CN112048524A - 一种利用银杏黄酮提高暗发酵产氢性能的方法 - Google Patents
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Abstract
一种利用银杏黄酮提高暗发酵产氢性能的方法,它属于生物质资源化利用领域和生物能源领域,具体涉及一种提高暗发酵生物制氢的方法。本发明的目的是要解决暗发酵‑光发酵联合产氢需要光源,反应器造价高昂,而暗发酵‑微生物电解池联合产氢无法大规模应用的问题。利用银杏黄酮提高暗发酵产氢性能的方法:一、将银杏黄酮加入发酵制氢培养基中,先氮气曝气,再封口灭菌;二、加入碳源;三、接种产氢微生物,厌氧发酵,收集产出的气体。优点:一、显著提高暗发酵氢气产率。二、简单易行;且成本低,便于实现工业化生产,进而能大规模应用。本发明主要用于暗发酵产氢。
Description
技术领域
本发明属于生物质资源化利用领域和生物能源领域,具体涉及一种提高暗发酵生物制氢的方法。
背景技术
人类文明在工业革命以来快速进步,化石燃料的广泛使用为工业革命和人类的发展奠定了基础。然而,化石燃料的过度开采、使用,造成了严重的环境问题和社会问题。空气污染,海洋酸化,全球变暖等都严重威胁着人类的正常生活。不断增长的能量需求、化石能源的枯竭和生存环境的恶化迫使人类寻求新的可替代能源。风能、潮汐能、光能、生物能源等可再生能源得到了空前的关注。
在诸多生物能源中,氢气因为其独特的优点被认为是“未来的能源”。氢气能量密度高,燃烧无碳排放,而且来源丰富。但是,目前的氢气生产高度依赖化石燃料,其中48%的氢气来自于天然气,30%来自于重油和粗汽油,18%来自煤炭,依然未能克服依赖化石燃料的问题,反而进一步造成消耗。生物制氢利用光能、有机废水和工农业廉价生物质为原料,将废物利用与能量制造结合到一起,是一种理想的可再生能源生产形势。
暗发酵制氢以有机废水和农业废弃生物质为底物,原料来源广,反应器简单易操作,生产成本低廉。近年来,通过优化反应器类型,暗发酵制氢的产氢速率得到了巨大的提升。一系列底物的发酵产氢潜能得到了研究,比如糖蜜废水、餐厨垃圾、玉米秸秆、大豆壳等。然而,转化率低和氢气产率低依然是限制暗发酵制氢发展的最大瓶颈。传统技术、例如发酵过程因素的优化,很难将氢气产率提高25%。暗发酵产氢的理论产氢率,在丁酸型发酵类型中为2mol/mol葡萄糖,在乙酸型发酵中为4mol/mol葡萄糖。但是,在产氢菌中,除了氢气,还有很多别的还原型产物,用作重新氧化NADH(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸),来保证糖酵解的进行。大约三分之二的碳和质子转化成了别的产物,无法达到暗发酵产氢的理论产氢率。
目前,主要通过代谢工程手段或者联合其他工艺来提高暗发酵制氢的产氢率。代谢工程手段通过过表达氢化酶、敲除还原力竞争产物的合成基因(如乙醇脱氢酶,丁醇脱氢酶,乳酸脱氢酶等),提高菌株产氢能力,但是存在抗生素污染、工程菌菌株退化等问题。目前,联合产氢法,如暗发酵-光发酵联合产氢、暗发酵-微生物电解池联合产氢等工艺,能显著提高底物的转化率和氢气产率。但是光发酵产氢需要光源、反应器造价高昂、维护繁琐。而微生物电解池,目前尚难以走出实验室,无法大规模应用到实际生产中。这些问题都限制了生物制氢的广泛应用,也是目前无法与化石燃料制氢竞争的原因。因此,提高生物制氢竞争力和应用潜力的关键还是在于提高暗发酵制氢的产氢能力,而寻找简单易行的方法提高其产氢率迫在眉睫。
发明内容
本发明的目的是要解决暗发酵-光发酵联合产氢需要光源,反应器造价高昂,而暗发酵-微生物电解池联合产氢无法大规模应用的问题,而提供一种利用银杏黄酮提高暗发酵产氢性能的方法。
一种利用银杏黄酮提高暗发酵产氢性能的方法,具体是按以下步骤完成的:
一、将银杏黄酮加入厌氧发酵器中,然后加入发酵制氢培养基,得到含银杏黄酮的发酵制氢培养基;先氮气曝气5min~20min,再封口灭菌,得到灭菌含培养基厌氧发酵器;所述含银杏黄酮的发酵制氢培养基中银杏黄酮的浓度为0.05g/L~0.1g/L;
二、向灭菌含培养基厌氧发酵器加入碳源,至灭菌含培养基厌氧发酵器内培养基底物中碳源浓度为10g/L~20g/L为止;
三、接种产氢微生物,接种量为1%~10%,厌氧发酵,收集产出的气体。
本发明优点:一、银杏黄酮具有抗氧化功能,其中的还原性基团能够降低发酵液中的氧化还原电势,促进厌氧产氢菌的生长和质子的还原,从而提高氢气的产量。例如:当采用哈尔滨产乙醇杆菌Yuan-3作为产氢微生物时,银杏黄酮改变了哈尔滨产乙醇杆菌Yuan-3的代谢网络,使还原型产物乙醇显著减少,还原力更多地流向产氢途径,从而提高了氢气的产量。所以本发明方法能显著提高暗发酵氢气产率(当含银杏黄酮的发酵制氢培养基中银杏黄酮的浓度为0.05g/L时,提高约27%,当含银杏黄酮的发酵制氢培养基中银杏黄酮的浓度为0.1g/L时,提高约43%)。二、本发明方法简单易行;且成本低,便于实现工业化生产,进而能大规模应用。
附图说明
图1是氢气产量-时间曲线图,图中◇为实施例1的氢气产量-时间曲线图;图中○为对比例1的氢气产量-时间曲线图。
具体实施方式
具体实施方式一:本实施方式是一种利用银杏黄酮提高暗发酵产氢性能的方法,具体是按以下步骤完成的:
一、将银杏黄酮加入厌氧发酵器中,然后加入发酵制氢培养基,得到含银杏黄酮的发酵制氢培养基;先氮气曝气5min~20min,再封口灭菌,得到灭菌含培养基厌氧发酵器;所述含银杏黄酮的发酵制氢培养基中银杏黄酮的浓度为0.05g/L~0.1g/L;
二、向灭菌含培养基厌氧发酵器加入碳源,至灭菌含培养基厌氧发酵器内培养基底物中碳源浓度为10g/L~20g/L为止;
三、接种产氢微生物,接种量为1%~10%,厌氧发酵,收集产出的气体。
具体实施方式二:本实施方式与具体实施方式一的不同点是:步骤一中所述银杏黄酮来源于银杏叶提取物,且银杏叶提取物中银杏黄酮的质量分数为20~24%。其他与具体实施方式一相同。
本实施方式所述银杏叶提取物具体是按以下步骤制备的:选择自然脱落的银杏叶或黄色的银杏叶在温室下晾干,去除叶梗,先超声波破碎,再研磨,然后采用醇提取剂进行提取分离,即得到银杏叶提取物,所述醇提取剂为乙醇或丙醇。
具体实施方式三:本实施方式与具体实施方式一或二之一不同点是:步骤一中先将发酵制氢培养基煮沸,然后加入厌氧发酵器中。其他与具体实施方式一或二相同。
具体实施方式四:本实施方式与具体实施方式一至三之一不同点是:步骤一中所述发酵制氢培养基的成份如下:蛋白胨4g/L,牛肉膏2g/L,酵母浸粉1g/L,NaCl4g/L,K2HPO41.5g/L,MgCl20.01g/L,FeSO40.01g/L,半胱氨酸0.5g/L,质量分数为0.1%的刃天青0.5mL/L,微量元素液10mL/L,维生素液10mL/L;所述微量元素液的成份如下:MnSO4·7H2O0.01g/L,ZnSO4·7H2O0.05g/L,H3BO30.01g/L;N(CH2COOH)34.5g/L,CaCl2·2H2O0.01g/L,Na2MoO40.01g/L,CoCl2·6H2O0.2g/L,AlK(SO4)2·12H2O0.01g/L;所述维生素液的成份如下:钴胺素0.01g/L,维生素C0.025g/L,核黄素0.025g/L,柠檬酸0.02g/L,吡哆醛0.05g/L,对氨基苯甲酸0.01g/L,肌酸0.025g/L。其他与具体实施方式一至三相同。
具体实施方式五:本实施方式与具体实施方式一至四之一不同点是:步骤一中所述氮气为高纯氮气。其他与具体实施方式一至四相同。
具体实施方式六:本实施方式与具体实施方式一至五之一不同点是:步骤一中所述灭菌具体操作如下:在温度为121℃下灭菌15min~30min。其他与具体实施方式一至五相同。
具体实施方式七:本实施方式与具体实施方式一至六之一不同点是:步骤二中所述碳源为葡萄糖、木糖、果糖、淀粉、甘露醇、糖原、阿拉伯糖、蔗糖、海藻糖、纤维素、半纤维素和甘油中的一种或几种混合物。其他与具体实施方式一至六相同。
具体实施方式八:本实施方式与具体实施方式一至七之一不同点是:步骤三中所述产氢微生物为对数期的产氢微生物种子液;所述对数期的产氢微生物种子液为对数期的哈尔滨产乙醇杆菌Yuan-3。其他与具体实施方式一至七相同。
具体实施方式九:本实施方式与具体实施方式一至八之一不同点是:步骤三中在温度为37℃下厌氧发酵。其他与具体实施方式一至八相同。
具体实施方式十:本实施方式与具体实施方式一至九之一不同点是:步骤三中收集产出的气体的方法如下:气袋收集、气球收集或排水法收集。其他与具体实施方式一至九相同。
本发明内容不仅限于上述各实施方式的内容,其中一个或几个具体实施方式的组合同样也可以实现发明的目的。
采用下述试验验证本发明效果:
实施例1:一种利用银杏黄酮提高暗发酵产氢性能的方法,具体是按以下步骤完成的:
一、将银杏叶提取物加入厌氧发酵器中,先将发酵制氢培养基煮沸,然后加入厌氧发酵器中,得到含银杏黄酮的发酵制氢培养基;先利用高纯氮气曝气10min,使刃天青无色,再封口,然后在温度为121℃下灭菌25min,得到灭菌含培养基厌氧发酵器;
所述银杏叶提取物中银杏黄酮的质量分数为23.81%;
所述含银杏黄酮的发酵制氢培养基中银杏黄酮的浓度为0.05g/L;
所述发酵制氢培养基的成份如下:蛋白胨4g/L,牛肉膏2g/L,酵母浸粉1g/L,NaCl4g/L,K2HPO41.5g/L,MgCl20.01g/L,FeSO40.01g/L,半胱氨酸0.5g/L,质量分数为0.1%的刃天青0.5mL/L,微量元素液10mL/L,维生素液10mL/L;所述微量元素液的成份如下:MnSO4·7H2O0.01g/L,ZnSO4·7H2O0.05g/L,H3BO30.01g/L;N(CH2COOH)34.5g/L,CaCl2·2H2O0.01g/L,Na2MoO40.01g/L,CoCl2·6H2O0.2g/L,AlK(SO4)2·12H2O0.01g/L;所述维生素液的成份如下:钴胺素0.01g/L,维生素C0.025g/L,核黄素0.025g/L,柠檬酸0.02g/L,吡哆醛0.05g/L,对氨基苯甲酸0.01g/L,肌酸0.025g/L。
二、向灭菌含培养基厌氧发酵器加入葡萄糖,至灭菌含培养基厌氧发酵器内培养基底物中葡萄糖浓度为15g/L为止;
三、接种对数期的哈尔滨产乙醇杆菌Yuan-3,接种量为2.5%,在温度为37℃下厌氧发酵,采用排水法收集产出的气体,至无气体产生,发酵结束。
实施例1所述本实施方式所述银杏叶提取物具体是按以下步骤制备的:选择自然脱落的银杏叶或黄色的银杏叶在温室下晾干,去除叶梗,先超声波破碎,再研磨,然后采用乙醇进行提取分离,即得到银杏叶提取物。
对比例1:不添加银杏黄酮:
一、先将发酵制氢培养基煮沸,然后加入厌氧发酵器中,先利用高纯氮气曝气10min,使刃天青无色,再封口,然后在温度为121℃下灭菌25min,得到灭菌含培养基厌氧发酵器;
所述发酵制氢培养基的成份如下:蛋白胨4g/L,牛肉膏2g/L,酵母浸粉1g/L,NaCl4g/L,K2HPO41.5g/L,MgCl20.01g/L,FeSO40.01g/L,半胱氨酸0.5g/L,质量分数为0.1%的刃天青0.5mL/L,微量元素液10mL/L,维生素液10mL/L;所述微量元素液的成份如下:MnSO4·7H2O0.01g/L,ZnSO4·7H2O0.05g/L,H3BO30.01g/L;N(CH2COOH)34.5g/L,CaCl2·2H2O0.01g/L,Na2MoO40.01g/L,CoCl2·6H2O0.2g/L,AlK(SO4)2·12H2O0.01g/L;所述维生素液的成份如下:钴胺素0.01g/L,维生素C0.025g/L,核黄素0.025g/L,柠檬酸0.02g/L,吡哆醛0.05g/L,对氨基苯甲酸0.01g/L,肌酸0.025g/L。
二、向灭菌含培养基厌氧发酵器加入葡萄糖,至灭菌含培养基厌氧发酵器内培养基底物中葡萄糖浓度为15g/L为止;
三、接种对数期的哈尔滨产乙醇杆菌Yuan-3,接种量为2.5%,在温度为37℃下厌氧发酵,采用排水法收集产出的气体,至无气体产生,发酵结束。
测量实施例1和对比例1得到的气体样品和液相末端发酵产物,如图1所示,图1是氢气产量-时间曲线图,图中◇为实施例1的氢气产量-时间曲线图;图中○为对比例1的氢气产量-时间曲线图;实施例1和对比例1的发酵时间为120h,发酵类型为乙醇型发酵。液相末端发酵产物包括乙醇和乙酸,发酵气相中有氢气和二氧化碳两种气体。实施例1的氢气产量为2.49L/L,对比例1的氢气产量为1.96L/L,实施例1相比对比例1提高了27.04%。气体产物中氢气体积分数显著提高。加入银杏黄酮后,乙醇型发酵中的乙醇产量显著减少,浓度为3.62g/L。与乙醇变化趋势相反,乙酸浓度显著增加,浓度升高了22.83%。实施例1中的醇酸比比对比例1中的醇酸比下降了32.52%。
综上所述,发酵液中添加银杏叶改变了发酵液中乙醇和乙酸的比例,显著地提高了氢气的产量。银杏叶作为农林类废弃生物质,可以废物利用,作为添加物,提高以废水、生物质等为底物的发酵产氢产量,提高底物转化率,降低发酵产氢的生产成本。
实施例2:本实施例与实施例1不同点是:所述含银杏黄酮的发酵制氢培养基中银杏黄酮的浓度为0.1g/L。其他与实施例1相同。
测量实施例2得到的气体样品,可知实施例2的氢气产量为2.8L/L,实施例2相比对比例1提高了42.86%。
Claims (10)
1.一种利用银杏黄酮提高暗发酵产氢性能的方法,其特征在于它是按以下步骤完成的:
一、将银杏黄酮加入厌氧发酵器中,然后加入发酵制氢培养基,得到含银杏黄酮的发酵制氢培养基;先氮气曝气5min~20min,再封口灭菌,得到灭菌含培养基厌氧发酵器;所述含银杏黄酮的发酵制氢培养基中银杏黄酮的浓度为0.05g/L~0.1g/L;
二、向灭菌含培养基厌氧发酵器加入碳源,至灭菌含培养基厌氧发酵器内培养基底物中碳源浓度为10g/L~20g/L为止;
三、接种产氢微生物,接种量为1%~10%,厌氧发酵,收集产出的气体。
2.根据权利要求1所述的一种利用银杏黄酮提高暗发酵产氢性能的方法,其特征在于步骤一中所述银杏黄酮来源于银杏叶提取物,且银杏叶提取物中银杏黄酮的质量分数为20~24%。
3.根据权利要求1所述的一种利用银杏黄酮提高暗发酵产氢性能的方法,其特征在于步骤一中先将发酵制氢培养基煮沸,然后加入厌氧发酵器中。
4.根据权利要求1或3所述的一种利用银杏黄酮提高暗发酵产氢性能的方法,其特征在于步骤一中所述发酵制氢培养基的成份如下:蛋白胨4g/L,牛肉膏2g/L,酵母浸粉1g/L,NaCl 4g/L,K2HPO41.5g/L,MgCl20.01g/L,FeSO40.01g/L,半胱氨酸0.5g/L,质量分数为0.1%的刃天青0.5mL/L,微量元素液10mL/L,维生素液10mL/L;所述微量元素液的成份如下:MnSO4·7H2O 0.01g/L,ZnSO4·7H2O 0.05g/L,H3BO30.01g/L;N(CH2COOH)34.5g/L,CaCl2·2H2O 0.01g/L,Na2MoO40.01g/L,CoCl2·6H2O 0.2g/L,AlK(SO4)2·12H2O 0.01g/L;所述维生素液的成份如下:钴胺素0.01g/L,维生素C 0.025g/L,核黄素0.025g/L,柠檬酸0.02g/L,吡哆醛0.05g/L,对氨基苯甲酸0.01g/L,肌酸0.025g/L。
5.根据权利要求1所述的一种利用银杏黄酮提高暗发酵产氢性能的方法,其特征在于步骤一中所述氮气为高纯氮气。
6.根据权利要求1所述的一种利用银杏黄酮提高暗发酵产氢性能的方法,其特征在于步骤一中所述灭菌具体操作如下:在温度为121℃下灭菌15min~30min。
7.根据权利要求1所述的一种利用银杏黄酮提高暗发酵产氢性能的方法,其特征在于步骤二中所述碳源为葡萄糖、木糖、果糖、淀粉、甘露醇、糖原、阿拉伯糖、蔗糖、海藻糖、纤维素、半纤维素和甘油中的一种或几种混合物。
8.根据权利要求1所述的一种利用银杏黄酮提高暗发酵产氢性能的方法,其特征在于步骤三中所述产氢微生物为对数期的产氢微生物种子液;所述对数期的产氢微生物种子液为对数期的哈尔滨产乙醇杆菌Yuan-3。
9.根据权利要求8所述的一种利用银杏黄酮提高暗发酵产氢性能的方法,其特征在于步骤三中在温度为37℃下厌氧发酵。
10.根据权利要求1所述的一种利用银杏黄酮提高暗发酵产氢性能的方法,其特征在于步骤三中收集产出的气体的方法如下:气袋收集、气球收集或排水法收集。
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