CN112521396B - 连翘脂素衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
连翘脂素衍生物及其制备方法和应用，第一步，溶解连翘脂素：将连翘脂素7 mg溶于5 mL干燥二氯甲烷；第二步，脱甲基反应：‑45℃~‑50℃下滴加三溴化硼‑二氯甲烷，所述三溴化硼为125 mg，二氯甲烷为5mL，升温至0℃，冰浴下反应1小时第三步，终止反应：用1mL甲醇淬灭反应，浓缩反应液；第四步，透析过滤：室温条件下，透析过滤反应液，所述透析液为乙腈:水5‑95%，0.1%，TFA流速为2mL/min，得到连翘脂素衍生物。本发明成功制备连翘脂素衍生物，产率高，且该衍生物对幽门螺杆菌的有明显的抑制作用，且作用专一，不容易产生耐药。
Description
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种连翘脂素衍生物及其制备方法和对幽门螺杆菌抑制方面的应用。
背景技术
幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，Hp)是胃炎、消化性溃疡和胃癌等疾病的重要病因，除此之外Hp还与多种胃肠外疾病，如牙周炎、继发性血小板减少性紫癜等相关。现在Hp感染了全球约半数以上的人口，发展中国家的感染率高于发达国家，一些不发达地区Hp感染率超过80％。目前，国内外根除Hp方案的主要包括标准三联、非铋剂四联(PPI+3种抗菌药物)、铋剂四联(PPI+铋剂+2种抗菌药物)等，抗菌药物主要包括甲硝唑、克拉霉素、左氧氟沙星等。但随着广泛的使用抗生素进行治疗，Hp耐药性越来越高，根除率也越来越低，严重威胁公众的健康安全。2017年世界卫生组织把对克拉霉素耐药的HP列为急需重点研发新型抗生素的12种病原体之一。因此，探索新型药物用于治疗是非常急迫的任务。从天然产物如植物、中药中筛选、改造、修饰活性成分是研发新型药物比较快速、有效的方法。连翘属于清热解毒类中药，对幽门螺杆菌等微生物有一定的抑制作用，但是活性成分并不清楚，不同的成分抗菌谱可能存在比较大的差异。我们在筛选连翘抗幽门螺杆菌的活性成分时发现连翘脂素的活性最佳，但是对幽门螺杆菌的抑制作用还有待提高。
本发明涉及制备的连翘脂素衍生物是全新的药物，未见有相同药物改造的报道，该药物对幽门螺杆菌有特异性、专一性的抑制作用，且抑菌作用比未改造的连翘脂素增强2～8倍，不容易产生耐药、安全性高，其用途属于首次公开。
发明内容
解决的技术问题：为了提升连翘脂素抗幽门螺杆菌活性，本发明提供一种连翘脂素衍生物及其制备方法和应用，制备的连翘脂素衍生物对耐药性和敏感性幽门螺杆菌均有较好的抑制作用，且抑制作用优于连翘脂素。
技术方案：一种连翘脂素衍生物的制备方法，按如下比例，具体步骤为：第一步，溶解连翘脂素：将连翘脂素7mg溶于5mL干燥二氯甲烷；第二步，脱甲基反应：-45℃～-50℃下滴加三溴化硼-二氯甲烷，所述三溴化硼为125mg，二氯甲烷为5mL，升温至0℃，冰浴下反应1小时；第三步，终止反应：用1mL甲醇淬灭反应，浓缩反应液；第四步，透析过滤：室温条件下，透析过滤反应液，所述透析液为乙腈:水5-95％，0.1％，TFA流速为2mL/min，得到连翘脂素衍生物。
优选的，上述脱甲基反应在-50℃下进行。
优选的，上述三溴化硼-二氯甲烷滴加速率为1滴/10秒。
上述制备方法制得的连翘脂素衍生物。
上述该连翘脂素衍生物在制备抑制幽门螺杆菌产品中的应用。
有益效果：首先，本发明成功制备连翘脂素衍生物，产率高；第二，本发明制备的连翘脂素衍生物用于抑制幽门螺杆菌的生长，且效果优于连翘脂素，而且其作用特异性高、毒副作用小、不易产生耐药，有效缓解幽门螺杆菌耐药性问题。
附图说明
图1为连翘脂素衍生物制备线路；
图2为连翘脂素衍生物傅里叶红外分析；3299cm-1酚羟基伸缩振动；1360cm-1酚羟基面内弯曲1283cm-1酚羟基C-O伸缩；1193cm-1C-O-C伸缩；884cm-1 770cm-1 585cm-1苯环特征峰。
图3为连翘脂素衍生物质谱鉴定；LCMS(ES+)Calc.for C18H18O6[M]+＝331,found:[M-18]+313.质谱为[M-OH]+。
图4为连翘脂素衍生物核磁鉴定(氢谱)；1H NMR(400MHz,CDCl3-MeOD)δ6.64(s,2H),6.54(d,J＝6.6Hz,2H),6.36(d,J＝6.6Hz,2H),4.02-3.97(m,4H),3.77(d,J＝12.4Hz,2H),2.65-2.50(m,2H)，氘带氯仿-氘带甲醇溶剂。
图5为连翘脂素衍生物核磁鉴定(碳谱)；13C NMR(101MHz,CDCl3-MeOD)δ144.99(C-O),144.00(C-O),143.57(C),133.04(CH),117.69(CH),115.51(CH),74.93(C-O),64.14(CH2),57.00(CH)，氘带氯仿-氘带甲醇溶剂。
图6为连翘脂素衍生物细胞毒性评价。
图7为连翘脂素衍生物耐药性评价。
具体实施方式
实施例1
第一步，溶解连翘脂素：将化合物1(即连翘脂素，1eq，7mg)溶于干燥二氯甲烷(5mL)；
第二步，脱甲基反应：零下30℃下慢慢滴加三溴化硼-二氯甲烷(5.0eq，125mg三溴化硼溶于5mL二氯甲烷)。升温至0℃，冰浴下反应1小时；
第三步，终止反应：用1mL甲醇淬灭反应，浓缩反应液；
第四步，透析过滤：用HPLC制备纯化(乙腈:水5-95％，流速：2mL/min，TFA：0.1％，室温)得到化合物2，白色固体粉末15mg，即获得连翘脂素衍生物，产率30％。
实施例2
第一步，溶解连翘脂素：将化合物1(即连翘脂素，1eq，7mg)溶于干燥二氯甲烷(5mL)；
第二步，脱甲基反应：零下50℃下慢慢滴加三溴化硼-二氯甲烷(5.0eq，125mg in5mL DCM)。升温至0℃，冰浴下反应1小时；
第三步，终止反应：用1mL甲醇淬灭反应，浓缩反应液；
第四步，透析过滤：用HPLC制备纯化(乙腈：水5-95％，流速：2mL/min，TFA：0.1％，室温)得到化合物2，白色固体粉末15mg，即获得连翘脂素衍生物，产率45％。
实施例3
第一步，溶解连翘脂素：将化合物1(即连翘脂素，1eq，7mg)溶于干燥二氯甲烷(5mL)；
第二步，脱甲基反应：零下45℃下慢慢滴加三溴化硼-二氯甲烷(5.0eq，125mg in5mL DCM)。升温至0℃，冰浴下反应2小时；
第三步，终止反应：用1.2mL甲醇淬灭反应，浓缩反应液；
第四步，透析过滤：用HPLC制备纯化(乙腈：水5-95％，流速：2mL/min，TFA：0.1％，室温)得到化合物2，白色固体粉末15mg，即获得连翘脂素衍生物，产率40％。
本发明连翘脂素衍生物对幽门螺杆菌的抑制作用通过如下实施例进一步详细的说明
1.材料
1.1样品
连翘脂素衍生物用实施例2制备，制备和鉴定结果如图1、2、3、4、5所示。
1.2菌株
(1)幽门螺杆菌菌株:标准菌株26695、菌株NSH57、MSD132、G27；临床甲硝唑耐药菌株、克拉霉素耐药菌株、左氧氟沙星耐药菌株、左氧氟沙星和甲硝唑耐药菌株、克拉霉素和甲硝唑耐药菌株、左氧氟沙星和克拉霉素及甲硝唑多重耐药菌株由右江民族医学院耐药微生物感染防治研究中心提供。
(2)非幽门螺杆菌：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯氏菌、白色念珠菌、阴沟肠杆菌、空肠弯曲杆菌、枯草芽孢杆菌、奇异变形杆菌、弯曲乳杆菌、嗜麦芽寡养单胞菌、摩氏摩根菌、新生隐球菌、热带假丝酵母菌、溶血葡萄球菌、醋杆菌、酿酒酵母菌、脆弱拟杆菌、长双歧杆菌、霍氏肠杆菌由右江民族医学院耐药微生物感染防治研究中心提供。
1.3主要培养基和试剂：哥伦比亚培养基、脑心浸液培养基、营养琼脂培养基、营养肉汤培养基、MH培养基、沙氏培养基、标准小牛血清。
1.4主要仪器：三气培养箱、离心机、酶标仪、电子天平等。
1.5耗材：EP管、Tip头、离心管等。
2.方法与结果
2.1微量稀释法检测连翘脂素衍生物对幽门螺杆菌的最低抑菌浓度(MIC，100μL体系)
(1)配备连翘脂素、连翘脂素衍生物4mg/mL。
(2)MIC板制备第一孔先加培养基173.6μL，再加6.4μL抗菌药物，倍比稀释至第7孔；第8孔不加药，保留90μL培养基，作为加菌不加药对照。
(3)菌液制备取固体平板上对数期生长的幽门螺杆菌用BHI培养基制作成菌悬液，调整浓度OD600为0.3(1×108CFU/mL)，稀释10倍，为1×107CFU/mL，备用。
(4)接种菌液取10μL加至第1-8孔(每孔菌液浓度约为1.0×106CFU/mL)。培养72h判断结果。第1孔至第6孔药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2μg/mL。
(5)结果判断以在小孔内完全抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。当阳性对照孔第7孔(即不含抗生素)内细菌明显生长和第8孔(无菌)不生长试验才有意义。当在微量稀释法出现单一的跳孔时，应记录抑制细菌生长的最高药物浓度。如出现多处跳孔，则不应报告结果，需重复试验。每个药物重复3次试验。
(6)结果：连翘脂素衍生物对幽门螺杆菌的抑制作用明显优于连翘及其成分，抗菌作用是未改造的连翘脂素的2～8倍，结果见表1。
表1连翘对幽门螺杆菌的最低抑菌浓度(μg/ml)
2.2微量稀释法检测连翘脂素衍生物对非幽门螺杆菌的最低抑菌浓度(MIC，100μL体系)
(1)配备连翘脂素衍生物4mg/mL。
(2)MIC板制备第一孔先加培养基173.6μL，再加6.4μL抗菌药物，倍比稀释至第7孔；第8孔不加药，保留90μL培养基，作为加菌不加药对照。
(3)菌液制备取固体平板上对数期生长的菌用相应培养基制作成菌悬液，细菌调整浓度OD600为0.3(1×108CFU/mL)，稀释100倍，为1×106CFU/mL，真菌调整浓度OD600为0.5(5×106CFU/mL)，稀释1000倍，为5×103CFU/mL，备用。
(4)接种菌液取10μL加至第1-8孔(每孔菌液浓度细菌约为1.0×105CFU/mL，真菌为5.0×102CFU/mL)。培养24h判断结果。第1孔至第6孔药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2μg/mL。
(5)结果判断以在小孔内完全抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。当阳性对照孔第7孔(即不含抗生素)内细菌明显生长和第8孔(无菌)不生长试验才有意义。当在微量稀释法出现单一的跳孔时，应记录抑制细菌生长的最高药物浓度。如出现多处跳孔，则不应报告结果，需重复试验。每个药物重复3次试验。
(6)结果：连翘脂素衍生物对非幽门螺杆菌抑制作用比较差，说明抗菌谱比较窄、专一性强，能特异性作用于幽门螺杆菌，结果见表2。
表2连翘脂素及其衍生物抗菌谱(MIC)
2.3连翘脂素衍生物的毒性检测
2.3.1细胞毒性检测
(1)制备Ges-1细胞悬液，调浓度为1×105。
(2)接种到96孔板中：每孔100μL，同样的样本做3个重复。
(3)37℃培养箱中培养24小时。
(4)加入连翘脂素衍生物10μL，工作浓度分别为300μg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、0μg/mL，设加药不加细胞组。
(5)37℃培养箱中培养24小时。
(6)加入10μL CCK8，轻敲混匀后培养4小时。
(7)测定450nm吸光度，根据公式计算存活率：细胞存活率＝[(As-Ab)]/[(Ac-Ab)]×100％，As为含有细胞培养基、药物、CCK-8孔，Ac为含有细胞培养基、CCK-8、没有药物孔，Ab为不含细胞和药物、只有培养基和CCK-8孔。根据存活率建立生存曲线。
(8)结果200μg/mL的连翘脂素衍生物对Ges-1细胞损伤不大，连翘脂素衍生物比连翘脂素的细胞毒性稍低，但无显著差异，如图6所示。
2.4连翘脂素衍生物的耐药性检测
(1)用幽门螺杆菌G27菌株进行检测连翘脂素衍生物的耐药性。首先检测甲硝唑和连翘脂素衍生物的MIC分别为2μg/mL、32μg/mL，用1/4MIC浓度进行诱导，每3天检测一次，共诱导24天。诱导浓度随着MIC变化而调整，如甲硝唑MIC变为16μg/mL时，诱导的浓度则调为4μg/mL。
(2)结果诱导24天后，甲硝唑和连翘脂素耐药明显，MIC分别增长了128倍和16倍；连翘脂素衍生物MIC无变化，没有产生耐药。
Claims (1)
1.连翘脂素衍生物
在制备抑制幽门螺杆菌产品中的应用。
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Citations (1)
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|---|---|---|---|---|
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Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| Antibacterial and Antioxidant Activities of Quercetin Oxidation Products from Yellow Onion (Allium cepa) Skin;FREDDY A. RAMOS 等;《J. Agric. Food Chem.》;20061231;第54卷;第3551-3557页 * |
| Enzymatic Characterization and Inhibitor Discovery of a New Cystathionine γ-Synthase from Helicobacter pylori;Yunhua Kong 等;《J. Biochem.》;20081231;第143卷;第59–68页 * |
| Synthesis and Dopaminergic Binding of 2-Aryldopamine Analogues: Phenethylamines, 3-Benzazepines, and 9-(Aminomethyl)fluorenes;David L. Ladd 等;《Journal of Medicinal Chemistry》;19861231;第29卷(第10期);第1904-1912页 * |
| Synthesis and Pharmacology of a Novel κ Opioid Receptor (KOR) Agonist with a 1,3,5-Trioxazatriquinane Skeleton;Shigeto Hirayama 等;《ACS Med. Chem. Lett.》;20140726;第5卷;第868-872页 * |
| 连翘脂素去甲基衍生物的合成;樊宏宇;《合成化学》;20171231;第25卷(第10期);第851-855页 * |
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