CN112263710B - 一种兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架及其制备方法与应用 - Google Patents

一种兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种兼具抗炎和骨‑软骨修复功能的生物陶瓷支架及其制备方法与应用，制备方法包括以人体头发为原料通过碱提法制备头发纳米颗粒或头发微米棒，之后以头发纳米颗粒或头发微米棒与镁黄长石支架为原料，通过磷酸盐矿化法即制备得到上述生物陶瓷支架；该生物陶瓷支架兼具抗炎和骨‑软骨修复一体化的生物学功能，是一种新型的抗炎组织工程支架。与现有技术相比，本发明首次通过碱提法从人源头发提取抗氧化成分HNP和HMP，并利用磷酸盐矿化法制备抗氧化HNP‑AKT与HMP‑AKT生物陶瓷，具有制备过程绿色温和、工艺简单、条件可控、成本低廉等优点，并能达到抗炎和骨‑软骨修复一体化的效果，在炎症骨‑软骨缺损修复领域具有广阔的应用前景。

Description

一种兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架及其制备 方法与应用
技术领域
本发明属于炎症骨-软骨缺损修复技术领域，涉及一种兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架及其制备方法与应用。
背景技术
目前临床上常规的骨-软骨缺损治疗手段包括：微骨折刺激术、自体/异体细胞或组织移植等，但是自体细胞/组织的供体来源有限，此外额外创伤使病人的治疗顺应性下降；而异体细胞/组织的移植修复效能低，还可能造成疾病传播与免疫排斥。虽然目前已有大量的组织工程支架被应用于骨-软骨组织修复，然而相关研究最突出的问题是治疗策略上只单纯地考虑骨-软骨的重建问题，而忽视了炎症微环境对骨-软骨修复的阻碍作用，导致最终修复效果不佳。
发明内容
本发明的目的就是提供一种兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架及其制备方法与应用，用于解决采用自体/异体组织移植修复骨-软骨过程中由于炎症微环境的阻碍作用导致修复效果不佳的技术问题。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
一种兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架，包括镁黄长石支架(AKT) 以及分布于镁黄长石支架上的人体头发材料；
所述的人体头发材料包括头发纳米颗粒(HNP)或头发微米棒(HMP)中的至少一种。
进一步地，所述的头发纳米颗粒的粒径小于100nm；所述的头发微米棒的直径小于300nm，且长径比大于2；所述的人体头发材料与镁黄长石支架的质量比为 25-65mg/g。
一种兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架的制备方法，包括以人体头发为原料通过碱提法制备人体头发材料，之后以人体头发材料与镁黄长石支架为原料，通过磷酸盐矿化法即制备得到兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架， HNP-AKT或HMP-AKT。
进一步地，所述的头发微米棒的制备方法包括：将人体头发加入至碱性溶液中并搅拌至完全溶解，再依次经过透析、离心、冻干过程后，即得到所述的头发微米棒；
所述的头发纳米颗粒的制备方法包括：将头发微米棒依次经过超声破碎、离心、冻干过程后，即得到所述的头发纳米颗粒。
进一步地，所述的碱性溶液由可溶性无机碱配制而成，包括0.5-1.5M的氢氧化钾溶液或氢氧化钠溶液(优选为氢氧化钠溶液)。
进一步地，搅拌过程中，搅拌温度为50-80℃，搅拌时间为5-20min。
进一步地，所述的镁黄长石支架的制备方法包括：以镁黄长石陶瓷粉为原料通过3D打印即可制备得到。
进一步地，所述的磷酸盐矿化法包括：将人体头发材料与模拟体液(SBF)混合，得到矿化工作液；之后将镁黄长石支架加入至矿化工作液中，再依次经过振荡处理与超声清洗后，即得到兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架。
进一步地，所述的矿化工作液的浓度为1-10mg/mL(优选为2-10mg/mL)；
所述的振荡处理中，振荡温度为30-40℃，振荡转速为100-200rpm，振荡时间为24-100h。
作为优选的技术方案，所述的振荡温度为37℃，振荡转速为100rpm，振荡时间为24-72h。
所述的HNP及HMP具有广泛的清除自由基作用(包括清除超氧自由基、羟基自由基、双氧水、氮自由基等)以及加速干细胞成骨分化和诱导软骨细胞成熟的作用，使得所得的生物陶瓷支架在制备兼具抗炎和骨-软骨修复植入材料领域具有较好的应用潜力。
与现有技术相比，本发明具有以下特点：
1)本发明首次通过碱提法从人源头发提取抗氧化成分HNP和HMP，并利用磷酸盐矿化法制备抗氧化HNP-AKT与HMP-AKT生物陶瓷，具有制备过程绿色、温和，工艺简单，条件可控及成本低廉等优点；
2)HNP和HMP首次被发现具有诱导软骨细胞成熟和干细胞成骨分化的功能，而HNP-AKT和HMP-AKT生物陶瓷上首次用作关节炎骨-软骨缺损植入材料，表现出优异的体外抗炎作用、优异的生物活性，以及显著的体内骨-软骨修复生物学功能特性，能达到抗炎和骨-软骨修复一体化的效果，因此，本发明中的HNP-AKT 和HMP-AKT生物陶瓷支架在炎症骨-软骨缺损修复领域具有广阔的应用前景。
附图说明
图1为实施例1中制备得到的HNP(A)和HMP(B)的透射电镜照片；
图2为实施例1中制备得到的HNP和HMP的ZETA电位图；
图3为实施例1中制备得到的HNP和HMP的粒径分布图；
图4为实施例1中制备得到的HNP和HMP对DPPH自由基(A)、羟基自由基(B)、超氧自由基(C)及双氧水(D)的清除效果对比图；
图5为实施例1中制备得到的AKT(A1-A2)、SBF-AKT(B1-B2)、HNP-AKT (C1-C2)以及HMP-AKT(D1-D2)生物陶瓷支架的宏观形貌照片与扫描电镜照片；
图6为实施例1中制备得到的AKT、SBF-AKT、HNP-AKT以及HMP-AKT 生物陶瓷支架的抗压强度对比图(B)，测试试样如图中A所示；
图7为实施例1中制备得到的AKT、SBF-AKT、HNP-AKT以及HMP-AKT 生物陶瓷支架的降解性能对比图；
图8为实施例1中制备得到的AKT、SBF-AKT、HNP-AKT以及HMP-AKT 生物陶瓷支架的HNP/HMP释放性能对比图；
图9为实施例1中制备得到的AKT、SBF-AKT、HNP-AKT以及HMP-AKT 对DPPH自由基(A)、超氧自由基(B)、双氧水(C)的清除能力以及对分解双氧水制氧气的催化能力对比图(D)，其中宏观催化效果对比图如图中E所示；
图10为软骨细胞和骨髓间充质干细胞在实施例1中制备得到的AKT、 SBF-AKT、HNP-AKT以及HMP-AKT生物陶瓷支架上增殖及黏附效果对比图，其中A1-D1为软骨细胞在生物陶瓷支架上的扫描电镜照片，A2-D2为软骨细胞在生物陶瓷支架上的激光共聚焦照片，A3-D3为骨髓间充质干细胞在生物陶瓷支架上的扫描电镜照片，A4-D4为骨髓间充质干细胞在生物陶瓷支架上的激光共聚焦照片；
图11为实施例1中制备得到的HNP及HMP对软骨细胞成熟和葡萄糖摄取能力的促进作用对比图，其中(A)COLⅡ基因，(B)SOX9基因，(C)Aggrecan 基因，(D)GLUT-1基因，(E)葡萄糖摄取荧光照片；
图12为实施例1中制备得到的HNP及HMP对骨髓间充质干细胞成骨分化的促进作用对比图，其中(A)COLⅠ基因，(B)OCN基因，(C)OPN基因， (D)TIMP3基因，(E)ALP定量检测，(F)钙结节定量检测，(G)ALP染色， (H)钙结节染色；
图13为实施例1中制备得到的HNP及HMP对软骨细胞Aggrecan(A)、COL Ⅱ蛋白(B)和骨髓间充质干细胞的COLⅠ蛋白(C)表达的促进作用对比图；
图14为实施例1中制备得到的HNP及HMP对软骨细胞炎症相关基因表达的影响对比图；其中(A)MMP3基因，(B)MMP13基因，(C)Adamts-5基因， (D)IL-1β基因，(E)TNF-α基因，(F)ROS清除作用统计，(G)ROS清除作用的荧光照片；
图15为实施例1中制备得到的HNP-AKT及HMP-AKT生物陶瓷支架体内修复效果图；其中(A-D)材料植入12周的Micro-CT图，(E-H)HE染色，(I-L) TB染色，(M-P)VG染色。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。
一种兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架的制备方法，包括以下步骤：
1)HMP的提取：将人体头发剪至0.1-0.5cm，并加入至0.5-1.5M的氢氧化钾溶液或氢氧化钠溶液中，再在50-80℃下搅拌5-20min至完全溶解，待溶液冷却至室温后，采用8000-14000Da的透析袋在PBS中透析12h，再在去离子水中透析 60h(前12h中每2h更换一次透析液，后48h中每12h更换一次透析液)，之后将所得溶液以2000rpm的转速离心6min以去除大颗粒杂质，再采用12000rpm 的转速离心10min并经过冻干处理后即得到头发微米棒(HMP)，置于4℃下冷藏备用；
2)HNP的提取：将HMP配制成2-10mg/mL水溶液并采用JY92-IIN型超声波细胞粉碎机以10％功率超声破碎30min，之后以12000rpm的转速离心10min 并经冻干处理后得到头发纳米颗粒(HNP)，置于4℃下冷藏备用；
3)以镁黄长石陶瓷粉为原料通过3D打印制备得到镁黄长石支架；
4)将头发纳米颗粒(HNP)或头发微米棒(HMP)中的至少一种与模拟体液 (SBF)混合，得到1-10mg/mL(优选浓度为2-10mg/mL)矿化工作液；
5)将镁黄长石支架加入至矿化工作液中，再依次经过振荡处理与超声清洗后，即得到兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架HNP-AKT或HMP-AKT。
其中，镁黄长石支架的加入量为0.015-0.04g/mg HNP or HMP；振荡处理中，振荡温度为30-40℃(优选为37℃)，振荡转速为100-200rpm(优选为100rpm)，振荡时间为24-100h(优选为24-72h)。
所得生物陶瓷支架可用于制备兼具抗炎和骨-软骨修复植入材料。
以下是更加详细的实施案例，通过以下实施案例进一步说明本发明的技术方案以及所能够获得的技术效果。
实施例1：
一种兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架的制备方法，包括以下步骤：
1)HMP的提取：将人体头发剪至0.5cm，并加入至0.5M的氢氧化钠溶液中，再在50℃下搅拌20min至完全溶解，待溶液冷却至室温后，采用8000Da的透析袋在PBS中透析12h，再在去离子水中透析60h(前12h中每2h更换一次透析液，后48h中每12h更换一次透析液)，之后将所得溶液以2000rpm的转速离心 6min以去除大颗粒杂质，再采用12000rpm的转速离心10min并经过冻干处理后，得到HMP，并置于4℃下冷藏备用；
2)HNP的提取：将HMP配制成2mg/mL水溶液并并采用JY92-IIN型超声波细胞粉碎机以10％功率超声破碎30min，之后采用12000rpm的转速离心10min 并经过冻干处理后，得到HNP，并置于4℃下冷藏备用；
3)AKT的制备：以镁黄长石陶瓷粉为原料通过3D打印制备AKT支架；
4)HNP-AKT支架：称取20mg HNP粉体，并用SBF配制成2mg/mL矿化工作液，之后加入0.4g AKT支架，并置于37℃摇床中以100rpm的速度处理48h，所得产物经超声清洗5min后，即得到HNP-AKT支架，并在60℃下烘干备用；
5)HMP-AKT支架：称取20mg HMP粉体，并用SBF配制成2mg/mL矿化工作液，之后加入0.4g AKT支架，并置于37℃摇床中以100rpm的速度处理48h，所得产物经超声清洗5min后，即得到HMP-AKT支架，并在60℃下烘干备用。
同时，本实施例还制备了SBF-AKT支架，其制备方法为将AKT支架加入至不含有HMP或HNP的SBF中，其余制备过程同HNP-AKT及HMP-AKT。
实施例2：
一种兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架的制备方法，包括以下步骤：
1)HMP的提取：将人体头发剪至0.5cm，并加入至1M的氢氧化钠溶液中，再在60℃下搅拌20min至完全溶解，待溶液冷却至室温后，采用10000Da的透析袋在PBS中透析12h，再在去离子水中透析60h(前12h中每2h更换一次透析液，后48h中每12h更换一次透析液)，之后将所得溶液以2000rpm的转速离心6min以去除大颗粒杂质，再采用12000rpm的转速离心10min并经过冻干处理后，得到HMP，并置于4℃下冷藏备用；
2)HNP的提取：将HMP配制成5mg/mL水溶液并采用JY92-IIN型超声波细胞粉碎机以10％功率超声破碎30min，之后采用12000rpm的转速离心10min并经过冻干处理后，得到HNP，并置于4℃下冷藏备用；
3)AKT的制备：以镁黄长石陶瓷粉为原料通过3D打印制备AKT支架；
4)HNP-AKT支架：称取50mg HNP粉体，并用SBF配制成5mg/mL矿化工作液，之后加入1.0g AKT支架，并置于37℃摇床中以100rpm的速度处理72h，所得产物经超声清洗5min后，即得到HNP-AKT支架，并在60℃下烘干备用；
5)HMP-AKT支架：称取50mg HMP粉体，并用SBF配制成5mg/mL矿化工作液，之后加入1.0g AKT支架，并置于37℃摇床中以100rpm的速度处理48h，所得产物经超声清洗5min后，即得到HMP-AKT支架，并在60℃下烘干备用。
实施例3：
一种兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架的制备方法，包括以下步骤：
1)HMP的提取：将人体头发剪至0.5cm，并加入至1.5M的氢氧化钠溶液中，再在80℃下搅拌20min至完全溶解，待溶液冷却至室温后，采用14000Da的透析袋在PBS中透析12h，再在去离子水中透析60h(前12h中每2h更换一次透析液，后48h中每12h更换一次透析液)，之后将所得溶液以2000rpm的转速离心6min以去除大颗粒杂质，再采用12000rpm的转速离心10min并经过冻干处理后，得到HMP，并置于4℃下冷藏备用；
2)HNP的提取：将HMP配制成10mg/mL水溶液并采用JY92-IIN型超声波细胞粉碎机以10％功率超声破碎30min，之后采用12000rpm的转速离心10min 并经过冻干处理后，得到HNP，并置于4℃下冷藏备用；
3)AKT的制备：以镁黄长石陶瓷粉为原料通过3D打印制备AKT支架；
4)HNP-AKT支架：称取100mg HNP粉体，并用SBF配制成10mg/mL矿化工作液，之后加入1.8g AKT支架，并置于37℃摇床中以100rpm的速度处理24h，所得产物经超声清洗5min后，即得到HNP-AKT支架，并在60℃下烘干备用；
5)HMP-AKT支架：称取100mg HMP粉体，并用SBF配制成10mg/mL矿化工作液，之后加入1.8g AKT支架，并置于37℃摇床中以100rpm的速度处理 24h，所得产物经超声清洗5min后，即得到HMP-AKT支架，并在60℃下烘干备用。
实施例4：
本实施例用于对实施例1所制备的HNP和HMP的表面形貌及材料性能进行系统表征，包括：透射电镜表征(如图1所示)、ZETA电位分析(如图2所示) 以及粒径分布测试(如图3所示)。表征结果如下：HNP的粒径在80nm左右， HMP为棒状结构，且二者的ZETA电位均为负值。
实施例5：
本实施例用于对实施例1所制备的HNP和HMP的抗氧化性能进行表征，包括对DPPH自由基、羟基自由基、超氧自由基及双氧水的清除效果测试，测试方法包括：(A)利用DPPH自由基测定HNP和HMP对氮自由基的清除效率；(B) 利用芬顿反应产生羟基自由基，接着将HNP和HMP与羟基自由基溶液混合，通过水杨酸法测定HNP和HMP对羟基自由基的清除作用；(C)利用超氧化歧化酶检测试剂盒测定HNP和HMP对超氧自由基的清除作用；(D)利用过氧化氢酶测定试剂盒测定HNP和HMP对双氧水的清除作用。
表征结果如图4所示：HNP和HMP均具有优异的氮自由基、羟基自由基、超氧自由基和双氧水的作用。
实施例6：
本实施例用于对实施例1中制备的AKT、SBF-AKT、HNP-AKT以及HMP-AKT 生物陶瓷支架的表面形貌及材料性能进行系统表征，包括：宏观形貌表征与扫描电镜表征(如图5所示)、抗压强度(如图6所示)、降解性能(如图7所示)以及 HNP或HMP释放性能(如图8所示)。其中，抗压强度的测试方法如下：取生物陶瓷支架以《GBT4740-1999-陶瓷材料抗压强度试验方法》为标准，在德国 INSTRON5566型万能力学测试机下以2×102N/s的速度对支架进行抗压强度测试，并利用仪器自带软件记录数据；生物陶瓷降解性能和HNP或HMP释放性能的测试方法如下：将生物陶瓷支架置于含Tris-HCl的离心管中，生物陶瓷支架质量与 Tris-HCl的比例为1g:200mL，并将离心管放在37℃摇床以120rpm速度分别振荡1、3、7、14、21和35天后取液体，通过电感耦合等离子光谱发生仪测定液体里面离子含量来评估支架的离子释放；通过紫外吸收光谱法和蛋白测定试剂盒测定液体里的HNP或HMP含量，以评估HNP或HMP释放性能，最后将支架在120℃烘干后对比释放前后质量变化以评估支架的降解性能。
表面形貌表征结果如下：HNP-AKT支架的颜色为浅黄色，表面为均匀的颗粒状；HMP-AKT支架颜色为棕黄色，表面为粗糙状；AKT和SBF-AKT支架为纯白色，AKT支架具有光滑的表面，SBF-AKT支架表面为纳米花状。
材料性能表征结果如下：生物陶瓷支架修饰HNP和HMP前后的抗压强度和降解性能没有发生显著变化，HNP和HMP的释放随时间延长而增加。
实施例7：
本实施例用于对实施例1所制备的AKT、SBF-AKT、HNP-AKT以及HMP-AKT 生物陶瓷支架的抗氧化性能进行表征，包括对DPPH自由基、羟基自由基、超氧自由基及双氧水的清除效果测试，测试方法包括：(A)利用DPPH自由基测定生物陶瓷支架对氮自由基的清除效率；(B)利用芬顿反应产生羟基自由基，接着将生物陶瓷支架与羟基自由基溶液混合，通过水杨酸法测定生物陶瓷支架对羟基自由基的清除作用；(C)利用超氧化歧化酶检测试剂盒测定生物陶瓷支架对超氧自由基的清除作用；(D)利用过氧化氢酶测定试剂盒测定生物陶瓷支架对双氧水的清除作用，并通过溶氧仪测定生物陶瓷支架对双氧水的催化效率。
表征结果如图9所示：HNP-AKT和HMP-AKT生物陶瓷支架对多种自由基的清除效果较好。
实施例8：
本实施例用于对实施例1中AKT、SBF-AKT、HNP-AKT以及HMP-AKT生物陶瓷支架进行体外促进成骨分化能力评价，包括上述生物陶瓷支架对骨髓间充质干细胞的增殖、黏附及成骨分化相关的基因及蛋白的表达。
其中，骨髓间充质干细胞在生物陶瓷支架上的增殖及黏附性能的评价方法可参照文献：Adv.Funct.Mater.2019,29,1806068；结果如图10中A3-D4所示，从图中可以看出，HNP-AKT和HMP-AKT生物陶瓷支架显著促进骨髓间充质干细胞铺展、黏附和增殖。
骨髓间充质干细胞成骨分化相关基因表达能力的评价方法可参照文献：Theranostics 2019,Vol.9,Issue 21(用HNP或HMP培养液对骨髓间充质干细胞进行培养，并用碱性磷酸酶染色和茜素红染色对成骨早期和终末期标志物进行定性及定量分析)；结果如图12所示，从图中可以看出，一定浓度范围内，HNP和HMP 促进成骨相关基因的表达，并显著提高ALP活性及促进矿化。
骨髓间充质干细胞成骨分化相关蛋白(COL I蛋白)表达能力的评价方法可参照文献：Theranostics 2019,Vol.9,Issue 21；结果如图13中C所示，从图中可以看出，不同浓度的HNP和HMP均具备促进骨髓间充质干细胞的COL I蛋白表达的作用。
综上所述，HNP-AKT和HMP-AKT生物陶瓷支架及其释放的HNP和HMP能显著促进干细胞的增殖、黏附和成骨分化，证明材料具有促进成骨分化的功效。
实施例9：
本实施例用于对实施例1中AKT、SBF-AKT、HNP-AKT以及HMP-AKT生物陶瓷支架进行体外促进成软骨分化能力评价，包括上述生物陶瓷支架对软骨细胞的增殖、黏附、软骨细胞成熟和葡萄糖摄取以及成软骨分化相关的基因及蛋白的表达。
其中，软骨细胞细胞在生物陶瓷支架上的增殖及黏附性能的评价方法可参照文献：Adv.Funct.Mater.2019,29,1806068；结果如图10中A1-D2所示，从图中可以看出，HNP-AKT和HMP-AKT生物陶瓷支架显著促进软骨细胞铺展、黏附和增殖。
软骨细胞成熟和葡萄糖摄取能力的评价方法包括：用HNP或HMP培养液对软骨细胞进行培养，并在第7天提取RNA并逆转录及进行PCR实验对软骨特异性基因COLⅡ，SOX9，Aggrecan及N-cadherin等进行定量分析；对于葡萄糖摄取能力的评价方法包括：用HNP或HMP培养液对软骨细胞进行培养，并在第3天通过葡萄糖摄取检测试剂盒(ab204702,Abcam,Britain)对细胞摄取葡萄糖的能力进行检测；结果如图11所示，从图中可以看出，不同浓度的HNP和HMP均有利于促进软骨细胞成熟和葡萄糖摄取的能力。
软骨细胞成软骨分化相关蛋白表达能力的评价方法如下：用HNP或HMP培养液对软骨细胞进行培养，并在第7天利用2.5％戊二醛固定细胞，利用Abcam公司的Aggrecan、COLⅡ抗体(一抗和二抗)对细胞进行孵育，最后利用激光共聚焦仪器对细胞表达的蛋白进行成像；结果如图13中A、B所示，从图中可以看出，不同浓度的HNP和HMP均具备促进软骨细胞Aggrecan、COLⅡ蛋白表达的作用。
软骨细胞炎症相关基因表达能力的评价方法如下：利用白介素1构建关节炎模型软骨细胞，接着用HNP或HMP培养液对炎症软骨细胞进行培养，并在第7天提取RNA并逆转录及进行PCR实验对验证相关基因MMP3、MMP13、Adamts-5、 IL-1β、TNF-α等进行定量分析；细胞的ROS表达利用碧云天DCFH-DA探针 (S0033)进行检测，结果如图14所示；从图中可以看出，HNP和HMP能显著降低软骨细胞炎症相关基因的表达，同时明显下调ROS的含量。
综上所述，HNP-AKT和HMP-AKT生物陶瓷支架及其释放的HNP和HMP能显著促进软骨细胞的增殖、黏附和成软骨分化。HNP或HMP首次被发现具有激活葡萄糖转运蛋白信号通路，增加细胞的葡萄糖摄取，促进软骨细胞成熟，并通过清除炎症软骨细胞的活性氧保护其免受破环的作用，结果证明材料具备促进成软骨及保护炎症软骨细胞的生物活性。
实施例10：
本实施例用于考察实施例1中HNP-AKT生物陶瓷支架体内修复效果，测试方法可参考文献：Adv.Funct.Mater.2019,29,1806068；结果如图15所示。
微CT扫描结果显示植入HNP-AKT生物陶瓷支架组在缺损处形成的新生软骨及软骨下骨较空白组对照和纯AKT组显著增多。组织化学染色分析显示，植入材料12周后，空白对照组(CTR)、纯AKT组及SBF-AKT组在骨-软骨缺损周围形成少量的新生软骨/软骨下骨和纤维组织的混合物，且软骨层不完整。HNP-AKT生物陶瓷支架组在骨-软骨缺损周围及支架中心均有大量的新骨和软骨形成，同时新生软骨层结构完整，并有潮线形成，而其他三组则还存在缺损，同时生成物中含有一定量的纤维组织。以上结果表明，HNP-AKT生物陶瓷支架具备优异的体内骨- 软骨下骨一体化修复性能。
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架，其特征在于，该生物陶瓷支架包括镁黄长石支架以及通过磷酸盐矿化法分布于镁黄长石支架上的人体头发材料；
所述的人体头发材料包括头发纳米颗粒或头发微米棒中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的一种兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架，其特征在于，所述的头发纳米颗粒的粒径小于100nm；所述的头发微米棒的直径小于300nm，且长径比大于2；所述的人体头发材料与镁黄长石支架的质量比为25-65mg/g。
3.一种如权利要求1或2所述的兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架的制备方法，其特征在于，该方法包括以人体头发为原料通过碱提法制备人体头发材料，之后以人体头发材料与镁黄长石支架为原料，通过磷酸盐矿化法即制备得到兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架。
4.根据权利要求3所述的兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架的制备方法，其特征在于，所述的头发微米棒的制备方法包括：将人体头发加入至碱性溶液中并搅拌至完全溶解，再依次经过透析、离心、冻干过程后，即得到所述的头发微米棒；
所述的头发纳米颗粒的制备方法包括：将头发微米棒依次经过超声破碎、离心、冻干过程后，即得到所述的头发纳米颗粒。
5.根据权利要求4所述的兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架的制备方法，其特征在于，所述的碱性溶液由可溶性无机碱配制而成，浓度在0.5-1.5M范围内。
6.根据权利要求4所述的一种兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架的制备方法，其特征在于，搅拌过程中，搅拌温度为50-80℃，搅拌时间为5-20min。
7.根据权利要求3所述的一种兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架的制备方法，其特征在于，所述的镁黄长石支架的制备方法包括：以镁黄长石为原料通过3D打印即可制备得到。
8.根据权利要求3所述的一种兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架的制备方法，其特征在于，所述的磷酸盐矿化法包括：将人体头发材料与模拟体液混合，得到矿化工作液；之后将镁黄长石支架加入至矿化工作液中，再依次经过振荡处理与超声清洗后，即得到兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架。
9.根据权利要求8所述的一种兼具抗炎和骨-软骨修复功能的生物陶瓷支架的制备方法，其特征在于，所述的矿化工作液的浓度为1-10mg/mL；
所述的振荡处理中，振荡温度为30-40℃，振荡转速为100-200rpm，振荡时间为24-100h。
10.一种如权利要求1或2所述的生物陶瓷支架的应用，其特征在于，所述的生物陶瓷支架具有多种的清除自由基作用，包括超氧阴离子、羟基自由基和氮自由基的清除作用，以及具有双氧水的清除作用，可用于制备兼具抗炎和骨-软骨修复植入材料。
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Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104941005A (zh) * 2015-05-18 2015-09-30 天津工业大学 一种羟基磷灰石增强角蛋白复合骨材的制备方法

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5932552A (en) * 1997-11-26 1999-08-03 Keraplast Technologies Ltd. Keratin-based hydrogel for biomedical applications and method of production
US6461628B1 (en) * 1999-09-13 2002-10-08 Keraplast Technologies, Ltd. Non-woven keratin cell scaffold
CN100360191C (zh) * 2005-05-13 2008-01-09 中国科学院上海硅酸盐研究所 一种镁黄长石多孔骨组织工程支架材料及其制备方法
US20080147197A1 (en) * 2006-12-14 2008-06-19 Mckay William F Biodegradable osteogenic porous biomedical implant with impermeable membrane
US9163212B2 (en) * 2010-01-25 2015-10-20 Warsaw Orthopedic, Inc. Osteogenic cell delivery matrix
CN102908664B (zh) * 2011-08-02 2016-03-02 香港理工大学 一种磷灰石/角蛋白复合支架及其制备方法
WO2015168622A1 (en) * 2014-05-01 2015-11-05 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Keratin nanomaterials and methods of production
CN104004221B (zh) * 2014-06-13 2017-02-15 东华大学 一种聚己内酯‑角蛋白复合多孔支架的制备方法
US9925297B2 (en) * 2015-07-24 2018-03-27 The Texas A&M University System Shape memory polymer scaffolds for tissue defects
US10029031B2 (en) * 2015-10-28 2018-07-24 Warsaw Orthopedic, Inc. Bone void filler having sustained therapeutic agent release
CN108498858B (zh) * 2017-02-24 2020-02-14 中国科学院上海硅酸盐研究所 二硫化钼纳米片原位修饰生物陶瓷支架及其制备方法和应用
CN108273132A (zh) * 2018-03-15 2018-07-13 南通纺织丝绸产业技术研究院 一种丝素蛋白/角蛋白复合多孔材料及其制备方法
CN110279891A (zh) * 2018-03-19 2019-09-27 凯利得科技股份有限公司 由人体毛发制成的医用组合物及其制备方法和应用
CN108863332A (zh) * 2018-07-18 2018-11-23 中南大学 一种具有微纳结构表面的三维多孔硅酸钙骨支架及其制备方法
CN109395162B (zh) * 2018-12-17 2020-10-27 南通纺织丝绸产业技术研究院 一种天然蛋白基仿生结构骨支架的制备方法
US20220227634A1 (en) * 2019-06-19 2022-07-21 Agency For Science, Technology And Research Micron-sized silica hollow spheres with raspberry-like structures and a low-cost method for preparation thereof
CN110787322B (zh) * 2019-11-19 2021-11-30 佛山科学技术学院 一种矿化角蛋白仿生材料及其制备方法
CN111330078B (zh) * 2020-03-18 2020-12-22 华中农业大学 一种基于分层蛋壳膜和蛋白诱导制备的仿生矿化膜、制备方法及应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104941005A (zh) * 2015-05-18 2015-09-30 天津工业大学 一种羟基磷灰石增强角蛋白复合骨材的制备方法

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