CN111821330A - 三七水提取物在制备降血脂产品中的用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了三七水提取物在制备降血脂产品中的用途，所述产品可以为药物、保健品或食品。该提取物来源于中药三七。在诱导肥胖的动物试验中，与其它三七提取物和市售西药减肥药xenical相比，其具有更显著降低血清中甘油三酯及总胆固醇含量的效果，其可用于预防或治疗高脂血症。

Description

三七水提取物在制备降血脂产品中的用途
技术领域
本发明属于医药领域。具体而言，本发明涉及三七水提取物在制备降血脂产品中的用途。
背景技术
肥胖是指体内脂肪堆积过多或分布异常，导致体重过度增加的一种病理状态，其中无明显内分泌、代谢病等病因者，即为单纯性肥胖症。世界卫生组织将肥胖列为严重危害人类健康的五大疾病之一。随着肥胖的发展，临床上可出现乏力、心悸、动则气喘、体力下降等症状，久之易诱发高血压、高脂血症、心脑血管及感染性等疾病，不仅严重影响人类生活质量，而且加速了机体衰老，提高了猝死的发生率。
目前对于肥胖症的治疗手段还是以调整饮食结构和运动为主，现有的治疗肥胖症的药，多数为西药，一般很难达到根除疾病的目的，而且极易面临复发的风险。
血脂是血液中中性脂肪(甘油三酯)和类脂(磷脂、糖脂、固醇、类固醇)的总称，广泛存在于人体中。它们是生命细胞的基础代谢的必需物质。一般说来，血脂中的主要成分是甘油三酯和胆固醇，其中甘油三酯参与人体内能量代谢，而胆固醇则主要用于合成细胞浆膜、类固醇激素和胆汁酸。
由于血浆胆固醇和甘油三酯水平的升高与动脉粥样硬化的发生有关，因此这两项成为血脂测定的重要指标。
高脂血症(hyperlipidemia)是指血浆中总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白中其中一种或多种水平高于正常。高脂血症是一类较常见的疾病，除少数是由于全身性疾病所致外(继发性高脂血症)，绝大多数是因遗传基因缺陷(或与环境因素相互作用)引起的(原发性高脂血症)。
高脂血症的临床表现主要包括两大方面：
(1)脂质在真皮内沉积所引起的黄色瘤；
(2)脂质在血管内皮沉积所引起的动脉粥样硬化，产生冠心病和周围血管病等。由于高脂血症时黄色瘤的发生率并不十分高，动脉粥样硬化的发生和发展需要相当长的时间，所以多数高脂血症患者并无任何症状和异常体征发现。而患者的高脂血症常常是在进行血液生化检验(测定血胆固醇和甘油三酯)时被发现的。
高脂血症可直接引起一些严重危害人体健康的疾病，如动脉粥样硬化、冠心病、胰腺炎等。目前尚缺乏有效预防和/或治疗高脂血症及其相关病症的药物。
三七，又名田七、金不换，是五加科植物三七(Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen)的干燥根及茎，甘、苦、微温，归肝、胃经，具有散瘀止血，消肿定痛的功效。三七是传统中医用于治疗体内外各种出血之证及跌打损伤、瘀滞肿痛的珍贵药材。
三七的主要活性成分有三七皂苷、黄酮苷及三七氨酸，其中三七总皂苷(PNS)主要包括三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1等，PNS在块根中的含量可达到12％。近年来，三七被广泛地用于治疗冠心病、心绞痛、心脑血管病、脑出血后遗症等相关疾病，其在抗肿瘤和治疗慢性代谢性疾病方面的应用也越来越备受科研工作者们的关注。
发明内容
本发明的目的在于针对目前市场上降血脂产品的现状，提供了一种能够更高效降血脂的新产品，从而为高脂血症及其相关病症的预防和/或治疗开辟一条新的途径。
一方面，本发明提供了三七水提取物在制备降血脂产品中的用途。
另一方面，本发明提供了三七水提取物在制备降低血脂和体脂的产品中的用途。
优选地，所述血脂是血液中的甘油三酯和/或胆固醇。
再一方面，本发明还提供了三七水提取物在制备预防和/或治疗高脂血症及其相关病症的药物中的用途。
在上述用途中，所述三七水提取物的制备方法包括以下步骤：
将三七粉浸泡于水中过夜后加热至90-100℃，加热0.5-2小时浸提，将得到的水浸提液浓缩，得到三七水提物。
优选地，所述三七水提取物的制备方法包括以下步骤：
将三七药材粉碎后过120目筛，浸泡于水中过夜后加热至90-100℃，加热1-2小时浸提，将得到的水浸提液过滤并浓缩，随后冷冻干燥，得到三七水提物。
优选地，所述三七水提取物包含按三七水提取物的总重量计30％重量～70％重量，优选35％重量～60％重量，更优选30％重量～40％重量的三七总皂苷；其中，所述三七总皂苷包含三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1。更优选地，所述三七水提取物还包含黄酮苷和/或三七氨酸。
在上述用途中，所述产品为药物、保健品或食品。
优选地，所述产品包含按产品的总重量计0.3％重量～0.6％重量的所述三七水提取物；更优选地，所述产品包含按产品的总重量计0.05％重量～1％重量的三七总皂苷。
本发明的实验表明，三七水提取物可有效降低血清中甘油三酯及总胆固醇含量，而且其效果显著优于三七醇提取物、市售三七总皂苷和三七总皂苷发酵物以及阳性对照药物。另一方面，本发明的实验还表明三七水提取物具有降低高脂肪所诱导的小鼠的体重和脂肪百分比，以及抑制高脂肪所诱导的小鼠睾丸处脂肪堆积的作用。因此，三七水提取物具有被开发为降血脂产品、或降低血脂和体脂的产品的潜力。
附图说明
图1显示各种三七提取物中皂苷类物质的组成比例的HPLC分析结果，其中包括三种皂苷标准品的HPLC色谱图。
图2显示灌胃各种三七提取物的高脂肪饮食小鼠的体重有明显下降的趋势。显示的数据是由每组10只C57BL/6小鼠获得数值的平均值±标准偏差。高脂肪饮食(HFD)模型组和对照组(CTL)有显著性差异(#，p<0.05，Prism 6软件)；给药组(HFD+三七水提取物(WPN)、HFD+三七醇提取物(E-WPN)、HFD+三七总皂苷发酵物(F-PNS)、HFD+三七总皂苷(PNS)和HFD+Xenical(阳性对照药物))和HFD模型组有显著性差异(*，p<0.05，Prism 6软件)。
图3显示灌胃各种三七提取物的高脂肪饮食小鼠的体型有明显减小的趋势。
图4A-C分别显示各种三七提取物降低了高脂肪诱导肥胖小鼠的脂肪重量以及体脂的百分比，但未影响其瘦肉含量；数据为由每组10只C57BL/6小鼠获得数值的平均值±标准偏差(#，p<0.05表示HFD模型组和对照组(CTL)有显著性差异；*，p<0.05表示给药组和HFD模型组有显著性差异；均使用Prism 6软件)。
图5显示各种三七提取物明显降低了高脂肪饮食小鼠睾丸中的脂肪含量。
图6显示各种三七提取物显著降低了高脂肪饮食小鼠血清中的甘油三脂(triglyceride)和总胆固醇(cholesterol)水平。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明，应当理解，实施例仅用于进一步说明和阐释本发明，并非用于限制本发明。
除非另外定义，本说明书中有关技术和科学术语与本领域内的技术人员所通常理解的意思相同。虽然在实验或实际应用中可以应用与此文所述相似或相同的方法和材料，本文还是在下文中对材料和方法做了描述。在相冲突的情况下，以本说明书包括的定义为准。另外，材料、方法和例子仅供说明，而不具有限制性。
实施例1三七提取物的制备和含量分析
三七水提物的制备方法为先将三七药材粉碎后过120目筛，然后浸泡于水中过夜后加热至100℃，连续加热1小时浸提，将所得到的水浸提液过滤并浓缩，随后置于冷冻干燥器内进行干燥，得三七水提取物(WPN)。
三七水提醇沉物的制备方法为向上述浓缩后的水提物中加入乙醇，至乙醇比例为60％-80％，静置过夜，将所得到的上清液过滤并浓缩，随后置于冷冻干燥器内进行干燥，得到三七醇提取物(E-WPN)。
三七总皂苷发酵物的制备方法为向真菌液体培养基中，分别接种羊肚菌真菌菌株(由四川北川神农有限责任公司提供，产地为四川北川或者购于四川绵阳食用菌研究所)和三七粉水混合物，26℃条件下共培养。以三七药材为底物，通过羊肚菌和三七之间的相互作用，实现真菌-药材双向发酵的目的。发酵后产物加热至60℃，持续保温1小时，最后将所得到的发酵产物进行过滤和浓缩，获得三七总皂苷发酵物(F-PNS)。
1.各种三七提取物中三七总皂苷的含量分析：
精密称取人参皂苷Rg1对照品适量，加甲醇制成每1ml含有1mg的溶液；精密量取对照品溶液50μl、100μl、150μl、200μl、250μl、300μl以及样品WPN、E-WPN、F-PNS和三七粉末，分别置于10ml的具塞离心试管中，置水浴上挥干溶剂，各加5％香草醛-冰醋酸(5克香草醛，然后用冰醋酸定容到100ml)0.2ml，高氯酸0.8ml，混匀，盖塞，置60℃水浴中加热15min中后，放在冰水浴中冷却至室温。然后加冰醋酸5ml，摇匀，以试剂为空白，于545nm处测定其吸光度值。以吸光度值为纵坐标，总皂苷质量为横坐标，绘制标准曲线。测定三七提取物含总皂苷的含量分别为WPN，35.84％；E-WPN，60％；F-PNS，44.15％；三七粉末，25.51％。
2.三七提取物中三七皂苷R1以及人参皂苷Rg1、Rb1的含量分析：
a.HPLC标准品溶液配制：精密称取人参皂苷Rg1、Rb1以及三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每1ml含有0.4mg人参皂苷Rg1、0.4mg人参皂苷Rb1以及0.1mg三七皂苷R1的溶液。
b.HPLC使用的三七提取物配制：用甲醇配制50mg/ml的WPN和F-PNS，过0.22μm滤膜后上机测试。
c.HPLC分析：HPLC分析条件如下：
使用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，检测波长为203nm，进样量为5μl，最后上样检测器进行检测和分析。三七提取物的主要皂苷类成分组成比例请见表1。
表1 WPN、F-PNS的三种皂苷含量(mg/g)
Figure BDA0002033335880000051
实施例2动物实验
高脂肪饮食诱导小鼠形成体脂过量堆积的疾病模型：
待小鼠适应环境一周后，开始进行本试验的操作。随机将动物分成七组，对照组(CTL)、诱导组(HFD模型)、试验组I(WPN)、试验组II(E-WPN)，试验组III(PNS，购自成都曼思特生物科技有限公司)，试验组IV(F-PNS)，阳性对照组(Xenical，市售西药减肥药)每组10只。连续灌胃小鼠6周。
其详细分组如下：
CTL：对照组，灌胃标准配方饲料；
HFD模型：诱导组，灌胃高油脂饲料(HFD饲料(high fat diet)，60kcal％)；
WPN：HFD饲料+WPN 1.6g/kg
E-WPN：HFD饲料+E-WPN 1.2g/kg
PNS：HFD饲料+PNS 0.4g/kg
F-PNS：HFD饲料+F-PNS 0.54g/kg
Xenical：HFD-饲料+Xenical 20mg/kg。
实验结束时，测定各组小鼠体重，实验结果见图2。对小鼠进行麻醉，记录其体型变化，实验结果见图3。结果表明，各种三七提取物均能够显著降低肥胖小鼠的体重，但各种提取物效果没有显著性差异。各种三七提取物均能够改变肥胖小鼠体型，使其体型更接近于正常小鼠，但各种三七提取物的效果没有显著性差异。
实施例3体脂含量变化的测定
采用The Minispec LF90Body Composition Analyzer(Bruker)仪器分析实施例2的小鼠体脂变化，包括小鼠瘦肉含量(lean content)、体脂含量(fat content)以及体脂百分比，实验结果见图4。待实验结束后，将小鼠处死，取出睾丸周围的脂肪组织后进行记录，实验结果见图5。结果表明，各种三七提取物对小鼠瘦肉含量没有显著的影响，但能够明显降低体脂的水平；从体脂占总体重百分比来看，各种三七提取物均能够显著降低肥胖小鼠的体脂百分比，并且脂肪组织大小记录的结果趋势与体脂测定结果相近。
实施例4动物血脂肪测定分析
将实施例2的小鼠抽取血液样品，以先将动物空腹12-14小时为原则，采样后进行下列项目的分析：
实验结果见图6。三七各种提取物均能够显著降低肥胖小鼠血液的甘油三酯含量，其中以WPN效果最为明显，而对于减重、降低体脂效果最明显的PNS和F-PNS则效果不如WPN，这提示各种三七提取物中减体重、降血脂以及调节肝脏脂肪酸代谢的成分不尽相同。在降低血液总胆固醇方面，仅WPN具有明显作用，而且WPN的降甘油三酯作用最强。
由此可见，三七提取物具有两重作用：其一，减重、燃烧体脂，这表现在体重减轻、体脂比例下降，这部分主要有效成分为PNS、F-PNS，即三七皂苷类成分；其二，通过调节肝脏的脂肪酸代谢，降低甘油三酯和胆固醇的血液浓度，这部分主要有效成分为WPN，即水提取物，提示除皂苷类成分之外，可能还有其他成分对机体的脂肪酸代谢起到关键作用。
尽管本发明已进行了一定程度的描述，明显地，在不脱离本发明的精神和范围的条件下，可进行各个条件的适当变化。可以理解，本发明不限于所述实施方案，而归于权利要求的范围，其包括所述每个因素的等同替换。

Claims (9)

1.三七水提取物在制备降血脂的产品中的用途。
2.三七水提取物在制备降低血脂和体脂的产品中的用途。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其中所述血脂是血液中的甘油三酯和/或总胆固醇。
4.三七水提取物在制备预防和/或治疗高脂血症及其相关病症的药物中的用途。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的用途，其中所述三七水提取物的制备方法包括以下步骤：
将三七粉浸泡于水中过夜后加热至90-100℃，加热0.5-2小时浸提，将得到的水浸提液浓缩，得到三七水提物；
优选地，所述三七水提取物的制备方法包括以下步骤：
将三七药材粉碎后过120目筛，浸泡于水中过夜后加热至90-100℃，加热1-2小时浸提，将得到的水浸提液过滤并浓缩，随后冷冻干燥，得到三七水提物。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的用途，其中所述三七水提取物包含按三七水提取物的总重量计30％重量～70％重量，优选35％重量～60％重量，更优选30％重量～40％重量的三七总皂苷；
优选地，所述三七总皂苷包含三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1。
更优选地，所述三七水提取物还包含黄酮苷和/或三七氨酸。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的用途，其中所述产品为药物、保健品或食品。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的用途，其中所述产品包含按产品的总重量计0.3％重量～0.6％重量的所述三七水提取物。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的用途，其中所述产品包含按产品的总重量计0.05％重量～1％重量的三七总皂苷。
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