CN112410359A

CN112410359A - 茄二十八星瓢虫pp2a基因及其防治瓢虫的应用

Info

Publication number: CN112410359A
Application number: CN202011232212.4A
Authority: CN
Inventors: 潘慧鹏; 郭威; 陈诗敏; 郭木娟; 杨春晓; 吴建辉; 邱宝利
Original assignee: South China Agricultural University
Current assignee: South China Agricultural University
Priority date: 2020-11-06
Filing date: 2020-11-06
Publication date: 2021-02-26
Anticipated expiration: 2040-11-06
Also published as: CN112410359B

Abstract

本发明公开了茄二十八星瓢虫PP2A基因及其防治瓢虫的应用，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。其dsRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明得到一种茄二十八星瓢虫的PP2A基因，并开发了其高效沉默的dsRNA，开发了高效防治茄二十八星瓢虫的技术，即直接饲喂对茄二十八星瓢虫具有高致死能力的靶标基因dsRNA，利用dsPP2A对茄二十八星瓢虫的致死效应达到防治目的。该方法操作方便、有效性和灵敏性好、杀虫效率高，且具有环境友好等诸多优点，有很好的应用前景。

Description

茄二十八星瓢虫PP2A基因及其防治瓢虫的应用

技术领域

本发明属于虫害防控技术领域。更具体地，涉及茄二十八星瓢虫PP2A基因及其防治瓢虫的应用。

背景技术

茄二十八星瓢虫Henosepilachnavigintioctopunctata(Fabricius)属于鞘翅目、瓢虫科，是茄科蔬菜上的一种重要害虫，主要危害马铃薯、茄子、番茄及青椒等。成虫和幼虫均以叶片为食，取食下表皮、叶肉，被取食叶片的上表皮通常呈不规则网状或穿孔，严重时造成植株萎蔫甚至整株死亡。茄二十八星瓢虫在我国分布非常广泛，由南向北，从海南、广东到黑龙江都有分布，尤其是长江以南发生密度较大。但从近几年的调查结果来看，由于气候变暖、贸易发展以及保护地蔬菜栽培面积的扩大，一年四季茄二十八星瓢虫均有充足的食料，茄二十八星瓢虫在北京、山东、河南等省份的发生和为害愈加严重。我国在2015年启动了马铃薯主粮化战略，马铃薯种植面积的扩大必将为茄二十八星瓢虫的危害提供充足的食物来源。

目前，茄二十八星瓢虫的防治包括人工捕捉、引诱剂诱杀、化学农药防治。人工捕捉可以利用其成虫的假死性，打落后集中灭杀，也可以手动摘除卵块，但是对分散为害的幼虫没有好办法，不仅防治效果差，还带来高昂的劳力成本；引诱剂诱杀也无法达到人们的预期效果；当前，其防治主要依赖于化学农药，化学农药过度频繁的使用会引起环境污染和农产品质量安全等众多问题。所以，急需新的杀虫方式的环境友好型的生物农药用于茄二十八星瓢虫的防控。

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是一种由短片段RNAs(siRNAs)触发，促进同源mRNA的降解或抑制其转录的作用机制。RNAi现象首先在线虫中发现，随后，在大多数真核生物中均有发现。RNAi已被广泛的用作研究基因功能的工具，并在开发新的害虫治理策略方面显示出巨大的潜力。由于使用RNAi技术可以特异性抑制基因的表达，所以该技术可以高效地靶向沉默害虫基因，从而达到防治害虫的目的，但是目前缺少对茄二十八星瓢虫具有高效杀虫活性的靶基因。

本发明人团队前期研究发现利用直接饲喂外源dsRNA的方式即可导致茄二十八星瓢虫死亡，因此从基因层面开发适用于防治茄二十八星瓢虫的外源dsRN A产品，使用方便、成本低，更由于基因抑制的特异性，可实现精准的防治效果，对环境友好，在茄二十八星瓢虫的防治方面具有很大的应用前景。然而，高效杀虫靶标基因的获得是影响应用RNAi技术进行害虫防控最重要的因素。

发明内容

本发明目的是为了克服现有防控技术的不足，提供一种茄二十八星瓢虫PP2A基因及其防治瓢虫的应用。本发明基于该基因开发一种高效防治茄二十八星瓢虫的技术，即直接饲喂对茄二十八星瓢虫具有高致死能力的靶标基因dsRNA，利用dsPP2A对茄二十八星瓢虫的高致死能力达到害虫防治目的。该方法具有操作方便、有效性和灵敏性好、杀虫效率高，且具有环境友好等诸多优点，有很好的应用前景。

本发明的第一个目的是提供一种茄二十八星瓢虫PP2A基因。

本发明的第二个目的是提供一种茄二十八星瓢虫PP2A基因的dsRNA。

本发明的第三个目的是提供所述PP2A基因或其抑制剂任一在防治茄二十八星瓢虫和/或制备防治茄二十八星瓢虫的产品中的应用。

本发明的第四个目的是提供所述PP2A基因或其抑制剂任一在抑制茄二十八星瓢虫生长和/或制备抑制茄二十八星瓢虫生长的产品中的应用。

本发明的第五个目的是提供所述PP2A基因或其抑制剂任一在促进茄二十八星瓢虫死亡和/或制备促进茄二十八星瓢虫死亡的产品中的应用。

本发明的第六个目的是提供一种防治茄二十八星瓢虫的产品。

本发明的第七个目的是提供一种防治茄二十八星瓢虫的方法。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：

本发明、得到一个高致死基因——PP2A基因，并开发了饲喂PP2A基因的dsRNA(dsPP2A)防治茄二十八星瓢虫的技术。本发明把茄子叶片分别浸泡在试剂盒合成的dsPP2A和dsGFP的溶液中，取出晾干后饲喂茄二十八星瓢虫的1龄幼虫2天，而后以未用dsRNA处理的茄子叶片饲喂，观察记录茄二十八星瓢虫的死亡率和发育状态；另外，用定量饲喂dsPP2A的方法测定了其对茄二十八星瓢虫3龄以及成虫的致死能力，进而全面的评价外源dsPP2A对茄二十八星瓢虫不同发育阶段的杀虫活性。最后，利用荧光定量PCR(RT-qPCR)的方法检测分析了PP2A基因在取食了dsPP2A和dsGFP茄二十八星瓢虫中的表达量变化。结果显示，直接饲喂外源dsPP2A可显著抑制茄二十八星瓢虫PP2A基因表达，并具有高致死效应。

因此，本发明要求保护以下内容：

一种茄二十八星瓢虫PP2A基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

一种茄二十八星瓢虫PP2A基因的dsRNA，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

所述PP2A基因或其抑制剂任一在防治茄二十八星瓢虫和/或制备防治茄二十八星瓢虫的产品中的应用。

所述PP2A基因或其抑制剂任一在抑制茄二十八星瓢虫生长和/或制备抑制茄二十八星瓢虫生长的产品中的应用。

所述PP2A基因或其抑制剂任一在促进茄二十八星瓢虫死亡和/或制备促进茄二十八星瓢虫死亡的产品中的应用。

优选地，所述抑制剂为dsRNA。

更优选地，所述dsRNA为核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的dsRNA。

一种防治茄二十八星瓢虫的产品，其特征在于，含有权利要求1所述PP2A基因的表达抑制剂。

优选地，所述抑制剂为dsRNA。

更优选地，所述dsRNA为核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的dsRNA。

一种防治茄二十八星瓢虫的方法，饲喂外源dsRNA，该dsRNA可沉默/抑制权利要求1所述PP2A基因的表达。

优选地，所述dsRNA为核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的dsRNA。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明得到一种茄二十八星瓢虫的PP2A基因，并开发了其高效沉默dsRNA，开发了高效防治茄二十八星瓢虫的技术，即直接饲喂对茄二十八星瓢虫具有高致死能力的靶标基因dsRNA，利用dsPP2A对茄二十八星瓢虫的致死效应达到防治目的。该方法操作方便、有效性和灵敏性好、杀虫效率高，且具有环境友好等诸多优点，有很好的应用前景。

附图说明

图1为不同浓度(剂量)的dsPP2A对不同龄期茄二十八星瓢虫致死的影响(图A：1龄幼虫的存活率；图B：3龄幼虫的存活率；图C：成虫的存活率)。利用实验开始后10天的死亡率数据，用Cox回归程序建立存活曲线。不同字母(如a、b)表示对照曲线与处理曲线有显著性差异。

图2为饲喂1龄幼虫dsRNA开始的第3天，两个不同个体因蜕皮异常出现的死亡表型。

图3为饲喂3龄幼虫dsRNA开始的第7天，正常发育的dsGFP对照组(A)和发育受阻的dsPP2A处理组(B)茄二十八星瓢虫表型差异。

图4为1龄幼虫取食dsGFP和dsPP2A后的第2天和第4天，茄二十八星瓢虫中PP2A基因表达量的变化。

具体实施方式

下面结合说明书附图和具体实施例对本发明做出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。

下述实施例中所用茄二十八星瓢虫，2019年6月采自华南农业大学校园内的龙葵上，而后用茄子叶片饲养在培养箱中(温度25±1℃，湿度70％-80％，光周期L：D＝14：10)。

RNA提取利用TRIzol提取法(Thermo Fisher Scientific,USA)，反转录试剂(PrimeScript^TMRT reagent Kit with gDNA Eraser)购自TAKARA生物技术有限公司，dsRNA合成试剂盒(MEGAscript^TM T7)购自Thermo Fisher Scientific，PCR反应体系所用试剂盒(EX Taq^TM)购自TAKARA生物技术有限公司，DNA纯化回收试剂盒(Universal DNAPurification Kit)购自天根生化科技(北京)有限公司。

以下实施例的数据处理方法：使用Excel 2010对茄二十八星瓢虫的存活率进行统计，利用SPSS 17.0软件采用Cox回归分析作图，不同浓度间的差异性分析采用单因素分析。对RNA干扰后靶标基因表达量变化的分析，RT-qPCR数据采用

法(Ct表示循环数)进行计算。应用SPSS 17.0软件采用单因素方差分析进行数据分析。

实施例1基因PP2A的合成和dsRNA的获得

得到PP2A基因的开放阅读框，如SEQ ID NO.1所示。然后设计引物，合成dsRNA。

一、实验方法

1、茄二十八星瓢虫总RNA提取及第一链cDNA的合成。

取茄二十八星瓢虫的2龄幼虫10只于2mL离心管中，利用TRIzol法提取茄二十八星瓢虫的总RNA，RNA的浓度和质量利用仪器NanoDropOne^C进行测定，利用反转录试剂盒依照说明书步骤进行反转录，合成cDNA第一链。

2、引物设计

根据得到PP2A的基因序列，设计PP2A基因的dsRNA引物P1(表1)，绿色荧光蛋白基因(GFP)从实验室保存的含有GFP的质粒上扩增获得，GFP基因的dsRNA引物P2(表1)。根据PP2A基因的序列，设计PP2A基因的RT-qPCR引物P3，内参基因RPS18的RT-qPCR引物P4(表1)。

表1：dsRNA合成及RT-qPCR引物

3、PP2A基因和GFP基因的试剂盒合成dsRNAs的制备

利用表1中的引物P1和P2进行PCR扩增，PCR扩增的反应体系为10×EX Taq Buffer5μL、TaKaRa EX Taq 0.25μL、dNTP Mixture 4μL、上游引物(10μM)1μL、下游引物(10μM)1μL、cDNA/GFP质粒1μL，dd H₂O补齐至50μL。

PCR扩增的反应程序为94℃预变性3min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，供30个循环；72℃延伸5min。将扩增产物置于4℃保存。程序反应完成后，利用琼脂糖凝胶电泳法对扩增结果进行检测。

用DNA纯化回收试剂盒(Universal DNA Purification Kit,TIANGEN)回收纯化上述得到的PCR产物，作为体外转录dsRNA的模版，dsRNA的体外转录体系为10×ReactionBuffer 5μL、(ATP、GTP、CTP、UTP)溶液各5μL、Enzyme mix 5μL、模版20μL，ddH₂O补足至50μL。37℃放置4h。反应结束后加入2.5μL的TURBO DNase去除残留的模版DNA，然后纯化dsRNA，最后用50μL ddH₂O溶解dsRNA，置于-80℃冰箱保存，分别得到dsPP2A和dsGFP，用1.5％的琼脂糖凝胶电泳验证dsRNA的条带。

茄二十八星瓢虫的PP2A dsRNA为双链RNA，由正义链和反义链组成，其正义链的核苷酸序列为序列表中的SEQ ID NO.2，其反义链的核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO.2的反向互补序列。

GFP dsRNA为双链RNA，由正义链和反义链组成，其正义链的核苷酸序列为序列表中的SEQ ID NO.3，其反义链的核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO.3的反向互补序列。

二、实验结果

用P1引物扩增得到大小为539bp的PCR扩增产物，经测序并删去T7启动子序列后，得到大小为499bp的核苷酸序列即为目的基因PP2A，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。以载有GFP的质粒为模版，用P2引物进行扩增，得到大小为507bp的PCR产物dsGFP。

实施例2 dsPP2A对茄二十八星瓢虫的抑制作用

一、实验方法

茄二十八星瓢虫1龄幼虫的dsPP2A喂养组：在放有滤纸和加湿棉球的培养皿中放入10只茄二十八星瓢虫的1龄幼虫。分别用浓度1000ng/μL、500ng/μL、200ng/μL、100ng/μL、50ng/μL、10ng/μL、和5ng/μL、1ng/μL的dsPP2A溶液浸泡直径12mm的圆形茄子叶盘1min，室温风干1h后饲喂幼虫，每隔24h更换一次叶盘，连续饲喂dsPP2A浸泡的叶盘两天后，用正常茄子叶片饲喂幼虫。茄二十八星瓢虫1龄幼虫的dsGFP喂养组：dsGFP溶液的浓度为200ng/μL，其余步骤同上。每组设置4个重复。

茄二十八星瓢虫3龄幼虫的dsPP2A喂养组：在每个放有滤纸和加湿棉球的培养皿中放入1只茄二十八星瓢虫的3龄幼虫，一共设置5组不同剂量的实验，每组设置10个重复。用移液枪将2μL不同浓度的dsPP2A(实施例1制备的)滴在25mm²的叶片上，最终剂量分别为1000ng、100ng、40ng、20ng、10ng，12h后更换未处理的叶片饲喂幼虫。茄二十八星瓢虫3龄幼虫的dsGFP喂养组：每个重复喂养试剂盒合成的dsGFP溶液的最终剂量为200ng，其余步骤同上。

茄二十八星瓢虫成虫的dsPP2A喂养组：在每个放有滤纸和加湿棉球的培养皿中放入1只茄二十八星瓢虫的成虫，一共设置2组不同剂量的实验，每组设置20个重复。用移液枪将2μL不同浓度的dsPP2A(实施例1制备的)滴在25mm²的叶片上，最终剂量分别为1000ng和100ng，12h后更换未处理的叶片饲喂成虫。茄二十八星瓢虫成虫的dsGFP喂养组：每个重复喂养试剂盒合成的dsGFP(实施例1制备的)溶液的最终剂量为200ng，其余步骤同上。

每隔24h统计每个培养皿中茄二十八星瓢虫的死亡数目，并更换新的叶片，培养皿置于人工气候箱(温度25±1℃，湿度70％-80％，光周期L：D＝14：10)。统计各组每个培养皿中茄二十八星瓢虫的死亡个数，计算对照组和不同浓度(剂量)dsRNA处理下茄二十八星瓢虫的存活率变化。

二、实验结果

根据统计分析的结果可知，连续饲喂茄二十八星瓢虫1龄幼虫dsPP2A两天后，茄二十八星瓢虫1龄幼虫的存活率随着时间的增加而呈现下降的趋势。结果如图1所示。根据图1A的结果，发现不同浓度的处理组与对照组之间的存活率均存在显著差异，当处理组饲喂浓度为5ng/μL(p<0.01,Exp(B)＝16.351)时，与浓度为1ng/μL(p<0.05,Exp(B)＝12.597)、10ng/μL(p<0.01,Exp(B)＝22.371)的处理组之间的存活率差异不显著，当处理组饲喂浓度为50ng/μL(p<0.001,Exp(B)＝42.752)、100ng/μL(p<0.0001,Exp(B)＝95.926)、200ng/μL(p<0.0001,Exp(B)＝122.941)、500ng/μL(p<0.0001,Exp(B)＝174.341)、1000ng/μL(p<0.0001,Exp(B)＝189.815)时，各处理组之间的存活率不存在差异，其它几个浓度的处理组之间的存活率存在显著差异。从分析的结果中可以得到以下结论，当处理组的浓度分别为1ng/μL、5ng/μL、10ng/μL、50ng/μL、100ng/μL、200ng/μL和500ng/μL、1000ng/μL时与对照组相比死亡率分别增加13倍、17倍、20倍、32倍、39倍、39倍、39倍和39倍。

根据统计分析的结果可知，饲喂茄二十八星瓢虫3龄幼虫一定剂量的dsPP2A后，茄二十八星瓢虫3龄幼虫的存活率随着时间的增加而呈现下降的趋势。根据图1B的结果，发现不同剂量的处理组与对照组之间的存活率均存在显著差异，当处理组饲喂剂量为10ng(p＝0.071,Exp(B)＝8.075)时，与剂量为20ng(p<0.05,Exp(B)＝12.039)的处理组之间的存活率差异不显著，当处理组饲喂剂量为40ng(p<0.001,Exp(B)＝48.159)、100ng(p<0.001,Exp(B)＝84.187)和1000ng(p<0.0001,Exp(B)＝230.169)时，各处理组之间的存活率不存在差异，其它几个剂量的处理组之间的存活率存在显著差异。从分析的结果中可以得到以下结论，当处理组的剂量分别为10ng、20ng、40ng、100ng及1000ng时与对照组相比死亡率分别增加5倍、9倍、15倍、19倍和19倍。

根据统计分析的结果可知，饲喂茄二十八星瓢虫成虫一定剂量的dsPP2A后，茄二十八星瓢虫成虫的存活率随着时间的增加而呈现下降的趋势。根据图1C的结果，发现不同剂量的处理组与对照组之间存在显著差异，当处理组饲喂剂量为100ng(p＝0.553,Exp(B)＝2.070)时与剂量为1000ng(p<0.05,Exp(B)＝11.638)时，存活率差异显著，当处理组饲喂剂量为100ng时，与对照组之间存活率不存在差异。从分析的结果中可以得到以下结论，当处理组的剂量分别为100ng和1000ng时，与对照组相比死亡率分别增加1倍和8倍。

另外，观察1龄幼虫饲喂dsPP2A两天后和3龄幼虫饲喂200ng dsPP2A后，茄二十八星瓢虫表型特征的变化。发现1龄幼虫从饲喂dsPP2A开始的第3天，dsGFP对照组的茄二十八星瓢虫正常进入2龄阶段，处理组中的幼虫无法蜕皮而死亡(如图2所示)；3龄幼虫饲喂200ng dsPP2A开始的第7天，dsGFP对照组的茄二十八星瓢虫正常进入4龄阶段并即将化蛹，而处理组中的幼虫大部分死亡，少数个体仍然停留在3龄阶段(如图3所示)。说明取食dsPP2A能够在茄二十八星瓢虫的体内引发强烈的RNAi效应，影响瓢虫正常发育并导致瓢虫死亡。

实施例3 dsPP2A抑制茄二十八星瓢虫体内PP2A基因的表达

一、实验方法

分别在开始取食dsRNA后的第2天和第4天，收集用10ng/μL dsPP2A和dsGFP处理的茄二十八星瓢虫1龄幼虫，每个处理收集3个生物学重复。提取茄二十八星瓢虫的RNA，然后反转录成cDNA，稀释10倍作为RT-qPCR的模版。以P3和P4作为引物进行RT-qPCR分析。

RT-qPCR体系为(15μL)包含5.25μL的ddH2O，7.5μL的2×SYBR Green Master Mix(TAKARA生物技术有限公司)，4μM引物和1.0μL的cDNA第一链模版。RT-qPCR的反应仪器Bio-Rad C1000 Real-Time PCR system(BIO-RAD,USA)。反应条件为95℃5min；95℃10s，60℃30s，39个循环，每个样本3个技术重复。

二、实验结果

以饲喂dsGFP为对照，分别统计饲喂dsPP2A后在第2天和4天，茄二十八星瓢虫体内PP2A基因的相对表达量变化(如图4所示)。饲喂dsPP2A的茄二十八星瓢虫体内基因PP2A的表达量与饲喂dsGFP的茄二十八星瓢虫体内基因PP2A的表达量相比，呈现明显的下降趋势。进一步说明通过饲喂dsPP2A能够在茄二十八星瓢虫体内引起强烈的RNAi效应，导致体内PP2A基因的表达量明显降低，进而导致茄二十八星瓢虫死亡或发育受到抑制。从饲喂dsPP2A开始的第2天，PP2A基因的表达量与对照组相比下降了3.2倍(F_1,4＝137.371,p<0.0001)；从饲喂dsPP2A开始的第4天，PP2A基因的表达量与对照组相比下降了4.5倍(F_1,4＝282.120,p<0.0001)，进一步说明通过饲喂dsPP2A能够在茄二十八星瓢虫体内引起强烈的RNAi效应，导致体内PP2A基因的表达量显著降低，进而导致茄二十八星瓢虫发育受到抑制或死亡。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 华南农业大学

<120> 茄二十八星瓢虫PP2A基因及其防治瓢虫的应用

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 984

<212> DNA

<213> Henosepilachna vigintioctopunctata

<400> 1

atggcagaag cagacaaatt gaatatagat agtattatag cccgcctttt ggaagtacgt 60

ggagcaagac ctggaaaaaa tgttcaacta actgaaactg aaatcaaggg attatgtctg 120

aaatctagag aaatattttt atctcagccg attcttcttg aactggaagc tccactgaag 180

atttgtggtg atatccatgg ccaatattat gacttgttac gtttgtttga atatggagga 240

tttcctccag agtcaaatta cttgtttttg ggagactatg ttgaccgtgg taaacaatca 300

ctggaaacaa tatgtttatt gcttgcttat aaaataaaat atcctgagaa tttcttctta 360

ctccgtggca accatgaatg tgcatcaatc aacagaatct atggatttta tgatgaatgt 420

aaaagaaggt ataatattaa attatggaaa accttcacgg attgtttcaa ttgtcttcct 480

gtagcagcta ttgtagatga gaaaatcttc tgttgtcatg ggggtctaag tccagattta 540

cagtcgatgg aacaaatccg tagaataatg cgacctactg atgtaccaga tcagggtctt 600

ttgtgtgatt tactttggtc agatcctgat aaagatcaaa atggatgggg tgaaaatgat 660

agaggagtga gttttacctt tggagctgag gttgtgagca aatttttaca taaacatgac 720

tttgatctga tatgtcgagc acatcaggtt gtggaggatg gatatgaatt ttttgccaaa 780

cggcaacttg tcaccttatt cagtgcacca aattattgtg gagaattcga caatgcagga 840

gcaatgatgt cagtggatga taccctgatg tgtagtttcc agatattaaa acctgccgat 900

aagagaaaat tccaatacaa caccaatgca gggcgaccaa cgacgccgcc aaggggtgcc 960

actaacaaaa acaaaaagaa gtga 984

<210> 2

<211> 499

<212> DNA

<213> Henosepilachna vigintioctopunctata

<400> 2

cttcttactc cgtggcaacc atgaatgtgc atcaatcaac agaatctatg gattttatga 60

tgaatgtaaa agaaggtata atattaaatt atggaaaacc ttcacggatt gtttcaattg 120

tcttcctgta gcagctattg tagatgagaa aatcttctgt tgtcatgggg gtctaagtcc 180

agatttacag tcgatggaac aaatccgtag aataatgcga cctactgatg taccagatca 240

gggtcttttg tgtgatttac tttggtcaga tcctgataaa gatcaaaatg gatggggtga 300

aaatgataga ggagtgagtt ttacctttgg agctgaggtt gtgagcaaat ttttacataa 360

acatgacttt gatctgatat gtcgagcaca tcaggttgtg gaggatggat atgaattttt 420

tgccaaacgg caacttgtca ccttattcag tgcaccaaat tattgtggag aattcgacaa 480

tgcaggagca atgatgtca 499

<210> 3

<211> 467

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

cttgaagttg accttgatgc cattcttttg cttgtcggcc atgatgtaca cattgtggga 60

gttatagttg tattccagct tgtggccgag aatgtttcca tcctccttaa agtcaatgcc 120

cttcagctcg attctattca ccagggtgtc accttcgaac ttgacttcag cgcgggtctt 180

gtagttcccg tcatctttga aaaagatggt tctctcctgc acatagccct cgggcatggc 240

gctcttgaaa aagtcatgct gcttcatatg gtctgggtat ctggaaaagc actgcacgcc 300

ataggtgaag gtagtgacca gtgttggcca tggcacaggg agctttccag tggtgcagat 360

gaatttcagg gtgagctttc cgtatgtggc atcaccttca ccctctccgc tgacagaaaa 420

tttgtgccca ttcacatcgc catccagttc cacgagaatt gggacca 467

Claims

1.一种茄二十八星瓢虫PP2A基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种茄二十八星瓢虫PP2A基因的dsRNA，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.权利要求1所述PP2A基因或其抑制剂任一在防治茄二十八星瓢虫和/或制备防治茄二十八星瓢虫的产品中的应用。

4.权利要求1所述PP2A基因或其抑制剂任一在抑制茄二十八星瓢虫生长和/或制备抑制茄二十八星瓢虫生长的产品中的应用。

5.权利要求1所述PP2A基因或其抑制剂任一在促进茄二十八星瓢虫死亡和/或制备促进茄二十八星瓢虫死亡的产品中的应用。

6.根据权利要求3到5任一所述的应用，其特征在于，所述抑制剂为dsRNA。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述dsRNA为权利要求2所述的dsRNA。

8.一种防治茄二十八星瓢虫的产品，其特征在于，含有权利要求1所述PP2A基因的表达抑制剂。

9.一种防治茄二十八星瓢虫的方法，其特征在于，饲喂外源dsRNA，该dsRNA可沉默/抑制权利要求1所述PP2A基因的表达。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述dsRNA为权利要求2所述的dsRNA。