CN112544573A - 一种吸血蠓的实验室养殖系统及其方法 - Google Patents
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Abstract
一种吸血蠓的实验室养殖系统及其方法，所述系统包括：成虫饲养管，卵饲养皿，幼虫饲养皿，蛹饲养皿，恒温箱，滤纸，脱脂棉，镊子，湿毛笔、塑料盖。所述方法包括：（1）饱血吸血蠓采集后养殖，（2）卵孵化出幼虫期的养殖，（3）幼虫期间养殖，（4）蛹期间养殖。本方法操作简单，填补了实验室养殖吸血蠓的技术空白，为学者开展吸血蠓实验室研究提供了极大支持。
Description
技术领域
本发明涉及一种吸血蠓的实验室养殖系统及其方法。
背景技术
吸血蠓( Blood-sucking midges) 隶属双翅目、长角亚目、蠓科，是一种能通过刺吸反刍动物血液来传播虫媒病原体的蠓虫，是一类完全变态昆虫。其生长发育可以分为卵、幼虫、蛹、成虫四个阶段。全世界已知共1 671 种，中国已知吸血蠓共443种。吸血蠓体型微小、种类繁多、分布广泛，可吸食人畜血液，携带流行性乙型脑炎病毒，并传播牛羊蓝舌病、鸡原虫病、非洲马瘟等，是一类重要的媒介昆虫。上述疾病的爆发流行会带来巨大的经济损失。
目前国内外吸血蠓成虫的研究较为深入，而蠓科昆虫的幼期研究却是一个极度薄弱的环节，相对于成虫，幼期虫体由于其难采集，难发现而导致标本采集难度的大大增加，从而限制了在幼期形态学、生态学等方面的研究。
发明内容
本发明的目的是在于提供了一种吸血蠓的实验室养殖系统及养殖方法，首次通过科学试验建立了合适的实验室吸血蠓养殖系统，本方法科学合理，易于操作，弥补了实验室养殖吸血蠓的技术空白，提高科研效率。
为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案。
一种吸血蠓的实验室养殖系统，由成虫饲养管、卵饲养皿、幼虫饲养皿、蛹饲养皿四部分构成，所述成虫饲养管为规格10×150mm的玻璃试管，玻璃试管的外径为15mm，长度为150mm，玻璃试管的底部垫有厚度10mm脱脂棉A，脱脂棉A上方覆盖一层跟管口同样直径的圆形滤纸A；所述玻璃试管顶部开口处设有脱脂棉B；所述卵饲养皿为规格60mm的培养皿A，培养皿A的上盖A直径为64mm，下底直径为60mm，皿高为15mm，培养皿A的底部垫厚度0.5cm脱脂棉C，脱脂棉C上覆盖一层直径为65mm的圆形滤纸B紧贴于杯底的侧边；所述幼虫饲养皿为12孔细胞培养板；所述蛹饲养皿为规格60mm的培养皿B，培养皿B的上盖B直径为64mm，下底直径为60mm，皿高为15mm，培养皿B底部垫0.5cm厚脱脂棉D，脱脂棉D上覆盖一层直径为65mm的圆形滤纸C紧贴于杯底的侧边，滤纸C上侧覆盖半径30mm的半圆型透明塑料盖，塑料盖上侧放置同等大小的滤纸D。
一种吸血蠓的实验室养殖方法，包括如下步骤：
1）饱血吸血蠓采集后养殖：采集之前将养殖管底部滴入蒸馏水，直至脱脂棉A及滤纸A湿润即可，不可过多，避免水分过多导致成虫粘于滤纸A上不能飞行；然后根据吸血蠓在当地的叮咬人畜的情况设置采集点，采集时将单侧的小腿露出引诱吸血蠓，一管一只成虫，待吸血蠓停落吸血时，将玻璃试管管口的脱脂棉B取下，玻璃试管管口扣于吸血蠓处的皮肤上，待吸血蠓饱血后，用手指轻敲玻璃试管，使雌虫离开皮肤后，用手指堵住玻璃试管管口最后使用脱脂棉B封住管口；带回实验室后，每日在顶端脱脂棉B滴入少量糖水喂食雌虫，并将此成虫饲养管放入28 ± 1℃，光周期L : D = 12 : 12h 及 70 ± 10 % RH 的恒温箱中，每日观察产卵情况；
2）卵孵化出幼虫期的养殖：将产卵后的雌虫放入新的成虫饲养管中，然后将滤纸A用镊子轻轻取出，使用湿毛笔将卵挑入卵饲养皿中滤纸B的中央处，从侧边往卵养殖皿中滴入蒸馏水，直至脱脂棉C湿润，滤纸B成饱和状态即可，并在卵周围滴入小球藻沉淀液，以便幼虫出生之后取食；然后将卵饲养皿放入 27 ± 1 ℃，光周期 L : D = 12 : 12 h 及 70± 10 % RH 的恒温箱中，每日适当补充水分，保持滤纸呈湿润状态，早晚观察卵颜色、孵化情况；
3）幼虫期间养殖：将孵化出的幼虫挑入幼虫饲养皿中，12孔细胞培养板中一孔一只幼虫，并在孔中加入三分之二的蒸馏水，并将此幼虫饲养皿放入 27 ± 1 ℃，光周期( L: D = 12 : 12 h ) 及 70 ± 10 % RH 的恒温箱中，每日加入一滴球藻沉淀液补充营养，并适度补充水分，每日观察生长情况，直至其幼虫蜕皮化成蛹；
4）蛹期间养殖：待幼虫蜕皮化成蛹后，使用湿毛笔将蛹挑入蛹饲养皿中，并放入恒温箱中羽化为成虫。
所述糖水组成为白砂糖：水= 5：95。
所述小球藻沉淀液的培育方式为，取蒸馏水750ml加入藻种250ml，并加入培养基4ml，放入锥形瓶中海棉封口后放入 27 ± 1℃，70 ± 10 % RH，24小时光照的恒温箱，10到 12 天即可回收，然后置于阴暗处 48 h静待其沉淀；再将沉淀物集中至 15 ml 离心管中，置于 4℃冰箱中保存。
采用上述技术方案的有益效果是：
本发明已率先成功实现实验室吸血蠓养殖，为系统、深入开展吸血蠓实验室研究提供了技术保障。
附图说明
图1为本发明一种吸血蠓的实验室养殖系统结构示意图。
图中：1-成虫饲养管、11-玻璃试管、12-脱脂棉A、13-滤纸A、14-脱脂棉B、2-卵饲养皿、21-培养皿A、22-上盖A、23-脱脂棉C、24-滤纸B、3-幼虫饲养皿、31-12孔细胞培养板、4-蛹饲养皿、41-培养皿B、42-上盖B、43-脱脂棉D、44-滤纸C、45-塑料盖、46-滤纸D。
图2为图1中成虫饲养管结构示意图。
图3为图1中卵饲养皿结构示意图。
具体实施方式
为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行具体说明。应当理解，以下文字仅仅用以描述本发明的一种或几种具体的实施方式，并不对本发明具体请求的保护范围进行严格限定。
实施例一
一种吸血蠓的实验室养殖系统，由成虫饲养管1，卵饲养皿2，幼虫饲养皿3，蛹饲养皿4四部分构成，所述成虫饲养管1为规格10×150mm的玻璃试管11，玻璃试管11的外径为15mm，长度为150mm，颜色透明，一管一只雌虫，便于观察成虫产卵情况，玻璃试管11的底部垫有厚度10mm脱脂棉A12，脱脂棉A12上侧覆盖一层跟管口同样直径的圆形滤纸A13，便于成虫在此产卵，所述玻璃试管11顶部开口处设有脱脂棉B14，防止吸血蠓飞出，且脱脂棉底部可以蘸取营养液等，用于喂食；所述卵饲养皿2为规格60mm的培养皿A21，培养皿A21的上盖A22直径为64mm，下底直径为60mm，皿高为15mm，颜色透明，便于观察，培养皿A21的底部垫厚度0.5cm脱脂棉C23，脱脂棉C23上覆盖一层直径为65mm的圆形滤纸B24紧贴于杯底的侧边，防止刚孵化幼虫爬入底部的脱脂棉C22中，一个培养皿A21饲养一只成虫所有卵；所述幼虫饲养皿3为12孔细胞培养板31，将废弃且完好无毒的12孔细胞培养板31清洗干净，一个孔一只幼虫进行养殖，颜色透明，直接揭盖喂食，并可每日观察幼虫运动、活力、蜕皮、生长等情况；所述蛹饲养皿4为规格60mm的培养皿B41，培养皿B41的上盖42直径为64mm，下底直径为60mm，皿高为15mm，培养皿B41底部垫0.5cm厚脱脂棉D43，脱脂棉D43上覆盖一层直径为65mm的圆形滤纸C44紧贴于杯底的侧边，滤纸C44上方覆盖半径30mm的半圆型透明塑料盖45，塑料盖45上方放置同等大小的滤纸D46，利于羽化的成虫停靠于干燥的滤纸上。
实施例二
一种吸血蠓的实验室养殖方法，包括如下步骤：
1）饱血吸血蠓采集后养殖：采集之前将养殖管底部滴入蒸馏水，直至脱脂棉A12及滤纸A13湿润即可，不可过多，避免水分过多导致成虫粘于滤纸A13上不能飞行；然后根据吸血蠓在当地的叮咬人畜的情况设置采集点，采集时将单侧的小腿露出引诱吸血蠓，一管一只成虫，待吸血蠓停落吸血时，将玻璃试管11管口的脱脂棉B14取下，玻璃试管11管口扣于吸血蠓处的皮肤上，待吸血蠓饱血后，用手指轻敲玻璃试管11，使雌虫离开皮肤后，用手指堵住玻璃试管11管口最后使用脱脂棉B14封住管口；带回实验室后，每日在顶端脱脂棉B14滴入少量糖水喂食雌虫，并将此成虫饲养管1放入28 ± 1℃，光周期L : D = 12 : 12h 及70 ± 10 % RH 的恒温箱中，每日观察产卵情况；
2）卵孵化出幼虫期的养殖：将产卵后的雌虫放入新的成虫饲养管中，然后将滤纸A用镊子轻轻取出，使用湿毛笔将卵挑入卵饲养皿2中央处，从侧边往卵养殖皿2中滴入蒸馏水，直至脱脂棉C23湿润，滤纸B24成饱和状态即可，并在卵周围滴入小球藻沉淀液，以便幼虫出生之后取食；然后将卵饲养皿2放入 27 ± 1 ℃，光周期 L : D = 12 : 12 h 及 70± 10 % RH 的恒温箱中，每日适当补充水分，保持滤纸呈湿润状态，早晚观察卵颜色、孵化情况；
3）幼虫期间养殖：将孵化出的幼虫挑入幼虫饲养皿3中，12孔细胞培养板31中一孔一只幼虫，并在孔中加入三分之二的蒸馏水，并将此幼虫饲养皿3放入 27 ± 1 ℃，光周期( L : D = 12 : 12 h ) 及 70 ± 10 % RH 的恒温箱中，每日加入一滴球藻沉淀液补充营养，并适度补充水分，每日观察生长情况，幼虫2-3天出现一次蜕皮，直至其化成蛹，幼虫期大约需要14-18天；
4）蛹期间养殖：待幼虫蜕皮成蛹后，使用湿毛笔将蛹挑入蛹饲养皿4中，并将其放入恒温箱中待蛹羽化为成虫。
所述糖水组成为白砂糖：水= 5：95。
所述小球藻沉淀液的培育方式为，取蒸馏水750ml加入藻种250ml（藻种为网上购买小球藻），并加入SE培养基4ml，放入锥形瓶中海棉封口后放入 27 ± 1℃，70 ± 10 %RH，24小时光照的恒温箱，10 到 12 天即可回收，然后置于阴暗处 48 h静待其沉淀；再将沉淀物集中至 15 ml 离心管中，置于4℃冰箱中保存。
经过上述养殖后，本实施例共养殖9只饱血吸血蠓，共4只吸血蠓产卵，产卵量最低为2粒/只，最高可达20粒/只；分别得到1龄期幼虫、2龄期幼虫、3龄期幼虫、4龄期幼虫：32只、15只、9只、3只；蛹2只；羽化雌性成虫1只。
最后需要说明的是：以上实施例不以任何形式限制本发明，对本领域技术人员来说，在本发明基础上，可以对其做一些修改和改进。因此，凡在不偏离本发明精神的基础上所做的任何修改，均属于本发明要求保护的范围之内。
Claims (5)
1.一种吸血蠓的实验室养殖系统，其特征在于：它由成虫饲养管（1），卵饲养皿（2），幼虫饲养皿（3），蛹饲养皿（4）四部分构成，所述成虫饲养管（1）为规格10×150mm的玻璃试管（11），玻璃试管（11）的外径为15mm，长度为150mm，玻璃试管（11）的底部垫有厚度10mm脱脂棉A（12），脱脂棉A（12）上侧覆盖一层跟管口同样直径的圆形滤纸A（13）；所述玻璃试管（11）顶部开口处设有脱脂棉B（14）；所述卵饲养皿（2）为规格60mm的培养皿A（21），培养皿A（21）的上盖（22）直径为64mm，下底直径为60mm，皿高为15mm，培养皿A（21）的底部垫厚度0.5cm脱脂棉C（23），脱脂棉C（23）上覆盖一层直径为65mm的圆形滤纸B（24）紧贴于杯底的侧边；所述幼虫饲养皿（3）为12孔细胞培养板（31）；所述蛹饲养皿（4）为规格60mm的培养皿B（41），培养皿B（41）的上盖（42）直径为64mm，下底直径为60mm，皿高为15mm，培养皿B（41）底部垫0.5cm厚脱脂棉D（43），脱脂棉D（43）上覆盖一层直径为65mm的圆形滤纸C（44）紧贴于杯底的侧边，滤纸C（44）上方覆盖半径30mm的半圆型透明塑料盖（45），塑料盖（45）上方放置同等大小的滤纸D（46）。
2.一种吸血蠓的实验室养殖方法，其特征在于：它包括如下步骤：
1）饱血吸血蠓采集后养殖：采集之前将养殖管底部滴入蒸馏水，直至脱脂棉A（12）及滤纸A（13）湿润即可，不可过多，避免水分过多导致成虫粘于滤纸A（13）上不能飞行；然后根据吸血蠓在当地的叮咬人畜的情况设置采集点，采集时将单侧的小腿露出引诱吸血蠓，一管一只成虫，待吸血蠓停落吸血时，将玻璃试管（11）管口的脱脂棉B（14）取下，玻璃试管（11）管口扣于吸血蠓处的皮肤上，待吸血蠓饱血后，用手指轻敲玻璃试管（11），使雌虫离开皮肤后，用手指堵住玻璃试管（11）管口最后使用脱脂棉B（14）封住管口；带回实验室后，每日在顶端脱脂棉B（14）滴入少量糖水喂食雌虫，并将此成虫饲养管（1）放入28 ± 1℃，光周期L: D = 12 : 12h 及 70 ± 10 % RH 的恒温箱中，每日观察产卵情况；
2）卵孵化出幼虫期的养殖：将产卵后的雌虫放入新的成虫饲养管中，然后将滤纸A用镊子轻轻取出，使用湿毛笔将卵挑入卵饲养皿（2）中央处，从侧边往卵养殖皿（2）中滴入蒸馏水，直至脱脂棉C（23）湿润，滤纸B（24）成饱和状态即可，并在卵周围滴入小球藻沉淀液，以便幼虫出生之后取食；然后将卵饲养皿（2）放入 27 ± 1 ℃，光周期 L : D = 12 : 12 h及 70 ± 10 % RH 的恒温箱中，每日适当补充水分，保持滤纸呈湿润状态，早晚观察卵颜色、孵化情况；
3）幼虫期间养殖：将孵化出的幼虫挑入幼虫饲养皿（3）中，12孔细胞培养板（31）中一孔一只幼虫，并在孔中加入三分之二的蒸馏水，并将此幼虫饲养皿（3）放入 27 ± 1 ℃，光周期( L : D = 12 : 12 h ) 及 70 ± 10 % RH 的恒温箱中，每日加入一滴球藻沉淀液补充营养，并适度补充水分，每日观察生长情况，直至其幼虫蜕皮化为蛹；
4）蛹期间养殖：待幼虫蜕皮化为蛹后，使用湿毛笔将蛹挑入蛹饲养皿（4）中，并放入恒温箱中羽化为成虫。
3.根据权利要求2所述吸血蠓的实验室养殖方法，其特征在于：所述糖水组成为白砂糖：水= 5：95。
4.根据权利要求2所述吸血蠓的实验室养殖方法，其特征在于：所述小球藻沉淀液的培育方式为，取蒸馏水750ml加入藻种250ml，并加入培养基4ml，放入锥形瓶中海棉封口后放入 27 ± 1℃，70 ± 10 % RH，24小时光照的恒温箱，10 到 12 天即可回收，然后置于阴暗处 48 h静待其沉淀；再将沉淀物集中至 15 ml 离心管中，置于 4℃冰箱中保存。
5.根据权利要求4所述吸血蠓的实验室养殖方法，其特征在于：所述培养基为SE培养基。
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