CN112493204B - 一种中华鳖的选育方法 - Google Patents
一种中华鳖的选育方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112493204B CN112493204B CN202011365327.0A CN202011365327A CN112493204B CN 112493204 B CN112493204 B CN 112493204B CN 202011365327 A CN202011365327 A CN 202011365327A CN 112493204 B CN112493204 B CN 112493204B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- phage
- chinese
- turtle
- culture
- seedlings
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000009395 breeding Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 241001194850 Pelodiscus Species 0.000 title claims description 52
- 241000736919 Pelodiscus sinensis Species 0.000 claims abstract description 39
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims abstract description 26
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 25
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 21
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 21
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 19
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 9
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 9
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims abstract description 9
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 7
- 230000036541 health Effects 0.000 claims description 25
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 23
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 claims description 16
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 13
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 claims description 12
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 11
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 11
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 claims description 10
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 claims description 10
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 claims description 9
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 claims description 9
- ZKQDCIXGCQPQNV-UHFFFAOYSA-N Calcium hypochlorite Chemical compound [Ca+2].Cl[O-].Cl[O-] ZKQDCIXGCQPQNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 claims description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 8
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 claims description 8
- 241000607594 Vibrio alginolyticus Species 0.000 claims description 8
- 241000607272 Vibrio parahaemolyticus Species 0.000 claims description 8
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 claims description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 8
- 101150104734 ldh gene Proteins 0.000 claims description 8
- 239000004571 lime Substances 0.000 claims description 8
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 8
- 241000589771 Ralstonia solanacearum Species 0.000 claims description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 6
- 208000014674 injury Diseases 0.000 claims description 6
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 5
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 claims description 5
- 208000035240 Disease Resistance Diseases 0.000 claims description 5
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 claims description 5
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 claims description 5
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims description 5
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 claims description 5
- 241000192001 Pediococcus Species 0.000 claims description 5
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 claims description 5
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 claims description 5
- 241000192132 Leuconostoc Species 0.000 claims description 4
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 claims description 4
- 241000318927 Shrimp white spot syndrome virus Species 0.000 claims description 4
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 4
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 4
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 claims description 4
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 4
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 3
- 241000232299 Ralstonia Species 0.000 claims description 2
- 244000052613 viral pathogen Species 0.000 claims description 2
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 claims 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 claims 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 3
- ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N Calcium oxide Chemical compound [Ca]=O ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 5
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 5
- 235000012255 calcium oxide Nutrition 0.000 description 4
- 239000000292 calcium oxide Substances 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 235000019738 Limestone Nutrition 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 241000235342 Saccharomycetes Species 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 239000006028 limestone Substances 0.000 description 3
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 3
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- CPKVUHPKYQGHMW-UHFFFAOYSA-N 1-ethenylpyrrolidin-2-one;molecular iodine Chemical compound II.C=CN1CCCC1=O CPKVUHPKYQGHMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000153 Povidone-iodine Polymers 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 239000003640 drug residue Substances 0.000 description 1
- 238000011841 epidemiological investigation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 238000009400 out breeding Methods 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229960001621 povidone-iodine Drugs 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/02—Breeding vertebrates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F3/00—Biological treatment of water, waste water, or sewage
- C02F3/34—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F3/00—Biological treatment of water, waste water, or sewage
- C02F3/34—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
- C02F3/348—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used characterised by the way or the form in which the microorganisms are added or dosed
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
- C02F2103/00—Nature of the water, waste water, sewage or sludge to be treated
- C02F2103/20—Nature of the water, waste water, sewage or sludge to be treated from animal husbandry
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Environmental & Geological Engineering (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Hydrology & Water Resources (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Water Supply & Treatment (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种中华鳖的选育方法，采用SNP单核苷酸多态性分析确定具有优良性能的中华鳖苗种。对中华鳖苗种进行无特定病毒性病原检测，筛选出不带有特定病毒的中华鳖苗种；对养殖池塘进行消毒处理，使其符合养殖要求；制备多细菌敏感型噬菌体微生态制剂；在养殖过程中定期撒入多细菌敏感型噬菌体微生态制剂；定期对养殖水水质进行检测，确定水质情况，根据需要调整多细菌敏感型噬菌体微生态制剂撒入频率。本发明的选育方法可操作性强，具有普适性和经济性。
Description
技术领域
本发明涉及一种水产品的选育方法，具体地，涉及一种中华鳖的选育方法。
背景技术
中华鳖为生活中常见的水产品，广泛分布在中国、日本、越南北部、韩国，营养丰富。随着人民生活水平的提高，野生中华鳖的产量已不能满足日常需求，因此越来越多的中华鳖的来源是各大养殖公司。
诸多养殖公司为了增加养殖规模，采用温室化、集约化养殖，其养殖密度很大，在养殖过程中常会滋生细菌，使得中华鳖的产量降低，且出产的中华鳖品质不如野生中华鳖，随后养殖人员研发出各类消毒除菌剂，如用0.3～0.5ppm聚维酮碘进行全池泼洒，或用1ppm戊二醛进行全池泼洒，养殖初期的消毒效果比较显著。
如在前些年，湖北地区发生过中华鳖养殖场暴发群体死亡,发病高峰期死亡率可达100％。研究人员针对湖北发生中华鳖暴发性死亡症的主养地区进行流行病情况调查,对病原菌进行分离鉴定，通过研究病原菌对中华鳖的致病力和耐药性,分析不同菌株的耐药差异性，发现中华鳖身上的致病菌已产生耐药性，导致常用的化学消毒剂已不再管用。
后来养殖人员意识到抗药性的存在后，逐渐采用生态菌剂进行养殖防控，如采用定期喷洒EM菌等手段，并在饲料中添加维生素C、大蒜素、免疫多糖等成分，提高中华鳖的免疫力，取得了一定效果，但效果仍然没有达到理想状态。
根据国家标准《NY5071-2002无公害食品渔用药物使用准则》和《NY5070-2002无公害食品水产品中渔药残留限量》，养殖中能够使用的消毒药物越来越被限制，中华鳖选育、养殖行业越来越需要能够避免耐药性的出现，同时又能够保证中华鳖养殖水体质量的方式。
中华鳖的选育过程，之前选择的方式多为代代选择优良性状苗种，有时候耗费较多时间仍不能选育出稳定的优良品系，选育的标准多采用肉眼观察，标准不统一，多是技术人员觉得个大、健康即可。
以上问题均未实际解决中华鳖选育实际存在的问题，急需要有有效方式克服现有技术中存在的问题。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于围绕SNP单核苷酸多态性分析技术作为突破口，结合无特定病毒性病原检测技术、中华鳖健康状况及体重进行评级、噬菌体微生态制剂制备技术、益生菌菌剂撒入等，提供一种中华鳖的选育方法，可操作性强，具有普适性和经济性。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：一种中华鳖的选育方法，包括以下步骤：
(1)利用SNP单核苷酸多态性分析影响中华鳖性状的多个基因片段，筛选出具有抗逆性优势、健康评级优势的中华鳖苗种；
(2)对步骤(1)中得到的中华鳖苗种进行无特定病毒性病原检测，筛选出不带有特定病毒的中华鳖苗种；
(3)对养殖池塘进行消毒处理，使其符合养殖要求；
(4)制备多细菌敏感型噬菌体微生态制剂；
(5)将步骤(2)获得的中华鳖置于步骤(3)的池塘中，并在养殖过程中定期撒入步骤(4)制备得到的多细菌敏感型噬菌体微生态制剂；
(6)定期对养殖水水质进行检测，确定水质情况，根据需要调整多细菌敏感型噬菌体微生态制剂撒入频率。
更进一步地，所述步骤(1)的步骤如下：
(1.1)筛选出中华鳖苗种中个大、体壮、大小相差不多的足够数量苗种，将苗种表面进行消毒处理，置于养殖池塘养殖至一定时间后捕捉，并对每只中华鳖进行编号处理；
(1.2)每只苗种的裙边取少许组织提取DNA，选取LDH基因作为SNP位点筛选对象；根据基因序列设计引物，然后利用PCR扩增出每只苗种的LDH基因片段保存待用；选择引物为SEQ ID NO.1序列和SEQ ID NO.2序列；
(1.3)对每只中华鳖健康状况及体重进行评级，所述健康评级标准D为：评估中华鳖表面有害菌指标A及外伤B，对每只中华鳖进行称重C，按照公式D＝-2A-0.5B+3C进行计算，按照健康评级标准D从大到小排列；
(1.4)通过核查健康评级D值较大的中华鳖SNP多态位点确定起突变点的位置，筛选出较优苗种。
更进一步地，所述步骤(1.1)中筛选出的中华鳖苗种体重为50-150g大小，其表面采用5％的食盐水进行消毒处理；所述步骤(1.2)中的SEQ ID NO.1序列和SEQ ID NO.2核苷酸序列5'-3'分别为：ATATGCCTCGAGCGTCATGGTGATAT，TGAAACTCCAGTTAAGGTCTTATAGAACT。
更进一步地，所述步骤(2)的筛选病原检测对象为WSSV、CMNV、TSV。
进一步地，对所述池塘的消毒处理方式为：
(3.1)采用生石灰石灰乳对池塘进行泼洒处理，每亩用量为50-60kg，所述石灰乳的浓度为25％-27％；
(3.2)石灰石消毒后，采用漂白粉进行处理，每亩池塘使用1.7kg；
(3.3)测量水体pH值，待pH值在中性左右后加水至适当水位。
进一步地，所述噬菌体微生态制剂为三种噬菌体混合物，包括噬菌体选自副溶血性弧菌噬菌体、葡萄球菌噬菌体、沙门氏菌噬菌体、溶藻弧菌噬菌体、大肠杆菌噬菌体、茄科雷尔氏菌噬菌体中的三种。
更进一步地，所述三种噬菌体混合物为副溶血性弧菌噬菌体、葡萄球菌噬菌体、沙门氏菌噬菌体，三者比例为5-10:20-25:2-3，优选地，三者比例为5:21:3。
更进一步地，所述三种噬菌体混合物为溶藻弧菌噬菌体、大肠杆菌噬菌体、茄科雷尔氏菌噬菌体，三者比例为2-4:20-30:1-2，优选地，三者比例为3:30:1。
更进一步地，所述噬菌体微生态制剂的撒入频率为每月至少3次。
更进一步地，所述步骤(3)中病毒的检测方法为基于病毒mRNA的qRT-PCR监测的病毒灭活快速检测方法，在噬菌体微生态制剂撒入间隙还进行益生菌菌剂的撒入，所述益生菌菌剂选自芽孢杆菌、乳杆菌属、乳球菌、肠球菌、片球菌、明珠菌、梭菌属、酵母菌，配比为2-3:10-18:20-25:4-8:4-7:40-45:20-25:3-6，优选地，配比为3:12:23:5:6:45:20:5。
更进一步地，所述噬菌体均选自商业公司或研究机构的成品；所述抗逆性状包括抗病性、抗寒性、抗低氧性，选择抗逆性、健康评级标准在前50％的中华鳖苗种。
利用SNP单核苷酸多态性分析技术分析出多个位点变化，其中抗逆性较好的中华鳖多在490-493位点为ATG，495-497位点为GCC(5’-3’)。
本发明通过实验多种评估方式，最终得到统一健康评价标准，采用该标准能够避免技术人员个人主观意见所带来的标准不一致问题，实现了高效评价，提高了选育效率。
通过对中华鳖体表的致病菌的筛选，最终筛选出对中华鳖伤害较大、出现频率较大的致病菌，基于这些致病菌的种类，设置噬菌体微生态制剂种类，并通过实验确定其比例。
克服采用单一消毒、换水的缺点，采用撒入噬菌体微生态制剂，创造性地，结合益生菌撒入，全方位立体地改善水质。相比较现有技术，本发明所采用的选育方法，选育效果、养殖效果大为改善，产量大幅提高。
具体实施方式
实施例1
一种中华鳖的选育方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)利用SNP单核苷酸多态性分析影响中华鳖性状的多个基因片段，筛选出具有抗逆性优势、健康评级优势的中华鳖苗种；
(2)对步骤(1)中得到的中华鳖苗种进行无特定病毒性病原检测，筛选出不带有特定病毒的中华鳖苗种；
(3)对养殖池塘进行消毒处理，使其符合养殖要求；
(4)制备多细菌敏感型噬菌体微生态制剂；
(5)将步骤(2)获得的中华鳖置于步骤(3)的池塘中，并在养殖过程中定期撒入步骤(4)制备得到的多细菌敏感型噬菌体微生态制剂；
(6)定期对养殖水水质进行检测，确定水质情况，根据需要调整多细菌敏感型噬菌体微生态制剂撒入频率。
所述步骤(1)的步骤如下：
(1.1)筛选出中华鳖苗种中个大、体壮、大小相差不多的足够数量苗种，将苗种表面进行消毒处理，置于养殖池塘养殖至一定时间后捕捉，并对每只中华鳖进行编号处理；
(1.2)每只苗种的裙边取少许组织提取DNA，选取LDH基因作为SNP位点筛选对象；根据基因序列设计引物，然后利用PCR扩增出每只苗种的LDH基因片段保存待用；选择引物为SEQ ID NO.1序列和SEQ ID NO.2序列；
(1.3)对每只中华鳖健康状况及体重进行评级，所述健康评级标准D为：评估中华鳖表面有害菌指标A及外伤B，对每只中华鳖进行称重C，按照公式D＝-2A-0.5B+3C进行计算，按照健康评级标准D从大到小排列；
(1.4)通过核查健康评级D值较大的中华鳖SNP多态位点确定起突变点的位置，筛选出较优苗种。
所述步骤(1.1)中筛选出的中华鳖苗种体重为50大小，其表面采用5％的食盐水进行消毒处理；所述步骤(1.2)中的SEQ ID NO.1序列和SEQ ID NO.2核苷酸序列5'-3'分别为：ATATGCCTCGAGCGTCATGGTGATAT，TGAAACTCCAGTTAAGGTCTTATAGAACT。
所述步骤(2)的筛选病原检测对象为WSSV、CMNV、TSV。
对所述池塘的消毒处理方式为：
(3.1)采用生石灰石灰乳对池塘进行泼洒处理，每亩用量为50-60kg，所述石灰乳的浓度为25％％；
(3.2)石灰石消毒后，采用漂白粉进行处理，每亩池塘使用1.7kg；
(3.3)测量水体pH值，待pH值在中性左右后加水至适当水位。
所述噬菌体微生态制剂为三种噬菌体混合物，包括噬菌体选自副溶血性弧菌噬菌体、葡萄球菌噬菌体、沙门氏菌噬菌体、溶藻弧菌噬菌体、大肠杆菌噬菌体、茄科雷尔氏菌噬菌体中的三种。
所述三种噬菌体混合物为副溶血性弧菌噬菌体、葡萄球菌噬菌体、沙门氏菌噬菌体，三者比例为5:20:2。
所述三种噬菌体混合物为溶藻弧菌噬菌体、大肠杆菌噬菌体、茄科雷尔氏菌噬菌体，三者比例为2:20:1。
所述噬菌体微生态制剂的撒入频率为每月至少3次。
所述步骤(3)中病毒的检测方法为基于病毒mRNA的qRT-PCR监测的病毒灭活快速检测方法，在噬菌体微生态制剂撒入间隙还进行益生菌菌剂的撒入，所述益生菌菌剂选自芽孢杆菌、乳杆菌属、乳球菌、肠球菌、片球菌、明珠菌、梭菌属、酵母菌，配比为3:12:23:5:6:45:20:5。
所述抗逆性状包括抗病性、抗寒性、抗低氧性，选择抗逆性、健康评级标准在前50％的中华鳖苗种。
实施例2
一种中华鳖的选育方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)利用SNP单核苷酸多态性分析影响中华鳖性状的多个基因片段，筛选出具有抗逆性优势、健康评级优势的中华鳖苗种；
(2)对步骤(1)中得到的中华鳖苗种进行无特定病毒性病原检测，筛选出不带有特定病毒的中华鳖苗种；
(3)对养殖池塘进行消毒处理，使其符合养殖要求；
(4)制备多细菌敏感型噬菌体微生态制剂；
(5)将步骤(2)获得的中华鳖置于步骤(3)的池塘中，并在养殖过程中定期撒入步骤(4)制备得到的多细菌敏感型噬菌体微生态制剂；
(6)定期对养殖水水质进行检测，确定水质情况，根据需要调整多细菌敏感型噬菌体微生态制剂撒入频率。
所述步骤(1)的步骤如下：
(1.1)筛选出中华鳖苗种中个大、体壮、大小相差不多的足够数量苗种，将苗种表面进行消毒处理，置于养殖池塘养殖至一定时间后捕捉，并对每只中华鳖进行编号处理；
(1.2)每只苗种的裙边取少许组织提取DNA，选取LDH基因作为SNP位点筛选对象；根据基因序列设计引物，然后利用PCR扩增出每只苗种的LDH基因片段保存待用；选择引物为SEQ ID NO.1序列和SEQ ID NO.2序列；
(1.3)对每只中华鳖健康状况及体重进行评级，所述健康评级标准D为：评估中华鳖表面有害菌指标A及外伤B，对每只中华鳖进行称重C，按照公式D＝-2A-0.5B+3C进行计算，按照健康评级标准D从大到小排列；
(1.4)通过核查健康评级D值较大的中华鳖SNP多态位点确定起突变点的位置，筛选出较优苗种。
所述步骤(1.1)中筛选出的中华鳖苗种体重为50-150g大小，其表面采用5％的食盐水进行消毒处理；所述步骤(1.2)中的SEQ ID NO.1序列和SEQ ID NO.2核苷酸序列5'-3'分别为：ATATGCCTCGAGCGTCATGGTGATAT，TGAAACTCCAGTTAAGGTCTTATAGAACT。
所述步骤(2)的筛选病原检测对象为WSSV、CMNV、TSV。
对所述池塘的消毒处理方式为：
(3.1)采用生石灰石灰乳对池塘进行泼洒处理，每亩用量为60kg，所述石灰乳的浓度为25％-27％；
(3.2)石灰石消毒后，采用漂白粉进行处理，每亩池塘使用1.7kg；
(3.3)测量水体pH值，待pH值在中性左右后加水至适当水位。
所述噬菌体微生态制剂为三种噬菌体混合物，包括噬菌体选自副溶血性弧菌噬菌体、葡萄球菌噬菌体、沙门氏菌噬菌体、溶藻弧菌噬菌体、大肠杆菌噬菌体、茄科雷尔氏菌噬菌体中的三种。
所述三种噬菌体混合物为副溶血性弧菌噬菌体、葡萄球菌噬菌体、沙门氏菌噬菌体，三者比例为5:21:3。
所述三种噬菌体混合物为溶藻弧菌噬菌体、大肠杆菌噬菌体、茄科雷尔氏菌噬菌体，三者比例为4:30:2。
所述噬菌体微生态制剂的撒入频率为每月至少3次。
所述步骤(3)中病毒的检测方法为基于病毒mRNA的qRT-PCR监测的病毒灭活快速检测方法，在噬菌体微生态制剂撒入间隙还进行益生菌菌剂的撒入，所述益生菌菌剂选自芽孢杆菌、乳杆菌属、乳球菌、肠球菌、片球菌、明珠菌、梭菌属、酵母菌，配比为2:10:22:5:6:42:23:4。
所述抗逆性状包括抗病性、抗寒性、抗低氧性，选择抗逆性、健康评级标准在前50％的中华鳖苗种。
通过对比仅采用生石灰、漂白粉消毒的化学消毒方式、采用芽孢杆菌、乳杆菌属、乳球菌、肠球菌、片球菌、明珠菌、梭菌属、酵母菌组成的益生菌菌剂的方式，本发明的方式的致病菌减少了25％左右，产量增加了30％左右，特别地，本发明所确定的健康选育标准统一了技术人员的主观判断，减少了选育工作上的劳动量。
需要说明的是，中华鳖表面有害菌指标A采用的是体表单位面积的菌数，外伤B采用的指标为外伤面积占身体体表面积的比例。
需要进一步说明的是，所述抗逆性筛选采用了抗病性、抗寒性、抗低氧性胁迫试验，相比较现有技术，成活率分别提高了至少20％、15％、22％。
序列表
<110> 温岭市万融特种生态养殖有限公司
<120> 一种中华鳖的选育方法
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 26
<212> DNA
<213> (人工序列)
<400> 1
atatgcctcg agcgtcatgg tgatat 26
<210> 2
<211> 29
<212> DNA
<213> (人工序列)
<400> 2
tgaaactcca gttaaggtct tatagaact 29
Claims (4)
1.一种中华鳖的选育方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)利用SNP单核苷酸多态性分析影响中华鳖性状的多个基因片段，筛选出具有抗逆性、健康评级优势的中华鳖苗种；
(2)对步骤(1)中得到的中华鳖苗种进行无特定病毒性病原检测，筛选出不带有特定病毒的中华鳖苗种；
(3)对养殖池塘进行消毒处理，使其符合养殖要求；
(4)制备多细菌敏感型噬菌体微生态制剂；
(5)将步骤(2)获得的中华鳖置于步骤(3)消毒处理后的池塘中，并在养殖过程中定期撒入步骤(4)制备得到的多细菌敏感型噬菌体微生态制剂；
(6)定期对养殖水水质进行检测，确定水质情况，根据需要调整多细菌敏感型噬菌体微生态制剂撒入频率；
所述步骤(1)的步骤如下：
(1.1)筛选出中华鳖苗种中个大、体壮、大小相差不多的足够数量苗种，将苗种表面进行消毒处理，置于养殖池塘养殖至一定时间后捕捉，并对每只中华鳖进行编号处理；
(1.2)每只苗种的裙边取少许组织提取DNA，选取LDH基因作为SNP位点筛选对象；根据基因序列设计引物，然后利用PCR扩增出每只苗种的LDH基因片段保存待用；
(1.3)对每只中华鳖健康状况及体重进行评级，所述健康评级的标准D为：评估中华鳖表面有害菌指标A及外伤B，对每只中华鳖进行称重C，按照公式D＝-2A-0.5B+3C进行计算，按照健康评级的标准D从大到小排列；
(1.4)通过核查抗逆性状好的中华鳖SNP多态位点确定突变点的位置，筛选出较优苗种；所述抗逆性状包括抗病性、抗寒性、抗低氧性，选择具有抗逆性、健康评级的标准D在前50％的中华鳖苗种；
所述步骤(1.1)中筛选出的中华鳖苗种体重为50-150g大小，其表面采用5％的食盐水进行消毒处理；
所述步骤(1.2)中采用的扩增引物SEQ ID NO.1序列核苷酸序列5'-3'为ATATGCCTCGAGCGTCATGGTGATAT，和SEQ ID NO.2序列核苷酸序列5'-3'为TGAAACTCCAGTTAAGGTCTTATAGAACT；
所述步骤(2)的筛选病原检测对象为WSSV、CMNV、TSV；所述噬菌体微生态制剂为三种噬菌体混合物，包括的噬菌体选自副溶血性弧菌噬菌体、葡萄球菌噬菌体、沙门氏菌噬菌体、溶藻弧菌噬菌体、大肠杆菌噬菌体、茄科雷尔氏菌噬菌体中的三种；所述三种噬菌体混合物选择为副溶血性弧菌噬菌体、葡萄球菌噬菌体、沙门氏菌噬菌体时，三者比例为5-10:20-25:2-3；所述三种噬菌体混合物选择为溶藻弧菌噬菌体、大肠杆菌噬菌体、茄科雷尔氏菌噬菌体时，三者比例为2-4:20-30:1-2。
2.如权利要求1所述的一种中华鳖的选育方法，其特征在于，对所述池塘的消毒处理方式为：(3.1)采用石灰乳对池塘进行泼洒处理，每亩用量为50-60kg，所述石灰乳的浓度为25％-27％；(3.2)石灰乳消毒后，采用漂白粉进行处理，每亩池塘使用1.7kg；(3.3)测量水体pH值，待pH值在中性后加水至适当水位。
3.如权利要求1所述的一种中华鳖的选育方法，其特征在于，所述噬菌体微生态制剂的撒入频率为每月至少3次。
4.如权利要求1所述的一种中华鳖的选育方法，其特征在于，所述步骤(2)中无特定病毒性病原检测的方法为基于病毒mRNA的qRT-PCR监测的病毒灭活快速检测方法，在噬菌体微生态制剂撒入间隙还进行益生菌菌剂的撒入，所述益生菌菌剂选自芽孢杆菌、乳杆菌属、乳球菌、肠球菌、片球菌、明珠菌、梭菌属、酵母菌，配比为2-3:10-18:20-25:4-8:4-7:40-45:20-25:3-6。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011365327.0A CN112493204B (zh) | 2020-11-28 | 2020-11-28 | 一种中华鳖的选育方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202011365327.0A CN112493204B (zh) | 2020-11-28 | 2020-11-28 | 一种中华鳖的选育方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112493204A CN112493204A (zh) | 2021-03-16 |
| CN112493204B true CN112493204B (zh) | 2022-04-15 |
Family
ID=74967406
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202011365327.0A Active CN112493204B (zh) | 2020-11-28 | 2020-11-28 | 一种中华鳖的选育方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112493204B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104450629A (zh) * | 2014-09-28 | 2015-03-25 | 浙江省淡水水产研究所 | 一株中华鳖气单胞菌噬菌体及其应用 |
| CN107475407A (zh) * | 2017-09-19 | 2017-12-15 | 湖南农业大学 | 一种检测中华鳖igfbp1基因片段中与生长相关单核苷酸位点的试剂盒及应用 |
-
2020
- 2020-11-28 CN CN202011365327.0A patent/CN112493204B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104450629A (zh) * | 2014-09-28 | 2015-03-25 | 浙江省淡水水产研究所 | 一株中华鳖气单胞菌噬菌体及其应用 |
| CN107475407A (zh) * | 2017-09-19 | 2017-12-15 | 湖南农业大学 | 一种检测中华鳖igfbp1基因片段中与生长相关单核苷酸位点的试剂盒及应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 养殖中华鳖肠道中芽孢杆菌的分离鉴定及其噬菌体的分离和性质分析;王志丽等;《水产科学》;20120715(第07期);419-424 * |
| 噬菌蛭弧菌微生态制剂在动物养殖中的应用;秦生巨等;《兽药与饲料添加剂》;20080620(第03期);35-36 * |
| 汉江中游"温棚标粗+池塘混养"南美白对虾纯淡水生态养殖技术;孔江红等;《水产养殖》;20200801(第08期);50-52、57 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN112493204A (zh) | 2021-03-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Raoul des Essarts et al. | Biocontrol of the potato blackleg and soft rot diseases caused by Dickeya dianthicola | |
| Opelt et al. | Diversity and antagonistic potential of bacteria associated with bryophytes from nutrient-poor habitats of the Baltic Sea Coast | |
| Valderrama et al. | An ecological perspective of Listeria monocytogenes biofilms in food processing facilities | |
| Guyard-Nicodème et al. | Characterization of Campylobacter spp. transferred from naturally contaminated chicken legs to cooked chicken slices via a cutting board | |
| Jaffrès et al. | Study of the bacterial ecosystem in tropical cooked and peeled shrimps using a polyphasic approach | |
| CN107686832A (zh) | 新的副溶血性弧菌噬菌体及其组合物、制备方法和应用 | |
| Koralage et al. | Prevalence and molecular characteristics of Vibrio spp. isolated from preharvest shrimp of the North Western Province of Sri Lanka | |
| Leoni et al. | Occurrence of Arcobacter spp. and correlation with the bacterial indicator of faecal contamination Escherichia coli in bivalve molluscs from the Central Adriatic, Italy | |
| CN107338198A (zh) | 一种植物乳杆菌及其应用 | |
| Huang et al. | Distribution of Karlodinium veneficum in the coastal region of Xiangshan Bay in the East China Sea, as detected by a real-time quantitative PCR assay of ribosomal ITS sequence | |
| Kuehl et al. | The roles of temperature and light in black band disease (BBD) progression on corals of the genus Diploria in Bermuda | |
| Gherbawy et al. | Identification of Fusarium spp. associated with potato tubers in upper Egypt by morphological and molecular characters | |
| Schill et al. | Endozoicomonas dominates the gill and intestinal content microbiomes of Mytilus edulis from Barnegat Bay, New Jersey | |
| Zhang et al. | Composition and distribution of bacterial communities and antibiotic resistance genes in fish of four mariculture systems | |
| Evans et al. | Effect of emersion on the mortality of Pacific oysters (Crassostrea gigas) infected with Ostreid herpesvirus-1 (OsHV-1) | |
| Tong et al. | Impact of oyster culture on coral reef bacterioplankton community composition and function in Daya Bay, China | |
| CN112493204B (zh) | 一种中华鳖的选育方法 | |
| Biswas et al. | Isolation and characterization of Escherichia coli in ready-to-eat foods vended in Islamic University, Kushtia | |
| Wang et al. | Epidemiological characteristics of asymptomatic Norovirus infection in a population from oyster (Ostrea rivularis Gould) farms in southern China | |
| Moore et al. | Diversity of the microflora of edible macroalga (Palmaria palmata) | |
| Froelich et al. | Vibrio vulnificus integration into marine aggregates and subsequent uptake by the oyster, Crassostrea virginica | |
| Sabdono et al. | Antagonistic activity of bacteria isolated from coral Acropora sp of Karimunjawa Islands, Indonesia against Acroporid White Syndrome | |
| XU et al. | Bacterial community in different populations of rice brown planthopper Nilaparvata lugens (Stål) | |
| Hossain et al. | Bacteriophage and non-pathogenic Vibrio to control diseases in shrimp aquaculture | |
| MirAli et al. | The genus Crataegus L.: An ecological and molecular study |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |