CN112390879A - 靶向SARS-CoV-2的抗体及其制备方法和应用 - Google Patents
靶向SARS-CoV-2的抗体及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112390879A CN112390879A CN202110078599.0A CN202110078599A CN112390879A CN 112390879 A CN112390879 A CN 112390879A CN 202110078599 A CN202110078599 A CN 202110078599A CN 112390879 A CN112390879 A CN 112390879A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antibody
- cov
- sars
- antigen
- binding fragment
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 title claims abstract description 86
- 230000008685 targeting Effects 0.000 title claims abstract description 43
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 67
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims abstract description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 53
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 47
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 43
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 43
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 43
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 20
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 claims description 17
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 claims description 17
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 claims description 17
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 16
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 15
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 13
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 13
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 13
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 claims description 11
- 201000003176 Severe Acute Respiratory Syndrome Diseases 0.000 claims description 10
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 7
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 claims description 6
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000000890 drug combination Substances 0.000 claims description 5
- 208000037847 SARS-CoV-2-infection Diseases 0.000 claims description 4
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 3
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 claims description 3
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 claims description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 claims description 2
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 claims description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 claims 1
- 230000009465 prokaryotic expression Effects 0.000 claims 1
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 abstract description 16
- 108091005634 SARS-CoV-2 receptor-binding domains Proteins 0.000 abstract description 16
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 abstract description 16
- 241001112090 Pseudovirus Species 0.000 abstract description 13
- 102100031673 Corneodesmosin Human genes 0.000 abstract description 8
- 101710139375 Corneodesmosin Proteins 0.000 abstract description 8
- 108090000975 Angiotensin-converting enzyme 2 Proteins 0.000 abstract description 7
- 230000017188 evasion or tolerance of host immune response Effects 0.000 abstract description 7
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 5
- 102000053723 Angiotensin-converting enzyme 2 Human genes 0.000 abstract description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 34
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 33
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 21
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 15
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 12
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 9
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 7
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 7
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 description 5
- 101710198474 Spike protein Proteins 0.000 description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 5
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- 102100035765 Angiotensin-converting enzyme 2 Human genes 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 239000004138 Stearyl citrate Substances 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 3
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 3
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AMIQZQAAYGYKOP-FXQIFTODSA-N Arg-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O AMIQZQAAYGYKOP-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- QLSRIZIDQXDQHK-RCWTZXSCSA-N Arg-Val-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QLSRIZIDQXDQHK-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- CIMULJZTTOBOPN-WHFBIAKZSA-N Gly-Asn-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O CIMULJZTTOBOPN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- YWAQATDNEKZFFK-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YWAQATDNEKZFFK-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- NZOCIWKZUVUNDW-ZKWXMUAHSA-N Ile-Gly-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O NZOCIWKZUVUNDW-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- PXKACEXYLPBMAD-JBDRJPRFSA-N Ile-Ser-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N PXKACEXYLPBMAD-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 2
- ILDSIMPXNFWKLH-KATARQTJSA-N Leu-Thr-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ILDSIMPXNFWKLH-KATARQTJSA-N 0.000 description 2
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 2
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 2
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 2
- MNYNCKZAEIAONY-XGEHTFHBSA-N Thr-Val-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MNYNCKZAEIAONY-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 108010069926 arginyl-glycyl-serine Proteins 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 2
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 2
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- MFRNYXJJRJQHNW-DEMKXPNLSA-N (2s)-2-[[(2r,3r)-3-methoxy-3-[(2s)-1-[(3r,4s,5s)-3-methoxy-5-methyl-4-[methyl-[(2s)-3-methyl-2-[[(2s)-3-methyl-2-(methylamino)butanoyl]amino]butanoyl]amino]heptanoyl]pyrrolidin-2-yl]-2-methylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoic acid Chemical group CN[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N(C)[C@@H]([C@@H](C)CC)[C@H](OC)CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MFRNYXJJRJQHNW-DEMKXPNLSA-N 0.000 description 1
- KVWLTGNCJYDJET-LSJOCFKGSA-N Ala-Arg-His Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N KVWLTGNCJYDJET-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- BTYTYHBSJKQBQA-GCJQMDKQSA-N Ala-Asp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N)O BTYTYHBSJKQBQA-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 1
- BTRULDJUUVGRNE-DCAQKATOSA-N Ala-Pro-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O BTRULDJUUVGRNE-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- MUGAESARFRGOTQ-IGNZVWTISA-N Ala-Tyr-Tyr Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)N MUGAESARFRGOTQ-IGNZVWTISA-N 0.000 description 1
- ZDILXFDENZVOTL-BPNCWPANSA-N Ala-Val-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZDILXFDENZVOTL-BPNCWPANSA-N 0.000 description 1
- 102100030988 Angiotensin-converting enzyme Human genes 0.000 description 1
- OZNSCVPYWZRQPY-CIUDSAMLSA-N Arg-Asp-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OZNSCVPYWZRQPY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- WVNFNPGXYADPPO-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Ser Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WVNFNPGXYADPPO-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- JJGRJMKUOYXZRA-LPEHRKFASA-N Asn-Arg-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)C(=O)O JJGRJMKUOYXZRA-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- CPYHLXSGDBDULY-IHPCNDPISA-N Asn-Trp-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O CPYHLXSGDBDULY-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- NYLBGYLHBDFRHL-VEVYYDQMSA-N Asp-Arg-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O NYLBGYLHBDFRHL-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 1
- VAWNQIGQPUOPQW-ACZMJKKPSA-N Asp-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VAWNQIGQPUOPQW-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- VFUXXFVCYZPOQG-WDSKDSINSA-N Asp-Glu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O VFUXXFVCYZPOQG-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- GCACQYDBDHRVGE-LKXGYXEUSA-N Asp-Thr-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@H](O)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O GCACQYDBDHRVGE-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- ALMIMUZAWTUNIO-BZSNNMDCSA-N Asp-Tyr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ALMIMUZAWTUNIO-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 241000008904 Betacoronavirus Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 241000579120 Coliiformes Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- AMRLSQGGERHDHJ-FXQIFTODSA-N Cys-Ala-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O AMRLSQGGERHDHJ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- HHABWQIFXZPZCK-ACZMJKKPSA-N Cys-Gln-Ser Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N HHABWQIFXZPZCK-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- RZSLYUUFFVHFRQ-FXQIFTODSA-N Gln-Ala-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O RZSLYUUFFVHFRQ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- KVXVVDFOZNYYKZ-DCAQKATOSA-N Gln-Gln-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KVXVVDFOZNYYKZ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- GHAXJVNBAKGWEJ-AVGNSLFASA-N Gln-Ser-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O GHAXJVNBAKGWEJ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- OTQSTOXRUBVWAP-NRPADANISA-N Gln-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O OTQSTOXRUBVWAP-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- YQPFCZVKMUVZIN-AUTRQRHGSA-N Glu-Val-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O YQPFCZVKMUVZIN-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 1
- GNBMOZPQUXTCRW-STQMWFEESA-N Gly-Asn-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CN)C(O)=O)=CNC2=C1 GNBMOZPQUXTCRW-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- VAXIVIPMCTYSHI-YUMQZZPRSA-N Gly-His-Asp Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)CN VAXIVIPMCTYSHI-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- MIIVFRCYJABHTQ-ONGXEEELSA-N Gly-Leu-Val Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O MIIVFRCYJABHTQ-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- FKYQEVBRZSFAMJ-QWRGUYRKSA-N Gly-Ser-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FKYQEVBRZSFAMJ-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- JQFILXICXLDTRR-FBCQKBJTSA-N Gly-Thr-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCC(O)=O JQFILXICXLDTRR-FBCQKBJTSA-N 0.000 description 1
- ZZWUYQXMIFTIIY-WEDXCCLWSA-N Gly-Thr-Leu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ZZWUYQXMIFTIIY-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- JFFAPRNXXLRINI-NHCYSSNCSA-N His-Asp-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O JFFAPRNXXLRINI-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- FOCSWPCHUDVNLP-PMVMPFDFSA-N His-Trp-Tyr Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC3=CC=C(C=C3)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC4=CN=CN4)N FOCSWPCHUDVNLP-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 1
- WYKXJGWSJUULSL-AVGNSLFASA-N His-Val-Arg Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@@H](N)Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(=N)N)C(=O)O WYKXJGWSJUULSL-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- ASCFJMSGKUIRDU-ZPFDUUQYSA-N Ile-Arg-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O ASCFJMSGKUIRDU-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- FBGXMKUWQFPHFB-JBDRJPRFSA-N Ile-Ser-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N FBGXMKUWQFPHFB-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- HXIDVIFHRYRXLZ-NAKRPEOUSA-N Ile-Ser-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N HXIDVIFHRYRXLZ-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- YBKKLDBBPFIXBQ-MBLNEYKQSA-N Ile-Thr-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)O)N YBKKLDBBPFIXBQ-MBLNEYKQSA-N 0.000 description 1
- NXRNRBOKDBIVKQ-CXTHYWKRSA-N Ile-Tyr-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)N NXRNRBOKDBIVKQ-CXTHYWKRSA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- UGTHTQWIQKEDEH-BQBZGAKWSA-N L-alanyl-L-prolylglycine zwitterion Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O UGTHTQWIQKEDEH-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- NRFGTHFONZYFNY-MGHWNKPDSA-N Leu-Ile-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NRFGTHFONZYFNY-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 1
- VCHVSKNMTXWIIP-SRVKXCTJSA-N Leu-Lys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VCHVSKNMTXWIIP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- BRTVHXHCUSXYRI-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BRTVHXHCUSXYRI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- LINKCQUOMUDLKN-KATARQTJSA-N Leu-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N)O LINKCQUOMUDLKN-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- LCNASHSOFMRYFO-WDCWCFNPSA-N Leu-Thr-Gln Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O LCNASHSOFMRYFO-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- AIMGJYMCTAABEN-GVXVVHGQSA-N Leu-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AIMGJYMCTAABEN-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- YKIRNDPUWONXQN-GUBZILKMSA-N Lys-Asn-Gln Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N YKIRNDPUWONXQN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- GQFDWEDHOQRNLC-QWRGUYRKSA-N Lys-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN GQFDWEDHOQRNLC-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- YTJFXEDRUOQGSP-DCAQKATOSA-N Lys-Pro-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YTJFXEDRUOQGSP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- SBQDRNOLGSYHQA-YUMQZZPRSA-N Lys-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SBQDRNOLGSYHQA-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 208000025370 Middle East respiratory syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000127282 Middle East respiratory syndrome-related coronavirus Species 0.000 description 1
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- MQVFHOPCKNTHGT-MELADBBJSA-N Phe-Asp-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N)C(=O)O MQVFHOPCKNTHGT-MELADBBJSA-N 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 229920002594 Polyethylene Glycol 8000 Polymers 0.000 description 1
- JARJPEMLQAWNBR-GUBZILKMSA-N Pro-Asp-Arg Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O JARJPEMLQAWNBR-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- AFXCXDQNRXTSBD-FJXKBIBVSA-N Pro-Gly-Thr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O AFXCXDQNRXTSBD-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 1
- LEIKGVHQTKHOLM-IUCAKERBSA-N Pro-Pro-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 LEIKGVHQTKHOLM-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- FDMKYQQYJKYCLV-GUBZILKMSA-N Pro-Pro-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H]1NCCC1 FDMKYQQYJKYCLV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- PZZJMBYSYAKYPK-UWJYBYFXSA-N Ser-Ala-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O PZZJMBYSYAKYPK-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- UQFYNFTYDHUIMI-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO UQFYNFTYDHUIMI-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- KDGARKCAKHBEDB-NKWVEPMBSA-N Ser-Gly-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O KDGARKCAKHBEDB-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- XXXAXOWMBOKTRN-XPUUQOCRSA-N Ser-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O XXXAXOWMBOKTRN-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- MQQBBLVOUUJKLH-HJPIBITLSA-N Ser-Ile-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O MQQBBLVOUUJKLH-HJPIBITLSA-N 0.000 description 1
- FUMGHWDRRFCKEP-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FUMGHWDRRFCKEP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N Ser-Leu-Lys Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- OLKICIBQRVSQMA-SRVKXCTJSA-N Ser-Ser-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O OLKICIBQRVSQMA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- ZKOKTQPHFMRSJP-YJRXYDGGSA-N Ser-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZKOKTQPHFMRSJP-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- OSFZCEQJLWCIBG-BZSNNMDCSA-N Ser-Tyr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O OSFZCEQJLWCIBG-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 101000667982 Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 Envelope small membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 101000629318 Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 Spike glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 244000064864 Sorghum bicolor var. caffrorum Species 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- KBBRNEDOYWMIJP-KYNKHSRBSA-N Thr-Gly-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N)O KBBRNEDOYWMIJP-KYNKHSRBSA-N 0.000 description 1
- YOOAQCZYZHGUAZ-KATARQTJSA-N Thr-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YOOAQCZYZHGUAZ-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- DXPURPNJDFCKKO-RHYQMDGZSA-N Thr-Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@H](NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O)C(O)=O DXPURPNJDFCKKO-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- FWTFAZKJORVTIR-VZFHVOOUSA-N Thr-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FWTFAZKJORVTIR-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- BKVICMPZWRNWOC-RHYQMDGZSA-N Thr-Val-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O BKVICMPZWRNWOC-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- SVGAWGVHFIYAEE-JSGCOSHPSA-N Trp-Gly-Gln Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 SVGAWGVHFIYAEE-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- YRXXUYPYPHRJPB-RXVVDRJESA-N Trp-Gly-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC3=CNC4=CC=CC=C43)C(=O)O)N YRXXUYPYPHRJPB-RXVVDRJESA-N 0.000 description 1
- KIMOCKLJBXHFIN-YLVFBTJISA-N Trp-Ile-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O)=CNC2=C1 KIMOCKLJBXHFIN-YLVFBTJISA-N 0.000 description 1
- AKXBNSZMYAOGLS-STQMWFEESA-N Tyr-Arg-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AKXBNSZMYAOGLS-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- VTFWAGGJDRSQFG-MELADBBJSA-N Tyr-Asn-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N)C(=O)O VTFWAGGJDRSQFG-MELADBBJSA-N 0.000 description 1
- BARBHMSSVWPKPZ-IHRRRGAJSA-N Tyr-Asp-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O BARBHMSSVWPKPZ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- AZGZDDNKFFUDEH-QWRGUYRKSA-N Tyr-Gly-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AZGZDDNKFFUDEH-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- WYOBRXPIZVKNMF-IRXDYDNUSA-N Tyr-Tyr-Gly Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)NCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 WYOBRXPIZVKNMF-IRXDYDNUSA-N 0.000 description 1
- NVJCMGGZHOJNBU-UFYCRDLUSA-N Tyr-Val-Phe Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N NVJCMGGZHOJNBU-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 1
- 101150117115 V gene Proteins 0.000 description 1
- VMRFIKXKOFNMHW-GUBZILKMSA-N Val-Arg-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N VMRFIKXKOFNMHW-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- UGFMVXRXULGLNO-XPUUQOCRSA-N Val-Ser-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O UGFMVXRXULGLNO-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- CEKSLIVSNNGOKH-KZVJFYERSA-N Val-Thr-Ala Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O CEKSLIVSNNGOKH-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- IEDXPSOJFSVCKU-HOKPPMCLSA-N [4-[[(2S)-5-(carbamoylamino)-2-[[(2S)-2-[6-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)hexanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]pentanoyl]amino]phenyl]methyl N-[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(3R,4S,5S)-1-[(2S)-2-[(1R,2R)-3-[[(1S,2R)-1-hydroxy-1-phenylpropan-2-yl]amino]-1-methoxy-2-methyl-3-oxopropyl]pyrrolidin-1-yl]-3-methoxy-5-methyl-1-oxoheptan-4-yl]-methylamino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]-N-methylcarbamate Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H]([C@@H](CC(=O)N1CCC[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)c1ccccc1)OC)N(C)C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)OCc1ccc(NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCCN2C(=O)CCC2=O)C(C)C)cc1)C(C)C IEDXPSOJFSVCKU-HOKPPMCLSA-N 0.000 description 1
- 108010081404 acein-2 Proteins 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 108010008685 alanyl-glutamyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000012215 gene cloning Methods 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 108010078144 glutaminyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108010087846 prolyl-prolyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 238000009877 rendering Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 108010072986 threonyl-seryl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Abstract
本发明提供了靶向SARS‑CoV‑2的抗体及其制备方法和应用，该抗体包含VH和VL，所述VH包含以下CDR：氨基酸序列如SEQ ID NO:1、2、3所示的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3；所述VL包含以下的CDR：氨基酸序列如SEQ ID NO:4、5、6所示的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3。该抗体能够高亲和且特异地结合SARS‑CoV‑2的S蛋白的RBD，抑制RBD蛋白与受体ACE2蛋白的结合，高效地抑制SARS‑CoV‑2感染细胞，同时对潜在的免疫逃逸突变的假病毒具有很好的中和活性，从而可有效应用于SARS‑CoV‑2病毒及相关疾病的诊断、预防和治疗中。
Description
技术领域
本发明涉及免疫学、病毒学及生物医药领域，具体涉及一种靶向SARS-CoV-2的抗体及其制备方法和应用。
背景技术
新型冠状病毒SARS-CoV-2是导致新冠肺炎（COVID19）的病原体，其传染性强，传播途径广。SARS-CoV-2是一种单链RNA病毒，与引发重症急性呼吸综合征的SARS-CoV以及引发中东呼吸综合征的MERS-CoV均属于beta冠状病毒。SARS-CoV-2包膜上分布着刺突蛋白（spike, S蛋白），其形成同源三聚体，感染过程中，S蛋白能够将受体结合结构域（receptorbinding domain, RBD）打开，暴露受体结合基序（receptor binding motif, RBM）从而与宿主细胞上的受体血管紧张素转换酶2（angiotensin converting enzyme 2, ACE2）结合，并进一步与宿主细胞膜融合，最终导致细胞被病毒感染。
新冠病毒中和抗体已被证明是治疗COVID19的有效方案，目前已经有一系列高亲和力中和抗体的报道，其中一部分已经进入临床实验，如再生元（Regeneron）公司的REGN-CoV 2系列抗体以及君实生物公司的JS016（CB6）抗体。然而，作为RNA病毒，其基因组不稳定，在传播过程中有较高的突变几率，而发生在S蛋白的突变极有可能改变病毒的感染特性，并对中和抗体的疗效产生明显的影响。如D614G突变，已经成为此次疫情中的主要形式。另外，有一系列突变已被证明能够引起免疫逃逸，使其对中和抗体的治疗产生耐药性。这些潜在的变异对新冠病毒的防治造成了极大的风险。为规避这些风险，目前的主流策略是使用抗体组成药物组合物，如再生元公司的REGN10933+REGN10987组合物。理论上，由于病毒在不同位点上同时发生突变的病毒较低，这类组合物能够通过同时作用于不同的抗原表位从而避免病毒发生逃逸。然而，在未来的疾病治疗过程中，病毒在抗体的选择压力下仍有潜在的变异可能，这种组合策略并没有从根本上解决免疫逃逸的问题。
因此，仍有待开发能够高亲和力且特异性地结合SARS-CoV-2病毒的同时，能够最大程度避免免疫逃逸现象发生的抗体。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术中预防、治疗或检测新型冠状病毒SARS-CoV-2药物的不足，提供了一种靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段及其制备方法和应用。
为了解决上述技术问题，本发明第一方面提供了一种靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区（VH）和/或轻链可变区（VL），
所述VH包含以下的互补决定区（CDR）（至少具有以下特征之一）：氨基酸序列如SEQ IDNO: 1（GGSISSSSYY）所示的VH CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO: 2（IYYRGST）所示的VHCDR2，和/或，氨基酸序列如SEQ ID NO: 3（ARHVRSAYYYGSGSYRDEGNWFDP）所示的VH CDR3；
所述VL包含以下的CDR（至少具有以下特征之一）：氨基酸序列如SEQ ID NO: 4（RSNIGAGHD）所示的VL CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO: 5（GNNN）所示的VL CDR2，和/或，氨基酸序列如SEQ ID NO: 6（QSYDRTLTSYV）所示的VL CDR3；
或者，所述VH在所述的VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3的氨基酸序列的基础上分别具有3、2或1个氨基酸突变，和/或，所述VL在所述的VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3氨基酸序列的基础上分别具有3、2或1个氨基酸突变。
本申请中，在类似“具有3、2或1个氨基酸的插入、缺失或替换”中“氨基酸突变”是指相较于原氨基酸序列而言，变体的序列存在氨基酸的突变，包括在原氨基酸序列的基础上发生氨基酸的插入、缺失或替换。示例性的解释是对CDR的突变可以包含3个、2个或1个氨基酸的突变，这些CDR之间可以任选地选择相同或不同数目的氨基酸残基进行突变，例如可以是对CDR1进行1个氨基酸的突变，对CDR2和CDR3不进行氨基酸突变。
本申请中，所述突变可以包括目前如本领域技术人员公知的突变，例如在抗体的生产或者应用过程中，可能会对抗体进行的一些突变，例如对可能存在的，特别是CDR区的转录后修饰（Potential post-translational modifications，PTMs）的位点进行突变，包括抗体的聚集、脱酰胺基敏感（asparagine deamidation，位点（NG，NS，NH等）、天冬氨酸异构（DG，DP）敏感位点、N糖基化（N-{P}S/T）敏感位点及氧化敏感位点等相关突变。
优选地，所述VH还包括重链可变区框架区（VH FWR）；和/或，所述VL还包括轻链可变区框架区（VL FWR）。在一些优选地具体实施例中，所述VH FWR为人抗体的重链可变区框架区。在一些优选地具体实施例中，所述VL FWR为人抗体的轻链可变区框架区。
更优选地，所述VH的氨基酸序列如SEQ ID NO: 7（EVQLVESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYRGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARHVRSAYYYGSGSYRDEGNWFDPWGQGTLVTVSS）或其突变所示。进一步更优选地，所述VH的核苷酸序列如SEQ ID NO: 9（GAGGTGCAGCTGGTGGAAAGCGGACCCGGCCTGGTCAAGCCTTCTGAAACCCTGAGCCTGACCTGCACCGTGTCCGGCGGCTCCATCTCTAGCAGCAGCTACTACTGGGGCTGGATCAGACAGCCACCTGGAAAAGGCCTGGAATGGATTGGCAGCATCTACTACCGGGGCAGCACCTACTACAACCCCAGCCTGAAAAGCAGAGTGACAATCAGCGTGGACACCTCAAAGAACCAGTTTAGCCTTAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCCGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGACACGTGCGGAGTGCTTATTACTACGGCAGCGGCTCTTATCGGGACGAGGGCAATTGGTTCGACCCCTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTGTCCAGC）所示。
更优选地，所述VL的氨基酸序列如SEQ ID NO: 8（QSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGTRSNIGAGHDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNNNRPSGVPDRFSGAKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDRTLTSYVFGTGTKVTVL）或其突变所示。进一步更优选地，所述VL的核苷酸序列如SEQ ID NO: 10（CAGAGCGTGCTGACCCAGCCTCCAAGCGTGTCTGGAGCTCCTGGACAAAGAGTGACCATCAGCTGTACAGGCACAAGAAGCAACATCGGCGCTGGCCACGATGTGCACTGGTACCAGCAACTGCCTGGCACCGCCCCTAAGCTGCTGATCTACGGCAACAACAATAGACCTTCTGGCGTGCCCGATAGATTCTCCGGAGCCAAGTCCGGCACAAGCGCCAGCCTGGCCATCACCGGCCTGCAGGCCGAGGACGAGGCCGATTACTATTGTCAGTCTTACGACAGAACCCTGACAAGCTACGTGTTCGGCACAGGAACAAAGGTGACCGTGCTG）所示。
上述突变为所述VH和/或VL的氨基酸序列上发生了一个或多个氨基酸残基的缺失、取代或添加，且所述突变的氨基酸序列与所述VH和/或VL的氨基酸序列具有至少85%序列同一性，并保持或改善了所述抗体与SARS-CoV-2的结合；所述至少85%序列同一性优选为至少90%序列同一性，更优选为至少95%序列同一性，最优选为至少99%序列同一性。
在本申请中，上述所列CDR的氨基酸序列均是按照IMGT定义规则所示出的。但是，本领域人员公知，在本领域中可以通过多种方法来定义抗体的CDR，例如基于序列可变性的Kabat定义规则（参见，Kabat等人，免疫学的蛋白质序列，第五版，美国国立卫生研究院，贝塞斯达，马里兰州（1991））和基于结构环区域位置的Chothia定义规则（参见JMol Biol273:927-48,1997）。本领域技术人员应当理解的是，除非另有规定，否则术语给定抗体或其区（例如可变区）的“CDR”及“互补决定区”应了解为涵盖如通过本发明描述的上述已知方案中的任何一种界定的互补决定区。虽然本发明中请求保护的范围是基于IMGT定义规则所示出的序列，但是根据其他CDR的定义规则所对应的氨基酸序列也应当落在本发明的保护范围中。
优选地，所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段为全长抗体、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv、VHH（单域抗体）、HCAb、嵌合抗体、双特异性抗体或多特异性抗体，或由上述抗体制得的单克隆抗体或多克隆抗体。
本申请中，所述的“Fab片段”由一条轻链和一条重链的CH1及可变区组成。Fab分子的重链不能与另一个重链分子形成二硫键。“Fc”区含有抗体的CH1和CH2结构域的两个重链片段。两个重链片段由两个或多个二硫键并通过CH3结构域的疏水作用保持在一起。所述的“Fab片段”含有一条轻链和包含VH结构域和CH1结构域以及CH1和CH2结构域之间区域的一条重链的部分，由此可在两个Fab’片段的两条重链之间形成链间二硫键以形成F(ab’)2分子。所述的“F(ab’)2片段”含有两条轻链和两条包含CH1和CH2结构域之间的恒定区的部分的重链，由此在两条重链间形成链间二硫键。因此F(ab’)2片段由通过两条重链间的二硫键保持在一起的两个Fab’片段组成。所述的术语“Fv”意指向抗体的单臂的VL和VH结构域组成的抗体片段，但缺少恒定区。
本申请中，所述的scFv（single chain antibody fragment，单链抗体）可为本领域常规的单链抗体，其包括重链可变区、轻链可变区和15~20个氨基酸的短肽。其中VL和VH结构域通过使其能够产生为单个多肽链的连接体配对形成单价分子[参见，例如，Bird等人，Science 242:423-426 (1988) 和Huston等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883(1988)]。此类scFv分子可具有一般结构：NH2-VL-接头-VH-COOH或NH2-VH-接头-VL-COOH。合适的现有技术接头由重复的G4S氨基酸序列或其变体组成。例如，可使用具有氨基酸序列(G4S)4或(G4S)3接头，但也可使用其变体。
本申请中，术语“多特异性抗体”按其最广义使用，涵盖具有多表位特异性的抗体。这些多特异性抗体包括但不限于：包含重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）的抗体，其中该VH-VL单元具有多表位特异性；具有两个或多个VL和VH区的抗体，每个VH-VL单元与不同的靶点或同一个靶点的不同表位结合；具有两个或更多个单可变区的抗体，每个单可变区与不同的靶点或同一个靶点的不同的表位结合；全长抗体、抗体片段、双特异性抗体（diabodies）、和三抗体（triabodies）、共价或非共价连接在一起的抗体片段等。
本申请中，所述的单克隆抗体或mAb或Ab，指由单一的克隆细胞株得到的抗体，所述的细胞株不限于真核的，原核的或噬菌体的克隆细胞株。
本申请中，所述的“重链抗体”指的是只包含一个重链可变区（VHH）和两个常规的CH2与CH3区的抗体，又称为HCAb。
“单域抗体”，又称为“纳米抗体”，指的是从重链抗体中克隆出来的VHH结构，是已知的可结合目标抗原的最小单位。
在某一较佳实施例中，其是全长抗体，所述全长抗体包括重链和轻链。
优选地，其还包括重链恒定区和/或轻链恒定区。例如所述重链恒定区可以选自hIgG1、hIgG2、hIgG3或hIgG4；例如所述轻链恒定区可以选自κ链或者λ链。
在某一较佳实施例中，所述重链恒定区为hIgG1，且所述轻链恒定区为人源抗体的κ链。
优选的，所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段可以具有标记，包括但不限制于例如具有荧光标记、酶标记或放射性标记等。
所述靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段主要可以为靶向SARS-CoV-2的刺突蛋白（S蛋白）的抗体或其抗原结合片段，优选为靶向SARS-CoV-2的刺突蛋白（S蛋白）的受体结合结构域（RBD）的抗体或其抗原结合片段。
为了解决上述技术问题，本发明第二方面提供了一种分离的核酸，其编码如本发明第一方面所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段。
所述核酸的制备方法为本领域常规的制备方法，较佳地，包括以下的步骤：通过基因克隆技术获得编码上述抗体的核酸分子，或者通过人工全序列合成的方法得到编码上述抗体的核酸分子。
本领域技术人员知晓，编码上述抗体的氨基酸序列的碱基序列可以适当引入替换、缺失、改变、插入或增加来提供一个多聚核苷酸的同系物。本发明中多聚核苷酸的同系物可以通过对编码该抗体序列基因的一个或多个碱基在保持抗体活性范围内进行替换、缺失或增加来制得。
为了解决上述技术问题，本发明第三方面提供了一种重组表达载体，其包含如本发明第二方面所述的分离的核酸。
所述重组表达载体可通过本领域常规方法获得，即：将本申请所述的核酸分子连接于各种表达载体上构建而成。所述的表达载体为本领域常规的各种载体，只要其能够容载前述核酸分子即可。
优选地，所述表达载体包含真核细胞表达载体和/或原核细胞表达载体。
为了解决上述技术问题，本发明第四方面提供了一种转化体，其包含如本发明第三方面所述的重组表达载体。
所述转化体的制备方法可为本领域常规的制备方法，例如为：将上述重组表达载体转化至宿主细胞中制得。所述转化体的宿主细胞为本领域常规的各种宿主细胞，只要能满足使上述重组表达载体稳定地自行复制，且所携带所述的核酸可被有效表达即可。优选地，所述宿主细胞为原核细胞和/或真核细胞，所述原核细胞优选E. coli 细胞如TG1、BL21（表达单链抗体或Fab抗体），所述真核细胞优选HEK293细胞（例如人HEK293T或HEK293F细胞）或CHO细胞（表达全长IgG抗体，例如CHO-K1细胞）。将前述重组表达质粒转化至宿主细胞中，即可得本发明优选的重组表达转化体。其中所述转化方法为本领域常规转化方法，较佳地为化学转化法，热激法或电转法。
为了解决上述技术问题，本发明第五方面提供了一种嵌合抗原受体，其包含如本发明第一方面所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段。
为了解决上述技术问题，本发明第六方面提供了一种基因修饰的细胞，其包含如本发明第五方面所述的嵌合抗原受体。
优选地，所述基因修饰的细胞为真核细胞，优选分离的人细胞；更优选免疫细胞如T细胞，或NK细胞。
为了解决上述技术问题，本发明第七方面提供了一种靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：培养如本发明第四方面所述的转化体，从培养物中获得靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段。
为了解决上述技术问题，本发明第八方面提供了一种抗体药物偶联物，其包含细胞毒性剂，以及如本发明第一方面所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段。优选地，所述细胞毒性剂为MMAF或MMAE。
为了解决上述技术问题，本发明第九方面提供了一种药物组合（例如可以是以套装药盒的形式如抗体组合、抗体对等，或者可以是以药物组合物的形式），其包含如本发明第一方面所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段、如本发明第五方面所述的嵌合抗原受体、如本发明第六方面所述的基因修饰的细胞、和/或如本发明第八方面所述的抗体药物偶联物。
当以套装药盒的形式存在时，其可以是包含药盒A和药盒B，所述的药盒A包含如本发明第一方面所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段、如本发明第五方面所述的嵌合抗原受体、如本发明第六方面所述的基因修饰的细胞、和/或如本发明第八方面所述的抗体药物偶联物，所述的药盒B为其他抗新冠病毒SARS-CoV-2的药物或药物组合物。所述的药盒A和药盒B可以同时使用，也可以先使用药盒A再使用药盒B，还可以先使用药盒B再使用药盒A，可以根据具体应用时的实际需求而定。
当以药物组合物的形式存在时，还可以包括药物上可接受的溶剂和（或）载体和（或）辅料。所述的药学上可接受的载体可为本领域常规的载体，所述的载体可以为任意合适的生理学或药学上可接受的药物辅料。所述的药物辅料为本领域常规的药物辅料，优选地包括药学上可接受的赋形剂、填充剂或稀释剂等。更优选地，所述的药物组合物包括0.01~99.99%的上述蛋白质和/或上述的抗体药物偶联物，和0.01~99.99%的药用载体，所述百分比为占所述药物组合物的质量百分比。
包括本发明所述抗体的药物组合例如套装药盒、药物组合物等，可通过不同给药方式适用于受试者，包括但不限制于静脉注射、口服、舌下给药等。
关于制剂、剂量、施用方案和可测量的治疗结果的另外指导，参见Berkow等人（2000）The Merck Manual of Medical Information（Merck医学信息手册）和Merck&Co.Inc., Whitehouse Station, New Jersey; Ebadi (1998) CRC Desk Reference ofClinical Pharmacology（临床药理学手册）等著作。
为了解决上述技术问题，本发明第十方面提供了一种试剂盒，其包括如本发明第一方面所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段、如本发明第五方面所述的嵌合抗原受体、如本发明第六方面所述的基因修饰的细胞、如本发明第八方面所述的抗体药物偶联物和/或如本发明第九方面所述的药物组合。
优选地，所述试剂盒还包括(i)施用抗体或其抗原结合片段或嵌合抗原受体或基因修饰的细胞或抗体药物偶联物或药物组合的装置；和/或(ii)使用说明。所述试剂盒可用于例如检测SARS-CoV-2病毒。
为了解决上述技术问题，本发明第十一方面提供了如本发明第一方面所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段、如本发明第五方面所述的嵌合抗原受体、如本发明第六方面所述的基因修饰的细胞、如本发明第八方面所述的抗体药物偶联物、和/或如本发明第九方面所述的药物组合和/或如本发明第十方面所述的试剂盒在制备预防和/或治疗SARS-CoV-2（例如通过中和新冠病毒SARS-CoV-2的形式）感染的产品（例如药物）中的应用（优选为在制备中和SARS-CoV-2的刺突蛋白的感染的药物中的应用）；或者，在制备用于诊断SARS-CoV-2病毒感染的诊断剂（例如可以是诊断试剂盒的形式）中的应用。
本发明还提供了如本发明第一方面所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段、如本发明第五方面所述的嵌合抗原受体、如本发明第六方面所述的基因修饰的细胞、如本发明第八方面所述的抗体药物偶联物、和/或如本发明第九方面所述的药物组合和/或如本发明第十方面所述的试剂盒在预防和/或治疗SARS-CoV-2（例如通过中和新冠病毒SARS-CoV-2的形式）感染中的应用（优选为在中和SARS-CoV-2的刺突蛋白的感染中的应用）；或者，在诊断SARS-CoV-2病毒感染中的应用。
本领域技术人员应当理解的是，本发明中的抗体及包含其的产品通过注射等方式到达体内后，可使体内产生中和抗体，从而可以达到预防新冠病毒SARS-CoV-2感染的目的。相应地，当已经发生新冠病毒SARS-CoV-2感染，使用本发明的抗体及包含其的产品使得体内产生中和抗体，可达到治疗新冠病毒SARS-CoV-2感染的目的。此外，本领域技术人员应当理解的是，本发明的抗体及包含其的产品可以通过特异识别病毒抗原，提示病毒的存在，进而达到诊断的目的。
为了解决上述技术问题，本发明第十二方面提供了一种检测样品中（是否含有）SARS-CoV-2的方法，其包括使用如本发明第一方面所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段、如本发明第五方面所述的嵌合抗原受体、如本发明第六方面所述的基因修饰的细胞、如本发明第八方面所述的抗体药物偶联物、和/或如本发明第九方面所述的药物组合和/或如本发明第十方面所述的试剂盒进行检测。
该检测样品中（是否含有）SARS-CoV-2的方法包括诊断目的的检测方法和非诊断目的的检测方法。诊断目的的检测方法可以检测患者治疗前、后新冠病毒数量、活力的变化。
本发明非诊断目的的治疗或检测方法包括例如：
1. 预防医学研究和公共卫生政策的制定
本领域技术人员知晓，现代医学分为两部分：预防医学和临床医学。本发明中所述的“非诊断目的的检测SARS-CoV-2的方法”，在预防医学中可以对环境中采集的样本（包括人体分泌物）进行检测，对环境是否被污染进行判断，从而决策是否对该环境进行封锁、暂停营业、消杀等处置方式，并决策是否对这一地区、城市甚至更高层面升级传染病防控措施。从公共卫生角度出发对传染病进行预防，避免该环境残留的病毒成为传染源。
2. 科学研究领域
（1）基础医学和生态学：例如，本领域技术人员可以对水样进行检测，以判断病毒的传播时间和广泛度。
（2）病毒学方面产品的研发：本领域技术人员知晓，当多种病毒在同一宿主体内同时感染，可能产生病毒突变，包括病毒自身核酸的重组，或来自不同病毒的核酸的重组。若出现病毒的突变，尤其当其发生在秋冬流感季，则情况更为严重。利用本发明的抗新冠病毒的抗体进行检测，可用于病毒学的研究，检测是否产生了病毒核酸的整合，可从预防医学的角度对病毒是否产生整合进行监测和及时预警。
为了解决上述技术问题，本发明还提供了一种诊断、预防和/或治疗新冠病毒SARS-CoV-2的感染的方法，其包括向受试者施用如本发明第一方面所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段、如本发明第五方面所述的嵌合抗原受体、如本发明第六方面所述的基因修饰的细胞、如本发明第八方面所述的抗体药物偶联物、和/或如本发明第九方面所述的药物组合和/或如本发明第十方面所述的试剂盒。
本发明提供的药物和药物组合可以单独使用或与其他药物联合使用。在某些优选的实施例中，如本发明第一方面所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段、如本发明第五方面所述的嵌合抗原受体、如本发明第六方面所述的基因修饰的细胞、如本发明第八方面所述的抗体药物偶联物、和/或如本发明第九方面所述的药物组合和/或如本发明第十方面所述的试剂盒还可以与其他药物进行联合用药，例如可以与化学治疗剂等进行联合用药。
在本发明中，除另做说明外，文中所使用的词汇与术语均为本领域科学技术人员通常理解的含义。文中所使用的细胞生物学、分子生物学、生物化学、免疫学实验操作均为相应领域内常用的常规实验手段。
“抗体”是指“重”链（H）和“轻”链（L）组成的免疫球蛋白。其重链可分类为γ、μ、δ、α和ε，对应地将具有同类型的抗体定义为IgG、IgM、IgD、IgA、IgE。轻链可分为κ链与λ链。重链由重链可变区（VH）和重链恒定区（CH）构成，其中，CH由CH1、CH2和CH3三个结构域组成。轻链由轻链可变区（VL）及轻链恒定区（CL）构成。VH及VL区域含有序列高度可变的互补决定区（CDR），负责抗体与抗原的识别。抗体按照其产生方法可分为但不限制于单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体等。同时，抗体可以是不同同种型的抗体，包括但不限制于IgG（IgG1，IgG2，IgG3，IgG4）、IgM 、IgD、IgA、IgE等。某些情况下，抗体可以以片段形式存在并保持其特异性，包括但不限制于Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、ScFv、VHH、HCAb、嵌合抗体、双价抗体等。
在本发明中，氨基酸序列使用本领域内公认的单字母和三字母缩写表示，如甘氨酸用G或Gly表示。
如本申请使用的，术语“包括”或“包含”旨在表示组合物和方法包括所述的元素但不排除其他元素，但根据上下文的理解，也包括“由……组成”的情况。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：
本发明提供的抗体能够高亲和地且特异地结合SARS-CoV-2的S蛋白的受体结合结构域（RBD），抑制RBD蛋白与受体ACE2蛋白的结合，高效地抑制SARS-CoV-2感染细胞，同时对潜在的免疫逃逸突变的假病毒具有很好的中和活性，从而可有效应用于SARS-CoV-2病毒及其相关疾病的诊断、预防和治疗中。
附图说明
图1显示了实施例1中使用ELISA检测噬菌体与RBD蛋白的结合情况。
图2显示了实施例2中使用ELISA检测重组表达的抗体1F结合RBD的能力的结果图。
图3显示了实施例3中使用SPR检测抗体1F结合RBD的亲和力的结果图。
图4显示了实施例4中使用ELISA检测抗体1F竞争ACE2-RBD结合的能力的结果图。
图5显示了实施例5中抗体1F中和SARS-CoV-2活病毒的能力的结果图。
图6显示了实施例6中抗体1F与其他对比抗体结合突变RBD蛋白能力的结果图。
图7显示了实施例7中抗体1F中和突变的SARS-CoV-2假病毒的能力的结果图，其中的A显示了1F能够高效中和一系列具有免疫逃逸突变的SARS-CoV-2假病毒，B显示了1F能够高效中和一系列携带自然发生突变的SARS-CoV-2假病毒，C为相应的IC50数值。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
实施例1. 利用噬菌体展示技术筛选靶向SARS-CoV-2 RBD的人源抗体
参考前人已报道的方法（Lim, T. S. et al., V-gene amplification revisited -An optimised procedure for amplification of rearranged human antibody genesof different isotypes. N. Biotechnol.2010, 27, 108-117），利用新型冠状病毒康复病人外周血B细胞，使用Trizol（Invitrogen Cat# 15596018）法提取B细胞中RNA，并进一步使用逆转录试剂盒（Takara, Cat# R023A）将8 μg RNA转录为cDNA。通过引物将VH基因与VL基因分别扩增出来，并最终以Fab形式构建在phagemid载体中，从而获得人源噬菌体抗体展示文库。利用淘选法（panning）获得特异性识别并结合新冠病毒S蛋白RBD区域的单克隆抗体。将纯化的RBD蛋白以10 μg/mL的浓度包被96孔筛选板(Thermo Fisher Scientific,Cat#3855)，4℃孵育过夜。次日将孔板清洗，并进一步使用2%的牛血清白蛋白（BSA）在室温封闭1小时。将噬菌体使用PEG-8000浓缩并重溶于PBS中，加入筛选孔板中，在室温孵育1小时。清洗后，将结合RBD的噬菌体解离并感染大肠杆菌E.coli TG1（Beyotime, Cat# D0389）进行扩增。经两轮淘选，挑选单克隆进行ELISA检测。
96孔筛选板以2 μg/mL的RBD蛋白（Novoprotein, Cat#DRA42）包被，4℃孵育过夜。次日将孔板清洗，并进一步使用2%的牛血清白蛋白（BSA）在室温封闭1小时。含有单一基因型噬菌体的细菌培养基上清加入孔板中，室温孵育1小时。经清洗后，加入HRP偶联的anti-M13抗体（Sino Biological, Cat# 11973-MM05T-H），室温孵育1小时。经清洗后，加入TMB底物（Beyotime, Cat#P0209）显色，加入10%硫酸终止反应后，检测在450 nm波长处的吸光度。以BSA为阴性对照，共测试3840个单克隆，其结果如图1所示，方框内的区域为候选克隆。将候选克隆进行测序，获得抗体的DNA编码序列。经噬菌体展示技术筛选，序列测序，发现一条显著富集的抗体序列，编号1F。
所述的抗体1F的CDR序列如SEQ ID NO: 1-6所示（CDR按IMGT编号）；其优选的重轻链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO: 7和8所示，优选的重轻链可变区的核苷酸序列分别如SEQ ID NO: 9和10所示，具体请详见下表1。
表1
实施例2. 使用ELISA检测抗体1F结合RBD的能力
将免疫酶标板（Thermo Fisher Scientific, Cat# 442404）以2 μg/mL的RBD蛋白包被，4℃孵育过夜。次日将孔板清洗，并进一步使用5%的脱脂牛奶在室温封闭1小时。1F抗体以人IgG1形式在HEK Expi 293F细胞中进行重组表达，并使用protein A Sepharose（GEHealthcare, Cat# 28-9670-56）进行纯化。将不同浓度稀释的1F抗体加入酶标板，室温孵育1小时。使用PBS清洗后，加入HRP偶联的anti-human IgG抗体（Proteintech, Cat#SA00001-17），室温孵育1小时。再次洗净后，加入TMB底物显色，加入10%硫酸后，检测在450nm波长处的吸光度。结果如图2所示，由图中可以看出，抗体1F能够高亲和地结合RBD蛋白，ELISA实验中EC50为1.6 ng/mL。
实施例3. 使用表面等离子共振（SPR）技术检测抗体1F与RBD的结合解离常数
抗体1F的结合解离常数使用Biacore T200（GE Healthcare）进行测定。将纯化的RBD固定与CM5芯片表面，使最终的相应值（response units, RU）在100 RU左右。SPR测试使用PBST溶剂，流速30 μL/min。测定不同浓度的抗体响应值，并最终以1:1结合模式模拟，计算抗体1F与RBD的结合解离常数。结果如图3所示。1F的KD值为0.077 nM。
实施例4. 使用ELISA检测抗体1F竞争ACE2-RBD结合的能力
将免疫酶标板（Thermo Fisher Scientific, Cat# 442404）以2 μg/mL的ACE2蛋白（Novoprotein, Cat# C419）包被，4℃孵育过夜。次日将孔板清洗，并进一步使用5%的脱脂牛奶在室温封闭1小时。1F抗体以不同浓度稀释于浓度2 μg/mL的生物素化RBD（Novoprotein, Cat# DRA43）中，室温孵育1小时以使抗体充分结合RBD，将混合物加入酶标板，室温继续孵育1小时。使用PBS清洗后，加入HRP偶联的streptavidin（Proteintech,Cat# SA00001-0），室温孵育1小时。再次洗净后，加入TMB底物显色，加入10%硫酸后，检测在450 nm波长处的吸光度。结果如图4所示，1F能够竞争RBD蛋白与ACE2的结合，ELISA实验中IC50为0.213 μg/mL。
实施例5. 抗体1F中和SARS-CoV-2的活性测定
将Vero-E6细胞以10,000细胞/孔的密度培养于96孔细胞培养板中，培养过夜后备用。将不同浓度的1F抗体与含有100 PFU SARS-CoV-2病毒的培养基混合，37℃孵育1小时。去除细胞培养板中培养基，将混合物加入细胞培养板内，37℃培养1小时以使病毒感染细胞。将细胞培养基换成含2% FBS的DMEM培养基，继续培养48小时。取细胞培养上清，使用TrizolLS（Invitrogen, Cat# 10296028）提取上清中病毒的RNA，进一步使用RT-PCR试剂盒（Takara, Cat# RR064A）检测上清中病毒的相对含量。使用引物为SARS-CoV-2-N-F（SEQ IDNO: 11）: GGGGAACTTCTCCTGCTAGAAT，SARS-CoV-2-N-R（SEQ ID NO: 12）:CAGACATTTTGCTCTCAAGCTG，SARS-CoV-2-N-probe（其中的核苷酸序列如SEQ ID NO: 13所示）: 5'-FAM- TTGCTGCTGCTTGACAGATT-TAMRA-3'。实验结果如图5所示，1F具有很强的SARS-CoV-2中和活性。其IC50为18 ng/mL。
实施例6. 抗体1F与对比抗体结合突变RBD蛋白能力的测定
将SARS-CoV-2-RBD序列（人源密码子优化，序列如SEQ ID NO: 14所示，Genscript公司合成）克隆至pTT5载体中，N端加入IL-2分泌肽信号，另通过PCR方法构建相关突变。将野生型或突变型RBD在HEK Expi 293F细胞中进行重组表达，并使用Ni-NTA树脂（Qiagen, Cat#151010181）进行纯化。其他对比抗体REGN10933（Hansen, et al. Science2020, 369,1110）、COV2-39（Wu, et al. Cell Rep.2020, 33, 108274）、2-4（Liu, et al. Nature 2020, 584, 450）、JS016（CB6）（Shi, et al. Nature2020, 584, 120）、CC12.3（Yuan, et al. Science2020, 369, 1119）、BD368-2（Du, et al. Cell2020, 183, 1113）以人IgG1形式表达，并如同实施例2使用protein A Sepharose进行纯化。
将免疫酶标板以2 μg/mL的RBD蛋白或突变蛋白包被，4℃孵育过夜。次日将孔板清洗，并进一步使用5%的脱脂牛奶在室温封闭1小时。将不同浓度稀释的抗体加入酶标板，室温孵育1小时。使用PBS清洗后，加入HRP偶联的anti-human IgG抗体，室温孵育1小时。再次洗净后，加入TMB底物显色，加入10%硫酸后，检测在450 nm波长处的吸光度。结果如图6所示，由图中可以看出，对于一系列筛选的突变RBD蛋白，1F的结合能力受到影响较弱，证明1F抗体能够高效地结合相应突变蛋白，预示其对相应突变的病毒具有较好的中和能力。与之相比，REGN10933抗体在F486位点突变后，抗体的结合能力受到很大影响；COV2-39抗体的结合能力在F456、A475、E484、F486位点突变后受到较大影响；2-4抗体在F456、V483、E484、F486、F490位点突变后受到较大影响；JS016抗体在K417、F456、A475位点突变后受到较大影响；CC12.3抗体在K417、L455、F456、A475位点突变后受到较大影响；BD368-2抗体在V483、E484、F490位点突变后受到较大影响。综上所述，与其他已报道抗体相比，1F抗体在突变蛋白的结合能力方面，具有显著的优势。
实施例7. 抗体1F中和突变SARS-CoV-2假病毒的活性测定
将SARS-CoV-2-S序列（人源密码子优化，序列如SEQ ID NO: 15所示，Genscript公司合成）克隆至pcDNA3.1载体中，另通过PCR方法构建相关突变，将pcDNA3.1-SARS-CoV-2-S质粒或相应突变质粒与pNL4-3.luc.RE载体质粒（addgene #44965）同时转染入HEK-293T细胞中，经72小时培养，取含有相应假病毒颗粒的细胞培养上清，3,000X g 离心10分钟去除细胞碎片后备用。以稳定表达ACE2的HEK-293T细胞（293T-ACE2）作为靶细胞，以5,000细胞/孔的密度培养于96孔细胞培养板中，培养过夜后备用。1F抗体以不同浓度稀释于含有假病毒的上清中，37℃孵育1小时。将混合物加入细胞培养板内，37℃培养12小时后将细胞培养基换为正常的细胞培养基，继续培养48小时。使用荧光素酶报告基因系统（Promega, Cat#E1483）检测荧光素酶的活性。实验结果如图7所示，1F对野生型的SARS-CoV-2假病毒具有很强的中和活性，其IC50为46.4 ng/mL。与此同时，1F还能够高效中和一系列具有免疫逃逸突变的SARS-CoV-2假病毒（图7中的A和C）（Li, et al. Cell2020, 182, 1284）以及一系列携带自然发生突变的SARS-CoV-2假病毒（图7中的B和C）。
综上所述，抗体1F能够高亲和地且特异地结合SARS-CoV-2的RBD蛋白，进而抑制RBD蛋白与受体ACE2蛋白的结合。同时，抗体1F能够高效地抑制SARS-CoV-2感染细胞。此外，在假病毒中和实验中，抗体1F能够高效中和一系列突变的假病毒。这些数据充分表明，1F抗体对于SARS-CoV-2病毒及其相关疾病的诊断、预防和治疗，具有重要的应用价值。
除上述实施例外，本发明还可以有其他实施方式。所有采用同等替换或等效的实施方案，均在本方明要求的保护范围内。
SEQUENCE LISTING
<110> 上海科技大学
<120> 靶向SARS-CoV-2的抗体及其制备方法和应用
<130> P20017440C
<160> 15
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VH CDR1
<400> 1
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser Ser Tyr Tyr
1 5 10
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VH CDR2
<400> 2
Ile Tyr Tyr Arg Gly Ser Thr
1 5
<210> 3
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VH CDR3
<400> 3
Ala Arg His Val Arg Ser Ala Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Arg
1 5 10 15
Asp Glu Gly Asn Trp Phe Asp Pro
20
<210> 4
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VL CDR1
<400> 4
Arg Ser Asn Ile Gly Ala Gly His Asp
1 5
<210> 5
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VL CDR2
<400> 5
Gly Asn Asn Asn
1
<210> 6
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VL CDR3
<400> 6
Gln Ser Tyr Asp Arg Thr Leu Thr Ser Tyr Val
1 5 10
<210> 7
<211> 132
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VH氨基酸
<400> 7
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Ser Ile Tyr Tyr Arg Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg His Val Arg Ser Ala Tyr Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr
100 105 110
Arg Asp Glu Gly Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
115 120 125
Thr Val Ser Ser
130
<210> 8
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VL氨基酸
<400> 8
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Arg Ser Asn Ile Gly Ala Gly
20 25 30
His Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gly Asn Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ala Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Arg Thr
85 90 95
Leu Thr Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 9
<211> 396
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VH核苷酸
<400> 9
gaggtgcagc tggtggaaag cggacccggc ctggtcaagc cttctgaaac cctgagcctg 60
acctgcaccg tgtccggcgg ctccatctct agcagcagct actactgggg ctggatcaga 120
cagccacctg gaaaaggcct ggaatggatt ggcagcatct actaccgggg cagcacctac 180
tacaacccca gcctgaaaag cagagtgaca atcagcgtgg acacctcaaa gaaccagttt 240
agccttaagc tgagctctgt gaccgccgcc gacaccgccg tgtactactg cgccagacac 300
gtgcggagtg cttattacta cggcagcggc tcttatcggg acgagggcaa ttggttcgac 360
ccctggggcc agggcaccct ggtcaccgtg tccagc 396
<210> 10
<211> 333
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VL核苷酸
<400> 10
cagagcgtgc tgacccagcc tccaagcgtg tctggagctc ctggacaaag agtgaccatc 60
agctgtacag gcacaagaag caacatcggc gctggccacg atgtgcactg gtaccagcaa 120
ctgcctggca ccgcccctaa gctgctgatc tacggcaaca acaatagacc ttctggcgtg 180
cccgatagat tctccggagc caagtccggc acaagcgcca gcctggccat caccggcctg 240
caggccgagg acgaggccga ttactattgt cagtcttacg acagaaccct gacaagctac 300
gtgttcggca caggaacaaa ggtgaccgtg ctg 333
<210> 11
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SARS-CoV-2-N-F
<400> 11
ggggaacttc tcctgctaga at 22
<210> 12
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SARS-CoV-2-N-R
<400> 12
cagacatttt gctctcaagc tg 22
<210> 13
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SARS-CoV-2-N-probe
<400> 13
ttgctgctgc ttgacagatt 20
<210> 14
<211> 945
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL2-signal RBD-Avitag-6XHis sequence
<400> 14
atgtacagga tgcaactcct gtcttgcatt gcactaagtc ttgcacttgt cacaaacagt 60
cgcgtgcagc ccaccgagag catcgtgcgc ttccccaaca tcaccaacct gtgccccttc 120
ggcgaggtgt tcaacgccac ccgcttcgcc agcgtgtacg cctggaaccg caagcgcatc 180
agcaactgcg tggccgacta cagcgtgctg tacaacagcg ccagcttcag caccttcaag 240
tgctacggcg tgagccccac caagctgaac gacctgtgct tcaccaacgt gtacgccgac 300
agcttcgtga tccgcggcga cgaggtgcgc cagatcgccc ccggccagac cggcaagatc 360
gccgactaca actacaagct gcccgacgac ttcaccggct gcgtgatcgc ctggaacagc 420
aacaacctgg acagcaaggt gggcggcaac tacaactacc tgtaccgcct gttccgcaag 480
agcaacctga agcccttcga gcgcgacatc agcaccgaga tctaccaggc cggcagcacc 540
ccctgcaacg gcgtggaggg cttcaactgc tacttccccc tgcagagcta cggcttccag 600
cccaccaacg gcgtgggcta ccagccctac cgcgtggtgg tgctgagctt cgagctgctg 660
cacgcccccg ccaccgtgtg cggccccaag aagagcacca acctggtgaa gaacaagtgc 720
gtgaacttca acttcaacgg cctgaccggc accggcgtgc tgaccgagag caacaagaag 780
ttcctgccct tccagcagtt cggccgcgac atcgccgaca ccaccgacgc cgtgcgcgac 840
ccccagaccc tggagatcct ggacatcacc ccctgcagcg gcctgaacga catcttcgag 900
gctcagaaaa tcgaatggca cgaacatcat caccatcacc attga 945
<210> 15
<211> 3888
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD5-signal SARS-CoV2-S sequence
<400> 15
atgcccatgg ggtctctgca accgctggcc accttgtacc tgctggggat gctggtcgct 60
tccgtgctag cccagtgcgt gaacctgacc acaaggaccc agctgccccc tgcctatacc 120
aattccttca cacggggcgt gtactatccc gacaaggtgt ttagaagctc cgtgctgcac 180
tctacacagg atctgtttct gcctttcttt agcaacgtga cctggttcca cgccatccac 240
gtgagcggca ccaatggcac aaagcggttc gacaatccag tgctgccctt taacgatggc 300
gtgtacttcg cctctaccga gaagagcaac atcatcagag gctggatctt tggcaccaca 360
ctggactcca agacacagtc tctgctgatc gtgaacaatg ccaccaacgt cgtgatcaag 420
gtgtgcgagt tccagttttg taatgatcct ttcctgggcg tgtactatca caagaacaat 480
aagagctgga tggagtccga gtttcgcgtg tattctagcg ccaacaattg cacatttgag 540
tacgtgtccc agccattcct gatggacctg gagggcaagc agggcaattt caagaacctg 600
agggagttcg tgtttaagaa tatcgatggc tacttcaaga tctactctaa gcacacccca 660
atcaacctgg tgcgcgacct gccacagggc ttcagcgccc tggagccact ggtggatctg 720
cccatcggca tcaacatcac ccggtttcag acactgctgg ccctgcacag aagctacctg 780
acacctggcg actcctctag cggatggacc gcaggagctg ccgcctacta tgtgggctat 840
ctgcagccaa ggaccttcct gctgaagtac aacgagaatg gcaccatcac agacgcagtg 900
gattgcgcac tggaccccct gagcgagacc aagtgtacac tgaagtcctt taccgtggag 960
aagggcatct atcagacatc caatttcagg gtgcagccca ccgagtctat cgtgcgcttt 1020
cccaatatca caaacctgtg cccttttggc gaggtgttca acgcaaccag gttcgcaagc 1080
gtgtacgcat ggaataggaa gcggatcagc aactgcgtgg ccgactatag cgtgctgtac 1140
aactccgcct ctttcagcac ctttaagtgc tatggcgtgt cccccacaaa gctgaatgac 1200
ctgtgcttta ccaacgtgta cgccgattct ttcgtgatca ggggcgacga ggtgcgccag 1260
atcgcaccag gacagacagg caagatcgca gactacaatt ataagctgcc tgacgatttc 1320
accggctgcg tgatcgcctg gaacagcaac aatctggatt ccaaagtggg cggcaactac 1380
aattatctgt accggctgtt tagaaagtct aatctgaagc cattcgagag ggacatctct 1440
acagagatct accaggcagg cagcacccca tgcaatggag tggagggctt taactgttat 1500
ttccctctgc agagctacgg cttccagcca acaaacggcg tgggctatca gccctaccgc 1560
gtggtggtgc tgagctttga gctgctgcac gcacctgcaa cagtgtgcgg accaaagaag 1620
tccaccaatc tggtgaagaa caagtgcgtg aacttcaact tcaacggact gaccggcaca 1680
ggcgtgctga ccgagtccaa caagaagttc ctgccctttc agcagttcgg cagggacatc 1740
gcagatacca cagacgccgt gcgcgaccct cagaccctgg agatcctgga catcacacca 1800
tgctctttcg gcggcgtgag cgtgatcaca cctggcacca atacaagcaa ccaggtggcc 1860
gtgctgtatc aggacgtgaa ttgtaccgag gtgcccgtgg caatccacgc agatcagctg 1920
acccctacat ggcgggtgta cagcaccggc tccaacgtgt tccagacaag agccggatgc 1980
ctgatcggag cagagcacgt gaacaattcc tatgagtgcg acatccctat cggcgccggc 2040
atctgtgcct cttaccagac ccagacaaac tctccaagga gagcccggag cgtggcatcc 2100
cagtctatca tcgcctatac aatgagcctg ggcgccgaga acagcgtggc ctactctaac 2160
aatagcatcg ccatccctac caacttcaca atctccgtga ccacagagat cctgccagtg 2220
tccatgacca agacatctgt ggactgcaca atgtatatct gtggcgattc taccgagtgc 2280
agcaacctgc tgctgcagta cggcagcttt tgtacccagc tgaatagagc cctgacaggc 2340
atcgccgtgg agcaggacaa gaacacacag gaggtgttcg cccaggtgaa gcagatctac 2400
aagaccccac ccatcaagga ctttggcggc ttcaattttt cccagatcct gcccgatcct 2460
tccaagcctt ctaagcggag ctttatcgag gacctgctgt tcaacaaggt gaccctggcc 2520
gatgccggct tcatcaagca gtatggcgat tgcctgggcg acatcgccgc cagagacctg 2580
atctgtgccc agaagtttaa tggcctgacc gtgctgcctc cactgctgac agatgagatg 2640
atcgcacagt acacaagcgc cctgctggca ggcaccatca catccggatg gaccttcggc 2700
gcaggagccg ccctgcagat ccccttcgct atgcagatgg cctatcggtt caacggcatc 2760
ggcgtgaccc agaatgtgct gtacgagaac cagaagctga tcgccaatca gtttaactcc 2820
gccatcggca agatccagga cagcctgtcc tctacagcct ccgccctggg caagctgcag 2880
gatgtggtga atcagaacgc ccaggccctg aataccctgg tgaagcagct gagctccaac 2940
ttcggcgcca tctctagcgt gctgaatgac atcctgagcc ggctggacaa ggtggaggca 3000
gaggtgcaga tcgaccggct gatcacaggc agactgcagt ctctgcagac ctacgtgaca 3060
cagcagctga tcagggcagc agagatcagg gcaagcgcca atctggcagc aaccaagatg 3120
tccgagtgcg tgctgggcca gtctaagaga gtggactttt gtggcaaggg ctatcacctg 3180
atgtccttcc cacagtctgc ccctcacgga gtggtgtttc tgcacgtgac ctacgtgcca 3240
gcccaggaga agaacttcac cacagcacca gcaatctgcc acgatggcaa ggcacacttt 3300
cccagggagg gcgtgttcgt gagcaacggc acccactggt ttgtgacaca gcgcaatttc 3360
tacgagcctc agatcatcac cacagacaat acattcgtgt ccggcaactg tgacgtggtc 3420
atcggcatcg tgaacaatac cgtgtatgat cctctgcagc cagagctgga cagctttaag 3480
gaggagctgg ataagtactt caagaatcac acctccccag acgtggatct gggcgacatc 3540
agcggcatca atgcctccgt ggtgaacatc cagaaggaga tcgacaggct gaacgaggtg 3600
gccaagaatc tgaacgagag cctgatcgat ctgcaggagc tgggcaagta tgagcagtac 3660
atcaagtggc cctggtatat ctggctgggc ttcatcgccg gcctgatcgc tatcgtgatg 3720
gtgaccatca tgctgtgctg tatgacatcc tgctgttctt gcctgaaggg ctgctgtagc 3780
tgtggctcct gctgtaagtt tgatgaggac gattccgagc cagtgctgaa gggcgtgaag 3840
ctgcactaca ccggcggcac cgagacatct caggtggccc ccgcctaa 3888
Claims (27)
1.一种靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，其包含重链可变区（VH）和轻链可变区（VL），
所述VH包含以下的互补决定区（CDR）：氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示的VH CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO: 2所示的VH CDR2，以及氨基酸序列如SEQ ID NO: 3所示的VHCDR3；所述VL包含以下的CDR：氨基酸序列如SEQ ID NO: 4所示的VL CDR1，氨基酸序列如SEQ ID NO: 5所示的VL CDR2，以及氨基酸序列如SEQ ID NO: 6所示的VL CDR3。
2.如权利要求1所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述VH还包括重链可变区框架区（VH FWR）；和/或，所述VL还包括轻链可变区框架区（VL FWR），其中，
所述VH FWR为人抗体的重链可变区框架区，所述VL FWR为人抗体的轻链可变区框架区。
3.如权利要求1所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述VH的氨基酸序列如SEQ ID NO: 7所示；所述VL的氨基酸序列如SEQ ID NO: 8所示。
4.如权利要求3所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段，其特征在于，所述VH的核苷酸序列如SEQ ID NO: 9所示；所述VL的核苷酸序列如SEQ ID NO: 10所示。
5.如权利要求1~4任一项所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段，其为全长抗体、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv、VHH、HCAb、双特异性抗体或多特异性抗体，或由上述抗体制得的单克隆抗体或多克隆抗体。
6.如权利要求5所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段，所述抗体为包括重链恒定区和轻链恒定区的全长抗体，所述重链恒定区选自hIgG1、hIgG2、hIgG3或hIgG4；和/或，所述轻链恒定区选自κ链或λ链。
7.如权利要求6所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段，所述重链恒定区为hIgG1，且所述轻链恒定区为人源抗体的κ链。
8.如权利要求1~4任一项所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段，其具有标记。
9.如权利要求8所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段，其具有荧光标记、酶标记或放射性标记。
10.一种分离的核酸，其编码如权利要求1~9中任一项所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段。
11.一种重组表达载体，其包含如权利要求10所述的分离的核酸。
12.如权利要求11所述的重组表达载体，其包含真核细胞表达载体和/或原核细胞表达载体。
13.一种转化体，其包含如权利要求11或12所述的重组表达载体。
14.如权利要求13所述的转化体，所述转化体的宿主细胞为原核细胞和/或真核细胞。
15.如权利要求14所述的转化体，其特征在于，所述原核细胞为E. coli TG1或BL21细胞，所述真核细胞为HEK293细胞或CHO细胞。
16.一种嵌合抗原受体，其包含如权利要求1~9中任一项所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段。
17.一种基因修饰的细胞，其特征在于，其包含如权利要求16所述的嵌合抗原受体。
18.如权利要求17所述的基因修饰的细胞，其特征在于，所述基因修饰的细胞为真核细胞。
19.如权利要求18所述的基因修饰的细胞，其特征在于，所述基因修饰的细胞为分离的人细胞。
20.如权利要求18所述的基因修饰的细胞，其特征在于，所述基因修饰的细胞为免疫细胞T细胞，或NK细胞。
21.一种靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：培养如权利要求13~15任一项所述的转化体，从培养物中获得靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段。
22.一种抗体药物偶联物，其包含细胞毒性剂，以及如权利要求1~9任一项所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段。
23.一种药物组合，其包含如权利要求1~9任一项所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段、和/或如权利要求22所述的抗体药物偶联物。
24.试剂盒，其包括如权利要求1~9任一项所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段、如权利要求16所述的嵌合抗原受体、如权利要求17~20任一项所述的基因修饰的细胞、或权利要求22所述的抗体药物偶联物或权利要求23所述的药物组合。
25.如权利要求24所述的试剂盒，所述试剂盒还包括(i)施用抗体或其抗原结合片段或嵌合抗原受体或基因修饰的细胞或抗体药物偶联物或药物组合的装置；和/或(ii)使用说明。
26.如权利要求1~9任一项所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段、如权利要求16所述的嵌合抗原受体、如权利要求17~20任一项所述的基因修饰的细胞、如权利要求22所述的抗体药物偶联物、如权利要求23所述的药物组合和/或如权利要求24或25所述的试剂盒在制备预防和/或治疗SARS-CoV-2感染的产品、或在制备用于诊断SARS-CoV-2病毒感染的诊断剂中的应用。
27.一种非诊断目的的检测SARS-CoV-2的方法，其特征在于，其包括：提供样品，以及使用如权利要求1~9任一项所述的靶向SARS-CoV-2的抗体或其抗原结合片段、如权利要求16所述的嵌合抗原受体、如权利要求17~20任一项所述的基因修饰的细胞、或权利要求22所述的抗体药物偶联物、权利要求23所述的药物组合或权利要求24或25所述的试剂盒检测所述样品中的SARS-CoV-2的存在。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110078599.0A CN112390879B (zh) | 2021-01-21 | 2021-01-21 | 靶向SARS-CoV-2的抗体及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110078599.0A CN112390879B (zh) | 2021-01-21 | 2021-01-21 | 靶向SARS-CoV-2的抗体及其制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112390879A true CN112390879A (zh) | 2021-02-23 |
| CN112390879B CN112390879B (zh) | 2021-04-02 |
Family
ID=74624930
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110078599.0A Active CN112390879B (zh) | 2021-01-21 | 2021-01-21 | 靶向SARS-CoV-2的抗体及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN112390879B (zh) |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112794899A (zh) * | 2021-03-16 | 2021-05-14 | 易康生物(苏州)有限公司 | 一种抗新型冠状病毒的全人源单克隆中和抗体及其应用 |
| CN113009153A (zh) * | 2021-02-25 | 2021-06-22 | 山东莱博生物科技有限公司 | 一种基于磁微粒化学发光的新冠病毒中和抗体检测试剂盒及其应用 |
| CN114231497A (zh) * | 2022-02-24 | 2022-03-25 | 广州伯尼兹生物科技有限公司 | 一株表达新冠病毒s1蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系及中和活性抗体 |
| WO2022068847A1 (zh) * | 2020-09-29 | 2022-04-07 | 山东博安生物技术股份有限公司 | 一种治疗或预防新型冠状病毒SARS-CoV-2引起的疾病的方法 |
| CN115028715A (zh) * | 2022-06-23 | 2022-09-09 | 生工生物工程（上海）股份有限公司 | 一种抗新型冠状病毒的抗体或其抗原结合片段、试剂盒及应用 |
| WO2022241200A1 (en) * | 2021-05-14 | 2022-11-17 | Vanderbilt University | Cross-reactive coronavirus antibodies |
| WO2023019724A1 (zh) * | 2021-08-17 | 2023-02-23 | 上海浙江大学高等研究院 | 单克隆抗体35b5及其制备方法和用途 |
| US11661448B2 (en) | 2020-09-22 | 2023-05-30 | Shihezi University | Nano-antibody and its application based on SARS-CoV-2 S protein S1 subunit |
| WO2023092739A1 (zh) * | 2021-11-26 | 2023-06-01 | 深圳先进技术研究院 | 抗sar-cov-2全人源单克隆抗体6g18及其制法与应用 |
| US11732030B2 (en) | 2020-04-02 | 2023-08-22 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-SARS-CoV-2-spike glycoprotein antibodies and antigen-binding fragments |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111153991A (zh) * | 2020-02-26 | 2020-05-15 | 北京博奥森生物技术有限公司 | 一种人SARS-CoV-2单克隆抗体及其制备方法和应用 |
| CN111333722A (zh) * | 2020-03-03 | 2020-06-26 | 江苏省疾病预防控制中心(江苏省公共卫生研究院) | SARS-CoV-2抑制剂及其应用 |
| CN111592595A (zh) * | 2020-04-27 | 2020-08-28 | 南京医科大学 | 抗新型冠状病毒SARS-Cov-2的中和性抗体及其应用 |
-
2021
- 2021-01-21 CN CN202110078599.0A patent/CN112390879B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111153991A (zh) * | 2020-02-26 | 2020-05-15 | 北京博奥森生物技术有限公司 | 一种人SARS-CoV-2单克隆抗体及其制备方法和应用 |
| CN111333722A (zh) * | 2020-03-03 | 2020-06-26 | 江苏省疾病预防控制中心(江苏省公共卫生研究院) | SARS-CoV-2抑制剂及其应用 |
| CN111592595A (zh) * | 2020-04-27 | 2020-08-28 | 南京医科大学 | 抗新型冠状病毒SARS-Cov-2的中和性抗体及其应用 |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11732030B2 (en) | 2020-04-02 | 2023-08-22 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Anti-SARS-CoV-2-spike glycoprotein antibodies and antigen-binding fragments |
| US11661448B2 (en) | 2020-09-22 | 2023-05-30 | Shihezi University | Nano-antibody and its application based on SARS-CoV-2 S protein S1 subunit |
| WO2022068847A1 (zh) * | 2020-09-29 | 2022-04-07 | 山东博安生物技术股份有限公司 | 一种治疗或预防新型冠状病毒SARS-CoV-2引起的疾病的方法 |
| CN113009153A (zh) * | 2021-02-25 | 2021-06-22 | 山东莱博生物科技有限公司 | 一种基于磁微粒化学发光的新冠病毒中和抗体检测试剂盒及其应用 |
| CN113009153B (zh) * | 2021-02-25 | 2023-12-15 | 山东莱博生物科技有限公司 | 一种基于磁微粒化学发光的新冠病毒中和抗体检测试剂盒及其应用 |
| CN112794899A (zh) * | 2021-03-16 | 2021-05-14 | 易康生物(苏州)有限公司 | 一种抗新型冠状病毒的全人源单克隆中和抗体及其应用 |
| WO2022241200A1 (en) * | 2021-05-14 | 2022-11-17 | Vanderbilt University | Cross-reactive coronavirus antibodies |
| WO2023019724A1 (zh) * | 2021-08-17 | 2023-02-23 | 上海浙江大学高等研究院 | 单克隆抗体35b5及其制备方法和用途 |
| WO2023092739A1 (zh) * | 2021-11-26 | 2023-06-01 | 深圳先进技术研究院 | 抗sar-cov-2全人源单克隆抗体6g18及其制法与应用 |
| CN114231497A (zh) * | 2022-02-24 | 2022-03-25 | 广州伯尼兹生物科技有限公司 | 一株表达新冠病毒s1蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系及中和活性抗体 |
| CN115028715A (zh) * | 2022-06-23 | 2022-09-09 | 生工生物工程（上海）股份有限公司 | 一种抗新型冠状病毒的抗体或其抗原结合片段、试剂盒及应用 |
| CN115028715B (zh) * | 2022-06-23 | 2023-08-18 | 生工生物工程（上海）股份有限公司 | 一种抗新型冠状病毒的抗体或其抗原结合片段、试剂盒及应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN112390879B (zh) | 2021-04-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN112390879B (zh) | 靶向SARS-CoV-2的抗体及其制备方法和应用 | |
| CN111690058B (zh) | 针对冠状病毒的具有中和活性的抗体及其用途 | |
| WO2021180218A1 (zh) | 一种抗新型冠状病毒的单克隆抗体及其应用 | |
| CN113264998B (zh) | 抗新冠病毒SARS-CoV-2表面S1蛋白的单链抗体及其应用 | |
| CN112625136B (zh) | 针对冠状病毒具有中和活性的双特异性抗体及其用途 | |
| WO2021244089A1 (zh) | 新型冠状病毒（sars-cov-2）刺突蛋白结合分子及其应用 | |
| CN112250763B (zh) | 靶向SARS-CoV-2冠状病毒的抗体及其诊断和检测用途 | |
| CN108137676A (zh) | gp120中和抗体及其用途 | |
| CN113150129B (zh) | 抗新冠病毒SARS-CoV-2表面S2蛋白的单链抗体及其应用 | |
| TWI551609B (zh) | 抗－顆粒溶解素抗體及其應用 | |
| WO2021174595A1 (zh) | 一种抗新型冠状病毒的单克隆抗体及其应用 | |
| CN113045647B (zh) | 新冠病毒SARS-CoV-2的中和性抗体及其应用 | |
| CN115768790A (zh) | 针对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)的人单克隆抗体 | |
| CN111234020B (zh) | 一种bcma结合蛋白及其制备方法和应用 | |
| WO2022117040A1 (zh) | 抗人b7-h3抗体及其应用 | |
| CA2937866A1 (en) | Antibodies against f glycoprotein of hendra and nipah viruses | |
| KR20230150184A (ko) | SARS-CoV-2 스파이크 단백질에 결합하는 단일 도메인 항체 | |
| WO2022061594A1 (zh) | 新型冠状病毒（sars-cov-2）刺突蛋白结合分子及其应用 | |
| WO2021174594A1 (zh) | 一种抗新型冠状病毒的单克隆抗体及其应用 | |
| JP2024506315A (ja) | コロナウイルスのスパイクタンパク質を標的とする抗体 | |
| WO2021143914A1 (zh) | 一种激活型抗ox40抗体、生产方法及应用 | |
| KR20150140752A (ko) | M-csf를 표적으로 하는 항체 | |
| CN116589564B (zh) | 抗aav5抗体及快速aav5滴度测定elisa试剂盒 | |
| WO2021238854A1 (zh) | 抗SARS-CoV-2刺突蛋白的单克隆抗体及其制备方法和用途 | |
| CN114907477A (zh) | 抗人il-36r抗体及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |