CN111840160B - 一种含苏木提取物的组合物及其在皮肤外用剂中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种含苏木提取物的组合物及其在皮肤外用剂中的应用，该组合物主要包含：苏木提取物15‑20份、紫苏提取物5‑11份、墨角藻提取物8‑14份。该组合物通过抑制IL‑6和IL‑8等炎症因子来缓解皮肤衰老过程中的炎症反应，减缓皮肤衰老进程。该组合物温和无刺激，抑制炎症因子效果好，抗衰效果优异。本发明公开的技术方案属于化妆品技术领域。

Description

一种含苏木提取物的组合物及其在皮肤外用剂中的应用
技术领域
本发明属于化妆品技术领域，尤其涉及一种含苏木提取物的组合物，具体地说，是包含一种镰形木荚苏木树皮提取物的组合物及其在皮肤外用剂中的应用。
背景技术
衰老并非疾病，而是一种客观规律，是人体成年后组织和器官功能随年龄增长而产生进行衰退的结果。目前衰老机制尚不明确，相关的学说包括自由基学说、细胞突变学说、基因程控学说和免疫衰老学说等，其中炎症反应在调控衰老机制方面起着重要作用。
在衰老过程中，天然免疫被激活并产生促炎介质，这个过程称为炎性衰老。大量证据表明，衰老能产生促炎表现，典型炎症标志物水平的升高均能指征衰老。白细胞介素-6，又称作前炎症细胞因子，是一种由单核巨噬细胞分泌的具有多种功能的细胞因子，可通过体液和细胞免疫功能影响炎症、宿主防御和组织损伤，是急性反应的介质之一，也是重要的促炎症反应因子之一。趋化因子主要由白细胞、表皮细胞和成纤维细胞等组织细胞所分泌，是一类对炎症细胞具有趋化和激活作用的细胞因子，而白细胞介素-8(Interleukin-8，IL-8)则是最主要的嗜中性粒细胞趋化因子，主要吸引中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和T细胞等，是嗜中性粒细胞穿越血管内皮到达炎症部位的重要因素。IL-6和IL-8都是免疫和炎症反应的重要调节因子，在皮肤炎症反应中，IL-6是角质形成细胞产生的细胞因子之一，对角质形成细胞增殖有促进作用；而IL-8则是皮肤炎症反应中重要的炎性趋化因子。细胞组织中过量的 IL-6和IL-8会引起皮肤的炎症损伤，因此，一定程度上抑制IL-6和IL-8等炎症因子的分泌，可以有效抑制炎症反应的发生，改善皮肤的炎症及过敏反应。衰老与炎症是相互作用的，衰老过程常伴随炎症稳态失衡，而炎症又可导致衰老，因此通过抑制炎症反应来延缓衰老是目前许多抗衰化妆品的开发途径。
苏木，作为豆科植物苏木的干燥心材，具有活血化瘀、消肿止痛的功效。中医上常用于治疗淤痛诸证，如跌打损伤、经闭痛经以及心腹疼痛等。在已公开的专利文献ZL200680038166.6中，申请人将橄榄叶提取物、豨莶草和苏木的水溶性提取物等组合来舒缓皮肤炎症。专利文献CN201910434599.2中，申请人将赤松叶提取物、金黄洋甘菊提取物、苏木提取物、欧夏至草提取物等组合来抑制痤疮、炎症反应。但是，目前暂未有苏木在抑制IL-6 和IL-8等炎症因子方面的相关研究以及通过抑制炎症反应来抗衰的研究。
发明内容
本发明的目的是提供一种含苏木提取物的组合物及其在皮肤外用剂中的应用。该组合物通过抑制IL-6和IL-8等炎症因子来缓解皮肤衰老过程中的炎症反应，减缓皮肤衰老进程。
为此，本发明提供的第一个技术方案是这样的：
一种包含苏木提取物的组合物，该组合物能够抑制炎症因子IL-6和IL-8，缓解因炎症反应引起的肌肤衰老。本发明技术方案中抑制炎症因子的组合物主要包含：苏木提取物、紫苏提取物、墨角藻提取物。
优选地，本发明抑制炎症因子的组合物按照质量份数计，优选含有苏木提取物15-20份、紫苏提取物5-11份、墨角藻提取物8-14份的组合。
其中，苏木提取物的质量份数可以是15份、15.4份、16份、17份、18份、19份、20 份。
紫苏提取物的质量份数可以是5份、6份、7份、7.8份、8份、9份、10份、11份。
墨角藻提取物的质量份数可以是8份、9份、10份、11份、11.3份、12份、13份、14 份。
更优选地，本发明技术方案中，抑制炎症因子的组合物按照质量份数计，包含苏木提取物16-18份、紫苏提取物8-10份、墨角藻提取物10-12份。
苏木作为一种中药材，具有抗肿瘤、抗炎、舒张血管、神经系统保护作用等多种药理功能。至今，国内外学者从苏木中分离得到了近百种化合物，它主要包括原苏木素类、苏木素类、苏木醇类、苯丙素类、高异黄酮类和苏木查耳酮类等。高异黄酮类化合物是苏木的一类重要活性成分，目前已经分离出较多此类化合物。研究发现此化合物能够抗神经炎和保护神经。苏木由于活性物质繁多，具有较高的药用价值。关于苏木活性物的提取方法，目前主要有煎煮法、索氏提取法、超声波提取法以及柱层析提取法。
本发明技术方案中采用的苏木来自法国圭亚那，优选苏木科皂荚豆科中的镰形木荚苏木。
本发明技术方案中，所选苏木提取物的提取部位优选提取自镰形木荚苏木树皮。
本发明技术方案中，组合物中的紫苏提取物含有黄酮化合物、酚酸类成分，具有抗氧化、杀菌等功效。紫苏提取物可以自制或者购买得到，例如可以采购自广州中然生物科技有限公司。此外，紫苏提取物也可以通过如下方法制备：将紫苏叶清洗干燥后粉碎，按照固液比(g/ml) 1:5-1:10加入质量分数为70％乙醇中，浸泡6-8h，加热回流提取2-3h，冷却，过滤，将滤液浓缩至膏状后再冷冻至干，即得紫苏提取物。
本发明技术方案中，组合物中的墨角藻属于海藻类，能够促进血红素氧化酶类型Ⅰ的酶反应、这种酶能促进血红素的分解，生成的新陈分解产物具有抗炎、抗氧化和保护细胞的特性。墨角藻提取物可以自制或者购买得到，例如可以采购自巴斯夫，商品名称为Shadownly。此外，墨角藻提取物也可以通过如下方法制备：将墨角藻干燥后粉碎，按照固液比(g/ml) 1:8-1:15加入质量分数为70％乙醇中，浸泡4-6h，加热回流提取4-6h，冷却，过滤，将滤液浓缩至膏状后再冷冻至干，即得墨角藻提取物。
本发明通过反复试验研究发现，将苏木提取物、紫苏提取物、墨角藻提取物合理组配，能够对白细胞介素-6、白细胞介素-8有较好的抑制作用，进而改善皮肤因微炎症反应引起的肌肤衰老。
相比于常规的提取工艺，本发明技术方案中的苏木提取物优选生物酶解联合超临界萃取的方式提取，使得苏木提取物中的活性物浸出率更高。因此，苏木提取物优选通过如下方法制备：
(1)取苏木干燥、粉碎；
(2)将粉碎后的苏木进行酶解后，高温灭酶；
(3)将灭酶后的苏木酶解液进行超临界萃取后在分离釜分离；
(4)将萃取液过滤，减压浓缩至膏状后，冷冻至干，即得苏木提取物。
更优选地，本发明技术方案中的苏木优选镰形木荚苏木，提取部分选自镰形木荚苏木的树皮。
更优选地，本发明技术方案中为了让苏木的活性成分充分溶出，优选将苏木树皮粉碎至 80-100目筛。
更优先地，本发明技术方案中的生物酶优选果胶酶和纤维素酶的复合酶，其中，果胶酶和纤维素酶的质量比为1:2-1:4。
本发明技术方案中，复合酶含量较低时，不能将树皮中的细胞壁充分降解后溶出活性物；而复合酶过高时，又容易导致生物酶资源浪费，因此本发明技术方案中复合酶优选的质量占苏木质量百分比的5-10％。
其中，纤维素酶和果胶酶的酶活力大于2000u/g。
本发明技术方案的步骤(2)中，苏木与去离子水的料液比(g/ml)优选1:3-1:5，该料液比可以使苏木能够进行充分的酶解反应。
本发明技术方案的步骤(2)中，酶解反应温度优选50-60℃，pH为6-7，酶解时间为100-150min。
本发明通过将苏木树皮先进行酶解，充分破坏植物细胞壁，再进行超临界萃取，利用超临界流体的高扩散性和高溶解性，对苏木的酶解液进行再次萃取，解决CO2作为非极性萃取剂对于极性活性物萃取效果不佳的问题，提高苏木中极性活性成分的浸出。
超临界萃取过程中，萃取温度、萃取压力、萃取时间的选择对于苏木活性物的提取影响较大。萃取温度升高可以使萃取溶质的挥发性增加，扩散系数增大，增加萃取物在超临界气相中的浓度，有利于萃取。此外，温度的升高，超临界流体密度降低，溶解能力也会相应降低。因此，萃取温度对于苏木中有效成分的提取表现为双重作用；萃取压力通过对CO2的密度和传质系数来影响萃取效果；由于超临界萃取是一个动态传质过程，在初始萃取阶段，萃取率会随时间的增加而增大。时间越长，萃取趋于完全，萃取率不会继续增加，如果继续提取造成资源的浪费。
通过反复研究试验，本发明优选超临界萃取的温度为35-50℃，萃取压力为25-35MPa，萃取时间为120-160min。
此外，本发明中CO2的流量优选25-30Kg/h。
优选地，本发明在CO2超临界萃取后采用两个分离釜对萃取液进行分离，包括分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ。
其中，分离釜Ⅰ的温度优选35-50℃，压力为8-15MPa；分离釜Ⅱ的温度为35-50℃，压力为2-7MPa。
本发明提供的另一个技术方案是含有苏木提取物、紫苏提取物、墨角藻提取物的组合物在延缓皮肤衰老中的应用，尤其在抗微炎症衰老中的应用，具体地说，是将该组合物作用于炎症因子IL-6和IL-8，从而抑制炎症反应，延缓肌肤衰老。
本发明组合物为了延长保存期限，还可以根据实际需要加入多元醇、水、防腐剂中的一种或者几种。所述多元醇可以为丁二醇、甘油、1,2-戊二醇等中的一种或者几种，所述防腐剂可以为化妆品领域常用的防腐剂如辛甘醇、乙基己基甘油、羟苯甲酯、羟苯丙酯、苯甲醇、苯甲酸钠、苯氧乙醇、甘油辛酸酯中一种或几种。
本发明抗微炎症组合物的制备方法为将各种活性成分常温下混合搅拌均匀即得。
本发明提供了一种皮肤外用剂，该外用剂含有苏木提取物、紫苏提取物、墨角藻提取物。
本发明技术方案中，含苏木提取物的组合物在皮肤外用剂中的重量百分比优选0.01-5％ (w/w)。
与现有技术相比，本发明提供的技术方案具有如下优点：
(1)本发明提供的组合物通过苏木提取物、紫苏提取物、墨角藻提取物三者合理组配，协同增效，共同作用于炎症因子IL-6和IL-8，抑制炎症反应，帮助皮肤抵抗微炎症引起的衰老。特别是当苏木提取物选自镰形木荚苏木时，组合物抑制炎症因子IL-6和IL-8的效果更好，抗衰效果更加优异，明显改善肌肤弹性和紧致度，提升皮肤屏障功能。
(2)本发明组合物中的苏木提取物通过酶解联合超临界萃取的方式提取，在充分破坏苏木细胞壁的前提下再使用超临界萃取，使苏木中的有效成分溶出率更高。同时，通过酶解预处理，解决CO2作为非极性萃取剂对于极性活性物萃取效果不佳的问题，促进极性活性物的溶出，使苏木提取物在组合物中发挥更好的抑制炎症功效，延缓肌肤衰老。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例。对于未特别注明的工艺参数或者条件，可参照常规技术进行。本发明所用的原料可通过自制获得或商业渠道购买。
实施例1
本发明提供一种含苏木提取物的组合物，该组合物按照质量份数计包括：镰形木荚苏木提取物15份、紫苏提取物10份、墨角藻提取物14份。
其中，镰形木荚苏木提取物主要通过如下方法制备：
(1)将镰形木荚苏木的树皮干燥、粉碎，过80目筛。
(2)将粉碎后的镰形木荚苏木树皮按照料液比(g/ml)1:3加入去离子水，用质量比为 1:2的果胶酶和纤维素酶的复合酶进行酶解，酶解反应温度为56℃，pH为6.4，复合酶占镰形木荚苏木的质量分数5％，酶解反应100min后得镰形木荚苏木树皮酶解液，高温灭酶。
(3)将灭酶后的镰形木荚苏木树皮酶解液加入超临界CO2萃取装置中进行超临界萃取，超临界萃取的温度为35℃，萃取压力为25MPa，CO2的流量25Kg/h，萃取120min后从分离釜放料，其中，分离釜包含分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ，分离釜Ⅰ的温度为35℃，压力为8MPa；分离釜Ⅱ的温度为35℃，压力为2MPa。
(4)将分离釜中的萃取液过滤，减压浓缩至膏状后，冷冻至干，即得镰形木荚苏木树皮提取物。
实施例2
本发明提供一种含苏木提取物的组合物，该组合物按照质量份数计包括：镰形木荚苏木提取物18份、紫苏提取物11份、墨角藻提取物8份。
其中，镰形木荚苏木提取物主要通过如下方法制备：
(1)将镰形木荚苏木的树皮干燥、粉碎，过90目筛。
(2)将粉碎后的镰形木荚苏木树皮按照料液比(g/ml)1:4加入去离子水，用质量比为 1:3的果胶酶和纤维素酶的复合酶进行酶解，酶解反应温度为55℃，pH为6.4，复合酶占镰形木荚苏木的质量分数7％，酶解反应120min后得镰形木荚苏木树皮酶解液，高温灭酶。
(3)将灭酶后的镰形木荚苏木树皮酶解液加入超临界CO2萃取装置中进行超临界萃取，超临界萃取的温度为40℃，萃取压力为28MPa，CO2的流量30Kg/h，萃取135min后从分离釜放料，其中，分离釜包含分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ，分离釜Ⅰ的温度为40℃，压力为10MPa；分离釜Ⅱ的温度为40℃，压力为4MPa。
(4)将分离釜中的萃取液过滤，减压浓缩至膏状后，冷冻至干，即得镰形木荚苏木树皮提取物。
实施例3
本发明提供一种含苏木提取物的组合物，该组合物按照质量份数计包括：镰形木荚苏木提取物20份、紫苏提取物5份、墨角藻提取物11份。
其中，镰形木荚苏木提取物主要通过如下方法制备：
(1)将镰形木荚苏木的树皮干燥、粉碎，过100目筛。
(2)将粉碎后的镰形木荚苏木树皮按照料液比(g/ml)1:5加入去离子水，用质量比为 1:4的果胶酶和纤维素酶的复合酶进行酶解，酶解反应温度为60℃，pH为7，复合酶占镰形木荚苏木的质量分数10％，酶解反应150min后得镰形木荚苏木树皮酶解液，高温灭酶。
(3)将灭酶后的镰形木荚苏木树皮酶解液加入超临界CO2萃取装置中进行超临界萃取，超临界萃取的温度为50℃，萃取压力为35MPa，CO2的流量30Kg/h，萃取160min后从分离釜放料，其中，分离釜包含分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ，分离釜Ⅰ的温度为50℃，压力为15MPa；分离釜Ⅱ的温度为50℃，压力为7MPa。
(4)将分离釜中的萃取液过滤，减压浓缩至膏状后，冷冻至干，即得镰形木荚苏木树皮提取物。
实施例4
本发明提供一种含苏木提取物的组合物，该组合物按照质量份数计包括：镰形木荚苏木提取物19份、紫苏提取物7份、墨角藻提取物11份。
其中，镰形木荚苏木提取物的制备方法与实施例2中的制备方法相同。
实施例5
本发明提供一种含苏木提取物的组合物，该组合物按照质量份数计包括：镰形木荚苏木提取物16份、紫苏提取物8份、墨角藻提取物12份。
其中，镰形木荚苏木提取物的制备方法与实施例3中的制备方法相同。
实施例6
本发明提供一种含苏木提取物的组合物，该组合物按照质量份数计包括：镰形木荚苏木提取物18份、紫苏提取物9份、墨角藻提取物10份。
其中，镰形木荚苏木提取物的制备方法与实施例2中的制备方法相同。
实施例7
本发明提供一种含苏木提取物的组合物，该组合物按照质量份数计包括：镰形木荚苏木提取物17份、紫苏提取物10份、墨角藻提取物11份。
其中，镰形木荚苏木提取物的制备方法与实施例3中的制备方法相同。
在本发明的技术方案中，实施例1-7中的紫苏提取物主要通过如下方法制备：将紫苏叶清洗干燥后粉碎，按照固液比(g/ml)1:8加入质量分数为70％乙醇中，浸泡6h，加热回流提取2h，冷却，过滤，将滤液浓缩至膏状后再冷冻至干，即得紫苏提取物。
在本发明的技术方案中，实施例1-7中的墨角藻提取物主要通过如下方法制备：将墨角藻干燥后粉碎，按照固液比(g/ml)1:10加入质量分数为70％乙醇中，浸泡5h，加热回流提取5h，冷却，过滤，将滤液浓缩至膏状后再冷冻至干，即得墨角藻提取物。
为了更好地体现本发明技术方案的优异性，本申请还做了如下对比例实验：
对比例1
对比例1主要与实施例1对比，对比例1中仅含有质量份数为39份的镰形木荚苏木提取物。
其中，镰形木荚苏木提取物的制备方法与实施例1相同。
对比例2
对比例2主要与实施例1对比，对比例2中仅含有质量份数为39份的紫苏提取物。
其中，紫苏提取物的制备方法与实施例中的相同。
对比例3
对比例3主要与实施例1对比，对比例3中仅含有质量份数为39份的墨角藻提取物。
其中，墨角藻提取物的制备方法与实施例中的相同。
对比例4
对比例4主要与实施例3对比，对比例4提供一种组合物，该组合物按照质量份数计包括：镰形木荚苏木提取物20份、紫苏提取物5份、墨角藻提取物11份。
其中，紫苏提取物、墨角藻提取物的提取方法与实施例中的相同。镰形木荚苏木提取物的提取方法如下：
(1)取镰形木荚苏木的树皮干燥、粉碎，过100目筛。
(2)将粉碎后的镰形木荚苏木树皮按照料液比(g/ml)1:5加入50％的乙醇溶液，浸泡 4h，加热回流提取4h，冷却，过滤，将滤液浓缩至膏状后再冷冻至干，即得镰形木荚苏木提取物。
实施例1-7、对比例1-4中的组合物制备方法为将组合物中各成分在常温下搅拌混合均匀即得。
为了更好地说明本发明组合物的优点，分别将本发明组合物进行功效性测试如下：
1.人体皮肤安全性测试
将实施例1-7的组合物配置成质量分数为0.5％的水溶液，分别称取实施例配置的水溶液 20μg至斑试器中，同时设置空白对照组，对照即为水。选取健康志愿者30名(男11名，女 19名)，年龄18～30岁，无过敏史。将加有测试样品的斑试器用无刺激胶带贴敷于受试者的前臂曲侧，用手掌轻压使之均匀地贴敷于皮肤上，持续24h。于24h后去除受试物，分别于移除斑贴后0.5h、24h、48h、观察皮肤反应，按照《化妆品安全技术规范》(2015版)中皮肤反应分级标准记录结果。
测试结果显示，实施例1-7均无不良反应，受试者基本为阴性反应，根据《化妆品安全技术规范》(2015版)中规定，测试样品对本批次受试者皮肤未引起不良反应、安全性高。
2.组合物对缓激肽诱导的NHF细胞生成IL-6/8的影响
缓激肽(bradykinin，BK)是一种其能与缓激肽受体B1和B2结合的激肽，皮肤注射缓激肽后通过与神经纤维的缓激肽受体B2结合，使外周小血管扩张，毛细血管通透性增强，同时对痛觉神经末梢具有强烈的刺激作用，从而引起皮肤的红肿、瘙痒和疼痛等炎症反应，因此常作为瘙痒模型的刺激物质。
本实验采用正常人成纤维细胞NHF进行实验检测，采用含青霉素(100IU/mL)和链霉素(100μg/mL)、补充试剂(胰岛素0.1％，rhFGF-B 0.1％，GA-10000.1％，FBS 2％)的成纤维细胞培养基(FBM)，在37℃、5％CO2恒温培养箱中培养。
NHF细胞以1.5×104/孔浓度接种于48孔板，培养24h。用不含补充试剂的DMEM培养基(无血清培养基)制成饥饿状态的细胞。第二天用10nM BK和1μg/ml浓度的实施例和对比例样品处理，并培养24h。用R&D系统的ELISA KIT(DY206，DY208)进行实验后，用 ELISA读数仪在450nm处测定吸光度OD，根据下式计算各实施例、对比例中样品对BK诱导的NHF细胞生成IL-6/8的抑制率。
IL-6/8生成抑制率(％)＝(ODBK﹣OD样品)/(ODBK﹣OD对照)×100％
表1不同样品对缓激肽诱导的NHF细胞生成IL-6/8的影响
Figure DEST_PATH_IMAGE001
Figure DEST_PATH_IMAGE002
实施例及对比例对于缓激肽诱导的NHF细胞生成IL-6/8的影响如表1所示，当实施例和对比例中的组合物作用浓度均为1μg/ml时，实施例1-7和对比例1-4中的组合物均对缓激肽诱导的IL-6/8生成有抑制效果，但实验结果显示，本发明技术方案中的组合物效果明显优于对比例。说明本发明组合物苏木提取物、紫苏提取物、墨角藻提取物通过合理组配，三种协调作用于缓激肽诱导的炎症因子IL-6和IL-8，特别是加入酶解联合超临界萃取的苏木提取物，组合物的抑制率更高。
3.组合物对SP诱导的NHF细胞生成IL-6/8的影响
P物质(substance P，SP)是世界上发现最早的神经肽，是一种高活性的神经肽类物质，广泛地分布于神经系统和其他外周组织器官内，具有多种生理功能。皮肤中的SP主要源自于感觉神经纤维末梢，少数由组织细胞如角质形成细胞(KC)、肥大细胞、单核巨噬细胞等细胞合成。SP能够促进角朊细胞释放IL-1、IL-8、TNF-α，促进单核巨噬细胞产生和释放IL-1、IL-6、 TNF-α和IFN-γ，增强活化的T细胞产生IL-2以及表达IL-2受体，刺激肥大细胞产生TNF-α，中性粒细胞及血管内皮细胞产生II-8，并借用这些细胞因子的作用，影响和调控皮肤免疫和炎症反应。研究表明，SP是一种重要的瘙痒介质，可通过激活NK1受体的直接方式，或通过促进其他瘙痒介质释放的间接方式，参与瘙痒机制，从而造成皮肤的红肿和瘙痒。
本实验采用正常人成纤维细胞NHF进行实验检测，采用含青霉素(100IU/mL)和链霉素 (100μg/mL)、补充试剂(胰岛素0.1％，rhFGF-B 0.1％，GA-10000.1％，FBS 2％)的成纤维细胞培养基(FBM)，在37℃、5％CO2恒温培养箱中培养。
NHF细胞以1.5×104/孔浓度接种于48孔板，培养24h。用不含补充试剂的DMEM培养基(无血清培养基)制成饥饿状态的细胞。第二天用500nM SP和浓度为1μg/ml的实施例、对比例样品处理，并培养5h。用R&D系统的ELISA KIT(DY206，DY208)进行实验后，用ELISA 读数仪在450nm处测定吸光度OD，根据下式计算各实施例、对比例中样品对SP诱导的NHF 细胞生成IL-6/8的抑制率。
IL-6/8生成抑制率(％)＝(ODsp﹣OD样品)/(ODsp﹣OD对照)×100％
表2不同样品对SP诱导的NHF细胞生成IL-6/8的影响
测试样品 IL-6生成抑制率 IL-8生成抑制率
实施例1 16.94％ 30.51％
实施例2 17.25％ 30.32％
实施例3 16.87％ 31.14％
实施例4 17.01％ 30.84％
实施例5 17.98％ 31.49％
实施例6 18.65％ 32.06％
实施例7 18.17％ 32.62％
对比例1 15.61％ 27.23％
对比例2 14.24％ 29.00％
对比例3 13.37％ 28.35％
对比例4 16.01％ 29.68％
实施例及对比例对于SP诱导的NHF细胞生成IL-6/8的影响如表2所示，当实施例和对比例中的组合物作用浓度均为1μg/ml时，实施例1-7和对比例1-4中的组合物对SP诱导的IL-6/8生成均有抑制效果，但实验结果显示，本发明技术方案中的组合物效果明显优于对比例。说明本发明组合物苏木提取物、紫苏提取物、墨角藻提取物通过合理组配，三种协调作用于SP诱导的炎症因子IL-6和IL-8，特别是加入酶解联合超临界萃取的苏木提取物，组合物的抑制率更高。
4.人体抗衰功效测试
取实施例3、4、5、6的组合物用于皮肤外用制剂的制备。将实施例3、4、5、6中的组合物用适量的丁二醇和水稀释成质量分数30％的组合物溶液，将配置的溶液按照质量分数0.5％加入到如下化妆品基质中。
表3含本发明组合物的抗衰晚霜
Figure DEST_PATH_IMAGE003
Figure DEST_PATH_IMAGE004
上述抗衰晚霜的制备方法：
(1)将A、B两相均加热至75℃，然后将B相加入A相中使之乳化，再迅速放在高速乳化机上以6000rpm的速度搅拌10min。
(2)再在普通的乳化机上以200rpm的速度搅拌，待温度降到45℃左右时加入C相继续搅拌，待温度降至35℃时停止搅拌，即得抗衰晚霜。
其中，实施例3、4、5、6的组合物对应的抗衰晚霜分别为抗衰晚霜1、抗衰晚霜2、抗衰晚霜3、抗衰晚霜4。
测试方法：选择眼角有皱纹的中国健康受试者20名(女14名、男6名)，年龄范围在35-45周岁，随机分成4组，每组5人。受试者每晚清洁皮肤后取约0.6g测试样品涂抹脸部，连续使用28天。在脸部使用测试产品前、使用产品28天后分别对眼角皮肤粗糙度及皮肤平滑度分析。
检测仪器VisioScan VC98 USB(Courage&Khazaka)：该仪器通过一个特殊的探头内具有紫外光源的皮肤图像CCD测试系统在皮肤表面进行测试，这样就可以得到皮肤的活性状态图像。将此黑白视频信号输入到测试系统的数字化仪中进行处理，再输入到计算机中，通过专用的活性皮肤表面评价软件SELS进行分析就可以得到评价活性皮肤表面状况的数值参数。 SFr为皮肤粗糙度参数。SEsm为皮肤平滑度参数，SEr、SEsm数值越低，代表皮肤越平滑。
检测部位：眼角外侧
表4皮肤状态变化情况
测试样品 SEr变化率 SEsm变化率
抗衰晚霜1 19.54％ 9.65％
抗衰晚霜2 20.17％ 8.74％
抗衰晚霜3 25.23％ 13.48％
抗衰晚霜4 24.36％ 12.69％
从表4可以看出，连续使用含有本发明组合物的晚霜28天后，受试者的眼角外侧的皮肤状态得到较大的改善，其中SEr值的变化率在20％左右，SEsm值的变化率在10％左右，说明本发明组合物对于皮肤的粗糙度、皮肤的光滑度都有较好的改善效果，能够平滑细腻肌肤。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种含苏木提取物的组合物，其特征在于，按照质量份数计，所述组合物主要包含：苏木提取物15-20份、紫苏提取物5-11份、墨角藻提取物8-14份；
所述苏木提取物为镰形木荚苏木树皮提取物；
所述镰形木荚苏木树皮提取物通过如下方法制备：
(1)取镰形木荚苏木树皮干燥、粉碎，过80-100目筛；
(2)将粉碎后的镰形木荚苏木树皮按照料液比(g/ml)1:3-1:5加入去离子水，用含有果胶酶和纤维素酶的复合酶进行酶解得镰形木荚苏木树皮酶解液后，高温灭酶；
(3)将灭酶后的镰形木荚苏木酶解液加入超临界CO2萃取装置中进行超临界萃取，萃取完成后从分离釜放料；
(4)将分离釜中的萃取液过滤，减压浓缩至膏状后，冷冻至干，即得镰形木荚苏木树皮提取物。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述镰形木荚苏木树皮提取物的提取方法步骤(2)中，所述果胶酶和纤维素酶的质量比为1:2-1:4，且复合酶占镰形木荚苏木树皮的质量分数为5-10％。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述镰形木荚苏木树皮提取物的提取方法步骤(2)中，酶解反应温度为50-60℃，pH为6-7，酶解时间为100-150min。
4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述镰形木荚苏木树皮提取物的提取方法步骤(3)中，超临界萃取的温度为35-50℃，萃取压力为25-35MPa，萃取时间为120-160min。
5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述镰形木荚苏木树皮提取物的提取方法步骤(3)中，包括分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ，其中分离釜Ⅰ的温度为35-50℃，压力为8-15MPa；分离釜Ⅱ的温度为35-50℃，压力为2-7MPa。
6.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物按照质量份数计，镰形木荚苏木树皮提取物16-18份、紫苏提取物8-10份、墨角藻提取物10-12份。
7.一种皮肤外用剂，其特征在于，包含权利要求1-6任一项 所述的含苏木提取物的组合物。
8.根据权利要求7所述的皮肤外用剂，其特征在于，所述含苏木提取物的组合物在皮肤外用剂中的重量百分比为0.01-5％(w/w)。
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