CN112461794B - 长程spr传感器及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种等离子体耦合和双抗夹心免疫共同改性的长程SPR传感器及其制备方法，所述传感器包括侧边抛磨的光子晶体光纤，抛磨后的所述光纤的表面形成U型抛磨区，在所述光子晶体光纤的抛磨面上，由下至上依次包括：无损介质匹配层，贵金属层，偶联剂层，捕获抗体层，抗原层和检测抗体层。本发明利用来源于银膜的长程表面等离子体波和来源于纳米银颗粒的局域表面等离子体波之间的近场电子耦合增强传感器表面电场强度，显著提升了传感器灵敏度，降低了传感器检测限；利用双抗夹心免疫，进一步提高了传感器表面平均折射率变化，从而进一步降低传感器检测限。

Description

长程SPR传感器及其制备方法

技术领域

本发明涉及SPR生物传感器领域，具体涉及一种等离子体耦合和双抗夹心免疫共同改性的长程SPR传感器。

背景技术

基于表面等离子体共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)的光纤生物传感器具有体积小、抗电磁干扰、灵敏度高、免标记检测等优良的传感特性，在免疫分析、物理化学和疾病检测等领域得到了广泛的研究。然而，传统的光纤SPR传感器进一步降低生物分子检测极限的能力有限，这是由于传统表面等离子体波穿透较浅，导致无法有效检测到生物大分子的折射率变化。此外，传统光纤SPR传感器共振光谱中共振谷较宽的半峰宽和低品质因子严重制约了检测精度和检测限。因此，提高SPR传感器性能的方法得到了越来越多的研究。

为了提升传感器性能，目前主要有两种实现方法。第一种是改变SPR传感器膜层结构。例如，在传统SPR传感器的基础上，在基底与金属膜之间增加一层与待测物折射率相近的无损介质匹配层构建长程SPR传感器，这样可以有效减少表面等离子体波的损耗，从而降低传感器半峰宽，提升传感器检测精度。第二种方法是在SPR传感器表面修饰纳米金属材料或者具有大的复介电常数的低维纳米材料。其中，纳米金属材料与SPR传感器中金属层之间的等离子体耦合能够形成局域电磁场增强，从而显著提升传感器灵敏度，降低传感器检测限。

CN109085140A公开了一种高灵敏度光纤SPR生物传感器，它的基本原理是表面等离子体共振，其利用金膜与金纳米粒子之间的耦合效应从而提高传感器的检测灵敏度。然而这种方式中的金纳米颗粒修饰在金膜上侧，使用时极易脱落。为避免这种情况的发生，SPR传感器需要偶联剂链接纳米金粒，导致传感器的性能受到偶联剂的影响，影响检测性能和检测结果的准确性。

为此，需要一款结构简单，检测结果准确性高的光纤SPR生物传感器。

发明内容

为了解决现有光纤SPR生物传感器检测精度和灵敏度较低，检测限高的问题，本发明提出了一种等离子体耦合和双抗夹心免疫共同改性的长程SPR传感器。本发明利用对温度变化不敏感的光子晶体光纤构建传感器使得开发的传感器的测量结果具有更高的准确性；利用折射率接近低浓度生物溶液的有机含氟聚合物构建长程SPR传感器，有效降低了传感器半峰宽，提升了传感器检测精度；利用来源于银膜的长程表面等离子体波和来源于纳米银颗粒的局域表面等离子体波之间的近场电子耦合增强传感器表面电场强度，显著提升了传感器灵敏度，降低了传感器检测限；利用双抗夹心免疫，即利用两种抗体与抗原结合并相互作用，进一步提高了传感器表面平均折射率变化，从而进一步降低传感器检测限。

为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

一种长程SPR传感器，包括光子晶体光纤，所述光子晶体光纤的两端分别熔接多模光纤；其中，所述光子晶体光纤为侧边抛磨的光子晶体光纤，抛磨后的所述光纤的表面形成U型抛磨区，所述U型抛磨区的底壁为抛磨面，所述U型抛磨区的侧壁与抛磨面之间的抛磨角度为30度；在所述光子晶体光纤的抛磨面上，由下至上依次包括：

无损介质匹配层，所述匹配层中掺杂纳米金属颗粒，并固化在所述光子晶体光纤的抛磨面上，所述U型抛磨区至少部分暴露并不被所述匹配层覆盖；

贵金属层，其固化在所述匹配层的上表面；

偶联剂层，其固化在所述贵金属层的上表面；

捕获抗体层，其为第一抗体溶液固化在所述偶联剂层的上表面；

抗原层，其为滴加在所述捕获抗体层上的抗原；

检测抗体层，其为滴加在所述抗原层上的第二抗体溶液。

进一步地，所述侧边抛磨光子晶体光纤的包层直径125μm，空气孔直径4.8μm，空气孔间隙7.7μm，侧边抛磨后的所述光子晶体光纤的包层剩余厚度66-68μm，所述U型抛磨区长度2-2.5cm。

进一步地，所述无损介质匹配层为均匀掺杂有直径为79-81nm纳米银颗粒的有机含氟聚合物层；其中，所述匹配层的厚度为99-101nm，折射率为1.33-1.34。

进一步地，所述贵金属层为致密平整的银膜层，其厚度范围为39-41nm。

进一步地，所述偶联剂层为厚度为8-10nm的自聚合多巴胺层。

进一步的，所述第一抗体溶液为兔抗人免疫球蛋白E溶液，所述第二抗体溶液为鼠抗人免疫球蛋白E溶液；所述抗原层上的抗原为浓度范围在1μg/mL-60μg/mL的人免疫球蛋白E溶液；

一种包括长程SPR传感器的检测传感系统，包括

波长为紫外-可见光波段的宽带光源，所述光源通过多模光纤连接等离子体耦合和双抗夹心免疫共同改性的长程SPR传感器的输入端，其输出端通过多模光纤连接至光谱分析仪，所述光谱分析仪通过数据接口连接到计算机；其中待测生物分子溶液滴加在所述长程SPR传感器的上表面。

一种长程SPR传感器的制备方法，包括：

步骤1：制备侧边抛磨光子晶体光纤

选取光子晶体光纤，其包层直径125μm，空气孔直径4.8μm，空气孔间隙7.7μm；利用电机与计算机控制抛磨砂轮转动与推进，逐渐打磨掉所述光子晶体光纤一侧的包层，利用显微镜实时观测光纤的抛磨深度，所述光纤抛磨区域的包层表面形成U型抛磨区，所述U型抛磨区的底壁为抛磨面，所述U型抛磨区的侧壁与抛磨面之间具有25-35度的夹角，直至所述光子晶体光纤的所述U型抛磨区的剩余厚度为66-68μm，抛磨面长度为2-2.5cm时停止；

进一步地，在制备侧边抛磨所述光子晶体光纤时，所述光子晶体光纤两端分别与宽带光源和光谱仪相连，用于实时监测输出光谱中光功率的损耗情况。

步骤2：镀制无损介质匹配层

将直径为79-81nm纳米银颗粒混入纯水中制备浓度为0.1mg/mL的纳米银颗粒溶液，再将制备的纳米银颗粒溶液与有机含氟聚合物溶液按1:2比例混合均匀，形成混合溶液；将步骤1制备的侧边抛磨光子晶体光纤固定于提拉镀膜机上，基于提拉镀膜法在光纤抛磨面的上表面镀制混合溶液，从而在光纤抛磨面的上表面形成一层掺杂银纳米颗粒的无损介质匹配层；

步骤3：镀制贵金属层

将步骤2制备的侧边抛磨光子晶体光纤置于磁控溅射仪中，在镀制掺杂纳米银颗粒的无损介质匹配层的光纤抛磨面上表面溅射贵金属膜，从而形成贵金属层；

步骤4：固定偶联剂层

将步骤3制备的侧边抛磨光子晶体光纤置于多巴胺溶液中进行多巴胺的自聚合作用，从而步骤3中制备的贵金属层表面形成一层自聚合的偶联剂层；

步骤5：固定捕获抗体

将步骤4制备的侧边抛磨光子晶体光纤置于第一抗体溶液中，即兔抗人免疫球蛋白E溶液中，在4℃环境下温育过夜，之后取出所述光纤并用磷酸盐缓冲溶液冲洗掉未固定的抗体，晾干备用；

步骤6：检测抗原

在常温至37℃环境下，向步骤5制备的侧边抛磨光子晶体光纤的抛磨面滴加特定浓度的抗原，即人免疫球蛋白E溶液，反应40min后，再向光纤的抛磨面的上表面滴加第二抗体溶液进行反应；根据抗原和两种抗体之间的特异性结合引起的共振波长漂移，实现对抗原的检测。

与现有技术相比，本发明的有益效果及显著进步在于：

1.本发明所述的长程SPR传感器利用基于对温度不敏感的光子晶体光纤和折射率接近低浓度生物溶液的无损介质匹配层构建长程SPR传感器使得本发明所述的传感器相比于普通SPR传感器对外界温度波动干扰不敏感，且具有更窄的半峰宽，这使得传感器具有更高的测量准确性和检测精度。

2.与传统的将纳米金属粒子通过化学剂修饰在传感器金属膜表面相比，本发明所述的传感器将纳米银粒子直接掺杂在匹配层中，制作更为简单且避免了化学剂对传感器性能造成影响；而且，无损介质匹配层和贵金属层之间的电场耦合显著增强了传感器表面电场，这使得传感器灵敏度增强，检测限降低。

3.本发明所述的长程SPR传感器利用两种抗体构建一种夹心免疫结构，增大了传感器表面平均折射率变化，进一步降低了传感器的检测限。

综上，本发明等离子体耦合和双抗夹心免疫共同改性的长程SPR传感器能够对低浓度生物溶液进行检测，具有高检测精度、高灵敏度、低检测限的优点。而且，本发明的技术方案解决了现有技术中普通SPR传感器制作复杂，易受外界环境温度变化干扰，灵敏度低，半峰宽较宽，检测精度低，检测限高的问题，适用于生物化学、医疗卫生、食品安全等领域广泛推广。

附图说明

图1为本发明所述的SPR传感器的结构示意图；

图2为包含本发明所述的SPR传感器的长程SPR传感系统的结构示意图；

图3示出实施例中的SPR传感器测量不同浓度生物溶液的共振光谱图；

图4示出实施例中的SPR传感器测量结果的动态吸附曲线和灵敏度拟合曲线。

图中：

1：侧边抛磨光子晶体光纤 2：无损介质匹配层 3：贵金属层

4：偶联剂层 5：捕获抗体层 6：抗原层

7：检测抗体层 8：抛磨面 9：空气孔 10：侧壁

1’：紫外-可见宽带光源 2’：多模光纤 3’：长程SPR传感器

4’：恒温加热台 5’：光谱分析仪 6’：计算机

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案、有益效果及显著进步更加清楚，下面，将结合本发明实施例中所提供的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所有描述的这些实施例仅是本发明的部分实施例，而不是全部的实施例；基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

此外，需要说明的是，使用“第一”、“第二”等词语来限定零部件，仅仅是为了便于对相应零部件进行区别，如没有另行声明，上述词语并没有特殊含义，因此不能理解为对本发明保护范围的限制。

实施例

如图1所示，等离子体耦合和双抗夹心免疫共同改性的长程SPR传感器，包括侧边抛磨光子晶体光纤1，所述侧边抛磨光子晶体光纤1的包层直径125μm，空气孔9直径为4.8μm，空气孔间隙7.7μm。在侧边抛磨光子晶体光纤1的一边进行抛磨，抛磨后的所述光纤的表面形成U型抛磨区，所述U型抛磨区的底壁为抛磨面8，所述侧壁10与抛磨面8之间的抛磨角度为30度；抛磨后抛磨区的剩余厚度为66-68μm，抛磨面长度为2-2.5cm。在所述光子晶体光纤1的抛磨面8上，由下至上依次包括：

无损介质匹配层2，其为厚度为99-101nm，折射率为1.33-1.34的掺杂纳米银颗粒的有机含氟聚合物层，所述固化在所述光子晶体光纤的抛磨面上，所述抛磨面至少部分暴露并不被所述匹配层覆盖；

贵金属层3，其固化在所述匹配层2的上表面，为厚度为39-41nm的致密平整银膜；也可镀制金膜，如CN109085140A所述。

偶联剂层4，其固化在所述贵金属层的上表面，为厚度为8-10nm的自聚合多巴胺层；

捕获抗体层5，其为固化在传感器表面的兔抗人免疫球蛋白E溶液；

抗原层6，其为滴加在所述捕获抗体层上的特定浓度的人免疫球蛋白E溶液；

检测抗体层7，其为滴加在所述抗原层上的鼠抗人免疫球蛋白E溶液。

制备所述长程SPR传感器时，包括如下步骤：

步骤1：制备侧边抛磨光子晶体光纤

选取光子晶体光纤1的包层直径125μm，空气孔直径4.8μm，空气孔间隙7.7μm，将所述光子晶体光纤1两端分别与宽带光源和光谱仪相连，用于实时监测输出光谱中光功率的损耗情况。采用轮式侧边抛磨法，将光子晶体光纤预抛磨区涂覆层剥掉并清洗，用光纤支撑架将待抛磨的光纤其预抛磨区悬空固定并紧贴在研磨砂轮的一侧，利用电机与计算机控制砂轮转动与推进，从而将光子晶体光纤1逐渐打磨掉光纤一侧的包层，利用显微镜实时观测光纤的抛磨深度，直至所述光子晶体光纤的抛磨区剩余厚度为66-68μm，U型抛磨区的长度为2-2.5cm时停止。

步骤2：镀制无损介质匹配层

将直径为79-81nm纳米银颗粒混入纯水中制备浓度为0.1mg/mL的纳米银颗粒溶液，再将制备的纳米银颗粒溶液与有机含氟聚合物溶液按1:2比例混合均匀，形成混合溶液；由于水性纳米银颗粒溶液和有机含氟聚合物溶液的折射率均接近于1.33，这使得掺杂后的溶液折射率在不同波长下的折射率范围为1.33-1.34。将步骤1制备的侧边抛磨光子晶体光纤固定于提拉镀膜机上，设置提拉速度为20mm/min，基于提拉镀膜法在光纤抛磨面的上表面将掺杂银纳米颗粒的有机含氟聚合物溶液均匀平整地涂覆从而在光纤抛磨面的上表面形成一层掺杂银纳米颗粒的有机含氟聚合物层；其中，有机含氟聚合物层的厚度可以通过控制溶液浓度来实现。

步骤3：镀制贵金属层

将步骤2制备的侧边抛磨光子晶体光纤置于磁控溅射仪中，在镀制掺杂纳米银颗粒的无损介质匹配层的光纤抛磨面上表面溅射银膜，溅射功率设置为30w，溅射时间设置为5min,真空度设置为10^-4bar；

步骤4：固定偶联剂层

将步骤3制备的侧边抛磨光子晶体光纤浸泡于浓度为2mg/mL，pH值为8.7的多巴胺溶液中35min，通过多巴胺的自聚合作用，在步骤3中制备的银膜表面形成一层厚度为8-10nm的自聚合多巴胺层。

步骤5：固定捕获抗体

将步骤4制备的侧边抛磨光子晶体光纤置于150μg/mL的第一抗体溶液中，即兔抗人免疫球蛋白E溶液中，在4℃环境下温育过夜，之后取出所述光纤并用磷酸盐缓冲溶液冲洗掉未固定的抗体，晾干备用；

步骤6：检测抗原

在常温至37℃环境下，向步骤5制备的侧边抛磨光子晶体光纤的抛磨面分别滴加浓度依次为1μg/mL，2μg/mL，5μg/mL，10μg/mL，15μg/mL，20μg/mL，30μg/mL，40μg/mL，50μg/mL，60μg/mL的人免疫球蛋白E溶液。将固定有检测抗体的光纤抛磨面固定在特制的凹槽中，取适量第一个浓度的人免疫球蛋白E溶液滴加至光纤抛磨区表面反应40min，之后滴加适量所述检测抗体，即40μg/mL的鼠抗人免疫球蛋白E溶液并反应15min以构造双抗夹心免疫。之后，取出光纤并用大量磷酸盐缓冲液冲洗U型抛磨区以冲洗掉抗原抗体复合物大分子，即使得抗原与捕获抗体分离，之后再检测下一个浓度的抗原溶液。

当在U型抛磨区表面滴加抗原溶液时，特定的相位匹配条件被满足，侧边抛磨光子晶体光纤中光的倏逝场能量耦合进银膜所产生的长程表面等离子体波和纳米银颗粒产生的局域表面等离子体波中，由于光能量发生损耗，传感器传输光谱中出现共振谷。当抗原抗体相互结合的过程中，传感器表面平均折射率发生变化，相位匹配条件发生改变，共振谷发生移动，通过探究共振谷的移动规律即可实现对抗原的检测。

图2示出由上述等离子体耦合和双抗夹心免疫共同改性的长程SPR传感器形成的传感系统，所述系统包括以多模光纤2’为光路的等离子体耦合和双抗夹心免疫共同改性的长程SPR传感器3’，其输入端连接波长为紫外-可见波段的宽带光源1’，其输出端连接光谱分析仪5’，光谱分析仪5’通过数据接口连接到计算机6’，等离子体耦合和双抗夹心免疫共同改性的长程SPR传感器3’置于恒温加热台4’上以保证恒温检测环境，待测溶液滴至等离子体耦合和双抗夹心免疫共同改性的长程SPR传感器3’表面以实现检测。

应用上述等离子体耦合和双抗夹心免疫共同改性的长程SPR传感器测量不同浓度人免疫球蛋白E溶液实验：

将本发明等离子体耦合和双抗夹心免疫共同改性的长程SPR传感器依次检测不同浓度的人免疫球蛋白E溶液，得到的共振光谱如图3所示。每种浓度的人免疫球蛋白E溶液滴加至传感器表面时，共振光谱中立即出现共振谷，随后共振谷逐渐红移并最终稳定在某个位置。共振谷初始位置和最终位置之间的波长差即为该浓度的抗原溶液引起的共振谷漂移量。图3中每个共振谷的位置为检测对应浓度抗原溶液后共振谷稳定时的位置。此外，所有共振谷的平均半峰宽为78.25nm，远低于普通光纤SPR传感器大于100nm的半峰宽值。

将每个浓度的抗原溶液对应的共振谷漂移量与对应抗原浓度进行朗缪尔拟合，取前五个浓度的数据点进行线性拟合，取斜率值为传感器灵敏度S，具体结果如图4所示。将纯水滴加至传感器表面，每隔5秒钟记录共振谷的共振波长，记录100次，取100次共振波长值的2倍标准差作为传感系统的波长分辨力ρ。传感器的检测限LOD为波长分辨力和灵敏度的比值，即：

LOD＝ρ/S

经计算，灵敏度S＝1.31nm/(μg/mL)，波长分辨力ρ＝0.02nm，检测限LOD＝15.26ng/mL。

本发明等离子体耦合和双抗夹心免疫共同改性的长程SPR传感器相比于传统光纤SPR传感器制作简单，检测低浓度生物溶液具有更高的检测精度、灵敏度、结果准确性以及更低的检测限，能够广泛应用于生化检测、疾病诊断和食品安全等领域。

以上各实施例和具体案例仅用以说明本发明的技术方案，而非是对其的限制，尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换，而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围，本领域技术人员根据本说明书内容所做出的非本质改进和调整或者替换，均属本发明所要求保护的范围。

Claims (9)

1.一种长程SPR传感器，包括光子晶体光纤(1)，所述光子晶体光纤(1)的两端分别熔接多模光纤，其特征在于，所述光子晶体光纤(1)为侧边抛磨的光子晶体光纤，抛磨后的所述光纤的表面形成U型抛磨区，所述U型抛磨区的底壁为抛磨面(8)，所述U型抛磨区的侧壁(10)与抛磨面(8)之间的抛磨角度为30度；在所述光子晶体光纤的抛磨面上，由下至上依次包括：

无损介质匹配层(2)，所述匹配层(2)中掺杂纳米金属颗粒，并固化在所述光子晶体光纤(1)的抛磨面(8)上，所述U型抛磨区至少部分暴露并不被所述匹配层(2)覆盖；

贵金属层(3)，其固化在所述匹配层(2)的上表面；

偶联剂层(4)，其固化在所述贵金属层(3)的上表面；

捕获抗体层(5)，其为第一抗体溶液固化在所述偶联剂层(4)的上表面；

抗原层(6)，其为滴加在所述捕获抗体层(5)上的抗原；

检测抗体层(7)，其为滴加在所述抗原层(6)上的第二抗体溶液。

2.如权利要求1所述的长程SPR传感器，其特征在于，所述侧边抛磨光子晶体光纤的包层直径125μm，空气孔直径4.8μm，空气孔间隙7.7μm，侧边抛磨后的所述光子晶体光纤的包层剩余厚度66-68μm，所述U型抛磨区长度2-2.5cm。

3.如权利要求1所述的长程SPR传感器，其特征在于，所述无损介质匹配层(2)为均匀掺杂有直径为79-81nm纳米银颗粒的有机含氟聚合物层；其中，所述匹配层的厚度为99-101nm，折射率为1.33-1.34。

4.如权利要求1所述的长程SPR传感器，其特征在于，所述贵金属层(3)为致密平整的银膜层，其厚度范围为39-41nm。

5.如权利要求1所述的长程SPR传感器，其特征在于，所述偶联剂层(4)为厚度为8-10nm的自聚合多巴胺层。

6.如权利要求1所述的长程SPR传感器，其特征在于，所述第一抗体溶液为兔抗人免疫球蛋白E溶液，所述第二抗体溶液为鼠抗人免疫球蛋白E溶液；所述抗原层(6)上的抗原为特定浓度的人免疫球蛋白E溶液。

7.一种包括如权利要求1所述的长程SPR传感器的检测传感系统，其特征在于，所述传感系统包括

波长为紫外-可见光波段的宽带光源(1’)，所述光源(1’)通过多模光纤(2’)连接等离子体耦合和双抗夹心免疫共同改性的长程SPR传感器的输入端，其输出端通过多模光纤(2’)连接至光谱分析仪(5’)，所述光谱分析仪(5’)通过数据接口连接到计算机(6’)；其中待测生物分子溶液滴加在所述长程SPR传感器的上表面。

8.一种利用如权利要求1所述的长程SPR传感器的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

步骤1：制备侧边抛磨光子晶体光纤，

选取光子晶体光纤(1)，利用电机与计算机控制抛磨砂轮转动与推进，逐渐打磨掉所述光子晶体光纤(1)一侧的包层，利用显微镜实时观测光纤的抛磨深度，所述光纤抛磨区域的包层表面形成U型抛磨区，所述U型抛磨区的底壁为抛磨面(8)，所述U型抛磨区的侧壁(10)与抛磨面(8)之间具有25-35度的夹角，直至所述光子晶体光纤的所述U型抛磨区剩余厚度为66-68μm，抛磨面长度为2-2.5cm时停止；

步骤2：镀制无损介质匹配层(2)，

将直径为79-81nm纳米银颗粒混入纯水中制备浓度为0.1mg/mL的纳米银颗粒溶液，再将制备的纳米银颗粒溶液与有机含氟聚合物溶液按1:2比例混合均匀，形成混合溶液；将步骤1制备的侧边抛磨光子晶体光纤(1)固定于提拉镀膜机上，基于提拉镀膜法在光纤抛磨面的上表面镀制混合溶液，从而在光纤抛磨面的上表面形成一层掺杂银纳米颗粒的无损介质匹配层(2)；

步骤3：镀制贵金属层(3)，

将步骤2制备的侧边抛磨光子晶体光纤置于磁控溅射仪中，在镀制掺杂纳米银颗粒的无损介质匹配层的光纤抛磨面上表面溅射贵金属膜；

步骤4：固定偶联剂层(4)，

将步骤3制备的侧边抛磨光子晶体光纤置于多巴胺溶液中进行多巴胺的自聚合作用，从而步骤3中制备的贵金属层(3)表面形成一层自聚合的偶联剂层(4)；

步骤5：固定捕获抗体，

将步骤4制备的侧边抛磨光子晶体光纤置于第一抗体溶液中，在4℃环境下温育过夜，之后取出所述光纤并用磷酸盐缓冲溶液冲洗掉未固定的抗体，晾干备用；

步骤6：检测抗原，

在常温至37℃环境下，向步骤5制备的侧边抛磨光子晶体光纤的抛磨面滴加特定浓度的抗原，反应40min后，再向光纤的抛磨面的上表面滴加第二抗体溶液进行反应；根据抗原和两种抗体之间的特异性结合引起的共振波长漂移，实现对抗原的检测。

9.如权利要求8所述的长程SPR传感器的制备方法，其特征在于，在步骤1中还包括：在制备侧边抛磨所述光子晶体光纤时，所述光子晶体光纤两端分别与宽带光源和光谱仪相连。

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