的、放置3个月、放置6个月的实施例3的快速检测潜在血渍的专用试剂对新鲜血渍的显色效果。
图9为取葡萄汁、橙汁、凉茶、可乐、豆油、牛奶、醋、酱油滴落在白色滤纸上，自然晾干后喷洒实施例3的快速检测潜在血渍的专用试剂后的效果。
具体实施方式
为了进一步了解本发明，下面结合具体实施方式对本发明的优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为进一步说明本发明的特征和优点而不是对本发明专利要求的限制。
本发明提供一种快速检测潜在血渍的专用试剂，包括配比为(90-100)mL：(3-5)g的淡棕色液体与过碳酸钠粉末；其中，淡棕色液体为含有有机固体产物和保护剂的水溶液，保护剂的浓度为0.2-3wt％的水溶液，有机固体产物的浓度为1-2wt％，结构式为；
本发明的快速检测潜在血渍的专用试剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、在惰性气氛或还原性气体保护下，以无机酸为催化剂催化对氯苯甲醛和 N-乙基-N-(3'-磺酸基苄基)苯胺进行缩合反应，分离，得到反应产物；
其中，无机酸、对氯苯甲醛、N-乙基-N-(3'-磺酸基苄基)苯胺的物质的量比为 0.01:1:2；无机酸为盐酸或者硫酸；惰性气氛为氮气、氩气、氦气中的一种或者几种的混合物，还原性气体为氢气，产物合成过程中使用惰性气氛或者还原性气体保护，避免产物被氧化；反应溶剂为乙醇；反应温度是50-100℃，反应时间10-40h；分离的过程为：先使用旋转蒸发仪低温下蒸发出溶剂，然后使用柱沉析的方法分离，温度没有特殊限制，能够蒸发出溶剂 即可。反应方程式如下：
步骤二、在惰性气体或者还原性气体的保护下，将步骤一得到的反应产物与对氨基苯乙醚按物质的量比为1:1反应，得到磺化混合物，即含有磺化产物的混合液；
其中，惰性气氛为氮气、氩气、氦气中的一种或者几种的混合物，还原性气体为氢气，磺化产物有还原性物质保护，避免进一步氧化，延长了保存时间；反应溶剂为乙醇；反应温度为80-100℃，反应时间2-10h。反应方程式如下：
步骤三、在惰性气氛保护下，先使用氢氧化钠溶液或者氢氧化钾溶液调节步骤二中得到的磺化混合物的pH值至中性，然后使用盐析法析出有机固体产物；
其中，惰性气氛为氮气、氩气、氦气中的一种或者几种的混合物，氢氧化钠溶液或 者氢氧化钾溶液的浓度为0.1M，使用氢氧化钠溶液或者氢氧化钾溶液调节步骤二中得到的 磺化混合物的pH值至中性的时间为10min，步骤三在室温下进行。反应方程式如下：
步骤四、取步骤三中的有机固体产物和保护剂，配成有机固体产物的浓度为1-2wt％，保护剂浓度为0.2-3wt％的水溶液，得到淡棕色液体；
其中，保护剂为柠檬酸、抗坏血酸、乳酸钠、次亚磷酸钠中的一种或者几种的混合物。
步骤五、将步骤四得到的淡棕色液体与过碳酸钠粉末按照(90-100)mL：(3-5)g的配比混合均匀，得到快速检测潜在血渍的专用试剂。
其中，为使用方便，可以将90-100mL淡棕色液体加入到喷雾瓶中，加入过碳酸钠粉末3-5g，摇晃，使粉末完全溶剂，溶解过程中保证喷雾瓶瓶口敞开，然后安装上喷头。
本发明的快速检测潜在血渍的专用试剂的使用方法：将快速检测潜在血渍的专用试剂喷在血渍表面，在1-30秒内可以将潜在的血渍显示出亮青色，且亮青色不易退去。
在本发明中所使用的术语，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义，除非另有说明。
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面将结合实施例对本发明作进一步的详细介绍。
在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂、装置、仪器、设备等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1
步骤一、1mol对氯苯甲醛和2mol N-乙基-N-(3'-磺酸基苄基)苯胺在氮气保护下，在反应器中进行缩合反应，反应溶剂为乙醇，催化剂盐酸(0.01mol)，反应温度是100℃，反应时间10h，使用旋转蒸发仪蒸发出溶剂，使用柱沉析的方法分离得到反应产物。
步骤二、在氮气保护下，将步骤一得到的反应产物与对氨基苯乙醚按物质的量比 为1:1反应，反应溶剂为乙醇，反应温度为90℃，反应时间8h，得到磺化混合物。
步骤三、在室温，氮气保护下，将步骤二中得到的磺化混合物使用0.1M的氢氧化钠在10min内调节pH值至中性，加入硫酸钠，使用盐析法析出有机固体产物。
步骤四、将步骤三得到的有机固体产物配成2wt％的水溶液，加入1wt％乳酸、0.3wt％抗坏血酸和0.3wt％次亚磷酸钠，得到淡棕色液体。
步骤五、取步骤四获得的淡棕色液体90mL加入喷雾瓶，加入过碳酸钠粉末3g，摇晃，使过碳酸钠粉末完全溶解，溶解过程中保证喷雾瓶瓶口敞开，然后安装上喷头，得到快速检测潜在血渍的专用试剂。
对实施例1中的快速检测潜在血渍的专用试剂的显色效果进行检测。
图1为取新鲜的成人全血涂抹在白墙上，然后立即喷洒快速检测潜在血渍的专用试剂，1秒内即显现出蓝青色。
图2为取1年陈旧血渍，然后立即喷洒快速检测潜在血渍的专用试剂，30秒内开始显色，3min内显色达到最佳显色效果，而且显现出了很多肉眼看不见的血渍。
图3为取新鲜的成人全血，涂抹在黑色的皮沙发表面，然后立即喷洒快速检测潜在血渍的专用试剂，可以看到显色清晰，在充足的光线环境下肉眼非常方便观察。
图4为取新鲜的成人全血，用手指蘸取血液后按压在纸张表面，然后喷洒快速检测潜在血渍的专用试剂，可以看到显色清晰，在充足的光线环境下肉眼非常方便观察。
实施例2
步骤一、1mol对氯苯甲醛和2mol N-乙基-N-(3'-磺酸基苄基)苯胺在氮气保护下，在反应器中进行缩合反应，反应溶剂为乙醇，催化剂盐酸(0.01mol)，反应温度是90℃，反应时间15h，使用旋转蒸发仪蒸发出溶剂，使用柱沉析的方法分离得到反应产物。
步骤二、在氮气保护下，将步骤一得到的反应产物与对氨基苯乙醚按物质的量比 1:1反应，反应溶剂为乙醇，反应温度为85℃，反应时间10h，得到磺化混合物。
步骤三、在室温，氮气保护下，将步骤二中得到的磺化混合物使用0.1M的氢氧化钠在10min内调节pH值至中性，加入硫酸钠，使用盐析法析出有机固体产物。
步骤四、将步骤三得到的有机固体产物配成1wt％的水溶液，加入0.5wt％乳酸、0.5wt％抗坏血酸和0.5wt％次亚磷酸钠，得到淡棕色液体。
步骤五、取步骤四获得的淡棕色液体100mL加入喷雾瓶，加入过碳酸钠粉末5g，摇晃，使过碳酸钠粉末完全溶解，溶解过程中保证喷雾瓶瓶口敞开，然后安装上喷头，得到快速检测潜在血渍的专用试剂。
对实施例2中的快速检测潜在血渍的专用试剂的显色效果进行检测。
图5为取健康成年人血液1mL，按以下比例梯度以水稀释：1:1、1:10、1:1000、1:2000、1：5000、1:10000、1：20000、1:100000，分别取10μl稀释液自然滴落在白色滤纸上，自然晾干后，喷洒快速检测潜在血渍的专用试剂，显色速度随稀释倍数的增加会减慢，但在5min后可见20000倍稀释的血渍显色，但随着时间增加也不能显现稀释100000的血渍。
图6为取新鲜的成人全血，用手指蘸取少量血液后按压在透明塑料薄膜表面，然后喷洒快速检测潜在血渍的专用试剂。可以发现血指纹保持非常好的原始形态，纹线线条清晰细腻，血渍没有发生扩散，显色也没有发生扩散，具有非常好的血渍固化能力。
实施例3
步骤一、1mol对氯苯甲醛和2mol N-乙基-N-(3'-磺酸基苄基)苯胺在氮气保护下，在反应器中进行缩合反应，反应溶剂为乙醇，催化剂盐酸(0.01mol)，反应温度是50℃，反应时间40h，使用旋转蒸发仪蒸发出溶剂，使用柱沉析的方法分离得到反应产物。
步骤二、在氮气保护下，将步骤一得到的反应产物与对氨基苯乙醚按物质的量比 1:1反应，反应溶剂为乙醇，反应温度为100℃，反应时间2h，得到磺化混合物。
步骤三、在室温，氮气保护下，将步骤二中得到的磺化混合物使用0.1M的氢氧化钠在10min内调节pH值至中性，加入硫酸钠，使用盐析法析出有机固体产物。
步骤四、将步骤三得到的有机固体产物配成1.5wt％的水溶液，加入1wt％乳酸、0.5wt％抗坏血酸和1wt％次亚磷酸钠，得到淡棕色液体。
步骤五、取步骤四获得的淡棕色液体95mL加入喷雾瓶，加入过碳酸钠粉末4g，摇晃，使过碳酸钠粉末完全溶解，溶解过程中保证喷雾瓶瓶口敞开，然后安装上喷头，得到快速检测潜在血渍的专用试剂。
对实施例3中的快速检测潜在血渍的专用试剂的显色效果进行检测。
图7为取健康成年人血液，滴落在餐巾纸上，自然晾干形成血斑，然后喷洒快速检测潜在血渍的专用试剂，a为刚喷洒完试剂的显色效果，b为显色后放置1年后的效果，可见1年后显色仍持续存在，不褪色。
图8为取用刚配的、放置3个月、放置6个月的快速检测潜在血渍的专用试剂对新鲜血渍进行显色，发现在显色效果、显色时间上没有明显区别，放置6个月后的快速检测潜在血渍的专用试剂本身会变成浅蓝色，但颜色非常浅，即使在白纸上也不明显，对血渍的显色不会引起干扰。
图9为取葡萄汁、橙汁、凉茶、可乐、豆油、牛奶、醋、酱油滴落在白色滤纸上，自然晾干后喷洒快速检测潜在血渍的专用试剂，可见没有显色生成，可见对于常见的日常溶液，该快速检测潜在血渍的专用试剂具有很好的针对血渍的显色性。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。对所公开的实施例的上述说明，使本领域专技术人员能够实现或使用本发明，对这些实施例的多种修改对本领域专业技术人员来说将是显而易见的。本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖性特点相一致的最宽的范围。
Claims (10)
1.快速检测潜在血渍的专用试剂，其特征在于，包括配比为(90-100)mL：(3-5)g的淡棕色液体与过碳酸钠粉末；
所述淡棕色液体为含有有机固体产物和保护剂的水溶液，保护剂的浓度为0.2-3wt％，有机固体产物的浓度为1-2wt％，有机固体产物的结构式为；
2.权利要求1所述的快速检测潜在血渍的专用试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、在惰性气氛或还原性气体保护下，以无机酸为催化剂催化对氯苯甲醛和N-乙基-N-(3'-磺酸基苄基)苯胺进行缩合反应，分离，得到反应产物；
所述无机酸、对氯苯甲醛、N-乙基-N-(3'-磺酸基苄基)苯胺的物质的量比0.01：1:2；
步骤二、在惰性气体或者还原性气体的保护下，将步骤一得到的反应产物与对氨基苯乙醚按物质的量比1:1进行反应，得到磺化混合物；
步骤三、在惰性气氛保护下，先使用氢氧化钠溶液或者氢氧化钾溶液调节步骤二中得到的磺化混合物的pH值至中性，然后使用盐析法析出有机固体产物；
步骤四、取步骤三中的有机固体产物和保护剂，配成有机固体产物的浓度为1-2wt％，保护剂浓度为0.2-3wt％的水溶液，得到淡棕色液体；
步骤五、将步骤四得到的淡棕色液体与过碳酸钠粉末按照(90-100)mL：(3-5)g的配比混合均匀，得到快速检测潜在血渍的专用试剂。
3.根据权利要求2所述的快速检测潜在血渍的专用试剂的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，无机酸为盐酸或者硫酸。
4.根据权利要求2所述的快速检测潜在血渍的专用试剂的制备方法，其特征在于，所述步骤一和步骤二中，惰性气氛分别为氮气、氩气、氦气中的一种或者几种的混合物，还原性气体分别为氢气。
5.根据权利要求2所述的快速检测潜在血渍的专用试剂的制备方法，其特征在于，所述步骤一和步骤二中，反应溶剂分别为乙醇。
6.根据权利要求2所述的快速检测潜在血渍的专用试剂的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，反应温度是50-100℃，反应时间10-40h。
7.根据权利要求2所述的快速检测潜在血渍的专用试剂的制备方法，其特征在于，所述步骤一中，分离的过程为：先使用旋转蒸发仪下蒸发出溶剂，然后使用柱沉析的方法分离。
8.根据权利要求2所述的快速检测潜在血渍的专用试剂的制备方法，其特征在于，所述步骤二中，反应温度为80-100℃，反应时间2-10h。
9.根据权利要求2所述的快速检测潜在血渍的专用试剂的制备方法，其特征在于，所述步骤三中，氢氧化钠溶液或者氢氧化钾溶液的浓度为0.1M，使用氢氧化钠溶液或者氢氧化钾溶液调节步骤二中得到的磺化混合物的pH值至中性的时间为10min，盐析采用的是加入硫酸钠和氯化钠，或者加入硫酸钾和氯化钾；所述步骤三在室温下进行。
10.根据权利要求2所述的快速检测潜在血渍的专用试剂的制备方法，其特征在于，所述步骤四中，保护剂为柠檬酸、抗坏血酸、乳酸钠、次亚磷酸钠中的一种或者几种的混合物。
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