CN112646020A - 基于组蛋白h3 k27m突变肽的抗原肽及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种基于组蛋白H3K27M突变肽的抗原肽及其应用，所述基于组蛋白H3K27M突变肽的抗原肽包括KQX₂₀ATKAAX₂₆MX₂₈APX₃₁TX₃₃GV序列中的至少部分序列，部分序列包括第27位M及X₂₀、X₂₆、X₂₈、X₃₃中至少一个，且部分序列中的X₂₀、X₂₆、X₂₈、X₃₃中至少一个氨基酸基于突变肽被置换，X₂₀、X₂₆、X₂₈、X₃₃均包括A、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y、V中的任意一种，X₃₁为A或S。本发明通过对组蛋白H3K27M突变肽的第20位、第26位、第28位、第33位氨基酸中的至少一个氨基酸进行置换，得到了对I型HLA等位基因蛋白产物具有高亲和力的抗原肽，该抗原肽可以用于制备抗肿瘤预防剂、治疗剂和药物等，尤其是抗DIPG疫苗和抗DMG疫苗，具有很强的抗肿瘤活性。

Description

基于组蛋白H3 K27M突变肽的抗原肽及其应用

技术领域

本发明涉及医疗技术领域，特别是涉及基于组蛋白H3 K27M突变肽的抗原肽及其应用。

背景技术

弥漫性内生性脑桥胶质瘤(Diffuse Intrinsic Pontine Glioma，DIPG)或其它弥漫性中线胶质瘤(Diffuse Midline Glioma，DMG)常发生在0-14岁，多见于 0-9的岁儿童，具有强侵袭性，不可能手术完全切除。患者手术或放疗后生存期大约9-15个月，五年存活率<5％。在世界范围内，DIPG或DMG每年新发病例的数目尚无准确的统计，据报道美国每年的新发病例约200～400例，根据人口基数的推算，我国每年的新发病例可能在900～1800例之间。

在DIPG或DMG病人中，80％的患者肿瘤细胞中存在组蛋白H3.3(H3F3A，蛋白产物P84243，60％)、组蛋白H3.1(HIST1H3B，蛋白产物P68431，20％) 或组蛋白H3.2(HIST2H3C，蛋白产物Q71DI3，少见)第27位赖氨酸(Lysine， K)突变，且绝大多数突变为甲硫氨酸(Methionine，M)，即K27M，少数突变为异亮氨酸(Isoleucine，I)，即K27I。一般认为，组蛋白H3.3和H3.1的多个位点的赖氨酸K存在不同程度的甲基化或乙基化，当第27位K出现三甲基化时，K突变为M的倾向增加。一旦第27位K突变为M，即H3 K27M出现，这个突变使组蛋白H3功能改变，抑制多梳蛋白调节性复合体2(Polycomb Repressive Complex 2，PRC2)，导致下游一系列基因表达的变化，使得正常细胞转变为癌细胞。因此，组蛋白的这类突变被认为是肿瘤驱动基因突变。

但是，组蛋白是细胞核内的结构蛋白，无法作为药物靶标用酶抑制剂或其他小分子药物直接进行干预。所以，即使目前对H3 K27M已有大量研究，但组蛋白突变H3 K27M的形成，与哪个信号传导系统有关，如何进行有效的干预，仍然知之甚少。而使用组蛋白赖氨酸甲基转移酶抑制剂来阻断赖氨酸的三甲基化，间接抑制组蛋白H3 K27M的突变，疗效也并不明显。

发明内容

基于此，有必要针对上述问题，提供一种基于组蛋白H3 K27M突变肽的抗原肽及其应用；通过对组蛋白H3 K27M突变肽特定位点的氨基酸进行置换得到的抗原肽具有高亲和力，可以用于制备抗肿瘤的治疗剂、预防剂和药物等。

一种基于组蛋白H3 K27M突变肽的抗原肽，所述抗原肽包括KQX₂₀ATKAAX₂₆MX₂₈APX₃₁TX₃₃GV序列中的至少部分序列，所述部分序列包括第27位M及X₂₀、X₂₆、X₂₈、X₃₃中的至少一个，其中，

X₂₀包括A、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、K、M、F、P、S、T、W、 Y、V中的任意一种，

X₂₆包括A、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y、 V中的任意一种，

X₂₈包括A、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、T、W、 Y、V中的任意一种，

X₃₃包括A、R、N、D、C、Q、E、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y、 V中的任意一种，

X₃₁为A或S。

在其中一个实施例中，所述抗原肽包括KQX₂₀ATKAAX₂₆M序列；

或者，所述抗原肽包括RMX₂₈APX₃₁TX₃₃GV序列；

或者，所述抗原肽包括ARMX₂₈APX₃₁TX₃₃序列。

在其中一个实施例中，所述抗原肽的序列中还包括-ARM-，所述抗原肽包括KQX₂₀ATKAAX₂₆MARMX₂₈APX₃₁TX₃₃GV序列中的至少部分连续序列。

一种核酸，所述核酸能够表达所述的抗原肽。

一种载体，所述载体含有所述的核酸。

一种用于肿瘤的治疗剂，包括所述的抗原肽、所述核酸、所述载体中的至少一种。

一种用于肿瘤的预防剂，包括所述的抗原肽、所述核酸、所述载体中的至少一种。

一种抗原提呈细胞，所述抗原提呈细胞表面的HLA分子能够识别所述的抗原肽并形成复合物。

在其中一个实施例中，所述抗原提呈细胞为树突状细胞，所述树突状细胞包括第一启动子控制的shRNA表达单位，以及依次位于所述表达单位下游的由第二启动子、第三启动子控制的所述抗原肽和第一树突状细胞调节基因。

在其中一个实施例中，所述shRNA的序列如SEQ ID NO.1所示。

在其中一个实施例中，所述树突状细胞疫苗还包括第二树突状细胞调节基因，所述第二树突状细胞调节基因位于所述抗原肽和所述第一树突状细胞调节基因之间。

在其中一个实施例中，所述第一树突状细胞调节基因包括CD154融合蛋白，所述第二树突状细胞调节基因包括CD70融合蛋白。

一种抗体或其活性片段，所述抗体或其活性片段能够特异性识别所述的抗原肽。

一种嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体的胞外域具有所述抗体或其功能片段。

一种杀伤性免疫细胞，所述杀伤性免疫细胞表达所述嵌合抗原受体，或被所述的抗原提呈细胞所活化。

一种药物，所述药物含有所述的抗原呈递细胞、所述的抗体或其活性片段、所述的杀伤性免疫细胞中的任一项作有效成分。

本发明基于组蛋白H3 K27M突变肽，对突变肽的第20位氨基酸、第26位氨基酸、第28位氨基酸和第33位氨基酸中的至少一个氨基酸进行置换，得到了对I型HLA等位基因蛋白产物具有高亲和力的抗原肽，使得该抗原肽可以用于制备核酸、载体、用于肿瘤的治疗剂或预防剂、抗原提呈细胞、抗体或其活性片段、嵌合抗原受体、杀伤性免疫细胞和药物等，其中，采用该抗原肽获得的抗肿瘤疫苗，尤其是抗DIPG疫苗和抗DMG疫苗，具有很强的抗肿瘤活性。

附图说明

图1为组蛋白H3 K27M_18-27突变肽(R₂₆)及抗原肽(A₂₆)免疫应答活性比较图；图中，a、活化DCT，未加NALM6；b、活化DCT+NALM6细胞共培养，未加抗原反应肽；c、活化DCT+NALM6共培养，加抗原反应肽；

图2为组蛋白H3 K27M_25-33突变肽(R₂₆、G₃₃)及抗原肽(M₂₆、L₃₃)免疫应答活性比较图；图中，a、活化DCT，未加IGR39；b、活化DCT+IGR39共培养，未加抗原反应肽；c、活化DCT+IGR39共培养，加抗原反应肽；

图3为hSOCS1基因表达SYBR GreenⅠ荧光定量PCR示意图；图中，Ⅰ为HBAD-CMV-GFP感染DC、Ⅱ为HBAD-CMV-DCML感染DC；

图4为CD70和CD154基因在人成熟DC中过表达示意图；图中，A为设门参数、B为HBAD-CMV-DCML感染的HEK293T细胞(MOI＝100)、 Anti-CD70-eFluor660(＝APC)和anti-CD154-PE双染色；

图5为腺病毒表达基因对免疫应答活性影响示意图；图中，a、活化DCT，未加NALM6；b、活化DCT+NALM6细胞共培养，未加抗原反应肽；c、活化 DCT+NALM6共培养，加抗原反应肽。

具体实施方式

以下将对本发明提供的基于组蛋白H3 K27M突变肽的抗原肽及其应用作进一步说明，其中，X₂₀指第20位氨基酸，X₂₆指第26位氨基酸，X₂₈指第28位氨基酸，X₃₁指第31位氨基酸，X₃₃指第22位氨基酸。

点突变H3.1 K27M、H3.3/H3.2 K27M是跟肿瘤相关的体细胞突变，可以衍生出肿瘤新抗原决定簇。凡是与宿主白细胞抗原等位基因HLA-I/II产物具有中等以上亲和力，具有产生免疫应答反应的突变称之为肿瘤新抗原或新表位。通常，可以将相应的肿瘤突变肽序列及宿主HLA-I/II等位基因通过网络软件和数据库进行预测和分析，得到两者亲和力理论值，准确率公认在90％以上。

一般认为，得到的理论亲和力(IC50值)在1000nM以下(IC50数值越小，亲和力越高)，或者排序百分比在0.01～2.0之间，可以认为该突变肽具有作为抗原肽刺激宿主免疫系统产生免疫抵抗力的潜力。

具体地，组蛋白H3.1 K27M_18-35突变肽的野生型肽段为KQL₂₀ATKAAR₂₆MS₂₈APA₃₁TG₃₃GV，组蛋白H3.2 K27M_18-35突变肽的野生型肽段和组蛋白H3.3K27M_18-35突变肽的野生型肽段均为 KQL₂₀ATKAAR₂₆MS₂₈APS₃₁TG₃₃GV。

所以，本发明提供的基于组蛋白H3 K27M突变肽的抗原肽，所述抗原肽包括KQX₂₀ATKAAX₂₆MX₂₈APX₃₁TX₃₃GV序列中的至少部分序列，所述部分序列包括第27位M及X₂₀、X₂₆、X₂₈、X₃₃中的至少一个，其中，X₂₀包括A、R、N、 D、C、Q、E、G、H、I、K、M、F、P、S、T、W、Y、V中的任意一种，X₂₆包括A、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y、V中的任意一种，X₂₈包括A、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、 T、W、Y、V中的任意一种，X₃₃包括A、R、N、D、C、Q、E、H、I、L、K、 M、F、P、S、T、W、Y、V中的任意一种，X₃₁为A或S。

从而，通过对组蛋白H3 K27M突变肽的第20位氨基酸、第26位氨基酸、第28位氨基酸和第33位氨基酸中的至少一个氨基酸进行置换，得到了对I型 HLA等位基因蛋白产物具有高亲和力的抗原肽。

进一步地，X₃₁为A时，即基于组蛋白H3.1 K27M的突变肽的抗原肽具有更好的亲和力。

在一些实施例中，将野生型肽段KQL₂₀ATKAAR₂₆M的结构H3 K27M_18-27 (B*15:01)的第20位氨基酸L₂₀、第26位氨基酸R₂₆中的任意一个氨基酸进行置换，即，将第20位氨基酸L置换成其它除L外的任意一种氨基酸，将第26 位氨基酸R置换成其它除R外的任意一种氨基酸，抗原肽的肽段包括 KQX₂₀ATKAAX₂₆M序列，可使抗原肽对相关等位基因B*15:01的亲和力增加。

具体地，以野生型肽段、抗原肽以及部分通过NetMHC4.0软件和数据库筛选出来人工肽序列，并预测其与相关等位基因B*15:01的亲和力，如表1所示。

表1

由表1可知，X₂₀和X₂₆两个位点的氨基酸置换1个或2个后获得的抗原肽对相关等位基因B*15:01的亲和力增加，因而可以进一步增强免疫应答反应。

进一步地，当第20位氨基酸L置换成M、第26位氨基酸R置换成A时，即抗原肽的序列为KQM₂₀ATKAAA₂₆M时，其比突变肽KQL₂₀ATKAAR₂₆M对 B*15:01的亲和力提高了10倍。

所以，包括KQX₂₀ATKAAX₂₆M序列的抗原肽可以在体外细胞模型上比突变肽产生更强的免疫应答反应。因此，采用人工序列KQX₂₀ATKAAX₂₆M可以为研制B*15:01抗DIPG疫苗和抗DMG疫苗及其优化提供更大空间和选择性。

可以理解，人工序列KQX₂₀ATKAAX₂₆M可单独使用，也可以人工序列KQX₂₀ATKAAX₂₆MS₂₈APX₃₁TG₃₃GV进行使用，当然，还可以人工序列 KQX₂₀ATKAAX₂₆M加其它序列进行使用。其中，X₂₀优选为M、F中的一种，进一步优选为M，X₂₆优选为A。

在一些实施例中，将野生型肽段RMS₂₈APATG₃₃GV的结构H3.1 K27M_26-35 (A*02:01)、野生型肽段RMS₂₈APSTG₃₃GV的结构H3.3/H3.2 K27M_26-35(A*02:01) 的第28位氨基酸S₂₈、第33位氨基酸G₃₃中的任意一个氨基酸进行置换，即，将第28位氨基酸S置换成其它除S外的任意一种氨基酸，将第33位氨基酸G 置换成其它除G外的任意一种氨基酸，抗原肽的肽段包括RMX₂₈APX₃₁TX₃₃GV 序列，可使抗原肽对相关等位基因A*02:01的亲和力增加。

具体地，以野生型肽段、抗原肽以及部分通过NetMHC4.0软件和数据库筛选出来人工肽序列，并预测其与相关等位基因A*02:01的亲和力，如表2和表3 所示。

表2

表3

由表2和表3可知，X₂₈和X₃₃两个位点的氨基酸置换1个或2个后获得的抗原肽对相关等位基因A*02:01的亲和力增加，因而可以进一步增强免疫应答反应。

如，当第28位氨基酸S置换成M、第33位氨基酸G置换成L时，即抗原肽的序列为RMM₂₈APATL₃₃GV或者RMM₂₈APSTL₃₃GV时，其比突变肽 RMS₂₈APATG₃₃GV或者RMS₂₈APSTG₃₃GV对A*02:01的亲和力分别提高了83 倍和76倍。

进一步地，抗原肽H3.1 K27M_26-35、抗原肽H3.3/H3.2 K27M_26-35为九肽核时，如表2中的MMAPATLGV(去掉了第26位氨基酸)和RMAPATLGV(去掉了第28位氨基酸)，表3中的MMAPSTLGV和RMAPSTLGV，X₂₈和X₃₃两个位点的氨基酸置换1个或2个后获得的抗原肽同样可以增加对相关等位基因 A*02:01的亲和力。

尤其是，抗原肽的序列为MM₂₈APATL₃₃GV或者MM₂₈APSTL₃₃GV时，其对A*02:02(IC₅₀3.2nM)、A*02:03(IC₅₀2.2nM)、A*02:06(IC₅₀3.5nM)等 HLA-A2位点的等位基因也有很高的亲和力(A*02:05、A*02:07等除外)，拓展了抗原肽预防剂、治疗剂、药物等的适用患者群。

所以，包括MX₂₈APX₃₁TX₃₃GV或者RMX₂₈APX₃₁TX₃₃GV序列的抗原肽可以在体外细胞模型上比突变肽产生更强的免疫应答反应。因此，采用人工序列 MX₂₈APX₃₁TX₃₃GV或者RMX₂₈APX₃₁TX₃₃GV可以为研制A*02:01抗DIPG疫苗和抗DMG疫苗及其优化提供更大空间和选择性。

可以理解，人工序列MX₂₈APX₃₁TX₃₃GV或者RMX₂₈APX₃₁TX₃₃GV可单独使用，也可以人工序列KQL₂₀ATKAAR₂₆MX₂₈APX₃₁TX₃₃GV进行使用，当然，还可以人工序列MX₂₈APX₃₁TX₃₃GV或者RMX₂₈APX₃₁TX₃₃GV加其它序列进行使用。其中，X₂₈优选为M，X₃₃优选为L。

在一些实施例中，将野生型肽段ARMS₂₈APATG₃₃的结构H3.1 K27M_25-33 (B*39:01)、野生型肽段ARMS₂₈APSTG₃₃的结构H3.3/H3.2 K27M_25-33(B*39:01) 的第28位氨基酸S₂₈、第33位氨基酸G₃₃中的任意一个氨基酸进行置换，即，将第28位氨基酸S置换成其它除S外的任意一种氨基酸，将第33位氨基酸G 置换成其它除G外的任意一种氨基酸，抗原肽的肽段包括ARMX₂₈APX₃₁TX₃₃序列，可使抗原肽对相关等位基因B*39:01的亲和力增加。

具体地，以野生型肽段、抗原肽以及部分通过NetMHC4.0软件和数据库筛选出来人工肽序列，并预测其与相关等位基因B*39:01的亲和力，如表4和表5 所示。

表4

表5

由表4和表5可知，X₂₈和X₃₃两个位点的氨基酸置换1个或2个后，可以使抗原肽对B*39:01的亲和力提高450倍～680倍，其中G₃₃置换成L₃₃起了决定性作用，因而可以进一步增强免疫应答反应。

所以，包括ARMX₂₈APX₃₁TX₃₃序列的抗原肽可以在体外细胞模型上比突变肽产生更强的免疫应答反应。因此，采用人工序列ARMX₂₈AP X₃₁TX₃₃可以为研制B*39:01抗DIPG疫苗和抗DMG疫苗及其优化提供更大空间和选择性。

可以理解，人工序列ARMX₂₈APX₃₁TX₃₃可单独使用，也可以人工序列KQL₂₀ATKAAR₂₆MX₂₈APX₃₁TX₃₃GV进行使用，当然，还可以人工序列 ARMX₂₈APX₃₁TX₃₃加其它序列进行使用。其中，X₂₈优选为M、G中的一种，进一步优先为M，X₃₃优选为L中的一种。

另外，从表4和表5可知，G₃₃置换成L₃₃后，修改第26位氨基酸和第30 位氨基酸后，即抗原肽的序列为AQMSAISTL₃₃或AQMSAISTL₃₃时，抗原肽对 A*03:02也有很高的亲和力(49nM～63nM)。

可以理解，抗原肽的亲和力是免疫应答反应的重要因素但不是唯一因素。肽序列的理化性质、免疫系统相关蛋白水解酶作用、胞内TAP转运、肽序列的内在活性等众多因素会综合影响到免疫应答反应的最终结果。即，通过各种方法的评估，免疫应答最强的抗原肽并非一定是上述理论亲和力最高的序列。

上述实施例中，还可在第27位氨基酸和第28位氨基酸之间插入-ARM-三肽，所述抗原肽包括KQX₂₀ATKAAX₂₆MARMX₂₈APX₃₁TX₃₃GV序列中的至少部分序列。

因此，本发明对组蛋白H3 K27M突变肽的第20位氨基酸、第26位氨基酸、第28位氨基酸和第33位氨基酸中的至少一个氨基酸进行置换得到的抗原肽，对I型HLA等位基因蛋白产物具有高亲和力，使得该抗原肽可以用于制备抗肿瘤疫苗，尤其是抗DIPG疫苗和抗DMG疫苗，具有很强的抗肿瘤活性。

所以，本发明还提供上述抗原肽的不同应用，包括：核酸、载体、用于肿瘤的治疗剂或预防剂、抗原提呈细胞、抗体或其活性片段、嵌合抗原受体、杀伤性免疫细胞和药物，其中，采用该抗原肽获得的抗肿瘤疫苗，尤其是抗DIPG 疫苗和抗DMG疫苗，具有很强的抗肿瘤活性。

本发明提供的核酸，其能够表达所述的抗原肽，可以用来制备肿瘤的治疗剂或者预防剂。

本发明提供的载体，其含有所述核酸，可以用来制备肿瘤的治疗剂或者预防剂。

本发明提供的用于肿瘤的治疗剂，它包括至少一种选自权利要求所述的抗原肽，或所述核酸，或所述载体，从而达到治疗肿瘤的目的。

本发明提供的用于肿瘤的预防剂，它包括至少一种选自权利要求所述的抗原肽，或所述核酸，或所述载体，从而达到预防肿瘤的目的。

本发明提供的抗原提呈细胞，其表面的HLA分子能够识别所述的抗原肽并形成复合物，该复合物存在于具有抗原提呈能力、得自肿瘤病人的分离细胞的表面；优选的，所述抗原提呈细胞为树突状细胞。

在一些事实方式中，所述树突状细胞包括第一启动子控制的shRNA表达单位，以及依次位于所述表达单位下游的由第二启动子、第三启动子控制的所述抗原肽和第一树突状细胞调节基因。

树突状细胞常常选用克隆1-3个DC活化或者DC活化T细胞相关的基因，包装成腺病毒，感染DC使之增强抗原刺激和免疫应答。

其中，SOCS1是DC活化的负调节基因，在DC活化过程中抑制JAK/STAT 信号通路基因，弱化DC细胞的抗原提呈作用。SOCS1 shRNA在细胞内表达，降解(knock-down)约40-60％的SOCS1，增强DC活化。

具体地，本发明选用hSOCS1(Human Suppressor of Cytokine Signaling 1，hSOCS1)基因的静默性RNA(siRNA)5’-CACGCACTTCCGCACATTC)，并用七元环TCAAGAG重新设计发卡结构，所以，本发明所述shRNA的序列如 SEQ ID NO.1所示，包括CACGCACTTCCGCACATTCTCAAGAGGAATGTGCG GAAGTGCGTG。

具体地，所述第一启动子包括U6启动子或H1启动子中的一种，优选为U6 启动子。

具体地，所述第二启动子包括MSCV启动子或其它真核细胞表达启动子，考虑到MSCV启动子适合在单个核细胞内表达，所述第二启动子优选为MSCV 启动子。

具体地，所述第三启动子包括Ires2序列或EF1a启动子中的一种。

具体地，所述第一树突状细胞调节基因包括CD154融合蛋白，其序列如SEQ IDNO.2所示。

进一步地，位于所述抗原肽和所述第一树突状细胞调节基因之间的第二树突状细胞调节基因，所述第二树突状细胞调节基团包括CD70融合蛋白，其序列如SEQ ID NO.3所示。

CD70融合蛋白和CD154融合蛋白作用于致敏后的成熟DC对T细胞的信号传递，CD70融合蛋白结合T细胞膜上CD27融合蛋白，刺激T细胞，而CD154 融合蛋白结合T细胞膜上CD40融合蛋白增强T细胞活化。另外，CD70融合蛋白和CD154融合蛋白都是Single-pass II型蛋白质，在蛋白基因的5’端或蛋白质的N端融合合适的调节因子，可进一步增强DC的抗原加工及其T细胞活化能力。

因此，本发明的DC具有很强的抗肿瘤活性，具体为具有很强的抗弥漫性内生性脑桥胶质瘤活性和抗弥漫性中线胶质瘤活性。

本发明提供的抗体或其活性片段(包括Fab、F(ab’)2、Fd、Fv、scFv、双特异抗体和抗体最小识别单位，以及这些抗体和片段的单链衍生物)，其能够特异性识别所述的抗原肽，从而可以用于预防和治疗肿瘤。

具体地，所述抗体优选为人源化抗体或人抗体。

本发明提供的嵌合抗原受体，其胞外域具有所述抗体或其功能片段，优选 sc-Fv或Fab抗体片段。

本发明提供的杀伤性免疫细胞，其表达所述嵌合抗原受体，或被所述的抗原提呈细胞所活化，所述杀伤性免疫细胞优选为CTL细胞或NK细胞。

本发明提供的药物，它含有以所述的抗原呈递细胞、所述的抗体、所述的杀伤性免疫细胞中的任一项作有效成分，从而可以用于预防和治疗肿瘤。

以下，将通过以下具体实施例对所述基于组蛋白H3 K27M突变肽的抗原肽及其应用做进一步的说明。

实施例1：

组蛋白H3 K27M_18-27突变肽及基于该突变肽的抗原肽对HLA-B*15:01的亲和力比较。

多肽合成：突变肽KQLATKAARMTSVAARMSAPATGGV(K27M-C)，抗原肽KQLATKAAAMTSVRMAPATGGV(K27M-B)，其中TSVA或TSV为间隔肽(Spacer)；抗原反应肽B1501KQLATKAARM。

DCT制备实验过程：采集全血50ml，分离外周血单个核细胞(PBMC)，贴壁，无血清培养液加100ng/ml GM-CSF+25ng/ml IL-4号液培养贴壁DC，每二天换液一次；悬浮细胞冻存。第六天加20-40ug/ml突变肽或抗原肽；第七天换培养液加50ng/ml TNFa，冻存悬浮细胞复苏，用无血清培养液加500IU/ml IL-2 培养一天；第八天DC和悬浮T细胞按1:10的比例混合，得到特异性活化的DCT 细胞。

伽马干扰素释放Elispot测试：选择具有B*15:01表位的肿瘤细胞株NALM-6 作为靶细胞，按常规培养。靶细胞用10-15ug/ml抗原反应肽B1501 (KQLATKAARM)在培养液和CO₂培养箱中温孵16小时以上，以便 KQLATKAARM与B*15:01形成稳定的复合物。靶细胞与DCT计数后按1:2的比例接种于Elispot微孔板，培养24小时。移除细胞，根据Elispot的说明书测试伽马干扰素释放斑点(Elispot试剂盒，货号2110005，深圳达科为)。

如图1所示，抗原肽K27M-B(A₂₆)比突变肽K27M-C(R₂₆)产生较强的免疫应答。参见表1，K27M-C中R₂₆被A₂₆取代后亲和力理论上增强两倍左右。

实施例2：

组蛋白H3 K27M_25-33突变肽及基于该突变肽的抗原肽对HLA-B*39:01的亲和力比较。

多肽合成：抗原刺激肽KQLATKAARMTSVAARMSAPATGGV(K27M-C)，KQLATKAAMMTSVAARMSAPATL(K27M-H)，抗原反应肽K27MB39 ARMSAPATG。

DCT制备实验过程：采集全血50ml，分离外周血单个核细胞(PBMC)，贴壁，无血清培养液加100ng/ml GM-CSF+25ng/ml IL-4号液培养贴壁DC，每二天换液一次；悬浮细胞冻存。第六天加20-40ug/ml突变肽或抗原肽；第七天换培养液加50ng/ml TNFa，冻存悬浮细胞复苏，用无血清培养液加500IU/ml IL-2 培养一天；第八天DC和悬浮T细胞按1:10的比例混合，得到特异性活化的DCT 细胞。

伽马干扰素释放Elispot测试：选择具有B*39:01表位的肿瘤细胞株IGR-39 作为靶细胞，按常规培养。靶细胞用10-15ug/ml抗原反应肽K27MB39 (ARMSAPATG)，在培养液和CO₂培养箱中温孵16小时以上，以便 ARMSAPATG与B*39:01形成稳定的复合物。靶细胞与DCT计数后按1:2的比例接种于Elispot微孔板，培养24小时。移除细胞，根据Elispot的说明书测试伽马干扰素释放斑点(Elispot试剂盒，货号2110005，深圳达科为)。

如图2所示，抗原肽K27M-H(M₂₆、L₃₃)比突变肽K27M-C(R₂₆、G₃₃) 产生更强的免疫应答，说明K27M-C中R₂₆、G₃₃被M₂₆、L₃₃取代后亲和力和免疫力都有明显增强。

实施例3：

腺病毒增强DC活性的基因载体克隆

hSOCS1 shRNAU6启动子、hSOCS1 shRNA、特殊的转录终止序列通过核酸全合成的方法制备，克隆在载体质粒蛋白合成启动子的上游的SnaB I位点，接入后测序验证(DNA序列如SEQ ID NO.4)。

CD70融合蛋白基因含一个新抗原序列接入部位、T2A及CD70序列，通过 Xba I和Not I位点接入载体质粒蛋白表达启动子的下游(DNA序列如SEQ ID NO.5)。

CD154及其融合基因含Ires2和CD154序列，通过Not I和Hpa I位点亚克隆在CD70融合基因和SV40 PolyA信号序列之间(DNA序列如SEQ ID NO.6)。

上述基因由上海汉恒生物亚克隆至AdMax的穿梭质粒上，包装成Ad5腺病毒HBAD--CMV-DCML，滴度约为1×10¹⁰。

hSOCS1基因knockdown检验：按常规方法制备人PBMC，贴壁制备DC，培养至第七天，收集活化DC，分成两组。一组用MOI 150-300腺病毒 HBAD-DCML感染，对照组用Mock病毒HBAD-CMV-GFP感染。48小时后，用康为世纪S的RNApure Tissue&Cell Kit处理样本，提取RNA。取1000ng RNA，用Thermo scientific的RevertAid First Strand cDNA SynthesisKit进行RNA逆转录。以cDNA为模板，hSOCS1引物(hSOCS1-F:5’-TGCAGTCTCCACAGCAGC AG，hSOCS1-R:5’-AGGGGCCCCCAGTAGAATCC)加入BIOTIUM的 EvaGreen，在RocheLightCycler480Ⅱ上用SYBR GreenⅠ法进行荧光定量PCR。

如图3所示，对照组Ct＝33.4，HBAD-CMV-DCML(hSOCS1 shRNA)组 Ct＝34.5，两者相差一个循环(Cycle)约两倍，验证hSOCS1 shRNA的knockdown 作用(约为50％)。

CD70和CD154过表达检验：以细胞株HEK293T为模型，取生长良好的 293T细胞计数，按24孔板每孔1.0×105cells每组接种2孔取细胞；离心去除原培养基，按照MOI＝100分别加入HBAD-GFP(空白对照组)和HBAD-DCML (目标组)用无血清培养液按照0.5ml/孔重悬后移入24孔板内培养；感染过夜后用完全培养基(RPMI1640+10％FBS)更换，同时收集悬浮的细胞移入原24 孔板内继续培养。48h后收集细胞，离心去除培养基，加入80μL PBS+10μLanti-CD154-PE(购自eBioscience，货号12-1546-41)和10μL anti-CD70-eFluor 660 (相当于APC)(购自eBioscience，货号50-0709-41)；4℃避光孵育30min；取出孵育后的细胞，加2.0ml PBS重悬，800rpm，3min离心去掉上清液；重复清洗步骤一次；用0.5mlPBS重悬，将细胞吹打散开，吹打均匀后用300目细胞过滤网过滤入流式检测样品管，上机(BDAria III)检测，另取少许细胞荧光显微镜拍照。

如图4所示，腺病毒HDBAD-CMV-DCML感染91％的HEK293细胞，过表达CD70和CD154(及其融合基因)，双阳性的细胞为83％。证明 HDBAD-CMV-DCML感染后能从功能上显著增强DC的抗原提呈和活化T细胞的能力。

实施例4：

增强DC活性的基因载体腺病毒表达和抗原肽的免疫应答

实验步骤和过程与实施例1相似。

DC培养到第五天后分成两组：一组加腺病毒HDBAD-CMV-DCML感染 12-24小时，另一组不加病毒。第六天病毒移除、清洗后，两组DC用相同20ug/ml 抗原肽K27MB15刺激；第七天换培养液加50ng/ml TNFa，冻存的悬浮T细胞复苏，用无血清培养液加500IU/ml IL-2培养一天；第八天DC和悬浮T细胞按1:10的比例混合，得到特异性活化的DCT细胞。

如图5的Elispot测试结果所示，腺病毒感染组DCT细胞非特异活性(a和 b组，-P)和特异性活性(c，+P)都比对照组增强，特异性活化DCT明显增多。

实施例5：

增强DC活性的基因载体真核表达和抗原免疫应答

儿童DIPG患者，手术组织经外显子测序(WES)、生信分析，得到肿瘤组织体细胞突变H3.3 K27M，HERC2 L2333fs，PLK2 L335fs，CCDC40 Q951R；这些突变衍生I型和II型HLA反应性抗原肽。将这些抗原肽拼合成小基因 (Minigene)(DNA序列如SEQ ID NO.7)，克隆到内部改造的Sleeping Beauty 真核表达质粒的相应位点，得到个体化DC刺激和活化的真核表达质粒 (U6-hSOCS1 shRNA-MSCV-新抗原minigene-T2A-CD70-Ires2-CD154，DNA序列如SEQID NO.8)。通过BioRad电转仪，300V，7ms将质粒电转DC，然后制备DCT混合细胞，静脉回输给患者。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

序列表

<110> 黄泽维

<120> 基于组蛋白H3 K27M突变肽的抗原肽及其应用

<160> 8

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 45

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

cacgcacttc cgcacattct caagaggaat gtgcggaagt gcgtg 45

<210> 2

<211> 786

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

atgatcgaaa catacaacca aacttctccc cgatctgcgg ccactggact gcccatcagc 60

atgaaaattt ttatgtattt acttactgtt tttcttatca cccagatgat tgggtcagca 120

ctttttgctg tgtatcttca tagaaggttg gacaagatag aagatgaaag gaatcttcat 180

gaagattttg tattcatgaa aacgatacag agatgcaaca caggagaaag atccttatcc 240

ttactgaact gtgaggagat taaaagccag tttgaaggct ttgtgaagga tataatgtta 300

aacaaagagg agacgaagaa agaaaacagc tttgaaatgc aaaaaggtga tcagaatcct 360

caaattgcgg cacatgtcat aagtgaggcc agcagtaaaa caacatctgt gttacagtgg 420

gctgaaaaag gatactacac catgagcaac aacttggtaa ccctggaaaa tgggaaacag 480

ctgaccgtta aaagacaagg actctattat atctatgccc aagtcacctt ctgttccaat 540

cgggaagctt cgagtcaagc tccatttata gccagcctct gcctaaagtc ccccggtaga 600

ttcgagagaa tcttactcag agctgcaaat acccacagtt ccgccaaacc ttgcgggcaa 660

caatccattc acttgggagg agtatttgaa ttgcaaccag gtgcttcggt gtttgtcaat 720

gtgactgatc caagccaagt gagccatggc actggcttca cgtcctttgg cttactcaaa 780

ctctga 786

<210> 3

<211> 576

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

gaggagggat ctggatgcag cgtgcggaga aggccatacg gatgcgtgct gagagccgcc 60

ctggtgccac tggtggcagg actggtcatc tgcctggtgg tgtgcatcca gaggtttgca 120

caggcacagc agcagctgcc tctggagagc ctgggatggg acgtggcaga gctgcagctg 180

aatcacaccg gaccacagca ggatccaagg ctgtactggc agggaggacc tgccctgggc 240

cggtccttcc tgcacggacc agagctggac aagggacagc tgcgcatcca ccgggatggc 300

atctatatgg tgcacatcca ggtgacactg gccatctgct cctctaccac agcctcccgg 360

caccacccaa ccacactggc cgtgggcatc tgttctcctg ccagccggag catctccctg 420

ctgaggctga gcttccacca gggatgcacc atcgcctccc agcgcctgac accactggcc 480

aggggcgaca ccctgtgcac aaacctgacc ggcacactgc tgccttccag aaataccgat 540

gagacatttt tcggcgtgca gtgggtgagg ccatga 576

<210> 4

<211> 365

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

tacgtagggc tacgtggacg acacgcggca ggaagaggct atttcccatg attccttcat 60

atttgcatat acgatacaag gctgttagag agataattag aattaatttg actgtaaaca 120

caaagatatt agtacaaaat acgtgacgta gaaagtaata atttcttggg tagtttgcag 180

ttttaaaatt atgttttaaa atggactatc atatgcttac cgtaacttga aagtatttcg 240

atttcttggc tttatatatc ttgtggaaag gacgaggatc cgcacgcact tccgcacatt 300

ctcaagagga atgtgcggaa gtgcgtgttt ttgcagcggg atggggagga ccaggatcct 360

acgta 365

<210> 5

<211> 659

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

tctagagcca ccatggctag cgagggaagg ggatctctgc tgacatgcgg cgatgtggag 60

gagaacccag gacctgagga gggatctgga tgcagcgtgc ggagaaggcc atacggatgc 120

gtgctgagag ccgccctggt gccactggtg gcaggactgg tcatctgcct ggtggtgtgc 180

atccagaggt ttgcacaggc acagcagcag ctgcctctgg agagcctggg atgggacgtg 240

gcagagctgc agctgaatca caccggacca cagcaggatc caaggctgta ctggcaggga 300

ggacctgccc tgggccggtc cttcctgcac ggaccagagc tggacaaggg acagctgcgc 360

atccaccggg atggcatcta tatggtgcac atccaggtga cactggccat ctgctcctct 420

accacagcct cccggcacca cccaaccaca ctggccgtgg gcatctgttc tcctgccagc 480

cggagcatct ccctgctgag gctgagcttc caccagggat gcaccatcgc ctcccagcgc 540

ctgacaccac tggccagggg cgacaccctg tgcacaaacc tgaccggcac actgctgcct 600

tccagaaata ccgatgagac atttttcggc gtgcagtggg tgaggccatg agcggccgc 659

<210> 6

<211> 1499

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

gcggccgcgg gatccgcccc tctccctccc ccccccctaa cgttactggc cgaagccgct 60

tggaataagg ccggtgtgcg tttgtctata tgttattttc caccatattg ccgtcttttg 120

gcaatgtgag ggcccggaaa cctggccctg tcttcttgac gagcattcct aggggtcttt 180

cccctctcgc caaaggaatg caaggtctgt tgaatgtcgt gaaggaagca gttcctctgg 240

aagcttcttg aagacaaaca acgtctgtag cgaccctttg caggcagcgg aaccccccac 300

ctggcgacag gtgcctctgc ggccaaaagc cacgtgtata agatacacct gcaaaggcgg 360

cacaacccca gtgccacgtt gtgagttgga tagttgtgga aagagtcaaa tggctctcct 420

caagcgtatt caacaagggg ctgaaggatg cccagaaggt accccattgt atgggatctg 480

atctggggcc tcggtgcaca tgctttacat gtgtttagtc gaggttaaaa aaacgtctag 540

gccccccgaa ccacggggac gtggttttcc tttgaaaaac acgatgataa tatggccaca 600

accatgatcg aaacatacaa ccaaacttct ccccgatctg cggccactgg actgcccatc 660

agcatgaaaa tttttatgta tttacttact gtttttctta tcacccagat gattgggtca 720

gcactttttg ctgtgtatct tcatagaagg ttggacaaga tagaagatga aaggaatctt 780

catgaagatt ttgtattcat gaaaacgata cagagatgca acacaggaga aagatcctta 840

tccttactga actgtgagga gattaaaagc cagtttgaag gctttgtgaa ggatataatg 900

ttaaacaaag aggagacgaa gaaagaaaac agctttgaaa tgcaaaaagg tgatcagaat 960

cctcaaattg cggcacatgt cataagtgag gccagcagta aaacaacatc tgtgttacag 1020

tgggctgaaa aaggatacta caccatgagc aacaacttgg taaccctgga aaatgggaaa 1080

cagctgaccg ttaaaagaca aggactctat tatatctatg cccaagtcac cttctgttcc 1140

aatcgggaag cttcgagtca agctccattt atagccagcc tctgcctaaa gtcccccggt 1200

agattcgaga gaatcttact cagagctgca aatacccaca gttccgccaa accttgcggg 1260

caacaatcca ttcacttggg aggagtattt gaattgcaac caggtgcttc ggtgtttgtc 1320

aatgtgactg atccaagcca agtgagccat ggcactggct tcacgtcctt tggcttactc 1380

aaactctgaa atcaacctct ggattacaaa atttgtgaaa gattgactgg tattcttaac 1440

tatgttgctc cttttacgct atgtggatac gctgctttaa tgcctttgta tcagttaac 1499

<210> 7

<211> 255

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

tctagagcca ccatggaagc cgcggccaaa cccagtttgg atgacatcat tcgacatgac 60

tttttttttg cagggcttca ctccggacag actgtcttcg ctccgggacc aggtcccgct 120

tacatcctga aagcaggtcg ggcgctgttc tcccgagttc acaggatgaa gaaatattgc 180

agaacaacac gggacgccaa gcaaatggct acaaaagccg ctgccatggg aggggtggga 240

gagagagctg ctagc 255

<210> 8

<211> 3194

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

tacgtagggc tacgtggacg acacgcggca ggaagaggct atttcccatg attccttcat 60

atttgcatat acgatacaag gctgttagag agataattag aattaatttg actgtaaaca 120

caaagatatt agtacaaaat acgtgacgta gaaagtaata atttcttggg tagtttgcag 180

ttttaaaatt atgttttaaa atggactatc atatgcttac cgtaacttga aagtatttcg 240

atttcttggc tttatatatc ttgtggaaag gacgaggatc cgcacgcact tccgcacatt 300

ctcaagagga atgtgcggaa gtgcgtgttt ttgcagcggg atggggagga ccaggatcct 360

acgtattagt catcgctatt accatgatcg atactagttg aaagacccca cctgtaggtt 420

tggcaagtta gcttaagtaa cgccattttg caaggcatgg aaaatacata actgagaata 480

gagaagttca gatcaaggtt aggaacagag agacagcaga atatgggcca aacaggatat 540

ctgtggtaag cagttcctgc cccggctcag ggccaagaac agatggtccc cagatgcggt 600

cccgccctca gcagtttcta gcgaaccatc agatgtttcc agggtgcccc aaggacctga 660

aatgaccctg tgccttattt gaactaacca atcagtttgc ttcttgcttc tgtttgtgtg 720

cttctgctcc ctgagctcaa taaaagagcc cacaacccct cacttggtgg gccagtcctc 780

tgatagactg tgtcccctgg atacccgtat tctagagcca ccatggaagc cgcggccaaa 840

cccagtttgg atgacatcat tcgacatgac tttttttttg cagggcttca ctccggacag 900

actgtcttcg ctccgggacc aggtcccgct tacatcctga aagcaggtcg ggcgctgttc 960

tcccgagttc acaggatgaa gaaatattgc agaacaacac gggacgccaa gcaaatggct 1020

acaaaagccg ctgccatggg aggggtggga gagagagctg ctagcgaggg aaggggatct 1080

ctgctgacat gcggcgatgt ggaggagaac ccaggacctg aggagggatc tggatgcagc 1140

gtgcggagaa ggccatacgg atgcgtgctg agagccgccc tggtgccact ggtggcagga 1200

ctggtcatct gcctggtggt gtgcatccag aggtttgcac aggcacagca gcagctgcct 1260

ctggagagcc tgggatggga cgtggcagag ctgcagctga atcacaccgg accacagcag 1320

gatccaaggc tgtactggca gggaggacct gccctgggcc ggtccttcct gcacggacca 1380

gagctggaca agggacagct gcgcatccac cgggatggca tctatatggt gcacatccag 1440

gtgacactgg ccatctgctc ctctaccaca gcctcccggc accacccaac cacactggcc 1500

gtgggcatct gttctcctgc cagccggagc atctccctgc tgaggctgag cttccaccag 1560

ggatgcacca tcgcctccca gcgcctgaca ccactggcca ggggcgacac cctgtgcaca 1620

aacctgaccg gcacactgct gccttccaga aataccgatg agacattttt cggcgtgcag 1680

tgggtgaggc catgagcggc cgcgggatcc gcccctctcc ctcccccccc cctaacgtta 1740

ctggccgaag ccgcttggaa taaggccggt gtgcgtttgt ctatatgtta ttttccacca 1800

tattgccgtc ttttggcaat gtgagggccc ggaaacctgg ccctgtcttc ttgacgagca 1860

ttcctagggg tctttcccct ctcgccaaag gaatgcaagg tctgttgaat gtcgtgaagg 1920

aagcagttcc tctggaagct tcttgaagac aaacaacgtc tgtagcgacc ctttgcaggc 1980

agcggaaccc cccacctggc gacaggtgcc tctgcggcca aaagccacgt gtataagata 2040

cacctgcaaa ggcggcacaa ccccagtgcc acgttgtgag ttggatagtt gtggaaagag 2100

tcaaatggct ctcctcaagc gtattcaaca aggggctgaa ggatgcccag aaggtacccc 2160

attgtatggg atctgatctg gggcctcggt gcacatgctt tacatgtgtt tagtcgaggt 2220

taaaaaaacg tctaggcccc ccgaaccacg gggacgtggt tttcctttga aaaacacgat 2280

gataatatgg ccacaaccat gatcgaaaca tacaaccaaa cttctccccg atctgcggcc 2340

actggactgc ccatcagcat gaaaattttt atgtatttac ttactgtttt tcttatcacc 2400

cagatgattg ggtcagcact ttttgctgtg tatcttcata gaaggttgga caagatagaa 2460

gatgaaagga atcttcatga agattttgta ttcatgaaaa cgatacagag atgcaacaca 2520

ggagaaagat ccttatcctt actgaactgt gaggagatta aaagccagtt tgaaggcttt 2580

gtgaaggata taatgttaaa caaagaggag acgaagaaag aaaacagctt tgaaatgcaa 2640

aaaggtgatc agaatcctca aattgcggca catgtcataa gtgaggccag cagtaaaaca 2700

acatctgtgt tacagtgggc tgaaaaagga tactacacca tgagcaacaa cttggtaacc 2760

ctggaaaatg ggaaacagct gaccgttaaa agacaaggac tctattatat ctatgcccaa 2820

gtcaccttct gttccaatcg ggaagcttcg agtcaagctc catttatagc cagcctctgc 2880

ctaaagtccc ccggtagatt cgagagaatc ttactcagag ctgcaaatac ccacagttcc 2940

gccaaacctt gcgggcaaca atccattcac ttgggaggag tatttgaatt gcaaccaggt 3000

gcttcggtgt ttgtcaatgt gactgatcca agccaagtga gccatggcac tggcttcacg 3060

tcctttggct tactcaaact ctgaaatcaa cctctggatt acaaaatttg tgaaagattg 3120

actggtattc ttaactatgt tgctcctttt acgctatgtg gatacgctgc tttaatgcct 3180

ttgtatcagt taac 3194

Claims (16)

1.一种基于组蛋白H3 K27M突变肽的抗原肽，其特征在于，所述抗原肽包括KQX₂₀ATKAAX₂₆MX₂₈APX₃₁TX₃₃GV序列中的至少部分序列，所述部分序列包括第27位M及X₂₀、X₂₆、X₂₈、X₃₃中的至少一个，其中，

X₂₀包括A、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、K、M、F、P、S、T、W、Y、V中的任意一种，

X₂₆包括A、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y、V中的任意一种，

X₂₈包括A、R、N、D、C、Q、E、G、H、I、L、K、M、F、P、T、W、Y、V中的任意一种，

X₃₃包括A、R、N、D、C、Q、E、H、I、L、K、M、F、P、S、T、W、Y、V中的任意一种，

X₃₁为A或S。

2.根据权利要求1所述的基于组蛋白H3 K27M突变肽的抗原肽，其特征在于，所述抗原肽包括KQX₂₀ATKAAX₂₆M序列；

或者，所述抗原肽包括RMX₂₈APX₃₁TX₃₃GV序列；

或者，所述抗原肽包括ARMX₂₈APX₃₁TX₃₃序列。

3.根据权利要求1所述的基于组蛋白H3 K27M突变肽的抗原肽，其特征在于，所述抗原肽的序列中还包括-ARM-，所述抗原肽包括KQX₂₀ATKAAX₂₆MARMX₂₈APX₃₁TX₃₃GV序列中的至少部分序列。

4.一种核酸，其特征在于，所述核酸能够表达权利要求1～3任一项所述的抗原肽。

5.一种载体，其特征在于，所述载体含有所述权利要求4所述的核酸。

6.一种用于肿瘤的治疗剂，其特征在于，包括权利要求1～3任一项所述的抗原肽、权利要求4所述核酸、权利要求5所述载体中的至少一种。

7.一种用于肿瘤的预防剂，其特征在于，包括权利要求1～3任一项所述的抗原肽、权利要求4所述核酸、权利要求5所述载体中的至少一种。

8.一种抗原提呈细胞，其特征在于，所述抗原提呈细胞表面的HLA分子能够识别如权利要求1～3任一项的所述的抗原肽并形成复合物。

9.根据权利要求8所述的抗原提呈细胞，其特征在于，所述抗原提呈细胞为树突状细胞，所述树突状细胞包括第一启动子控制的shRNA表达单位，以及依次位于所述表达单位下游的由第二启动子、第三启动子控制的所述抗原肽和第一树突状细胞调节基因。

10.根据权利要求9所述的抗原提呈细胞，其特征在于，所述shRNA的序列如SEQ IDNO.1所示。

11.根据权利要求9所述的抗原提呈细胞，其特征在于，所述树突状细胞疫苗还包括第二树突状细胞调节基因，所述第二树突状细胞调节基因位于所述抗原肽和所述第一树突状细胞调节基因之间。

12.根据权利要求11所述的抗原提呈细胞，其特征在于，所述第一树突状细胞调节基因包括CD154融合蛋白，所述第二树突状细胞调节基因包括CD70融合蛋白。

13.一种抗体或其活性片段，其特征在于，所述抗体或其活性片段能够特异性识别权利要求1～3任一项所述的抗原肽。

14.一种嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体的胞外域具有权利要求13所述抗体或其功能片段。

15.一种杀伤性免疫细胞，其特征在于，所述杀伤性免疫细胞表达权利要求14所述嵌合抗原受体，或被权利要求8所述的抗原提呈细胞所活化。

16.一种药物，其特征在于，所述药物含有以权利要求8所述的抗原呈递细胞、权利要求13所述的抗体或其活性片段、权利要求15所述的杀伤性免疫细胞中的任一项作有效成分。

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