CN112179867B - 一种基于太赫兹波谱技术的微藻细胞中油脂的测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于太赫兹波谱技术的微藻细胞中油脂的测定方法，包括：采用傅里叶变换远红外光谱仪获取微藻细胞样本的太赫兹光谱原始信息，然后将所得的太赫兹光谱原始信息依次进行基线校正和去噪平滑预处理，最终得到待测微藻细胞的太赫兹光谱曲线，将待测微藻细胞在9.3THz处的太赫兹吸收峰面积值作为x代入y＝1.133x‑0.197中，计算得到微藻细胞中的油脂含量。根据本发明，该测定方法不需要对样品进行前处理，操作简单，从而大大的节约了人力和时间的成本。
Description
技术领域
本发明涉及微藻细胞中油脂含量的测定的技术领域，特别涉及一种基于太赫兹波谱技术的微藻细胞中油脂的测定方法。
背景技术
微藻用于生产生物柴油已经有了一定的研究，但是在微藻积累油脂的原理及积累的动态过程等方面研究还相对较少。目前研究发现，脂肪酸的合成需要经过一系列的酶促反应，参与酶促反应的酶包括丙酮酸脱氢酶、乙酰-CoA羧化酶、脂肪酸合酶等，而经过这一系列的反应后脂肪酸需要进入叶绿体、内质网和细胞溶胶等细胞结构中进行长链脂肪酸的合成。各种藻类合成的脂肪酸成分与含量有较大的差异，脂肪酸在微藻干重中的比例也有显著差距，甚至在不同的培养条件下同种微藻内的脂肪酸成分和含量也会有产生影响。将微藻用于生产生物柴油时，细胞中的脂肪酸含量是重要的考虑因素之一。但是目前的检测手段对于微藻内油脂成分及含量的检测耗时长并且预处理复杂，不仅无法及时检测细胞内油脂含量并且无法对油脂积累的机理进行快速准确研究。
太赫兹(Terahertz)波的范围为0.1-10THz，介于微波和红外区域之间(图1.2)。由于缺乏有效的光源和检测器，直到1980年代物理技术发展之前，电子与光子之间的“太赫兹间隙”一直未得到开发。近年来由于太赫兹光谱技术的快速发展，该波段光谱技术已被广泛应用于生物学等领域。在太赫兹区域的电磁光谱中，傅里叶变换远红外光谱技术是目前最流行的两种技术之一。
自2000年以来，傅里叶变换红外光谱仪(FTIR)因分析速度快、无化学污染、无复杂样品处理等优点，已被用于检测微藻中的大分子。例如，Giordano等研究了在氮限制条件下Chaetoceros muelleri L的碳分配模式,他们认为在这种条件下，碳是直接用于脂质而不是蛋白质和叶绿素的合成，而与氮的来源无关。Heraud等研究了使用红外显微技术检查了磷和氮的供应恢复后微藻中脂质和蛋白质的分布。Sigee等基于FTIR显微技术研究了海藻在磷限制期间的碳分配，并表明在细胞磷限制下，该微藻中的脂质积累比细胞外磷饥饿更为明显。虽然FTIR已被广泛应用于研究微藻，但是研究者的工作大多基于中红外波段，而忽视了太赫兹(远红外)波段。与主要反映分子内振动的中红外和拉曼光谱相反，太赫兹波段的光谱信息富含分子间弱相互作用和大分子骨架振动等，这与分子结构更直接相关。
目前微藻细胞中的油脂含量检测方法主要采用干重法和气相色谱质谱法(GC-MS)方法，这些方法需要对样品进行前处理，因此该检测方法存在操作过程繁琐，耗时费力，需要消耗大量的有机试剂，难以实现大批量地快速定量检测等技术问题。
发明内容
针对现有技术中存在的不足之处，本发明的目的是提供一种基于太赫兹波谱技术的微藻细胞中油脂的测定方法，该测定方法不需要对样品进行前处理，操作简单，从而大大的节约了人力和时间的成本。为了实现根据本发明的上述目的和其他优点，提供了一种基于太赫兹波谱技术的微藻细胞中油脂的测定方法，包括以下步骤：
S1、采用傅里叶变换远红外光谱仪测定淀粉标准品的太赫兹光谱曲线，计算淀粉标准品在9.0THz和10.5THz的吸收峰面积值为S”淀粉；
S2、制备待测藻细胞样品，并且制备待测微藻薄膜样品；
S3、将步骤S2所得的待测微藻薄膜样品，放置于中空的样品架上，然后放置在傅里叶变换远红外光谱仪的载物台上，傅立叶变换远红外光谱参数设置为分辨率为0.06THz(2cm-1)，扫描次数为128次，使用Bruker 66v/s傅里叶变换光谱仪测量范围在2-20.4THz；
S4、利用淀粉标准品在9.0THz和10.5THz的吸收峰面积S9.0和S10.5之和S淀粉和待测微藻细胞太赫兹光谱曲线在17.3THz处的吸收峰峰强H17.3，淀粉标准品在9.0THz、10.5THz吸收峰面积之和与17.3THz的太赫兹峰强的比值A＝10.5,计算出待测微藻细胞在9.3THz处其含有淀粉的太赫兹吸收峰面积S’淀粉，即S’淀粉＝A*H17.3；
S5、将待测微藻细胞在9.3THz的吸收峰面积S9.3扣除其在9.3THz处其含有淀粉的吸收峰面积S’淀粉，即得到待测微藻细胞不含淀粉，仅为油脂在9.3THz的吸收峰面积S油脂，即S油脂＝S9.3-S’淀粉；
S6、通过17.3THz处吸收峰峰强和9.3THz处的吸收峰面积的比值的关系，得到油脂含量的计算公式：y＝1.133x-0.197，其中y为油脂含量(％)，x为仅油脂在9.3THz的吸收峰面积S油脂。将S油脂作为x代入到公式中，即得待测微藻细胞中的油脂含量y(％)。
优选的，所述步骤S2还包括以下步骤：
S21、选取斜生栅藻为待测微藻作为待测微藻，将待测微藻接种到装有微藻培养基的2000ml锥形瓶中，然后置于简易光生物培养机上，控制温度25℃、相对湿度为80％、光照强度2500Lux-3500Lux进行光照培养一周，光照培养过程中每24h中光照12h、黑暗12h，得到微藻液；
S22、取稳定期的微藻作为待测微藻液，在室温下以9000r/min的速度离心5min得到藻泥，用蒸馏水洗涤藻泥两次并重复离心；
S23、取湿重200mg藻泥将配成1ml的藻液添加到直径为20mm的平滑聚乙烯模具中，放入烘干机中，并在40℃下干燥6h。最后样品被制成厚度为20μm的薄膜进行测量。
优选的，所述步骤S3还包括以下步骤：
S31、消除大气水汽的吸收贡献，仪器的整个光路采用Nidec旋转真空泵，得到待测微藻细胞样品太赫兹光谱原始信息；
S32、然后将所得到的待测微藻细胞样品太赫兹光谱原始信息依次进行基线校正和去噪平滑预处理，最终得到待测微藻细胞的太赫兹光谱曲线，进一步得到待测微藻细胞在9.3THz处的吸收峰面积为S9.3，在17.3THz的吸收峰峰强为H17.3。
优选的，所述步骤S1还包括以下步骤：
S11、将淀粉标准品压片，放置于中空的样品架上，然后放置在傅里叶变换远红外光谱仪的载物台上，傅立叶变换远红外光谱参数设置为分辨率为0.06THz(2cm-1)，扫描次数为128次，使用Bruker 66v/s傅里叶变换光谱仪测量范围在2-20.4THz；
S12、消除大气水汽的吸收贡献，仪器的整个光路采用Nidec旋转真空泵，得到待测淀粉标准品太赫兹光谱原始信息。然后将所得到的太赫兹光谱原始信息依次进行基线校正和去噪平滑预处理，最终得到淀粉标准品的太赫兹光谱曲线。
优选的，所述的基线校正是采用Unscrambler软件对太赫兹光谱原始信息进行处理，所述的去噪平滑处理是采用卷积平滑方法对太赫兹光谱原始信息进行处理。
本发明与现有技术相比，其有益效果是：由于采用快速/非破坏的太赫兹光谱信号采集，因此其测定过程不需要配制任何溶液以及化学测定，大大简化了操作步骤，缩短了检测时间，也避免了由于操作人员操作不熟练或者主观因素带来的测量结果不准确等后果。
附图说明
图1为根据本发明的一种基于太赫兹波谱技术的微藻细胞中油脂的斜生栅藻的太赫兹光谱曲线图；
图2为根据本发明的一种基于太赫兹波谱技术的微藻细胞中油脂的测定方法的淀粉的太赫兹光谱曲线图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明的实施例中所用的Bruker 66v/s傅里叶变换光谱仪，生产厂家德国Bruker公司。
所述的Unscrambler软件，CAMO AS,Oslo,Norway；
所述的卷积平滑方法，详见参考文献1。
本发明的实施例中所用的斜生栅藻(Scenedesmus obliquus)购置于中国科学院野生生物种质库——淡水藻种库。
本发明的实施例中所用的BG11培养基，按每升计算，其含10ml浓度为150.0g/L的NaNO3、10ml浓度为4.0g/L的K2HPO4、10ml浓度为7.5g/L的MgSO4·7H2O、10ml浓度为3.6g/L的CaCl2·2H2O、10ml浓度为0.6g/L的柠檬酸水溶液、10ml浓度为0.6g/L的柠檬酸铁铵、10ml浓度为0.1g/L的EDTANa2水溶液，10ml浓度为2.0g/L的Na2CO3水溶液及1ml的A5溶液，余量为水，在120℃条件下灭菌30min，待冷却至室温后待用；
其中所用的A5溶液，按每升计算，其含2.86g的H3BO3，1.86g的MnCl2·4H2O，0.22g的ZnSO4·7H2O，0.39g的Na2MoO4·2H2O，0.08g的CuSO4·5H2O，0.05g的Co(NO3)2·6H2O，余量为水。
所用的无氮(BG11-N)培养基，按每升计算，其含10ml浓度为50.0g/L的NaNO3、10ml浓度为4.0g/L的K2HPO4、10ml浓度为7.5g/L的MgSO4·7H2O、10ml浓度为3.6g/L的CaCl2·2H2O、10ml浓度为0.6g/L的柠檬酸水溶液、10ml浓度为0.6g/L的柠檬酸铁铵、10ml浓度为0.1g/L的EDTANa2水溶液，10ml浓度为2.0g/L的Na2CO3水溶液及1ml的A5溶液，余量为水，在120℃条件下灭菌30min，待冷却至室温后待用；
其中所用的A5溶液，按每升计算，其含2.86g的H3BO3，1.86g的MnCl2·4H2O，0.22g的ZnSO4·7H2O，0.39g的Na2MoO4·2H2O，0.08g的CuSO4·5H2O，0.05g的Co(NO3)2·6H2O，余量为水
参照图1-2，一种基于太赫兹波谱技术的微藻细胞中油脂的测定方法，包括以下步骤：
S1、采用傅里叶变换远红外光谱仪测定淀粉标准品的太赫兹光谱曲线，计算淀粉标准品在9.0THz和10.5THz的吸收峰面积值为S淀粉；
S2、制备待测藻细胞样品，并且制备待测微藻薄膜样品；
S3、将步骤S2所得的待测微藻薄膜样品，放置于中空的样品架上，然后放置在傅里叶变换远红外光谱仪的载物台上，傅立叶变换远红外光谱参数设置为分辨率为0.06THz(2cm-1)，扫描次数为128次，使用Bruker 66v/s傅里叶变换光谱仪测量范围在2-20.4THz；
S4、利用淀粉标准品在9.0THz和10.5THz的吸收峰面积S9.0和S10.5之和S淀粉和待测微藻细胞太赫兹光谱曲线在17.3THz处的吸收峰峰强H17.3，淀粉标准品在9.0THz、10.5THz吸收峰面积之和与17.3THz的太赫兹峰强的比值A＝10.5,计算出待测微藻细胞在9.3THz处其含有淀粉的太赫兹吸收峰面积S’淀粉，即S’淀粉＝A*H17.3；
S5、将待测微藻细胞在9.3THz的吸收峰面积S9.3扣除其在9.3THz处其含有淀粉的吸收峰面积S’淀粉，即得到待测微藻细胞不含淀粉，仅为油脂在9.3THz的吸收峰面积S油脂，即S油脂＝S9.3-S’淀粉；
S6、通过17.3THz处吸收峰峰强和9.3THz处的吸收峰面积的比值的关系，得到油脂含量的计算公式：y＝1.133x-0.197，其中y为油脂含量(％)，x为仅油脂在9.3THz的吸收峰面积S油脂。将S油脂作为x代入到公式中，即得待测微藻细胞中的油脂含量y(％)。
进一步的，所述步骤S2还包括以下步骤：
S21、选取斜生栅藻为待测微藻作为待测微藻，将待测微藻接种到装有微藻培养基的2000ml锥形瓶中，然后置于简易光生物培养机上，控制温度25℃、相对湿度为80％、光照强度2500Lux-3500Lux进行光照培养一周，光照培养过程中每24h中光照12h、黑暗12h，得到不同天数的微藻液；
上述每个锥形瓶中放入磁力转子，在微藻初级培养平台上，利用磁力搅拌器每天多次进行搅拌，以确保CO2在瓶中的溶解量，待测微藻为斜生栅藻；首先采用BG11培养基进行培养，待测斜生栅藻达到稳定期，然后将培养基换成BG11-N，上述待测微藻光照培养过程中从开始光照培养直至光照培养结束，每隔48h取一次样测量微藻生物量，生物量的测定采用血小板计数法；然后按照培养时间和微藻生物量的关系，判断待测微藻生命周期；光照培养至144h时，待测蛋白核小球藻达到稳定期；六个锥形瓶待测微藻，均取光照培养达到稳定期的微藻液作为待测微藻液；
S22、取稳定期的微藻作为待测微藻液，在室温下以9000r/min的速度离心5min得到藻泥，用蒸馏水洗涤藻泥两次并重复离心；
S23、取湿重200mg藻泥将配成1ml的藻液添加到直径为20mm的平滑聚乙烯模具中，放入烘干机中，并在40℃下干燥6h。最后样品被制成厚度为20μm的薄膜进行测量。
进一步的，所述步骤S3还包括以下步骤：
S31、消除大气水汽的吸收贡献，仪器的整个光路采用Nidec旋转真空泵，得到待测微藻细胞样品太赫兹光谱原始信息，然后将所得到的太赫兹光谱原始信息依次进行基线校正和去噪平滑预处理，最终得到9.0THz、10.5THz吸收峰面积之和与17.3THz的太赫兹峰强的比值为A＝10.5；
通过图1中不同天数的微藻光谱数据分析发现，随着时间的增加，油脂含量逐渐积累，其在9.3THz处出现明显特征峰，而这特征峰对应于C＝O,-COO-振动。而淀粉的太赫兹光谱(图2a)在9.0和10.5THz处存在两个吸收峰，这很可能加大微藻中油脂分子中的C＝O,-COO-在9.3THz的特征峰表现，使得微藻油脂含量偏大(图2b)。因此在计算上述微藻油脂含量时，有必要扣除淀粉在9.0和10.5THz处吸收峰面积的影响；
S32、然后将所得到的待测微藻细胞样品太赫兹光谱原始信息依次进行基线校正和去噪平滑预处理，最终得到待测微藻细胞的太赫兹光谱曲线，进一步得到待测微藻细胞在9.3THz处的吸收峰面积为S9.3，在17.3THz的吸收峰峰强为H17.3，然后将所得到的待测微藻细胞样品太赫兹光谱原始信息依次进行基线校正和去噪平滑预处理，最终得到待测微藻细胞的太赫兹光谱曲线，进一步得到待测微藻细胞在9.3THz处的不同天数的吸收峰面积为S09.3、S29.3、S49.3、S69.3、S89.3、S109.3，在17.3THz的吸收峰峰强为H017.3、H217.3、H417.3、H617.3、H817.3、H1017.3。
进一步的，所述步骤S1还包括以下步骤：
S11、将淀粉标准品压片，放置于中空的样品架上，然后放置在傅里叶变换远红外光谱仪的载物台上，傅立叶变换远红外光谱参数设置为分辨率为0.06THz(2cm-1)，扫描次数为128次，使用Bruker 66v/s傅里叶变换光谱仪测量范围在2-20.4THz；
S12、消除大气水汽的吸收贡献，仪器的整个光路采用Nidec旋转真空泵，得到待测淀粉标准品太赫兹光谱原始信息。然后将所得到的太赫兹光谱原始信息依次进行基线校正和去噪平滑预处理，最终得到淀粉标准品的太赫兹光谱曲线。
进一步的，所述的基线校正是采用Unscrambler软件对太赫兹光谱原始信息进行处理，所述的去噪平滑处理是采用卷积平滑方法对太赫兹光谱原始信息进行处理。
进一步的，利用步骤S1所得的淀粉标准品在9.0THz、10.5THz吸收峰面积之和与17.3THz的太赫兹峰强的比值A＝10.5及步骤S3所得的0、2、4、6、8、10天待测微藻细胞的太赫兹光谱曲线在17.3THz处的吸收峰峰强为H017.3、H217.3、H417.3、H617.3、H817.3、H1017.3，分别计算出不同天数待测微藻细胞在9.3THz处其含有淀粉的太赫兹吸收峰面积值S0’淀粉＝A*H017.3、S2’淀粉＝A*H217.3、S4’淀粉＝A*H417.3、S6’淀粉＝A*H617.3、S8’淀粉＝A*H817.3、S10’淀粉＝A*H1017.3；
将S3所得的0、2、4、6、8、10天待测微藻细胞在9.3THz的太赫兹吸收峰面积S09.3、S29.3、S49.3、S69.3、S89.3、S109.3扣除其在9.3THz处其含有淀粉的太赫兹吸收峰面积S0’淀粉、S2’淀粉、S4’淀粉、S6’淀粉、S8’淀粉、S10’淀粉，即得到待测微藻细胞不含淀粉，仅为油脂在9.3THz的太赫兹吸收峰面积S0油脂、S2油脂、S4油脂、S6油脂、S8油脂、S10油脂，即S0油脂＝S09.3-S0’淀粉、S2油脂＝S29.3-S2’淀粉、S4油脂＝S49.3-S4’淀粉、S6油脂＝S69.3-S6’淀粉、S8油脂＝S89.3-S8’淀粉、S10油脂＝S109.3-S10’淀粉、；
通过17.3THz处吸收峰峰强和9.3THz处的吸收峰面积的比值的关系，得到油脂含量的计算公式：y＝1.133x-0.197，其中y为油脂含量(％)，x为仅油脂在9.3THz的吸收峰面积S油脂。将不同天数S油脂作为x代入到公式中，即得待测微藻细胞中的油脂含量y(％)。
分别从0、2、4、6、8、10天待测微藻液细胞样品取18个样进行测定，最终所得到不同天数斜生栅藻光谱在9.3THz处油脂吸收峰面积S油脂的平均值、S油脂的标准偏差，不同天数斜生栅藻的油脂含量y的平均值和y的标准偏差，具体如表1所示：
表1.不同天数斜生栅藻光谱在9.3THz处油脂吸收峰面积(S油脂)、太赫兹光谱法预测油脂含量(y)和真实油脂含量(y’)结果表(校正后)
对照实施例
气相色谱质谱法(GC-MS)(Samek等人(2011))是目前微藻油脂分析的主要方法。本发明人借助气质联用GC-MS的方法(采用的仪器是赛默飞TSQ8000 Evo三重四极杆气质联用仪，型号TSQ 8000Evo，美国)检测计算得到斜生栅藻细胞中的油脂含量为y’(见表1)。
通过上述表1的对比，本发明的测定方法中得到的斜生栅藻细胞中的油脂含量与GC-MS测得的斜生栅藻细胞中的油脂含量值的平均值误差小于14.2％。比较不同天数微藻校正后的数据发现太赫兹光谱法测得油脂含量的标准偏差平均值为3.8％，GC-MS测得油脂含量的标准偏差平均值为2.8％。由此表明了本发明的微藻细胞中的油脂含量的测定方法的可靠性与精度是可行的。
综上所述，本发明的一种基于太赫兹波谱技术的微藻细胞中油脂含量的测定方法，解决了微藻细胞中的油脂含量检测方法存在操作过程繁琐，耗时费力，需要消耗大量的有机试剂等技术问题。经与国标法GC-MS比较以后，得到该计算方法的可靠性与精度是可行的，可以应用于实际生产中对微藻细胞中油脂含量的测定。
这里说明的设备数量和处理规模是用来简化本发明的说明的，对本发明的应用、修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。
Claims (5)
1.一种基于太赫兹波谱技术的微藻细胞中油脂的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、采用傅里叶变换远红外光谱仪测定淀粉标准品的太赫兹光谱曲线，计算淀粉标准品在9.0THz和10.5THz的吸收峰面积值；
S2、制备待测藻细胞样品，并且制备待测微藻薄膜样品；
S3、将步骤S2所得的待测微藻薄膜样品，放置于中空的样品架上，然后放置在傅里叶变换远红外光谱仪的载物台上，傅立叶变换远红外光谱参数设置为分辨率为0.06 THz (2cm-1)，扫描次数为128次，使用Bruker 66v/s傅里叶变换光谱仪测量范围在2-20.4 THz；
S4、利用淀粉标准品在9.0THz和10.5THz的吸收峰面积S9.0和S10.5之和S淀粉和待测微藻细胞太赫兹光谱曲线在17.3THz处的吸收峰峰强H17.3，淀粉标准品在9.0THz、10.5THz吸收峰面积之和与17.3THz的太赫兹峰强的比值A=10.5，计算出待测微藻细胞在9.3THz处其含有淀粉的太赫兹吸收峰面积S’淀粉，即S’淀粉=A* H 17.3；
S5、将待测微藻细胞在9.3THz的吸收峰面积S9.3扣除其在9.3THz处其含有淀粉的吸收峰面积S’淀粉，即得到待测微藻细胞不含淀粉，仅为油脂在9.3THz的吸收峰面积S油脂，即S油脂=S9.3-S’淀粉；
S6、通过17.3THz处吸收峰峰强和9.3THz处的吸收峰面积的比值的关系，得到油脂含量的计算公式：y=1.133x-0.197，其中y为油脂含量（%），x为仅油脂在9.3THz的吸收峰面积S油脂，将S油脂作为x代入到公式中，即得待测微藻细胞中的油脂含量y（%）。
2.如权利要求1所述的一种基于太赫兹波谱技术的微藻细胞中油脂的测定方法，其特征在于，所述步骤S2还包括以下步骤：
S21、选取斜生栅藻为待测微藻，将待测微藻接种到装有微藻培养基的2000ml锥形瓶中，然后置于简易光生物培养机上，控制温度25℃、相对湿度为80%、光照强度2500Lux-3500Lux进行光照培养一周，光照培养过程中每24h中光照12h、黑暗12h，得到微藻液；
S22、取稳定期的微藻作为待测微藻液，在室温下以9000 r / min的速度离心5 min得到藻泥，用蒸馏水洗涤藻泥两次并重复离心；
S23、取湿重200mg藻泥将配成1 ml的藻液添加到直径为20 mm 的平滑聚乙烯模具中，放入烘干机中，并在40℃下干燥6h，最后样品被制成厚度为20μm的薄膜进行测量。
3.如权利要求1所述的一种基于太赫兹波谱技术的微藻细胞中油脂的测定方法，其特征在于，所述步骤S3还包括以下步骤：
S31、消除大气水汽的吸收贡献，仪器的整个光路采用Nidec旋转真空泵，得到待测微藻细胞样品太赫兹光谱原始信息；
S32、然后将所得到的待测微藻细胞样品太赫兹光谱原始信息依次进行基线校正和去噪平滑预处理，最终得到待测微藻细胞的太赫兹光谱曲线，进一步得到待测微藻细胞在9.3THz处的吸收峰面积为S9.3，在17.3THz的吸收峰峰强为H17.3。
4.如权利要求1所述的一种基于太赫兹波谱技术的微藻细胞中油脂的测定方法，其特征在于，所述步骤S1还包括以下步骤：
S11、将淀粉标准品压片，放置于中空的样品架上，然后放置在傅里叶变换远红外光谱仪的载物台上，傅立叶变换远红外光谱参数设置为分辨率为0.06 THz (2 cm-1)，扫描次数为128次，使用Bruker 66v/s傅里叶变换光谱仪测量范围在2-20.4 THz；
S12、消除大气水汽的吸收贡献，仪器的整个光路采用Nidec旋转真空泵，得到待测淀粉标准品太赫兹光谱原始信息，然后将所得到的太赫兹光谱原始信息依次进行基线校正和去噪平滑预处理，最终得到淀粉标准品的太赫兹光谱曲线。
5.如权利要求3或4所述的一种基于太赫兹波谱技术的微藻细胞中油脂的测定方法，其特征在于，所述的基线校正是采用Unscrambler软件对太赫兹光谱原始信息进行处理，所述的去噪平滑处理是采用卷积平滑方法对太赫兹光谱原始信息进行处理。
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| CN112179867A (zh) | 2021-01-05 |
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