CN1123771C - 一种急性心肌梗塞检测试剂盒 - Google Patents

Abstract

一种急性心肌梗塞检测试剂盒。是利用一固定有多种高特异性、高效价的抗体的微标盘以吸附受检体中的血液生化标志物。以及利用一组具有相同测定参数的试剂，故能在单次操作中快速取得急性心肌梗塞相关血液生化标志物在血液中浓度的定量数字。可供同时检测肌酸激酸MB/总肌酸激酶比值，乳酸脱氢酶I/总乳酸脱氢酶比值，糖原磷酸化酶BB/总糖原磷酸化酶总活性比值，肌红蛋白/碳酸酐酶III型比值，脂肪酸结合蛋白/碳酸酐酶III型比值，肌红蛋白血清浓度以及谷氨酸-草酰乙酸转氨酶的血清浓度。

Description

一种急性心肌梗塞检测试剂盒

本发明是关于一种急性心肌梗塞检测试剂盒，尤其是利用一种酶的免疫测定方法及一组能使产物具有同一测定参数的试剂组，由此所得各种心肌梗塞标志蛋白异构酶及酶的检测数据，可以换为各种急性心肌梗塞血液生化标志物比值，据此，以改善单一急性心肌梗塞标志物测量所伴生的临床病理专一性(Specificity)及灵敏度(Sensitivity)不足的问题。

心脏血管疾病是国内癌症以外的最主要死亡原因，其中心肌梗塞是心脏血管疾病中的单项最大死因。从病人感到胸痛开始到溶血栓药物治疗，只有约四至六小时的宝贵时间可做处理，病人的救治是分秒必争的，不容时间上的耽搁。此病症的诊断主要是由心电图及一些血液生化标志物的测定来帮助医生做判断，以采取适当的紧急措施。然而，愈来愈多的数据显示有半数以上的急性心肌梗塞病患为心电图仪无法诊断的(Electrocardiogram Non-diagnostic)。因此，近年来多采用血液生化标志物来测定急性心肌梗塞。这些用于诊断急性心肌梗塞的血液生化标志物包括肌酸激酶MB(CreatineKinase MB；CKMB)，乳酸脱氢酶I型(Lactate Dehydrogenase I；LDHI)，肌红蛋白(Myoglobin)，肌浆球蛋白轻链(Myosin LightChain)，肌钙蛋白I(Troponin I)，肌钙蛋白T(Troponin T)，谷氨酸一草酰乙酸转氨酶(Glutamic-Oxaloacetic Transaminase；GOT)，总肌酸激酶，总乳酸脱氨酶，糖原磷酸化酶BB(Glycogen Phospho-rylase BB)，碳酸酐酶III型(Carbonic Anhydrase III)，烯醇化酶(Enolase)及心肌专一性脂肪酸结合蛋白(Cardial Fatty AcidBinding Protein)......等等。其中肌酸激酶MB在发生心肌梗塞后约3～8小时开始增加，36～48小时恢复常值，为早期的血液生化标志物；乳酸脱氢酶I型则在8～12小时开始增加，持续高活性至一周以上；为后期的生化标志物。血液中肌红蛋白量的变化，除被认为是非专一性的最早期血液生化标志物外，并已被认为验证急性心肌梗塞病人，接受药物灌注治疗效果的非侵入式(Non-invasive)的重要依据。

针对这些血液生化标志物，测定的方法很多，如(一)免疫电泳法。将受检体加入特定分析项目的免疫电泳片中，通电电泳后染色，再利用特殊的扫描设备计算其数据，此方法可求得异构酶比值，但需要特殊的设备，时间较长，准确性亦差。近来有毛细管电泳技术，可短时间获得结果，但设备昂贵，又需特别操作技术，不适于日常检测用途。另外一常用的测定血液生化标志物的方法为(二)免疫分析法(Immunoassay)，其中又可分为酶免疫分析法(Enzyme Immuno-assay；EIA)、放射免疫分析法(Radio lmmunoassay；RIA)、萤光免疫分析法(Fluorescence Immunoassay；RIA)、冷光免疫分析法(Luminescence Immunoassay；LIA)。这些免疫分析方法的原理如附图1A至1C所列以酶免疫分析法为例所示，为传统的使用两种抗体的酶连接免疫吸附分析法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay；ELISA)该酶免疫分析方法实施时如图1A，是将受检体加入固定有一第一抗体11的固体载体10，待一血液生化标志物12与第一抗体11结合后。接著如图1B，加入一第二抗体-酶共轭物15，包括能与血液生化标志物12结合的第二抗体端13以及酶端14。然后如图1C所示，待第二抗体-酶共轭物15与血液生化标志物12结合后，加入一生化反应试剂16与第二抗体-酶共轭物15的酶端14反应，通过测定产物17的产率可推算血液生化标志物12的浓度。此方法已经广泛为人使用，但所需的步骤多，花费的时间长，不符合急性心肌梗塞检测需求。放射免疫分析法，萤光免疫分析法及冷光免疫分析法除了同样耗时较长外，还需要特殊的设备，而放射免疫分析法试剂及废物的处置又具有危险性。(三)同功酶抑制法(Isozyme Inhibition)也常用于测定血液生化标志物。在此，以测定肌酸激酶MB为例来说明该方法。肌酸激酶包括三个异构酶，肌酸激酶MB，肌酸激酶MM，以及肌酸激酶BB，其主要原理是将M亚单位(Subunit)的活性用适当的抗体或化学物予以抑制。求得肌酸激酶活性，但该法特异性不足，结果不太准确。(四)比浊法及折射度法(Turbidometry & Nephelometry)。本法使用多克隆抗体(Polyclonal Antibody)吸附于乳胶粒上，以抗原出现所诱发抗体/抗原凝集反应，所造成反应液浊度或折射度的变化，作为标的物抗原定量的依据。本法使用全自动分析仪，简易可行，但易受各种自身免疫疾病(Autoimmune Diseases)血液中产生的免疫球蛋白M(1gM)干扰。并且，营养过多的高脂血症，亦因血中有乳糜物出现而较有假阳性的判断。

以急性心肌梗塞相关异构酶等血液生化标志物为例，综观现有的分析方法，仍有下列几点需要加以改进：(一)检测费时不符合急救需求，如需要两种抗体的各种免疫分析法。(二)操作步骤繁杂易生误差，如免疫电泳法等。(三)需要特殊仪器设备而不普及化，如毛细管电泳技术、萤光免疫分析法、冷光免疫分析法等。(四)仪器本身无随时待命供急诊需要的设计功能，如全自动生化分析仪比浊度法。急性心肌梗塞病人的救治是分秒必争的，因此开发一快速、准确、方便的血液生化标志物的检测试剂盒是为当务之急。

本发明是针对发生心肌梗塞时，心肌坏死所释放出的血液生化标志物为对象，并且利用血液生化标志物自身为酶的特性，开发出反应步骤减少一半的分析试剂盒，利用医院非日常操作的ELISA读数仪做动力学测定，较传统的三明治免疫测定法省时几倍以上。

由于肌酸激酶MB以及乳酸脱氢酶I型的实测值并不能绝对反映急性心肌梗塞发生的现象，因此传统上以免疫电泳法测得肌酸激酶MB/总肌酸激酶比值及乳酸脱氢酶I型/总乳酸脱氢酶比值，进一步证实急性心肌梗塞的发生。但是，由于免疫电泳法耗时、费事，不符合急性病症的诊断。

本发明能同时完成分析多种血液生化标志物的优点。在同一微标盘中测得肌酸激酶MB，乳酸脱氢酶I型，糖原磷酸化酶BB，碳酸酐酶III型，肌酸激酶MB/总肌酸激酶比值，乳酸脱氢酶I型/总乳酸脱氢酶比值，糖原磷酸化酶BB/总糖原磷酸化酶比值，肌红蛋白/碳酸酐酶III型比值，脂肪酸结合蛋白/碳酸酐酶III型，谷氨酸-草酰乙酸转氨酶，以及肌红蛋白等数据。由于本试剂盒一次同时用一种生化试剂，所测定异构酶/总酶活性比例有其不变的真实性，增加本方法的可参考性，而且测定不同酶的各种试剂，具有同一测定参数如测定波长动力学读取时间......等，简化了测定过程。

另外，急性心肌梗塞血液生化标志物的同时测定，不仅有助于改善急性心绞痛(Angina)、充血性心脏衰竭(Congestive HeartFailure)、骨骼肌创伤(Skeletal Muscle Trauma)及急性心肌梗塞的分类(Triage)，同时，可方便做系列测定(Serial Determinati-on)而能得到用以推算血块大小，延迟送医病患心肌梗塞发生时间，并为血液灌注(Reperfusion)病患提供非侵入式的各种生化血液标志物灌注前后的数值，作为观测治疗效果的依据。

根据本发明的主要目的，提出一种急性心肌梗塞检测试剂盒，包括：

多种抗体；

一具有多个微标盘孔的微标盘，其中，每一微标盘孔至多固定所述抗体中的一种；以及

多种试剂用以测定多种血液生化标志物。

另外，根据本发明的第二目的，提出一种急性心肌梗塞检测方法，它包括下列步骤：

a.提供多种抗体，其中这些抗体是能与急性心肌梗塞血液生化标志物键合的抗体；

b.提供多个固体载体，其中，每一固体载体至多固定这些抗体中的一种；

c.去除未与这些抗体键合的杂质；

d.分别加入多个相对的试剂于这些固定有抗体的固体载体及这些未固定有抗体的固体载体中；以及

e.测量与这些抗体键合的血液生化标志物活性。

为使本发明的上述和其他目的、特征、和优点能更明显易懂，下文举出一较佳实施例，并配合附图，作详细说明如下：

附图的简单说明：

图1A至1C表示传统酶连接免疫吸附分析法。

图2A至2B表示本发明所利用的酶免疫分析法的较佳实施例。

图3是肌酸激酶MB与试剂I反应，在340nm下，吸光值的变化。

图4是乳酸脱氢酶I型与试剂II反应，在340nm下，吸光值的变化。

图5是抗肌酐激酶MB抗体，较佳固定化浓度的测定。

图6是抗乳酸脱氢酶I型抗体，较佳固定化浓度的测定。

图7是抗肌酐激酶MB抗体，较佳固定化时间的测定。

图8是抗乳酸脱氢酶I型抗体，较佳固定化时间的测定。

图9是受检体在固定有抗激酶MB抗体的微标盘孔内培育的较佳时间测定。

图10是受检体在固定有抗乳酸脱氢酶I型抗体的微标盘孔内培育的较佳时间测定。

图11是肌酐激酶MB浓度与吸光值关系的标准曲线。

图12是乳酸脱氢酶I型酶浓度与吸光值关系的标准曲线。

图13是本发明较佳实施例的急性心肌梗塞检测试剂盒操作流程。

图14是利用本发明的急性心肌梗塞检测试剂盒在临床测试的结果。是以病人开始胸痛的时间作第0小时。

实施例

本发明利用一种酶的免疫测定方法。如图2A所示，是筛选高专一性，高效价的酶抗体22，例如抗肌酸激酶MB抗体、抗乳酸脱氢酶I型抗体、抗糖原磷酸化酶BB抗体、抗碳酸酐酶III型抗体、抗肌酸激酶MM₁抗体、抗肌酸激酶MM₂抗体、抗肌酸激酶MM₃抗体、抗肌酸激酶MB₁抗体与抗肌酸激酶MB₂抗体，以及诊断骨细胞代谢的异构酶的抗体、诊断胰脏炎的异构酶的抗体等等。接着，将酶抗体22固定于固体载体21上，例如微标盘、乳胶粒或是玻璃珠。然后，对固定有酶抗体22的固体载体21进行蛋白质吸附遮盖处理(未示出)，将剩余孔隙填塞。接着，加入受检体培育，受检体中的本身为酶的血液生化标志物会被选择性地吸附。经清洗后，如图2B所示，加入相关试剂24与被酶抗体22吸附的血液生化标志物23反应，根据测定产物25的产率以推算血液生化标志物23的浓度。

为使本发明的急性心肌梗塞检测试剂盒在临床上能具有较佳的准确性，方便性，以及高效率，并考虑在制造本试剂盒时能较省时并符合较低成本的原则，较佳表现抗体的筛选，抗体固定化的较佳浓度测定以及抗体固定化的较佳时间测定，其实施方法与结果，陈述如下。(一)抗体的筛选

购买不同厂牌，例如OEM，Biodesign，Chemicon，Internati-onal Enzyme的抗肌酸激酶MB抗体以及抗乳酸脱氢酶I型抗体。接着，取100μl浓度10μg/ml的抗体加入微标盘中做固定化，二十四小时以后用1M氯化钾溶液(1M KCl)清洗，再将剩余孔隙用含2％牛血清白蛋白(BSA)的磷酸缓冲溶液(0.01M，pH7.6)做遮盖。接着将已知浓度的肌酸激酶MB或乳酸脱氢酸I型分别加入对应的微标盘孔内培育一小时，经过抗原/抗体反应后加以清洗，再分别加入测肌酸激酶的试剂I，及测乳酸脱氢酶的试剂II，测定单位时间内340nm内吸光值改变的速度来推算活性。

其中，该试剂I包括：

1.基质缓冲溶液：咪唑(Imidazole)0.1mole/l，pH6.7，葡萄糖(Glucose)20mmole/l，醋酸镁10mmle/l，乙二胺四乙酸(EDTA)2mmole/l；以及

2.肌酸激酶反应试剂：腺苷二磷酸(ADP)2mmole/l，氧化态烟酰胺嘌呤二核苷磷酸(NADP⁺)2mmole/l，磷酸肌酸(CreatinePhosphate)30mmole/l，N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine)13mmole/l，己糖激酶(Hexose Kinase；HK)2500 U/I，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6P-DH)1500 U/I。

并且肌酸激酶(CK)与该试剂I的化学反应如下：

另外，该试剂II包括：

1.基质缓冲液：磷酸缓冲液(phosphate Buffer)0.1mole/lpH7.6，丙酮酸钠(Na-Pyruvate)0.63mmol/l，稳定剂(Stabil-izer)；以及

2.还原态烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)0.35mmole/l。

并且乳酸脱氢酶(LDH)与该试剂II的化学反应式如下：

抗体筛选的结果，得知，Biodesign厂牌的抗肌酸激酶MB抗体较其他厂牌的为佳，而抗乳酸脱氢I型抗体亦以Biodesign厂牌的较佳。(二)抗体固定化的较佳浓度测定

分别将抗肌酸激酶MB抗体以及抗乳酸脱氢酶I型抗体稀释成不同浓度后做固定化，其余方法如(一)。

结果如图5所示，发现将抗肌酸激酶MB抗体固定化时，当使用10μg/ml时，即可达到最佳表现。当固定化浓度大于10μg/ml时，其活性表现并无明显增加，其于成本考虎，固定化理想浓度为10μg/ml。

而抗乳酸脱氢酶I型的抗体的较佳固定化浓度，结果如图6，得知固定化的浓度愈高，其活性表现愈好。基于成本及不损害活性表现的考虑，固定化的较佳浓度为10μg/ml。(三)抗体固定化的较佳时间测定

以上述探讨所得的抗体固定化较佳浓度做固定化，于不同时间取出做清洗，其余方法如(一)。抗肌酸激酶MB抗体固定化的较佳时间测定结果如图7，发现固定化的时间愈长，固定在微标盘孔内抗体的量就愈多。尤其在96小时则更明显增加，故以96小时为抗肌酸激酶MB的固定化较佳时间。而抗乳酸脱氢酶I型抗体固定化的较佳时间测定结果如图8，得知固定化的时间愈长，固定在微标盘孔内的抗体量亦较多，尤其在72小时有明显增加趋势，故取72小时为抗乳酸脱氢酶I型抗体的固定化较佳时间。

另外，受检体较佳培育时间的探讨如下：将抗肌酸激酶MB抗体稀释成10μg/ml浓度后做固定化，96小时后取出清洗，接着以牛血清白蛋白做遮盖处理，再加入已知浓度的受检体培育不同时间后，取出清洗，即加入试剂I反应，测其在340nm下单位时间吸光值的改变，由图9的结果可发现，为检测肌酸激酶MB，受检体的较佳培育时间约为三十分钟以上，而由上述条件所做的肌酸激酶MB标准曲线如图11所示，检测极限为5～150U/L。

将抗乳酸脱氢酶I型抗体稀释成80μg/ml浓度做固定化，72小时后取出清洗，接着以牛血清白蛋白做遮盖处理，再加入受检体培育不同时间后取出清洗，即加入试剂II反应，测其在340nm下单位时间吸光值的改变，由图10的结果可发现为检测乳酸脱氢酶I型，受检体的较佳培育时间约为十五分钟以上，而其标准曲线则如图12所示，检测极限为5～150U/L。

在实施上，本急性心肌梗塞检测试剂盒的操作原理，及流程说明如下：

如图13所示，将受检体分为六份：受检体I、受检体II、受检体III、受检体IV、受检体V以及受检体VI。接着，将受检体I加入固定有抗肌酸激酶MB抗体的微标盘孔I；将受检体II加入固定有抗乳酸脱氢酶I型抗体的微标盘孔II；接着先将已知量的肌红蛋白-乳酸脱氢酶共轭物与受检体III混合，再将该混合物加入固定有抗肌红蛋白抗体的微标盘孔III。然后分别将受检体Iv、受检体V以及受检体VI加入空白无固定抗体微标盘孔IV、微标盘孔V及微标盘孔VI。将微标盘孔I、微标盘孔II及微盘孔III培育30分钟后预以清洗，然后，将试剂I加入于微标盘孔I以及微标盘孔IV。并且，将试剂II加入于微标盘孔II，微标盘孔III以及微标盘孔V。另外，将测谷氨酸-草酰乙酸转氨酶的试剂III加入微标盘孔VI。其中试剂III包括：

1.基质缓冲溶液：天冬氨酸盐(Aspartate)200mmole/l，α-酮戊二酸(α-Ketoglutarate)12mmole/l；以及

2.谷氨酸-草酰乙酸转氨酶反应试剂：乳酸脱氨酶(LDH)大于1500U/l；苹果酸脱氢酶(MDH)大于1200U/l；还原态烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)0.18mmole/l。

并且谷氨酸-草酰乙酸转氨酶与该试剂III的化学反应式如下：

最后，在340nm下测定各微标盘孔I～VI吸光值的变化来推算活性。由微标盘孔IV及微标盘孔V可分别推得总肌酸激酶的活性以及总乳酸脱氢酶活性。由微标盘孔I及微标盘孔II可推得肌酸激酶MB活性及乳酸脱氢酶I型的活性。由以上结果可计算得肌酸激酶MB/总肌酸激酶比值以及乳酸脱氢酶I型/总乳酸脱氢酶比值。另外测微标盘孔VI单位时间内340nm吸光值降低的速度来推算谷氨酸-草酰乙酸转氨酶的活性。在微标盘孔III，肌红蛋白与肌红蛋白-乳酸脱氢酶共轭物竞争性地与抗肌红蛋白抗体反应，反应后清洗，即加入试剂II反应，测定单位时间内340nm吸光值降低的速度来得到乳酸脱氢酶的活性并推测得肌红蛋白的量。

综合以上，可知本试剂盒有下列特点：

一、提供急性心肌梗塞早期血液生化标志物，如肌酸激酶MB异构酶与肌红蛋白，及晚期标志物如乳酸脱氢酶I型异构酶，同时测定的可能，以供医务人员参考避免误诊。

二、同时测定异构酶及总酶活性可进一步肯定急性心肌梗塞的发生。

三、提供肌红蛋白数据，可以作为判断药物灌注治疗疗效的依据，没有必要进行再侵入式诊断。

四、用同一种生化试剂、装置、参数做异构酶/总酶活性测定，比值可靠。

五、在同一波长，六十分钟内读取所有的相关数值。

六、使用化验室普遍使用的ELISA读数仪可以随时做急诊测定。

虽然本发明已以一些较佳实施例揭露如下，然其并非用以限制本发明，例如糖原磷酸化酶BB/总糖原磷酸化酶总活性比值，肌红蛋白/碳酸酐酶III型比值以及脂肪酸结合蛋白/碳酸酐酶III型也可依照本发明的精神来获得。任何熟习该技术的，在不脱离本发明的精神和范围，可作些许更动与润饰，因此本发明的保护范围当以后附的权利要求书所限定的为准。

Claims (28)

1、一种急性心肌梗塞检测试剂盒，包括：

多种抗心肌梗塞血液生化标志物的抗体；

一微标盘，该微标盘中具有多个第一微标盘孔和多个第二微标盘孔，其中每一第一微标盘孔是用以固定所述抗体中的一种，由此而从一受检体中分离出一种心肌梗塞血液生化标志物，而每一第二微标盘孔是用以固定该受检体中各种心肌梗塞血液生化标志物；以及

多种试剂，是用以测定所述每一第一微标盘孔和每一第二微标盘孔中的心肌梗塞血液生化标志物的含量，以得到多个比值。

2、如权利要求1所述的试剂盒，还包括肌红蛋白-乳酸脱氢酶共轭物。

3、如权利要求1所述的试剂盒，其中所述抗体选自抗肌酸激酶MB抗体、抗乳酸脱氢酶I型抗体、抗肌红蛋白抗体、抗脂肪酸结合蛋白抗体、抗糖原磷酸化酶BB抗体、抗碳酸酐酶III型抗体、抗肌酸激酶MB₁抗体、抗肌酸激酶MB₂抗体、抗肌酸激酶MM₁抗体、抗肌酸激酶MM₂抗体以及抗肌酸激酶MM₃抗体。

4、如权利要求1所述的试剂盒，其中所述受检体中的心肌梗塞血液生化标志物选自总肌酸激酶、总乳酸脱氢酶、总糖原磷酸化酶、碳酸酐酶III型、谷胺酸-草酰乙酸转氨酶。

5、如权利要求1所述的试剂盒，其中所述试剂具有相同测定参数。

6、如权利要求1所述的试剂盒，其中所述试剂包括：

用于测定肌酸激酶及其异构酶的第一试剂；

用于测定乳酸脱氢酶及其异构酶的第二试剂；以及

用于测定谷氨酸-草酰乙酸转氨酶的第三试剂。

7、如权利要求6所述的试剂盒，其中所述第一试剂包括有：咪唑、醋酸镁、乙二胺四乙酸、N-乙酰半胱氨酸、磷酸肌酸、腺苷二磷酸、葡萄糖、己糖激酶、氧化态烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸以及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。

8、如权利要求6所述的试剂盒，其中所述第二试剂包括有：磷酸缓冲液、丙酮酸钠以及还原态烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸。

9、如权利要求6所述的试剂盒，其中所述第三试剂包括有：天冬氨酸盐、α-酮戊二酸、苹果酸脱氢酶以及还原态烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸。

10、如权利要求1所述的试剂盒，其中固定有抗体的所述第一微标盘孔经过蛋白质吸附遮盖处理。

11、如权利要求3所述的试剂盒，其中固定于所述第一微标盘孔中的该种抗肌酸激酶抗体的固定条件是浓度约为7μg/ml以上，体积约为100μl，固定时间约为60小时以上。

12、如权利要求3所述的试剂盒，其中固定于所述第一微标盘孔中的该种抗乳酸脱氢酶抗体的固定条件是浓度约为40μg/ml以上，体积约为100μl，固定时间约为50小时以上。

13、如权利要求3所述的试剂盒，其中固定于所述第一微标盘孔中的该种抗肌酸激酶抗体与一受检体的培育时间约为20分钟以上。

14、如权利要求3所述的试剂盒，其中固定于所述第一微标盘孔中的该种抗乳酸脱氢酶抗体与一受检体的培育时间约为10分钟以上。

15、一种同时检测急性心肌梗塞中的多种标志物的方法，包括下列步骤：

a.提供多种能与心肌梗塞血液生化标志物键合的抗体；

b.提供多个第一固体载体和多个第二固体载体；

c.每一第一固体载体固定所述抗体中的一种；

d.将多份同一受检体分别与每一第一固体载体以及每一第二固体载体接触，其中所述受检体中包含有心肌梗塞血液生化标志物；

e.去除未与所述第一固体载体中已固定的抗体键合的杂质；

f.分别加入多个相对的试剂在所述第一固体载体和所述第二固体载体中，其中所述试剂是用以测定所述心肌梗塞血液生化标志物的试剂；以及

g.测量所述第一载体和所述第二载体中的所述的血液生化标志物的活性。

16、如权利要求15所述的方法，其中所述第一固体载体是从微标盘、乳胶粒和玻璃珠所组成的族群中选择其一。

17、如权利要求15所述的方法，其中所述第二固体载体是从微标盘、乳胶粒和玻璃珠所组成的族群中选择其一。

18、如权利要求15所述的方法，其中步骤a中的所述抗体选自抗肌酸激酶MB抗体、抗乳酸脱氢酶I型抗体、抗肌红蛋白抗体、抗脂肪酸结合蛋白抗体、抗糖原磷酸化酶BB抗体、抗碳酸酐酶III型抗体、抗肌酸激酶MB₁抗体、抗肌酸激酶MB₂抗体、抗肌酸激酶MM₁抗体、抗肌酸激酶MM₂抗体以及抗肌酸激酶MM₃抗体。

19、如权利要求15所述的方法，其中步骤c之后还包括将所述第一固体载体作蛋白质吸附遮盖处理。

20、如权利要求15所述的方法，其中步骤d之前还包括将多份同一受检体中的一份，加入肌红蛋白-乳酸脱氢酶共轭物。

21、如权利要求15所述的方法，其中步骤f中的所述试剂包括有：

用于测定肌酸激酶及其异构酶的第一试剂；

用于测定乳酸脱氢酶及其异构酶的第二试剂；以及

用于测定谷氨酸-草酰乙酸转氨酶的第三试剂。

22、如权利要求15所述的方法，其中步骤f的所述试剂具有相同测定参数。

23、如权利要求15所述的方法，其中所述心肌梗塞血液生化标志物选自总肌酸激酶、总乳酸脱氢酶、总糖原磷酸化酶、碳酸酐酶III型、谷氨酸-草酰乙酸转氨酶。

24、如权利要求21所述的方法，其中所述第一试剂包括有：咪唑、醋酸镁、乙二胺四乙酸、N-乙酰半胱氨酸、磷酸肌酸、腺苷二磷酸、葡萄糖、己糖激酶、氧化态烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸以及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。

25、如权利要求21所述的方法，其中所述第二试剂包括有：磷酸缓冲液、丙酮酸钠以及还原态烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸。

26、如权利要求21所述的方法，其中所述第三试剂包括有：天冬氨酸盐、α-酮戊二酸、苹果酸脱氢酶以及还原态烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸。

27、如权利要求15所述的方法，其中步骤g是以动力学法测量并计算所述血液生化标志物的活性。

28、如权利要求27所述的方法，其中步骤g是以ELISA读数仪测量并计算所述血液生化标志物的活性。

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