CN112305093A - 一种测定烟用香精香料中还原性单糖、多种麦芽糖的方法 - Google Patents

一种测定烟用香精香料中还原性单糖、多种麦芽糖的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种测定烟用香精香料中还原性单糖、多种麦芽糖的方法，包括以下步骤：S1.在烟用香精香料中加入维生素E、三乙胺、乙醇的混合物，加热回流后过滤，取滤液；S2.将对羟基苯甲酸丙酯加入至所述滤液中，用饱和氯化钠水溶液稀释，并用水相滤膜过滤，得检测液；S3.利用离子色谱分析获得所述检测液的离子色谱图，根据保留时间定性，外标法定量，计算得到所述检测液中还原性单糖、多种麦芽糖的含量，保持还原性单糖及多种麦芽糖在分析过程中的稳定性，萃取效率高、检测灵敏度高。

Description

一种测定烟用香精香料中还原性单糖、多种麦芽糖的方法
技术领域
本发明涉及香精香料技术领域，具体涉及一种测定烟用香精香料中还原性单糖、多种麦芽糖的方法。
背景技术
麦芽糖以及麦芽多糖是由两个或者多个葡萄糖单位经由 α-1,4 糖苷键连接而成的寡糖。麦芽糖可制备成麦芽糖浆，其用途广泛，用于食品行业的各个领域，固体食品、液体食品、冷冻食品、胶体食品(如果冻)等。主要用于加工焦糖酱色及糖果、果汁饮料、造酒、罐头、豆酱、酱油。本发明主要是建立一种新型的离子色谱分析烟用香精香料中麦芽糖和麦芽多糖的方法。
目前有关烟用香精香料中麦芽糖和麦芽多糖的测定的报道还比较少，但在其它食品中有类似的报道，CN201810575470.9 公开了一种黄酒中异麦芽糖、异麦芽三糖、麦芽糖、潘糖的检测方法。稀释后的酒样以C18固相萃取小柱净化、净化后的样液注入离子色谱系统，使用CarboPacTM PA10糖分析专用柱色谱柱分离，NaOH溶液洗脱，柱后流出液注入串联四极杆质谱系统，在负离子模式下用多反应监测模式检测 ，CN201910911251.8 公开了一种啤酒中多种糖、糖醇及醇类同时快速检测的方法，属于分析化学领域,本发明采用积分脉冲安培-离子色谱法，通过优化前处理检测方法，研究影响组分分离的实验因素，建立一次性同时检测啤酒中23种糖类、糖醇、醇类（2,3-丁二醇、乙醇、甲醇、丙三醇、赤藓糖醇、木糖醇、岩藻糖、阿拉伯糖醇、山梨醇、海藻糖、核糖醇、甘露醇、2-脱氧-D-葡萄糖、甘露糖、蜜二糖、葡萄糖、麦芽糖醇、果糖、乳糖、核糖、蔗糖、棉子糖、麦芽糖）的方法，但是该方法没有麦芽多糖的检测，GB/T21533-2008提出了一种测定蜂蜜中麦芽多糖的方法，但是该方法前处理方法复杂，需要过柱除去葡萄糖等单糖才能进行分析，且麦芽糖在检测过程中易发生降解。
本发明公开一种前处理步骤简单，应用离子色谱可以同时测定阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖和麦芽七糖的方法。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供一种测定烟用香精香料中还原性单糖、多种麦芽糖的方法，保持还原性单糖及多种麦芽糖在分析过程中的稳定性，萃取效率高、检测灵敏度高。
本发明的解决的技术方案是，一种测定烟用香精香料中还原性单糖、多种麦芽糖的方法，包括以下步骤：
S1.在烟用香精香料中加入维生素E、三乙胺、乙醇的混合物，搅拌均匀，维生素E及三乙胺的加入方式为滴加式，加热回流后过滤，取滤液；
S2.将对羟基苯甲酸丙酯加入至所述滤液中，用饱和氯化钠水溶液稀释，稀释倍数可以为50-100倍，并用0.45μm水相滤膜过滤，得检测液；
S3.利用离子色谱分析获得所述检测液的离子色谱图，根据保留时间定性，外标法定量，计算得到所述检测液中还原性单糖、多种麦芽糖的含量，所述还原性单糖、多种麦芽糖可能包括阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖组分，组分种类取决于烟用香精香料的采样品种，本申请所使用的离子色谱分析仪配有电化学检测器，离子色谱分析仪型号为赛默飞优谱佳UHPLC+高效液相色谱系统，电化学检测器型号为Dionex™ ICS-4000 ED 电化学检测器；
优选地，所述根据保留时间定性，外标法定量的步骤为：将浓度为1000μg/ml的混标用羟基苯甲酸丙酯的饱和氯化钠溶液稀释成浓度分别为0.1μg/ml、0.3μg/ml、0.5μg/ml、0.7μg/ml、1.0μg/ml的混标系列标准工作溶液，根据混标系列标准工作溶液各组分的浓度及其响应离子色谱图的峰面积，制作线性回归标准曲线，所述混标包括阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖，依据以上方法，本申请可以分别得到阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖这9种物质的标准曲线作为检测液中物质的参照；测定检测液中还原性单糖、多种麦芽糖响应离子色谱图的峰面积，通过得到的峰面积及各物质的标准曲线，计算得到各物质的含量。
优选地，步骤S1中，所述乙醇与所述烟用香精香料的质量比为50-100：1。
优选地，步骤S1中，所述乙醇与所述维生素E的质量比为100:1-5，所述乙醇与所述三乙胺的质量比为100:0.5-1.5。
优选地，所述步骤S2中羟基苯甲酸丙酯与所述步骤S1中乙醇的质量比为0.5-1:100。
优选地，所述加热回流温度为60-80℃，所述加热回流时间为1-2h。
优选地，所述离子色谱分析的条件为，色谱柱：CarboPac PA20 AnalyticalColumn (3 x 150 mm)；流动相：去离子水为A相，氢氧化钠溶液为B相，醋酸钠溶液为缓冲液，梯度洗脱。
本发明的有益效果在于：
1. 本申请能同时检测烟草香精香料中阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖和麦芽七糖的含量，前处理方法简单、测定结果准确；
2. 烟用香精香料中的还原性单糖以及麦芽糖、麦芽多糖，在分析过程中的稳定性不一致，本申请所添加的维生素E具有抗氧化作用可防止还原性单糖、麦芽糖、麦芽多糖在提取过程中发生降解，提高分析对象的稳定性；
3. 在乙醇溶液中加入适量的三乙胺增强碱性，提高了糖的萃取效率；
4. 本申请添加了对羟基苯甲酸丙酯和饱和氯化钠水溶液，以提高含糖检测液的稳定性，避免其发生化学变化导致检测准确度降低。
说明书附图
图1为本申请测定的烟用香精香料样品的色谱图；
图2为本申请测定的烟用香精香料样品中阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖的含量；
图3为本申请所使用的标准曲线；
图4为本申请所使用的梯度洗脱程序；
图5为本申请电化学检测器的电化学脉冲积分检测电位程序。
具体实施方式
为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
实施例1
称取1g烟用香精香料，加入100g的乙醇、1g的维生素E、0.5g三乙胺后，60℃加热回流2小时萃取原料中的糖类物质，过滤，取1ml滤液，加入0.5g的对羟基苯甲酸丙酯后，用饱和氯化钠水溶液稀释100倍，用0.45μm水相滤膜过滤，得检测液；
分别称取1mg的阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖标准品，用0.5%的对羟基苯甲酸丙酯的饱和氯化钠水溶液稀释至0.1μg/ml、0.3μg/ml、0.5μg/ml、0.7μg/ml、1.0μg/ml系列浓度，按照所设定的洗脱程序进样，具体的洗脱程序如图4所示，流动相A：250mmol/L的氢氧化钠水溶液；流动相C：超纯水；流动相D：100mmNaAc，在0-18分钟，流动相A的比例维持在25%，流动相D的比例维持在0%，流动相C维持在75%；在18-95分钟，流动相A的比例维持在25%，流动相D的比例维持在10%，流动相C维持在65%；在95-110分钟，流动相A的比例维持在25%，流动相D的比例维持在0%，流动相C维持在75%，在第110分钟结束时完成整个梯度运行，按所设定如图5所示的电化学脉冲积分检测电位检测进行检测，在0-0.4s，脉冲积分检测电位维持在0.1V，在0.4-0.43s，脉冲积分检测电位维持在-2.5V，在0.43-0.45s，脉冲积分检测电位维持在0.5V，在0.45-0.5s，脉冲积分检测电位维持在-0.1V，分别得到阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖的标准曲线，所述标准曲线如图3所示；
将所述检测液按照图4的洗脱程序、图5的检测电位进行检测，得到烟草香精香料中各组分的响应离子色谱图的峰面积，如图1所示，对照所得到的标准曲线，分别计算烟草香精香料中阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖的含量，结果如图2所示。
实施例2
称取1g烟用香精香料，加入100g的乙醇、5g的维生素E、1.5g三乙胺后，80℃加热回流1小时萃取原料中的糖类物质，过滤，取1ml滤液，加入1g的对羟基苯甲酸丙酯后，用饱和氯化钠水溶液稀释50倍，用0.45μm水相滤膜过滤，得检测液；
分别称取1mg的阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖标准品，用1%的对羟基苯甲酸丙酯的饱和氯化钠水溶液稀释至0.1μg/ml、0.3μg/ml、0.5μg/ml、0.7μg/ml、1.0μg/ml系列浓度，按照所设定的洗脱程序进样，具体的洗脱程序如图4所示，按所设定如图5所示的电化学脉冲积分检测电位检测进行检测，分别得到阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖的标准曲线，所述标准曲线如图3所示；
将所述检测液按照图4的洗脱程序、图5的检测电位进行检测，得到烟草香精香料中各组分的响应离子色谱图的峰面积，并对照所得到的标准曲线，分别计算烟草香精香料中阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖的含量，结果如图2所示。
实施例3
称取2g烟用香精香料，加入100g的乙醇、3g的维生素E、1g三乙胺后，70℃加热回流1.5小时萃取原料中的糖类物质，过滤，取1ml滤液，加入0.8g的对羟基苯甲酸丙酯后，用饱和氯化钠水溶液稀释80倍，用0.45μm水相滤膜过滤，得检测液；
分别称取1mg的阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖标准品，用0.8%的对羟基苯甲酸丙酯的饱和氯化钠水溶液稀释至0.1μg/ml、0.3μg/ml、0.5μg/ml、0.7μg/ml、1.0μg/ml系列浓度，按照所设定的洗脱程序进样，具体的洗脱程序如图4所示，按所设定如图5所示的电化学脉冲积分检测电位检测进行检测，分别得到阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖的标准曲线，所述标准曲线如图3所示；
将所述检测液按照图4的洗脱程序、图5的检测电位进行检测，得到烟草香精香料中各组分的响应离子色谱图的峰面积，对照所得到的标准曲线，分别计算烟草香精香料中阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖的含量，结果如图2所示。
实施例4
称取1.5g烟用香精香料，加入100g的乙醇、3g的维生素E、1g三乙胺后，70℃加热回流1.5小时萃取原料中的糖类物质，过滤，取1ml滤液，加入0.8g的对羟基苯甲酸丙酯后，用饱和氯化钠水溶液稀释80倍，用0.45μm水相滤膜过滤，得检测液；
分别称取1mg的阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖标准品，用0.8%的对羟基苯甲酸丙酯的饱和氯化钠水溶液稀释至0.1μg/ml、0.3μg/ml、0.5μg/ml、0.7μg/ml、1.0μg/ml系列浓度，按照所设定的洗脱程序进样，具体的洗脱程序如图4所示，按所设定如图5所示的电化学脉冲积分检测电位检测进行检测，分别得到阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖的标准曲线，所述标准曲线如图3所示；
将所述检测液按照图4的洗脱程序、图5的检测电位进行检测，得到烟草香精香料中各组分的响应离子色谱图的峰面积，对照所得到的标准曲线，分别计算烟草香精香料中阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖的含量，结果如图2所示。
实施例5
称取1g烟用香精香料，加入80g的乙醇、1g的维生素E、0.5g三乙胺后，70℃加热回流1.5小时萃取原料中的糖类物质，过滤，取1ml滤液，加入0.5g的对羟基苯甲酸丙酯后，用饱和氯化钠水溶液稀释100倍，用0.45μm水相滤膜过滤，得检测液；
分别称取1mg的阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖标准品，用0.8%的对羟基苯甲酸丙酯的饱和氯化钠水溶液稀释至0.1μg/ml、0.3μg/ml、0.5μg/ml、0.7μg/ml、1.0μg/ml系列浓度，按照所设定的洗脱程序进样，具体的洗脱程序如图4所示，按所设定如图5所示的电化学脉冲积分检测电位检测进行检测，分别得到阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖的标准曲线，所述标准曲线如图3所示；
将所述检测液按照图4的洗脱程序、图5的检测电位进行检测，得到烟草香精香料中各组分的响应离子色谱图的峰面积，对照所得到的标准曲线，分别计算烟草香精香料中阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖的含量，结果如图2所示。
实施例6
称取1.2g烟用香精香料，加入100g的乙醇、5g的维生素E、1.5g三乙胺后，80℃加热回流1.5小时萃取原料中的糖类物质，过滤，取1ml滤液，加入0.8g的对羟基苯甲酸丙酯后，用饱和氯化钠水溶液稀释100倍，用0.45μm水相滤膜过滤，得检测液；
分别称取1mg的阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖标准品，用0.8%的对羟基苯甲酸丙酯的饱和氯化钠水溶液稀释至0.1μg/ml、0.3μg/ml、0.5μg/ml、0.7μg/ml、1.0μg/ml系列浓度，按照所设定的洗脱程序进样，具体的洗脱程序如图4所示，按所设定如图5所示的电化学脉冲积分检测电位检测进行检测，分别得到阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖的标准曲线，所述标准曲线如图3所示；
将所述检测液按照图4的洗脱程序、图5的检测电位进行检测，得到烟草香精香料中各组分的响应离子色谱图的峰面积，对照所得到的标准曲线，分别计算烟草香精香料中阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖的含量，结果如图2所示。
以上详细描述了本发明的具体实施例。
应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域的技术人员以本发明构思在现有技术上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，都应在本权利要求书所确定的保护范围内。

Claims (7)

1.一种测定烟用香精香料中还原性单糖、多种麦芽糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.在烟用香精香料中加入维生素E、三乙胺、乙醇的混合物，加热回流后过滤，取滤液；
S2.将对羟基苯甲酸丙酯加入至所述滤液中，用饱和氯化钠水溶液稀释，并用水相滤膜过滤，得检测液；
S3.利用离子色谱分析获得所述检测液的离子色谱图，根据保留时间定性，外标法定量，计算得到所述检测液中还原性单糖、多种麦芽糖的含量。
2.根据权利要求1所述的一种测定烟用香精香料中还原性单糖、多种麦芽糖的方法，其特征在于，所述根据保留时间定性，外标法定量的步骤为：将浓度为1000μg/ml的混标用羟基苯甲酸丙酯的饱和氯化钠溶液稀释成浓度分别为0.1μg/ml、0.3μg/ml、0.5μg/ml、0.7μg/ml、1.0μg/ml的混标系列标准工作溶液，根据混标系列标准工作溶液各组分的浓度及其响应离子色谱图的峰面积，制作线性回归标准曲线，所述混标包括阿拉伯糖、葡萄糖、木糖、麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖；测定检测液中还原性单糖、多种麦芽糖响应离子色谱图的峰面积。
3.根据权利要求1所述的一种测定烟用香精香料中还原性单糖、多种麦芽糖的方法，其特征在于，步骤S1中，所述乙醇与所述烟用香精香料的质量比为50-100：1。
4.根据权利要求1所述的一种测定烟用香精香料中还原性单糖、多种麦芽糖的方法，其特征在于，步骤S1中，所述乙醇与所述维生素E的质量比为100:1-5，所述乙醇与所述三乙胺的质量比为100:0.5-1.5。
5.根据权利要求1所述的一种测定烟用香精香料中还原性单糖、多种麦芽糖的方法，其特征在于，所述步骤S2中羟基苯甲酸丙酯与所述步骤S1中乙醇的质量比为0.5-1:100。
6.根据权利要求1所述的一种测定烟用香精香料中还原性单糖、多种麦芽糖的方法，其特征在于，所述加热回流温度为60-80℃，所述加热回流时间为1-2h。
7.根据权利要求1所述的一种测定烟用香精香料中还原性单糖、多种麦芽糖的方法，其特征在于，所述离子色谱分析的条件为，色谱柱：CarboPac PA20 Analytical Column (3 x150 mm)；流动相：去离子水为A相，氢氧化钠溶液为B相，醋酸钠溶液为缓冲液，梯度洗脱。
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