CN111904993A

CN111904993A - 中药组合物在制备具有抗衰老功效的食品、药品或保健食品中的应用

Info

Publication number: CN111904993A
Application number: CN201910375211.6A
Authority: CN
Inventors: 方广宏; 陈伟平; 郑荣波; 黄晓丹; 陈运娇; 曹庸; 伍柏坚; 和海龙; 朱焕容; 胡冠英; 彭绍忠; 林德晖; 林春秀; 张小英
Original assignee: Guangzhou Wanglaoji Pharmaceutical Co ltd
Current assignee: Guangzhou Wanglaoji Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2019-05-07
Filing date: 2019-05-07
Publication date: 2020-11-10
Anticipated expiration: 2039-05-07
Also published as: CN111904993B

Abstract

本发明涉及一种中药组合物在制备具有抗衰老功效的食品、药品或保健食品中的应用，所述中药组合物，由包括如下重量份的原料组分制成：仙草1000～3500份、鸡蛋花135～900份、布渣叶45～900份、菊花180～900份、金银花180～900份、夏枯草180～900份、甘草45～900份。结果显示，该中药组合物能够明显延长秀丽线虫寿命、提升吞咽能力和运动能力、提高对热力胁迫和百草枯诱导的氧化胁迫的应激能力，缓解Aβ_1‑42和Poly‑Q介导神经毒性，因而该中药组合物具有改善生理功能、抗应激作用、防治神经退行性疾病及延长寿命的作用，从多方面证实其具有抗衰老作用，能够用于制备具有抗衰老功效的药品、保健食品或食品。

Description

中药组合物在制备具有抗衰老功效的食品、药品或保健食品中的应用

技术领域

本发明涉及中药组合物的新应用，特别是涉及一种中药组合物在制备具有抗衰老功效的食品、药品或保健食品中的应用。

背景技术

衰老(ageing)是一个多环节的生物学过程，是多因素共同作用的结果，其机制颇为复杂，涉及到机体各个系统结构与功能的改变，可分为生理性衰老和病理性衰老。生理性衰老是机体随着年龄的增加，在代谢过程中所出现的一个进行性的必然阶段，是机体健康水平和维持自身内稳态能力的退行性改变，具体可表现为皮肤松弛发皱、老年斑出现、毛发逐渐变白和稀少、骨质疏松且变脆、性腺和肌肉萎缩、血管硬化、神经退行性改变及免疫功能低下等。而机体的这种生理性衰老表现(如组织结构发生的退行性变化、器官功能的减退以及对内外环境的自稳能力的减弱)，会进一步发展成病理性衰老而诱导心脑血管疾病、糖尿病、肿瘤、阿兹海默症和帕金森等疾病的发生率增加，这两种衰老形式相互影响、相互作用，形成恶性循环，进而引起机体趋向死亡，从而最终导致机体寿命的降低。

目前还没有一种学说能完全解释衰老现象。有关衰老的学说颇多，如自由基学说、端粒学说、遗传学说、分子交联学说、神经内分泌学说、体细胞突变学说、免疫学说、代谢废物积累学说等。Harman提出的自由基学说是世界上公认的衰老学说之一，其认为衰老是有机体在细胞的代谢过程中大量产生的自由基造成的。过多的自由基会引起细胞内的生物大分子如蛋白质、脂类和核酸等氧化损伤，超出了机体的清除速度，氧化系统和抗氧化系统失衡，产生大量的脂质过氧化物和丙二醛，使机体各组织或脏器出现损伤和功能丧失，从而导致衰老。超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)是机体抗氧化系统重要组成部分，其通过清除细胞内的氧自由基来降低细胞内的氧化应激反应而发挥重要的抗氧化作用，其中，SOD是生物体内清除自由基的首要物质，其水平的高低是评价衰老的最直观指标。

鉴于此，市场上流通的抗衰老产品主要成分通常为具有抗氧化作用的物质，即抗氧化剂，其通过帮助捕获并中和自由基，从而祛除自由基对人体损害。而目前常见的抗氧化剂主要包括：抗氧化酶，如SOD、CAT和GSH-Px等；非抗氧化酶，如Vit C、Vit E、茶多酚、β-胡萝卜素、微量元素铜、锌、硒等。然而，这些具有预防和控制衰老的产品其实际效果往往表现不佳，且部分产品副作用明显。因此，综合运用多种途径解决衰老问题，通过多层面、多角度深入研究和开发出功效更加突出的延缓衰老的食品、药品或保健食品已逐渐成为必然趋势。

中国专利CN102793038A公开一种中药组合物，其原料组成包括仙草1000～3500份、鸡蛋花135～900份、布渣叶45～900份、菊花180～900份、金银花180～900份、夏枯草180～900份、甘草45～900份。各原料组分互相配伍，具有祛火除湿、清热解毒、生津止渴的功效。目前，该中药组合物尚无关于抗衰老功效公开。

发明内容

基于此，有必要提供一种中药组合物在制备具有抗衰老功效的食品、药品或保健食品中的应用。

一种中药组合物在制备具有抗衰老功效的食品、药品或保健食品中的应用，所述中药组合物，由包括如下重量份的原料组分制成：

仙草1000～3500份、鸡蛋花135～900份、布渣叶45～900份、菊花180～900份、金银花180～900份、夏枯草180～900份、甘草45～900份。

在其中一个实施例中，所述中药组合物，由包括如下重量份的原料组分制成：

仙草1500～2500份、鸡蛋花300～500份、布渣叶300～500份、菊花300～500份、金银花300～500份、夏枯草300～500份、甘草300～500份。

仙草1900～2500份、鸡蛋花350～450份、布渣叶350～450份、菊花350～450份、金银花350～450份、夏枯草350～450份、甘草350～450份。

在其中一个实施例中，所述中药组合物的制备方法包括如下步骤：

按照配方量配制各原料组分后，加水提取；

浓缩所得提取液，得浓缩液，即可。

在其中一个实施例中，所述水的用量为所述原料组分重量的6-20倍。

在其中一个实施例中，所述提取的时间为0.5-3h。

在其中一个实施例中，加水后，先浸泡10-50分钟，再进行所述提取。

在其中一个实施例中，所述浓缩液的浓度为9-14Be。

在其中一个实施例中，所述中药组合物还包括食品、药品、保健食品上可接受的辅料或辅助性成分。

在其中一个实施例中，所述食品为凉茶。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明提供了活性成分主要为仙草、鸡蛋花、布渣叶、菊花、金银花、夏枯草、甘草的中药组合物的新应用。通过研究发现，该中药组合物能够明显延长秀丽线虫的寿命，提升吞咽能力和运动能力、提高对热力胁迫和百草枯诱导的氧化胁迫的应激能力，缓解Aβ_1-42和/或Poly-Q积聚诱导的神经毒性，因而该中药组合物具有改善生理功能、抗应激作用、防治神经退行性疾病及延长寿命的作用，从多方面证实其具有抗衰老作用，能够用于制备具有抗衰老功效的药品、保健食品或食品，提供了该中药组合物的新用途，也为抗衰老提供了新的途径。另外，该中药组合物可以作为日常饮料饮用，适应性好，无副作用，符合现代人的需求。

附图说明

图1为对照组和中药组合物组(P10、P30、P50)秀丽线虫的寿命(A)和生殖能力(B)对比；

图2为对照组和中药组合物组(P10)秀丽线虫的E.coli OP50生长曲线对比；

图3为对照组和中药组合物组(P10)秀丽线虫的运动能力(A)、吞咽能力(B)对比；

图4为对照组和中药组合物组(P10)秀丽线虫的抗氧化应激能力(A)、抗热应激能力(B)、SOD-3蛋白荧光表达(C)和SOD-3量化表达(D)对比；

图5为对照组和中药组合物组(P10)秀丽线虫的CL4176瘫痪曲线(A)、AM140瘫痪曲线(B)对比；

图6为对照组和中药组合物组(P10)秀丽线虫的DAF-16在细胞内分布对比。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明的中药组合物在制备具有抗衰老功效的食品、药品或保健食品中的应用作进一步详细的说明。

实施例1

本实施例为所述中药组合物在制备具有抗衰老功效的食品、药品或保健食品中的应用研究。

1、材料与方法

1.1实验试剂及设备

1.1.1实验试剂

秀丽线虫生长固体培养基(NGM)组成包括：NaCl，蛋白胨，琼脂，链霉素，胆固醇，CaCl₂，MgSO₄，制霉菌素。秀丽线虫裂解液组成包括：NaOH，家用漂白剂。秀丽线虫为N₂野生型秀丽线虫(C.elegans，the Bristol strain N₂)，雌雄同体。大肠杆菌OP50(Escherchiacoli OP50；E.coli OP50)为尿嘧啶合成缺陷菌株，在NGM上生长缓慢，不影响在显微镜下观察秀丽线虫的清晰度。

中药组合物试样：由如下重量份的原料组分制成：仙草2200份、鸡蛋花400份、布渣叶400份、菊花400份、金银花400份、夏枯草400份、甘草400份。制备方法如下：

1)原料处理：选择用于制备中药组合物试样的中药原材料，洗净、切碎之后按照配方量配制；

2)水提：于所述原材料中加入6倍于原材料重量的水，浸泡15分钟后，提取1h，得水提液；

3)浓缩：将所述水提液浓缩至浓度为9Be，得中药组合物试样。该中药组合物试样经过灭菌包装后即为凉茶。也可进一步加入药品、保健食品、食品上可接受的辅料制成药品、保健食品或凉茶之外的其它食品。其中，所述的食品是指一般意义上的食品，不强调特定功能和特定人群；保健食品是指具有一定保健功效的食品，具有特定的功能且一般有特定的食用人群。

1.1.2设备(表1)

表1实验主要仪器

2.2实验溶液及培养基的配制

①1M磷酸钾缓冲液：KH₂PO₄ 108.39g，K₂HPO₄ 35.69g，加水至1L，调pH值至6.0。

②M9缓冲液：KH₂PO₄ 3g，Na₂HPO₄ 6g，NaCl 5g，MgSO₄ 0.12g，加入蒸馏水至1L，121℃高压灭菌20min。

③秀丽线虫裂解液：NaOH 0.1g，加4mL纯水和1mL NaCl，混合摇匀。秀丽线虫裂解液现配现用。

④LB液体培养基：LB肉汤21g，加水至1L，121℃灭菌15分钟，宜现用现配。

⑤秀丽线虫生长固体培养基(Nematode Growth Medium，NGM)：氯化钠3g，琼脂粉17g，胰蛋白胨2.5g，加入975mL蒸馏水，121℃，高压灭菌30min，然后在无菌条件下加入5mg/mL胆固醇1mL(用无水乙醇配制)，1M CaCl₂、1M MgSO₄各1mL和1M pH6.0磷酸钾缓冲液25mL。摇匀后，在无菌条件下，将培养基分装到培养皿(直径55mm平板)中，10mL/板，用前在室温下放置2至3天，再涂布菌液。

2.3实验方法

2.3.1秀丽线虫的准备

①秀丽线虫的培养与传代

参照文献方法(S.Brenner，The genetics of caenorhabditis elegans，Genetics77:71-94，May 1974)，在无菌条件下，切一块含有秀丽线虫较多的培养基，转移新的OP50的NGM培养基上即可，在标准培养条件(20℃，湿度40～60％)下培养，秀丽线虫会自动由食物较少的培养基边缘爬到食物较多菌苔中去。由于秀丽线虫非常容易通过培养基表面空隙钻入琼脂内，因此培养秀丽线虫时，应尽量选择表面光滑，无气泡、划痕的琼脂板。约培养48小时，可进行同期化。

②秀丽线虫的同期化

采用高氯酸钠漂白法(Brian Onken et al.，Metformin induces a dietaryrestriction-like state and the oxidative stress response to extend C.eleganshealthspan via AMPK,LKB1,and SKN-1，PLOS one：January 2010，Volume5，Issue1，8758)：在无菌条件下，用已高温灭菌的M9缓冲溶液将正处于产卵期的秀丽线虫洗至2mL无菌管中，加1mL裂解液裂解秀丽线虫，振荡3～5min，置低速离心机上3000rpm离心1min，弃上清，再用M9冲洗秀丽线虫2次，置低速离心机上3000rpm离心1min，弃上清后用移液枪吸取2mL无菌管底部剩余的0.1mL秀丽线虫滴于NGM的无菌区，在标准培养条件下培养，约51h后裂解的秀丽线虫体内的受精卵基本发育成L4期幼虫，完成同期化用于试验。

2.3.2不含与含所述中药组合物试样的NGM的配制

①E.coli OP50的培养

挑取OP50的菌种接于100mL LB液体培养基中，在37℃，170rpm条件下，振荡培养12h，至OD600＝0.4，用于接种NGM喂养正常组秀丽线虫。培养好的菌液若不是立即使用完，用10mL无菌管分装约每管8mL置于4℃医用冷藏箱中备用。

②不含所述中药组合物试样NGM的配制(对照组)

在每个NGM平板上加适量的OP50菌液(一般直径55mm平板加100μL)，用移液器取100μL OP50菌液均匀地涂布在NGM平板中央，尽量使菌液边缘距离平板边缘0.5cm左右。涂布好细菌的NGM平板在室温(21～25℃)下过夜后即可使用，若不是立即使用则将其封膜倒置置于4℃医用冷藏箱中备用。

③含所述中药组合物试样NGM的配制(中药组合物组)

根据设定的不同浓度(10mg/mL、30mg/mL、50mg/mL)，在无菌环境下用10mL容量瓶分别称取100mg、300mg、500mg所述中药组合物试样，用OP50菌液定容至10mL，分别标记为P10(10mg/mL)、P30(30mg/mL)、P50(50mg/mL)。涂布方法同不含所述中药组合物试样NGM的配制。置于4℃冷藏箱内的平板2周内尽快用完。

2.3.3抗衰老相关试验

(1)所述中药组合物对秀丽线虫寿命的影响

参照文献方法(Yunjiao Chen，Brian Onken，et al.，Mechanism of longevityextension of caenorhabditis elegans induced by pentagalloyl glucose isolatedfrom eucalyptus leaves，J Agric.Food Chem.2014，62,3422-3431)，将刚裂解好的虫卵加入各组平板上，并放入20℃恒温生化培养箱中培养至L4期幼虫。挑取同期化的L4期幼虫到新的各组平板上(每个重复30条，每个处理重复4次)继续培养。秀丽线虫生殖期(L4期起4天内)每天将秀丽线虫转移到新的各组平板中，其它时期每两天转移到新的平板中，以保证处理化合物的浓度。隔天计数秀丽线虫死亡、存活条数，直至所有组秀丽线虫死亡，实验结束(秀丽线虫存活天数从卵孵化第一天算起)。秀丽线虫死亡判断标准：用铂丝轻触虫体，无任何反应，即判断为死亡。虫卵在体内孵化而成袋样虫或逃离出培养基而干死的秀丽线虫应从统计数据中排除。每组实验都包括一对照组。

(2)所述中药组合物对秀丽线虫生殖能力的影响

生殖能力的测定：参照文献方法(Brian Onken et al.，Metformin induces adietary restriction-like state and the oxidative stress response to extendC.elegans healthspan via AMPK,LKB1,and SKN-1，PLOS one：January 2010，Volume5，Issue1，8758)，化合物处理从秀丽线虫卵开始。挑取10条L4期幼虫平均放到5个各组平板上，同时实现了秀丽线虫同期化。在产卵期，每隔24小时将秀丽线虫转移至新平板中直至秀丽线虫停止产卵。将所有产有卵的平板继续在培养箱中培养，待子代秀丽线虫孵化并进入L4期时对秀丽线虫子代数目进行计数。每组实验重复3次。

(3)所述中药组合物对E.coli OP50生长曲线的影响

秀丽线虫寿命的影响因素有很多，其中一个很重要的影响因素就是作为食物来源的大肠杆菌的状态。人们发现作为食物的大肠杆菌被紫外线、热以及抗生素等破坏的时候，秀丽线虫的寿命都一定程度的延长。为了确定物质延长秀丽线虫寿命的效果是否是通过作用于大肠杆菌来实现，要检测所述中药组合物对E.coli OP50生长曲线。在相同的培养条件下，观察所述中药组合物对E.coli OP50生长曲线的影响。

(4)所述中药组合物对秀丽线虫生理功能的影响

(4-1)所述中药组合物对秀丽线虫运动能力的影响

培养条件与寿命实验一致，观察第7、12、17天的秀丽线虫运动，并记录秀丽线虫的运动情况。①秀丽线虫自发运动，不需要触碰刺激，记为Ⅰ；②秀丽线虫必须受到触碰刺激才运动，记为Ⅱ；③秀丽线虫受到触碰刺激后只摆动头或尾，记为Ⅲ。

(4-2)所述中药组合物对秀丽线虫吞咽频率的影响

吞咽频率的测定：在第7，12，17天时随机挑选10条秀丽线虫测定其在30秒钟内的吞咽次数(Onken B,Driscoll M.，Metformin induces a dietary restriction–likestate and the oxidative stress response to extend C.elegans healthspan viaAMPK,LKB1,and SKN-1[J].PloS one，2010，5(1)：e8758)。吞咽频率的测定在室温下，秀丽线虫转移至涂有菌液(或样品)的新平板上进行。因为挑取转移过程中对秀丽线虫造成一定的外界刺激，转移后的秀丽线虫不宜太快进行指标的测定，在挑取转移后静置20min再测定吞咽指标。每组实验进行3次重复，每次重复取10条秀丽线虫。

(5)所述中药组合物对秀丽线虫抗应激能力的影响

(5-1)在高温胁迫下检测所述中药组合物对秀丽线虫抗应激能力的影响

热应激实验：参照文献方法(Honda Y,Honda S.，The daf-2gene network forlongevity regulates oxidative stress resistance and Mn-superoxide dismutasegene expression in Caenorhabditis elegans[J].，The FASEB journal，1999，13(11)：1385-1393)，经所述中药组合物处理4天的野生型秀丽线虫从20℃转移到35℃。转移后，每小时记录秀丽线虫的存活率并及时移走那些因为脱水而死亡的秀丽线虫。

(5-2)在氧化胁迫下检测所述中药组合物对秀丽线虫抗应激能力的影响

氧化应激实验：在挑虫第10天将虫转移至加入了诱导氧化胁迫剂-百草枯(最终浓度：10mM)的固体培养基中，百草枯是一种细胞内游离的物质，能诱导多种氧化应激的自由基生成化合物(Wu J Z,Huang J H,Khanabdali R,et al.，Pyrroloquinoline quinoneenhances the resistance to oxidative stress and extends lifespan upon DAF-16and SKN-1activities in C.elegans[J].，Experimental gerontology，2016，80：43-50)。之后每12小时观察秀丽线虫并记录秀丽线虫的存活情况。

(5-3)所述中药组合物对秀丽线虫SOD-3基因表达的影响

SOD-3::GFP突变体秀丽线虫(CF1553)是绿色荧光蛋白同SOD-3基因融合表达的，其携带SOD-3::GFP报告基因。在氧化胁迫下，突变体秀丽线虫CF1553中绿色荧光蛋白会表达出来，绿色荧光蛋白的表达能够反映出SOD-3的水平。将CF1553突变体裂解同期化后，置于NGM培养基上培养。在20℃下培养4天的CF1553突变体秀丽线虫转移到未经涂菌的空白NGM上，在虫体上滴加麻醉剂对秀丽线虫进行麻醉，有利于后续拍照。每组随机挑选15条秀丽线虫置于滴有PBS缓冲溶液的载玻片上，盖上盖玻片，在蔡司荧光显微镜(ZEISSImager.D2)下，使用100倍(10×10)的放大倍数和适合的滤片设置及单色数码相机进行拍照，分别进行明场(波长220nm)和荧光(波长390nm)下的虫体拍摄，所得照片采用image J软件分析结果。

(6)所述中药组合物对秀丽线虫CL4176中Aβ_1-42聚集诱导的神经毒性影响

秀丽线虫转基因体CL4176 dvIs2[pCL12(unc-54/human Aβ1-42 minigene)lpRF4]观察：参照文献方法(Martorell P,Bataller E,Llopis S,et al.，A cocoapeptide protects Caenorhabditis elegans from oxidative stress andβ-amyloidpeptide toxicity[J].，PloS one，2013，8(5)：e63283)，该突变体通过体壁肌细胞肌球蛋白启动子驱动Aβ微基因表达人Aβ_1-42。在构建CL4176转基因株时，smg-1mRNA监控系统被作为温度诱导系统。突变体在适宜生长温度15℃中培养时，smg-1系统具有活性，能识别并降解带有错误3'非编码区的Aβ转基因。如在幼虫3期(L3)时将温度升高至非适宜生长温度25℃，smg-1系统失活，转基因片段人Aβ_1-42mRNA得以在突变体体壁细胞中表达形成Aβ低聚体，在24-36小时内秀丽线虫逐步丧失运动能力。将同期化的虫卵在15℃下培养至L3时将温度调高至25℃诱导人Aβ_1-42低聚体表达。所述中药组合物处理从卵开始，秀丽线虫进入L3期时，将温度升高至25℃，每隔2h观察秀丽线虫运动。当秀丽线虫仅头部做微摇摆运动，身体不再做滚动划圈运动，在碰触刺激下亦不能诱导其身体移动时，定义为瘫痪。由于瘫痪秀丽线虫仅能微摇摆头部取食，因此其头部周围通常会形成一扇状细菌空白区域(halos)，具有halos的秀丽线虫也可定义为瘫痪。

(7)所述中药组合物对秀丽线虫AM140中poly-Q聚集诱导神经毒性的影响

秀丽线虫突变体AM140(rmIsl32[P(unc-54)Q35::YFP])观察：该突变体通过体壁肌细胞肌球蛋白启动子(myosin promoter)驱动Q35::YFP，在体壁肌肉细胞中表达与YFP融合的poly-Q重复扩展突变，随年龄的增长，poly-Q进展性聚结为不可溶性聚集体，诱导秀丽线虫瘫痪，当轻触虫子尾部，秀丽线虫无前进运动时定义为秀丽线虫瘫痪。每天记录瘫痪秀丽线虫数目，直至所有秀丽线虫瘫痪。

(8)所述中药组合物对秀丽线虫DAF-16细胞内定位变化的影响

选用突变体秀丽线虫TJ356，其DAF-16：：GFP报告基因。DAF-16::GFP的在细胞内的分布主要分为三种情况：位于细胞质、核间质、细胞核中。位于细胞质是DAF-16::GFP的荧光信号呈弥散状态分布于整个细胞中，在显微镜下可以观察到秀丽线虫通体发出均匀的绿色荧光。位于细胞核是指DAF-16::GFP的荧光信号进入细胞核并聚集在细胞核内，显微镜下观察秀丽线虫通体呈现点状的绿色荧光。核间质状态则是指DAF-16::GFP的荧光信号从细胞质向细胞核内聚集的过程，显微镜下观察秀丽线虫呈现从通体均匀绿色荧光到点状绿色荧光的中间状态。将同期化后突变体TJ356置于NGM培养基上，在正常条件下培养4天后，转移秀丽线虫至空白NGM培养基上，同1.13操作制作玻片，在荧光显微镜(ZEISS Imager.D2)下，使用100倍(10×10)的放大倍数和适合的滤片设置及单色数码相机进行拍照，分别进行明场(波长220nm)和荧光(波长390nm)下的虫体拍摄，观察DAF-16在细胞质、质核间、细胞核中的分布。

2.3.4数据统计

在秀丽线虫的生命周期内，每48h对其存活、死亡数量进行详细记录，使用GraphPad Prism 5软件、SPSS Statistics 19.0软件和Excel表格对数据进行统计分析。

3、结果与分析

3.1所述中药组合物对秀丽线虫寿命及生殖能力的影响

表2中药组合物对秀丽线虫寿命的影响

注：同一列不同的小写字母表示显著差异。

由表2和图1A可知，所述中药组合物处理从秀丽线虫L4开始，在20℃条件下培养秀丽线虫。研究结果发现三个处理浓度的中药组合物对秀丽线虫均具有延长寿命效果，尤其以10mg/mL浓度样品显著延长秀丽线虫的生命周期。从图1A可以看出，所述中药组合物三个处理浓度的秀丽线虫存活曲线均比对照组的存活曲线偏右(Log-rank测验中P<0.0001)，这说明中药组合物处理的秀丽线虫寿命整体比对照组秀丽线虫的寿命高。本实验中对照组平均寿命为21.70d，最高寿命为29.50d，当喂食10mg/mL的中药组合物时，秀丽线虫平均寿命为26.09d，最高寿命为37.00d，相比对照组，秀丽线虫平均寿命提高了20.23％，最高寿命提高了25.42％，均存在显著性差异(P<0.05)。当喂食30mg/mL中药组合物时，秀丽线虫平均寿命为25.28d，最高寿命为35.50d，相比对照组，秀丽线虫的平均寿命提高了16.50％，最高寿命提高了20.34％，均存在显著性差异(P<0.05)。当喂食50mg/mL中药组合物时，秀丽线虫平均寿命为23.39d，相比对照组，秀丽线虫的平均寿命提高了7.79％，不存在显著性差异(P>0.05)，而最高寿命为34.50d，相比对照组，秀丽线虫的最高寿命提高了16.95％，存在显著性差异(P<0.05)。相比对照组，P10、P30均能显著提高秀丽线虫的平均寿命，以P10为最佳。相比对照组，P10、P30、P50均能显著提高秀丽线虫的最高寿命，以P10为最佳。因此，10mg/mL的所述中药组合物处理能够显著提高秀丽线虫的平均寿命和最高寿命，并且效果最佳。选择以P10样品来进行接下来的生理功能等指标的检测实验。

进一步地，我们还研究了中药组合物作用之后寿命得以延长的秀丽线虫是否在生殖能力方面存在缺陷。结果如图1B所示，采用10mg/mL的所述中药组合物处理后的秀丽线虫与对照组的秀丽线虫生殖能力相当，说明所述中药组合物在延长秀丽线虫寿命的同时，对秀丽线虫的常规生殖并无延迟或抑制影响。

3.2所述中药组合物对E.coli OP50生长曲线的影响

观察P10组以及对照组在11h内对E.coli OP50生长曲线的影响，OD值(600nm)的大小与E.coli OP50的浓度成正比。由图2A得出，随时间的增加，P10组和对照组的OP50生长曲线均呈上升趋势，且在第4h开始增幅变大，P10组一直呈上升趋势，对照组基本呈现波动增加趋势。由图2B得出，在时间后期，从第11h开始，P10组以及对照组对E.coli OP50生长曲线的影响没有显著性差异。这表明，在培养中期(6-10h)，所述中药组合物会显著抵制E.coliOP50的生长；但在培养后期(11h)，对E.coli OP50的生长没有显著影响。

3.3所述中药组合物对秀丽线虫生理功能的影响

3.3.1所述中药组合物对秀丽线虫运动能力的影响

秀丽线虫的衰老伴随着移动能力及对外界机械刺激反应的退化，随着年龄的增大，秀丽线虫的移动力逐渐变得缓慢不协调，自发运动能力下降，直至死亡而停止运动。本研究中，为研究所述中药组合物是否延缓秀丽线虫移动能力的退化，有效提高其移动能力，将秀丽线虫移动能力分为三种情况：Ⅰ秀丽线虫自发运动；Ⅱ秀丽线虫受到触碰刺激才运动；Ⅲ秀丽线虫受到触碰刺激后只摆动头或尾。由图3A可知，在第7天，所有组的秀丽线虫均进行快速有节奏的自发运动。在第12天，各组的秀丽线虫移动速度开始减缓，对照组的秀丽线虫中有3.33％的秀丽线虫需刺激才运动，而中药组合物组中则6.66％的秀丽线虫需要刺激才运动，其余秀丽线虫均能自发运动，但是速度比第7天稍慢。在第17天，对照组的移动情况Ⅱ增至23.3％，移动情况Ⅲ增至30％，秀丽线虫能自发移动的速度明显下降，而中药组合物组的秀丽线虫自发运动的速度也随处理浓度的降低而减慢，其中移动情况Ⅱ、Ⅲ均增至20％。这说明所述中药组合物能提高秀丽线虫后期(第17天)移动能力，有效延缓秀丽线虫移动能力的退化。

3.5.2所述中药组合物对秀丽线虫吞咽频率的影响

由图3B可知所示，与对照组相比较，中药组合物组在第7、12、17天时都有增加秀丽线虫吞咽频率的作用，在第12、17天有显著性效果(P<0.05)。因此所述中药组合物在中后期能显著增加秀丽线虫的吞咽频率。

3.4所述中药组合物对秀丽线虫抗应激能力的影响

3.4.1在氧化胁迫下所述中药组合物对秀丽线虫抗应激能力的影响

表3中药组合物对百草枯氧化胁迫下秀丽线虫寿命的影响

注：同一列不同的小写字母表示显著差异。

分别转移第7天的秀丽线虫到涂有样品的百草枯固体培养基中，由表3可知，对照组的秀丽线虫平均寿命时间是4.43±0.26d，而涂有所述中药组合物的培养基中秀丽线虫的平均寿命时间是4.95±0.09d，具有显著性差异(P<0.001)。由生长曲线图4A可发现所述中药组合物明显出现让生长曲线右移的情况。

3.4.2在高温胁迫下所述中药组合物对秀丽线虫抗应激能力的影响

表4中药组合物对热胁迫下秀丽线虫寿命的影响

注：同一列不同的小写字母表示显著差异。从表4可知，在热应激实验中，与对照组相比(平均寿命15.36±0.28d；最大寿命21.67±0.58d)，中药组合物组的平均寿命为17.28±0.84d，最大寿命为23.33±0.58d，能显著性提高秀丽线虫的死亡时间(P<0.05)。由图4B可知，与对照组相比，中药组合物组能显著使秀丽线虫生长曲线右移(p<0.001)。

3.4.3所述中药组合物对秀丽线虫SOD-3蛋白表达的影响

SOD-3是秀丽线虫体内一种超氧化物歧化酶，也是一种线粒体Mn-SOD。已有相关研究(Honda Y,Honda S.，The daf-2gene network for longevity regulates oxidativestress resistance and Mn-superoxide dismutase gene expression inCaenorhabditis elegans[J].，The FASEB journal，1999，13(11)：1385-1393)表明，SOD-3与秀丽线虫过氧化损伤引起的衰老有关。CF1553转基因秀丽线虫的荧光可以反映秀丽线虫体内SOD-3表达水平，SOD-3与秀丽线虫过氧化而引起的衰老损失有关，SOD-3表达增加有利于延缓秀丽线虫的衰老。

由图4C所示，中药组合物组与对照组相比，显示出更高强度的SOD-3表达，量化后如图4D所示，中药组合物组的SOD-3表达显著增加。这表明所述中药组合物能更为显著地提高秀丽线虫体内的SOD-3表达水平，从而减少由于过氧化而对秀丽线虫所造成的损伤，延缓衰老。

3.5所述中药组合物对秀丽线虫CL4176中Aβ_1-42聚集诱导的神经毒性影响

表5中药组合物对秀丽线虫CL4176中Aβ_1-42聚集诱导的神经毒性影响

注：同一列不同的小写字母表示显著差异。

由表5可知，中药组合物组的平均瘫痪时间为11.67±0.34h，最大瘫痪时间为15.33±0.58h，相对于对照组的平均瘫痪时间10.02±0.69h、最大瘫痪时间为14.33±0.58h而言，其平均瘫痪时间延长了30.24％，最大瘫痪时间延长了6.9％，因此能显著性提高秀丽线虫的瘫痪时间(P<0.05)。由图5A可知，所述中药组合物能显著地缓解Aβ_1-42介导的神经毒性，延缓秀丽线虫突变株CL4176麻痹表型的发生发展，因此所述中药组合物能显著延长秀丽线虫瘫痪时间(P<0.001)。

3.6所述中药组合物对秀丽线虫AM140中Poly-Q聚集诱导神经毒性的影响

表6中药组合物对秀丽线虫AM140中poly-Q聚集诱导神经毒性的影响

注：同一列不同的小写字母表示显著差异。

由表6可知，中药组合物组的平均瘫痪时间为13.08d；与对照组相比，能显著性提高秀丽线虫的瘫痪时间(P<0.05)。由图5B可知，中药组合物组的秀丽线虫瘫痪曲线右移。因此所述中药组合物能显著缓解Poly-Q介导的神经毒性，延缓秀丽线虫突变株AM140麻痹表型的发生发展，同时能使秀丽线虫瘫痪曲线显著地发生右移。

3.7所述中药组合物对秀丽线虫DAF-16亚细胞定位的影响

研究发现(Murphy CT,McCarroll SA,Bargmann CI,et al.，Genes that ActDownstream of Daf-16to Influence the Lifespan of Caenorhabditis Elegans[J].，Nature，2003，424：277-283.)DAF-16是IIS通路的主要转录因子，可以上调许多参与各种形式应激应答过程蛋白基因的表达，如参与氧化应激的超氧化物歧化酶(SOD-3)、过氧化氢酶(CTL-1、2)谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)等，从而对于秀丽线虫的生理状况产生影响。DAF-16在细胞内的分布情况与秀丽线虫的寿命相关。daf-16基因编码的DAF-16蛋白向细胞核内转移，能够显著延长秀丽线虫的寿命。

为了研究所述中药组合物对于秀丽线虫的延寿作用是否通过促进DAF-16蛋白向细胞核内转移实现，分析不同样品处理DAF-16在细胞内的分布情况。统计结果表明(图6)，中药组合物组的秀丽线虫体内的DAF-16在细胞核内分布比例明显提高，DAF-16::GFP荧光在细胞核的秀丽线虫的比例从对照组的20.35％增加至38.19％，能够显著提高DAF-16的入核率。因此，这说明所述中药组合物介导秀丽隐杆线虫的寿命可能与IIS通路有关，通过促进DAF-16向秀丽线虫细胞核内转移，提高DAF-16蛋白入核，影响其对胰岛素信号通路的调节，起到抗氧化作用。

综上可知，所述的活性成分为仙草、鸡蛋花、布渣叶、菊花、金银花、夏枯草和甘草的中药组合物能够明显延长秀丽线虫的寿命，提升吞咽能力和运动能力、提高对热力胁迫和百草枯诱导的氧化胁迫的应激能力，防治Poly-Q和/或Aβ_1-42积聚诱导的神经退行性疾病，从而多方面证实其具有良好的抗衰老的作用，能够用于制备具有抗衰老功效的食品、药品或保健食品。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims

1.一种中药组合物在制备具有抗衰老功效的食品、药品或保健食品中的应用，所述中药组合物，由包括如下重量份的原料组分制成：

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述中药组合物，由包括如下重量份的原料组分制成：

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述中药组合物，由包括如下重量份的原料组分制成：

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述中药组合物的制备方法包括如下步骤：

按照配方量配制各原料组分后，加水提取；

浓缩所得提取液，得浓缩液，即可。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述水的用量为所述原料组分重量的6-20倍。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述提取的时间为0.5-3h。

7.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，加水后，先浸泡10-50分钟，再进行所述提取。

8.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述浓缩液的浓度为9-14Be。

9.根据权利要求1-8任一项所述的应用，其特征在于，所述中药组合物还包括食品、药品、保健食品上可接受的辅料或辅助性成分。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述食品为凉茶。