CN112402622A - 靶向pd-l1的抗肿瘤多肽纳米药物载体及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种靶向PD‑L1的抗肿瘤多肽纳米药物载体及其应用。所述靶向PD‑L1的抗肿瘤多肽纳米药物载体能够阻断PD‑L1/PD‑1信号通路，激活T细胞的免疫反应，所述PD‑L1多肽纳米组装体包括两亲性抗肿瘤多肽以及与多肽侧链偶联的硬脂酸和酶响应性功能多肽。具体而言本发明涉及一种C18修饰提高多肽稳定性的方法及其在激活免疫治疗中的应用。本发明的纳米药物载体制备方法简单、成本低廉，实用性强，与单独多肽相比，表现出更强的肿瘤抑制作用，同时是一种具有肿瘤部位蛋白酶响应性、生物相容性好、稳定性强和良好的肿瘤免疫治疗多肽纳米组装体。本发明为多种肿瘤免疫检查点治疗研究提供重要的理论和临床参考依据。

Description

靶向PD-L1的抗肿瘤多肽纳米药物载体及其应用
技术领域
本发明涉及生物医药领域和生物纳米材料领域，具体地说，涉及靶向PD-L1的抗肿瘤多肽纳米药物载体及其应用。
背景技术
目前，随着对肿瘤免疫逃逸机制研究的不断深入，针对免疫检查点的抑制剂在多种实体瘤的治疗中表现出了较好的临床效果，成为癌症治疗史上里程碑式的事件，使人们认识到免疫治疗能够真正成为恶性肿瘤治疗的重要角色。免疫检查点抑制剂则是解除肿瘤对免疫的耐受/屏蔽作用，让免疫细胞重新认识肿瘤细胞，对肿瘤细胞产生攻击。其中PD-L1/PD-1途径作为重要的细胞周期检查点，发挥着特异性的抗原依赖性负性调控作用，它们结合可以使T细胞的免疫活性受到抑制，在免疫耐受中发挥重要作用，这也是肿瘤细胞免疫逃逸的重要原因。PD-1及其配体PD-L1作为一对共刺激信号，共同组成PD-1/PD-L1信号通路，抑制细胞增殖，对T细胞的活化及调控免疫应答起到重要作用，是目前最热门的抗肿瘤免疫治疗的靶分子之一，具有巨大的应用价值。
近年来，针对PD-1/PD-L1的抗体药物研究比较深入，部分药物已经商品化。目前阻断PD-1/PD-L1通路的免疫检查点抑制剂主要分为两大类：(1)针对PD-1和PD-L1的单克隆抗体，如nivolumab，pembrolizumab，BMS-936559，MPDL3280A，atezolizumab，avelumab和durvalumab等。在临床试验中，通过单克隆抗体阻断PD-1和PD-L1等已在恶性黑色素瘤、NSCLC等多种恶性肿瘤的免疫治疗临床试验中得到应用，具有良好的前景。目前，PD-1或PD-L1单克隆抗体已经在多种实体瘤如黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾癌、前列腺癌、结直肠癌、胰腺癌、胆管癌、肝癌、胃及食道癌、乳腺癌、小细胞肺癌等疾病中进行了临床研究，取得了显著性临床效果，能够阻止晚期转移性肿瘤的进程，有望实质性改善患者总生存期。
免疫检查点抑制剂，是现在最有前景的一种癌症治疗方法，目前的共识是PD-L1表达高，PD1或PDL1免疫药物整体效果比较好。然而多项临床试验结果提示，仅有不足30％的患者能积极响应免疫检查点治疗，大部分患者对这些药物天然无应答，也存在药物相关不良反应，包括皮肤瘙痒、食欲不振、疲劳等。如何提高患者免疫检查点治疗的响应率是该领域亟需研究的一个重要问题。解决这些问题需要寻找新的有效且毒副作用低的免疫检查点抑制剂或利用新技术改进已有的药物，并与肿瘤部位的其它免疫抑制分子阻断剂联合应用，以提高抗肿瘤免疫应答效率。
肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)是肿瘤发展过程中起主要的免疫抑制细胞类型。这些免疫抑制细胞的重编程对增强治疗效果至关重要，协同T细胞增强药物，如检查点抑制剂。因此，将TAMs从促肿瘤M2型减少或重新编程为抗肿瘤M1表型的治疗策略已成为癌症治疗中热点。最近的研究表明，R848(imiquimod)是唯一批准临床使用的TLR激动剂，可以诱导MDSCs转化为APCs，如树突状细胞(DC)和巨噬细胞，从而使TAM向M1表型倾斜，增强宿主免疫系统抗肿瘤能力。因此，开发针对肿瘤微环境的智能纳米材料是调控免疫抑制微环境向抗肿瘤免疫激活微环境极化的一种具体而有效的策略。
尽管单克隆抗体表现出较好的临床活性，但另一方面它们具有严重的免疫相关副作用。此外，由于抗体药物存在着制备繁琐，体外稳定性较差，有获得性耐药问题，分子量大穿透力弱且费用昂贵等原因，使其应用受到限制。为了解决单克隆抗体的这些局限性，相应地开发出基于多肽的免疫检查点抑制剂，弥补抗体的缺陷。2014年，Aurigene DiscoveryTechnologies和Pierre Fabre两家生物医药公司联合宣布一种名为AUNP-12的药物可用于癌症免疫治疗，这是第一个被纳入临床试验的PD-1/PD-L1通路多肽类阻断剂。刘磊等(Blocking of the PD-1/PD-L1 Interaction by a dd-Peptide Antagonist for CancerImmunotherapy,Angew.Chem.Int.Ed.2015,54,11760-11764)于2015年报道了第一个靶向PD-L1的D型多肽DPPA-1，与PD-L1亲和力约为0.51μM，该多肽最大的优势是抗水解，不仅在人血清中表现出稳定性，在活体内和体外均可以阻断PD-1/PD-L1作用途径。与治疗性抗体相比，多肽抑制剂有几大优势，包括成本低、分子量小、生物相容性好、穿透性强、无免疫原性，且制备简单等特点。此外，多肽可在氢键、π-π堆积、疏水作用、静电力等驱动下，自发组装形成有序的超分子拓扑结构，如纳米管、纤维、囊泡、片层等，表现出单分子或分子低聚体所不具备的特性。与线性肽相比，多肽组装体具有更稳定的空间结构和更长的半衰期，由于多肽紧密组装，能避免被酶降解，具有生物稳定性，尤其是多肽具有生物活性和生物相容性，自发的聚集和组装使得局部配体“密度”增高，可与靶标实现多价结合。一系列的治疗多肽已经被成功地开发出来治疗不同的肿瘤，研究表明多肽自组装纳米颗粒能够阻断PD-1/PD-L1信号通路。
肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)分泌各种肿瘤促进信号分子，诱导免疫抑制和限制纳米药物在肿瘤基质中的外渗和扩散。成纤维活化蛋白酶(FAP-α)在CAFs中过表达，并且在90％的人类肿瘤中特异性表达。FAP-α在CAFs中高表达及其独特的酶活性使其成为肿瘤基质特异性靶点的候选药物。一些FAP-α敏感的纳米系统已经被开发用于特定的癌症诊断和治疗。因此，为了减少药物对于正常组织细胞的毒副作用，期望能够得到一种酶响应性纳米药物，其在体内运输过程中可以稳定存在，而当到达肿瘤部位时可以释放药物以达到治疗肿瘤目的。因此，开发智能纳米材料，调控肿瘤免疫抑制微环境，将TAMs从M2表型逆转为M1表型，并结合PD-L1阻断，有效诱发系统的强抗肿瘤免疫反应，将是克服当前免疫治疗局限性的有效途径。
发明内容
本发明的目的是提供一种靶向PD-L1的抗肿瘤多肽纳米药物载体及其应用。
为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供一种靶向PD-L1的抗肿瘤多肽纳米药物载体，所述抗肿瘤多肽纳米药物载体包含靶向PD-L1的多肽分子和酶响应性多肽分子，且所述靶向PD-L1的多肽分子和所述酶响应性多肽分子由硬脂酸修饰；所述抗肿瘤多肽纳米药物载体具有两亲性；
其中，所述靶向PD-L1的多肽分子是具有阻断PD-L1/PD-1信号通路功能的可溶性多肽分子，由9-35个氨基酸组成；
所述酶响应性多肽分子为FAP-α酶的底物。
所述靶向PD-L1的多肽分子可以由12、14、16、18、20、24、28或32个氨基酸组成。
优选地，所述酶响应性多肽分子为GGPAK。
更优选地，所述抗肿瘤多肽纳米药物载体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，硬脂酸通过末端羧基分别偶联至SEQ ID NO:1所示序列的第14位和第19位赖氨酸的氨基上(硬脂酸疏水功能区)。
进一步地，本发明提供的靶向PD-L1的抗肿瘤多肽纳米药物载体还包含靶向PD-1的多肽分子。
所述抗肿瘤多肽纳米药物载体从N端到C端由所述靶向PD-L1的多肽分子、所述酶响应性多肽分子和所述靶向PD-1的多肽分子串联而成。
本发明的纳米药物载体在中性溶液中进行自组装形成纳米颗粒，所述纳米颗粒的粒径为20-80nm。
优选地，所述中性溶液为磷酸盐缓冲液。
可以采用固相合成法合成本发明的两亲性多肽PCP。
第二方面，本发明提供所述抗肿瘤多肽纳米药物载体的以下任一应用：
1)用于制备抗肿瘤药物；
2)作为抗肿瘤药物载体或递送系统；
3)用于抗肿瘤治疗。
本发明中，所述肿瘤为PD-L1过表达的肿瘤。
优选地，所述肿瘤可选自黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾癌、前列腺癌、结直肠癌、胰腺癌、胆管癌、肝癌、胃癌、食道癌、乳腺癌等。
第三方面，本发明提供一种抗肿瘤药物，其为载有阿霉素(Doxorubicin，Dox)和/或瑞喹莫德(R848，TLR7/8激动剂)的所述抗肿瘤多肽纳米药物载体。
借由上述技术方案，本发明至少具有下列优点及有益效果：
(一)本发明的多肽具有靶向PD-L1阳性肿瘤细胞的特性，同时，其本身作为多肽抑制剂药物，阻断PD-1/PD-L1信号通路，激活免疫治疗。本发明的多肽结构简单，容易合成、分离和纯化，有效抑制PD-1/PD-L1信号通路，消除免疫抑制的作用；本发明的多肽不良反应和毒副性反应弱。本发明多肽消除免疫抑制效果在体内、体外模型中表现良好，具体效果为显著提高T细胞的活性，使其消除免疫抑制的作用，阻止肿瘤细胞的逃逸进而产生抑瘤效果。
(二)本发明的多肽选择性强，纯度高，分子量小，特异性强，无免疫原性，安全可靠，可以采用化学合成的方法制备，简单易行，可与其它免疫治疗佐剂联合使用，不易产生耐药性，具有较好的研究前景和临床指导意义。
附图说明
图1为本发明较佳实施例中PD-L1多肽纳米组装体PCP的TEM图。
图2为本发明较佳实施例中PCP组装体是包载药物的酶响应药物释放曲线。
图3为本发明较佳实施例中表面等离子共振(SPRi)方法检测PCP抑制人PD-L1蛋白与PD-1蛋白的结合。
图4为本发明较佳实施例中PCP组装体与肿瘤细胞MC38及巨噬细胞Raw264.7的相互作用检测。
图5为本发明较佳实施例中qPCR检测PCP组装体对巨噬细胞Raw264.7的表型极化调控作用。
图6为本发明较佳实施例中小鼠肿瘤体积变化图。
图7为本发明较佳实施例中PCP组装体的抗肿瘤效果评价。
具体实施方式
本发明提供一种肿瘤免疫治疗的多肽纳米组装体及其制备方法与应用，特别是一种能与PD-L1蛋白结合的多肽和由该多肽衍生的且能与PD-L1蛋白结合的产品以及上述多肽或其衍生的产品在制备抗癌药物制剂中的用途。
本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种抗肿瘤多肽纳米组装体(抗肿瘤多肽纳米药物载体)，所述抗肿瘤多肽纳米组装体包括亲水性抗肿瘤多肽、酶响应多肽和疏水性功能分子。
本发明提供的抗肿瘤多肽纳米药物克服了普通线性多肽药物半衰期短的缺点，组成所述多肽的氨基酸残基可以是L-型，也可以是D-型，或者是L-、D-型的混合。与单独多肽相比，在中性环境下，抗肿瘤多肽纳米组装体形成高度有序的纳米结构，从而延长了在体内循环的半衰期。
本发明对亲水性抗肿瘤多肽进行改造，将亲水性抗肿瘤多肽片段和疏水性多肽片段包含酶响应底物片段相结合，改造成两亲性肿瘤免疫治疗酶响应多肽，而后与酶响应性功能分子偶联得到的肿瘤免疫治疗多肽纳米药物，相容性好，也提高了对肿瘤部位的靶向性以及肿瘤免疫治疗多肽分子的生物利用度。此外，由于该药物中含有酶响应多肽片段，实现较好的药物释放和富集并达到良好的治疗效果。
优选地，所述亲水性抗肿瘤多肽为具有阻断免疫检查点功能的多肽分子中的任意一种或至少两种的组合。优选地，所述亲水性抗肿瘤多肽为包括9-35个氨基酸的可溶性多肽；例如可以是12、16、18、20、24、28、32个氨基酸。
优选地，所述多肽为半胱氨酸-天冬氨酸-酪氨酸-丝氨酸-赖氨酸-脯氨酸-苏氨酸-天冬氨酸-精氨酸-谷氨酰胺-酪氨酸-组氨酸-苯丙氨酸-赖氨酸-甘氨酸-脯氨酸-丙氨酸-赖氨酸(C18烷基链)-甘氨酸-丙氨酸-天冬氨酸-酪氨酸-赖氨酸(C18烷基链)-脯氨酸-异亮氨酸-苏氨酸-缬氨酸-赖氨酸-缬氨酸-天冬酰胺所组成的多肽分子。
所述亲水性抗肿瘤多肽为PPA-1，是一种拮抗免疫检查点PD-L1能够抑制肿瘤生长的多肽拮抗剂，FAP-α的底物多肽为甘氨酸-甘氨酸-脯氨酸-丙氨酸-赖氨酸(GGPAK)，疏水分子为硬脂酸(C18烷基链)。
本发明制备的抗肿瘤多肽纳米组装体的粒径在20-80nm，粒径较均一，有利于在肿瘤部位的富集，提高了药物的靶向性，减少了对正常细胞的毒副作用。
第二方面，本发明提供一种上述抗肿瘤多肽纳米组装体的制备方法，所述方法包括以Fmoc固相合成策略合成亲水性抗肿瘤多肽、酶响应多肽和疏水性功能分子组成两亲性抗肿瘤多肽分子，而后在两亲性抗肿瘤多肽分子上引入酶响应性功能分子，然后进行自组装得到所述抗肿瘤多肽纳米组装体药物。
本发明中，两亲性多肽在水溶液中倾向于将其亲水部分暴露在外层与水分子形成交界面，疏水部分则聚集于内。在中性环境中，多肽分子主要通过疏水作用和氢键的物理相互作用力，自组装形成纳米颗粒。在肿瘤部位FAP-α酶的作用下使得自组装体变得松散并逐步释放出肿瘤免疫治疗PD-L1多肽分子，发挥抗肿瘤作用。
第三方面，本发明提供一种肿瘤免疫治疗纳米药物组合体系，所述肿瘤免疫治疗纳米药物组合体系是以上述抗肿瘤多肽纳米组装体作为载体，包载有化疗药物阿霉素(Dox)和瑞喹莫德(R848，TLR7/8激动剂)。
在肿瘤免疫治疗纳米药物组合体系中，抗肿瘤多肽纳米药物与疏水性的阿霉素和R848，在磷酸盐缓冲液或水中共组装成纳米球，肿瘤免疫治疗多肽纳米组装体作为载体将免疫激动剂包载于内腔。多肽自组装纳米结构在肿瘤部位解聚，并彻底释放出免疫治疗多肽和免疫佐剂R848调控肿瘤相关巨噬细胞，协同调控免疫抑制微环境，提高抗肿瘤免疫应答效率，达到联合抑制肿瘤的目的。
第四方面，本发明还提供上述肿瘤免疫治疗纳米药物组合体系在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明提供的抗肿瘤多肽纳米药物具有酶响应性，在肿瘤细胞外基质高表达FAP-α酶的环境下，实现较好的药物释放和富集并达到良好的药物可控释放效果。
第五方面，本发明还进一步提供一种药物组合物，其为载有阿霉素(Dox)和/或瑞喹莫德(R848)的上述抗肿瘤多肽纳米组装体。
本发明提供的制备方法简单，自组装过程中不生成共价键。
作为优选技术方案，本发明所述癌症为PD-L1过表达的癌症。
优选地，所述癌症为黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾癌、前列腺癌、结直肠癌、胰腺癌、胆管癌、肝癌、胃及食道癌、乳腺癌、小细胞肺癌等。
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。若未特别指明，实施例均按照常规实验条件，如Sambrook等分子克隆实验手册(Sambrook J&Russell DW，Molecular Cloning:a Laboratory Manual，2001)，或按照制造厂商说明书建议的条件。
实施例1 PD-L1多肽纳米组装体PCP的合成和表征
1、实验仪器与材料
N-甲基吗啉(NMM)，哌啶，三氟乙酸(TFA)，二氯甲烷(DCM)，茚三酮，维生素C，苯酚，四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)，六氢吡啶，三异丙基硅烷(TIS)，乙二硫醇(EDT)，人结肠癌细胞(MC38)购自ATCC。CO2细胞培养箱、荧光显微镜、小型离心机、数显恒温水浴锅。
按照固相合成法合成两亲性多肽PCP，用于偶联C18功能分子的赖氨酸侧链的氨基由苄氧羰基保护，全部合成完后用高浓度三氟乙酸将肽链从树脂上裂解下来，经过纯化处理即得到两亲性抗肿瘤多肽PCP：CNYSKPTDRQYHFK(C18烷基链)GGPAK(C18烷基链)GADYKPITVKVN(SEQ ID NO:1)。该序列中间的赖氨酸用Lys(Dde)保护基团，在多肽序列全部合成完后用2％水合肼只会脱掉Dde基团暴露中间赖氨酸侧链氨基然后偶连硬脂酸，最后用六氢吡啶脱掉C端氨基的Fmoc保护基团。
将PCP(1.0mg)和疏水药物(DOX或R848)溶解于20μL DMSO中，加入2mL PBS溶液混合，80W超声1min，间隔1min，共重复5次，进行共组装，室温孵育1h后，6000g室温离心5min后收集水相进行表征。PCP/R848/DOX的载药摩尔比确定为大约10:3:1的PCP、R848和DOX。利用透射电镜对得到的多肽纳米组装体进行形态以及粒径表征，结果如图1所示，制备得到的肿瘤免疫治疗多肽组装体呈球形，颗粒大小较均一，平均粒径约为40nm。
将制备的纳米药物组合体系分别置于1×PBS磷酸盐缓冲液和含有重组FAP-α酶的1×PBS磷酸盐缓冲液中，每个样本取1mL分别置于截留分子量为3K的透析袋中，并分别放入同种100mL溶液环境中透析，在0h、2h、4h、8h、12h、24h、36h、48h分别取透析液，用高效液相色谱测定或荧光光谱仪测试透析液中的含量，并换算出释放的量占纳米药物体系装载的量的百分比，即为每个时间点纳米药物组合体系的释药率。结果如图2所示，在没有FAP-α酶的情况下，PCP@R848/DOX和PNP@R848/DOX以同样低的速率释放DOX(在48小时内小于40％)。PCP@R848/DOX在FAP-α酶存在时3小时内释放几乎所有负载药物，PCP@R848/DOX对FAP-α酶的快速释药行为归因于FAP-α酶触发PCP裂解，有望极大地提高肿瘤部位的有效药物浓度。其中，PNP@R848/DOX为对照，PNP与PCP的区别仅在于GGAAK为非FAP-α酶响应底物，故不能被FAP-α酶切割。PNP：CNYSKPTDRQYHFK(C18烷基链)GGAAK(C18烷基链)GADYKPITVKVN。
为了测试PCP是否能够阻断PD-1/PD-L1相互作用，将1mg/mL PD-1或PD-L1斑点到芯片上，4℃湿润条件下孵育过夜。然后用10×PBS清洗10min，1×PBS清洗10min，最后用去离子水清洗2次，每次10min，用氮气吹干，装芯片上机(Plexera
Figure BDA0002770810780000071
HT表面等离子共振成像系统)。在PD-1固定化裸金芯片上进行SPR分析之前，将50nM的PD-L1外膜结构域的与PCP孵育，然后进行SPR测试。由图3的RU值可以看出，PCP浓度的增加导致PD-1/PD-L1的SPR结合信号的减少。这表明PCP有效地抑制了PD-L1与固定化hPD-1的结合。说明多肽组装体能抑制PD-1/PD-L1蛋白与蛋白的相互作用并激活抗肿瘤免疫反应。
实施例2 PCP组装体在体外的免疫抑制和对巨噬细胞向M1极化调控作用
为了研究多肽纳米组装体对肿瘤细胞MC38、巨噬细胞Raw264.7和树突细胞DC2.4的靶向作用。三种细胞以1×105的密度接种到共聚焦显微镜培养皿中。细胞在37℃条件下孵育24小时后，用100μg/mL的Cy5.5标记多肽组装体PCP处理4小时(FAP-α酶预处理1小时)，然后用冷的PBS洗涤细胞，最后用Hoechst 33342孵育10分钟，以染色细胞核。采用激光共聚焦成像(LSM710 CLSM)进行分析。如图4所示，PCP@R848/DOX(Cy5.5)在三种细胞内有显著积累，并通过溶酶进行共定位，表明R848被有效地递送到核内体中。
将Raw264.7(1×106/孔)置于6孔板中培养过夜，用IL-4(10ng/mL)极化处理细胞24小时后得到M2巨噬细胞，然后用可溶性R848(25μg/mL)、PCP@R848/DOX或对照组处理24小时。之后使用Trizol试剂(Invitrogen，USA)从细胞中提取总RNA，使用PrimeScriptRT试剂盒(TaKaRa)使用反向转录成cDNA。使用SYBRPremix Ex Taq(TaKaRa)在qPCR中分析M1标志物(TNF-α，CD86，iNOS)和M2标志物(CD206，TGF-β，Arg-1)的mRNA表达水平变化。用GAPDH对mRNA水平进行归一化处理。如图5所示，多肽组装体PCP@R848/DOX处理后，Raw264.7的M2表型marker明显降低，而M1表型marker明显上调，说明合成的多肽纳米组装体可以调控巨噬细胞的表型极化进行抗肿瘤治疗。
实施例3 PCP纳米组装体的体内抗肿瘤免疫反应
为了评估体内免疫治疗效果，C57BL/6小鼠(6～8周)购自维通利华实验动物科技有限公司。将MC38细胞(1×106个细胞)皮下注射至小鼠后腿右侧背部皮下，获得荷瘤小鼠。待肿瘤体积的大小为75mm3，将MC38肿瘤小鼠随机分为5组(n＝5)：1)PBS组；(2)PCP组；(3)PCP@R848(PCP自组装只包裹R848一种药物，PCP@R848的制备方法同PCP@R848/DOX)；(4)PNP@R848/DOX和(5)PCP@R848/DOX，尾静脉注射100μL不同药物，每只2.5mg/kg。分别在第1、3、5和7天各注射一次。每3天测量肿瘤大小和小鼠体重。
在第22天治疗结束后，处死小鼠取下主要脏器和肿瘤，然后称重并拍照。主要脏器和肿瘤组织进行石蜡包埋和切片，H&E染色，Tunel凋亡染色和用PE-anti-CD3和FITC-anti-CD8进行免疫荧光染色评价抗肿瘤效果。
从图6可以看出，经不同药物治疗后和对照组相比，肿瘤都有不同程度的被抑制，但PCP@R848/DOX纳米组装体的联合治疗比单药治疗具有更高的抗肿瘤，是由于在肿瘤部位酶切响应下快速释放免疫治疗药物，发生协同的抗肿瘤作用。图7的HE和Tunel凋亡染色显示多肽纳米组装体组合药物导致肿瘤出现了明显的凋亡和坏死，同时，肿瘤里出现了大量的CD3和CD8激活免疫细胞，说明PCP@R848/DOX纳米组装体的联合治疗可以最大程度的激活体内免疫反应进行抗肿瘤治疗。
综上，本发明的PD-L1多肽纳米组装体具有靶向PD-L1阳性肿瘤细胞和激活免疫反应的特性，在实际应用中，可以将本发明的多肽组装体作为靶向多肽药物载体，与能杀伤癌细胞的免疫制剂和药物混合，用于肿瘤的组合免疫治疗。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之做一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110> 福建医科大学
<120> 靶向PD-L1的抗肿瘤多肽纳米药物载体及其应用
<130> KHP201117509.6
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Cys Asn Tyr Ser Lys Pro Thr Asp Arg Gln Tyr His Phe Lys Gly Gly
1 5 10 15
Pro Ala Lys Gly Ala Asp Tyr Lys Pro Ile Thr Val Lys Val Asn
20 25 30

Claims (10)

1.靶向PD-L1的抗肿瘤多肽纳米药物载体，其特征在于，所述抗肿瘤多肽纳米药物载体包含靶向PD-L1的多肽分子和酶响应性多肽分子，且所述靶向PD-L1的多肽分子和所述酶响应性多肽分子由硬脂酸修饰；所述抗肿瘤多肽纳米药物载体具有两亲性；
其中，所述靶向PD-L1的多肽分子是具有阻断PD-L1/PD-1信号通路功能的可溶性多肽分子，由9-35个氨基酸组成；
所述酶响应性多肽分子为FAP-α酶的底物。
2.根据权利要求1所述的抗肿瘤多肽纳米药物载体，其特征在于，所述靶向PD-L1的多肽分子由12、14、16、18、20、24、28或32个氨基酸组成。
3.根据权利要求1所述的抗肿瘤多肽纳米药物载体，其特征在于，所述酶响应性多肽分子为GGPAK。
4.根据权利要求1所述的抗肿瘤多肽纳米药物载体，其特征在于，所述抗肿瘤多肽纳米药物载体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，硬脂酸通过末端羧基分别偶联至SEQ ID NO:1所示序列的第14位和第19位赖氨酸的氨基上。
5.根据权利要求1所述的抗肿瘤多肽纳米药物载体，其特征在于，所述抗肿瘤多肽纳米药物载体还包含靶向PD-1的多肽分子。
6.根据权利要求5所述的抗肿瘤多肽纳米药物载体，其特征在于，所述抗肿瘤多肽纳米药物载体从N端到C端由所述靶向PD-L1的多肽分子、所述酶响应性多肽分子和所述靶向PD-1的多肽分子串联而成。
7.根据权利要求1-6任一项所述的抗肿瘤多肽纳米药物载体，其特征在于，所述抗肿瘤多肽纳米药物载体在中性溶液中进行自组装形成纳米颗粒，所述纳米颗粒的粒径为20-80nm；
优选地，所述中性溶液为磷酸盐缓冲液。
8.根据权利要求1-7任一项所述抗肿瘤多肽纳米药物载体的以下任一应用：
1)用于制备抗肿瘤药物；
2)作为抗肿瘤药物载体或递送系统。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为PD-L1过表达的肿瘤；
优选地，所述肿瘤选自黑色素瘤、非小细胞肺癌、肾癌、前列腺癌、结直肠癌、胰腺癌、胆管癌、肝癌、胃癌、食道癌、乳腺癌。
10.抗肿瘤药物，其特征在于，其为载有阿霉素和/或瑞喹莫德的权利要求1-7任一项所述抗肿瘤多肽纳米药物载体。
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