CN111811901B - 一种细胞块采集装置和细胞块采集方法 - Google Patents
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Abstract
本申请公开了一种细胞块采集装置和细胞块采集方法，属于体液中细胞采集的技术领域，解决了体液中的癌变细胞含量较少时采用细胞切片进行癌症检测时检出率低的技术问题。所述细胞采集装置包括承托板，承托板上开设有多个凹槽，所述凹槽内分别卡接有辅料管、固定托板、专用离心管、组织包埋盒以及包埋纸。细胞采集装置的使用方法为：原材料准备；脱落细胞液离心过滤；细胞沉淀硬化；脱落细胞块固定；脱落细胞块的包埋和石蜡化。本申请的细胞采集装置可用于胸腹水、尿液、痰液等样本中的脱落细胞的细胞块采集和制备，其具有对少量脱落细胞高效富集和细胞块无支撑制备的优点，便于后期的细胞切片，提高后期病理检测的检出率。
Description
技术领域
本申请涉及体液中细胞采集的技术领域，更具体地说，它涉及一种细胞块采集装置和细胞块采集方法。
背景技术
在医疗领域，对于肺癌以及肝癌的提前诊断中，目前主要是采用对患者进行胸部X光和胸部CT扫描进行初步确诊，随后进行组织切片的获取、制备以及检测。但是组织切片的获取往往是一种有损伤的切片样本获取方式，需要在人体的相应部位制造创面后才可以实现对相关组织细胞的获取。因此，随后发展出的无损细胞切片检测技术迅速得到了大家的广泛使用。无损细胞切片即为：提取目标诊断部位的脱落细胞，并对提取得到的脱落细胞进一步处理之后进行切片和检测，从而确诊相应的部位是否有病变。
在自然管腔器官内表面的粘膜正常情况下，人体器官粘膜上皮细胞，会有脱落更新，即为脱落细胞。有癌变的粘膜上皮细胞，癌瘤组织代谢高，癌细胞的表面缺乏钙和透明质酸酶，彼此粘着力比正常细胞低，易于脱落，即出现大量的癌变后的脱落细胞。脱落细胞检查是采集人体各部位，特别是管腔器官表面的脱落细胞，经染色后用显微镜观察这些细胞的形态；由于脱落细胞有其特有的细胞形态学规律，与病理组织学改变的关系十分密切，因此可采用将脱落细胞的显微镜检形态和病理组织学检测两者相结合实现对人体不同部位的病理检查。
目前对脱落细胞的获得主要有以下几种方式：(1)自然脱落细胞，如鼻咽部、口腔、食管和胃粘膜的标本，除了自然脱落的细胞外，有部分是人工乔取或刷洗所得；(2)体腔抽出液：存在于胸膜腔、腹膜腔、心包腔和脑脊髓膜腔等部位的积液内的脱落细胞，通过在体腔内抽取获得，自这些部位获取脱落细胞时，往往伴随较多的体液；(3)针吸细胞：利用细针穿刺病变或肿物，抽吸出少许病变组织细胞作涂片检验，做细针穿刺细胞学检查，这种方式吸出的细胞完全是人为的脱落细胞，常用于乳腺肿块和皮下组织肿物的穿刺，肿大淋巴结、甲状腺和涎腺和穿刺，在超声波像定位下对肝、胰等器官肿物的穿刺等。
现有的无损方式获得脱落细胞的方法中，是将含有脱落细胞的溶液通过过滤进一步富集，由于过滤后的溶液中仍有较多的杂质，溶液以一种悬浊液的形式存在，脱落细胞并不能很好地被富集，因此向离心后呈悬浊液的脱落细胞液中加入蛋清和盐溶液，或者加入琼脂，进一步将脱落细胞固定，这属于一种有支撑方式的细胞采集方法。该方法虽然能够将脱落细胞固定在一定的范围内，但是其细胞的富集效果并不好，尤其是最初始采集到的脱落细胞液中脱落细胞含量不多，有病变的脱落细胞会更少，在进行细胞切片时，得到的检测样本中可能恰好不包含有病变的脱落细胞，这样导致的结果是：首先不利于后期的镜检以及病理学检测，导致检测结果不准确；其次，要想使检测结果更加准确，则需要针对同一样本做更多的切片样品的镜检和检测，导致检测过程繁琐、检测成本较高；除此以外，该方法难以实现对含有少量脱落细胞的体液(尿液中脱落细胞、痰液中脱落细胞)的目标细胞的获取、富集，进而影响后期的脱落细胞的检测的准确性。
而对于现在的各类的肿瘤检测，当肿瘤处于初期肿瘤，且还未癌变的时候，以脱落细胞的形式存在于体液中的肿瘤细胞含量较少，因此采用常规的脱落细胞的采集方式得到的样品中，采集到的目标待检细胞的量很少，导致在最后的检测结果中显示：细胞样本中不含有病变的细胞，很容易造成错检或漏检的情况。
因此，探索出一种能高效简便地富集、制备脱落细胞块的方法是十分有必要的，对于疾病的预防和肿瘤细胞的早期筛查有主要的意义。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本申请的第一个目的在于提供一种细胞块采集装置，其实现了对含有少量脱落细胞的体液样本的高效细胞块采集，便于制备用于细胞切片检测的石蜡细胞块，且携带方便。
本申请的第二个目的在于提供一种细胞块采集方法，其实现了对含有少量脱落细胞的体液样本的高效细胞块采集，且其制备得到的石蜡细胞块在用于细胞切片后的镜检和病理学检测时，检测结果更加准确。
为实现上述第一个目的，本申请提供了如下技术方案：一种细胞块采集装置，包括承托板、辅料管和专用离心管，所述承托板上开设有若干凹槽，所述凹槽包括辅料管凹槽和离心管凹槽，所述辅料管凹槽开设于承托板的一侧，所述离心管凹槽开设于承托板的另一侧；所述辅料管包括密封的内置了细胞固定胶的细胞固定胶管，所述细胞固定胶管卡接在辅料管凹槽内，所述专用离心管卡接在离心管凹槽内；所述专用离心管为两端开口且一端为倒置的圆台状的管体，所述管体的圆台状的一端连通有直管，所述直管的内径小于管体的圆台状的一端的口径，所述直管远离管体的一端开设有出口且出口处可拆卸连接有封口件。
通过采用上述技术方案，在专用离心管上设置和专用离心管连通的直管，将预处理之后的脱落细胞液置于专用离心管内，经过滤后，脱落细胞被富集在直管内，这样设置的优势在于：首先，以一种无支撑的方式将脱落细胞采集在相对集中的区域，采集效率高的同时便于后期对于少量脱落细胞从专用离心管中的全部取出，操作简便高效。其次，若是脱落细胞中有正常的脱落细胞和病变的脱落细胞，不同种类的脱落细胞的内含物不同，其细胞的相对质量不同。由于采用的是离心的方式将脱落细胞采集在直管内，当脱落细胞的相对质量不同时，相对质量不同的脱落细胞会在直管内按照相对质量的大小规律地堆积在直管内：相对质量大的脱落细胞被采集在直管远离管体的一端，相对质量小的脱落细胞被采集在直管靠近管体的一端。这样的结果便于后期在做细胞切片的时候取到所有类型的脱落细胞，进而保证镜检结果更加准确。在离心时，直管的较小的内经和离心管相对较大的容积，使得当脱落细胞液中脱落细胞的含量较少的时候，仅仅通过一次离心操作就可以实现相对集中地将脱落细胞富集在直管内；因此对离心管做这样的设置能够高效地实现对脱落细胞液高效且有效地富集。
优选地，所述封口件包括两端开口的外管，所述外管和直管套接，所述外管远离管体的一端开设有插接孔，插接孔处插接有插接件，所述插接件包括同轴设置的顶柱和卡接块，所述顶柱的一端伸出所述插接孔，所述顶柱的另一端和卡接块固接，所述卡接块位于外管内，所述卡接块远离顶柱的一端设置有密封片。
通过采用上述技术方案，当离心的脱落细胞液中的脱落细胞含量很少的时候，在打开直管的封口件之后，细胞容易从直管内直接掉落，造成细胞损失，因此在封口件的外管一端设置顶柱：当将封口件从直管上取下的时候，少量的细胞块会落在外管内，随后用顶柱将细胞块转移出专用离心管时，保证没有细胞块损失。而由于专用离心管是置于较高转速下离心，因此以密封垫将顶柱和外管的卡接处密封，防止专用离心管内的细胞从此处漏出。
优选地，所述采集装置还包括固定托板，所述凹槽还包括托板凹槽，所述托板凹槽开设在辅料管凹槽和离心管凹槽之间，所述托板凹槽和离心管凹槽的长度方向相同，所述固定托板卡接在所述托板凹槽内。
通过采用上述技术方案，将封口件从直管上拆卸下来之后，将脱落细胞转移至固定托板上，并用细胞固定胶将细胞固定在固定托板上，便于操作。
优选地，所述采集装置还包括限位件，所述凹槽还包括限位件凹槽，所述限位件凹槽自托板凹槽的槽底开设，所述限位件卡接在所述限位件凹槽内。
通过采用上述技术方案，将脱落细胞转移至固定托板上的限位件内，能够快速稳固地将细胞块固定在限位件内，便于后期将细胞块样品转移至组织包埋盒内进行细胞块的洗脱和蜡化，实现最终制备得到细胞蜡块，即石蜡化的细胞块，进而便于后期的细胞切片制备和细胞切片的病理学检测。
优选地，所述采集装置还包括过滤网，所述过滤网的孔径为100-300目；进一步优选地，所述滤网的孔径为100-200目。
通过采用上述技术方案，将脱落细胞液中大块或絮状的悬浮物或者杂质截留在过滤网上，脱落细胞液通过过滤网进入专用离心管，这样的操作保证了所需要的脱落细胞能够进入专用离心管，而将不需要的杂质物质截留在过滤网上。
为实现上述第二个目的，本申请提供了如下技术方案：一种细胞块采集方法，包括以下步骤：
S1、将得到的体液预处理后得到脱落细胞液，备用；配制细胞硬化液备用；
S2、自承托板内取出专用离心管，将处理后的脱落细胞液置于专用离心管内，在2000-3000rpm的转速下离心5-15min后倒掉上清液，脱落细胞被采集于直管内；S3、于专用离心管中加入5-15mL的备用的细胞硬化液，在2000-3000rpm的转速下离心3-8min后，静置10-14h，随后倒掉上清液，得到硬化后的细胞块；
S4、自承托板内取出细胞固定胶管，随后取下所述直管处的封口件，将硬化后的细胞块从直管内取出并置于一容器内；随后打开所述细胞固定胶管，取出所述细胞固定胶管内的细胞固定胶并置于所述容器内，且使得硬化后的细胞块包覆在细胞固定胶内，即采集得到细胞块。
通过采用上述技术方案，首先将脱落细胞液处理成含有脱落细胞的相对清澈的溶液，通过离心使得溶液中脱落细胞被高效地富集，有利于后期的细胞洗脱以及细胞切片的制备。随后将离心管内的细胞硬化，是为了能进一步使得得到的细胞块硬度变高，有利于细胞块的取出，在上述的硬化条件下具有较好的硬化效果。整个过程对于脱落细胞的采集高效、完全，利于后期的细胞切片和镜检、药理检测分析，使得对于病变样品的检出率更高、检出精确度更高。
优选地，所述凹槽还包括托板凹槽和限位件凹槽，所述托板凹槽开设在辅料管凹槽和离心管凹槽之间，所述托板凹槽和离心管凹槽的长度方向相同，所述限位件凹槽自托板凹槽的槽底开设；所述采集装置还包括固定托板和限位件，所述固定托板卡接在所述托板凹槽内，所述限位件卡接在所述限位件凹槽内；对硬化后的细胞块的固定操作为：依次自承托板内取出固定托板、限位件和细胞固定胶管，将限位件置于固定托板上，将硬化后的脱落细胞置于固定托板上的限位件内，随后打开所述细胞固定胶管，取出所述细胞固定胶管内的细胞固定胶并置于限位件内，并使得硬化后的细胞块包覆在细胞固定胶内即可。
优选地，所述细胞硬化液选自75％的乙醇液或者福尔马林液中的一种；所述细胞固定胶为卡拉胶或者明胶。
通过采用上述技术方案，通过适用于脱落细胞固定的细胞固定胶配方完成对脱落细胞的有效固定。
优选地，所述体液的包括痰液、尿液、胸腹水、穿刺液等从人体获得的液体中的一种。
通过采用上述技术方案，对不同来源的脱落细胞均能够利用本申请的细胞采集装置进行细胞采集和石蜡细胞块的制备，使得本申请的装置和方法的应用范围广泛。
进一步地，所述体液预处理的步骤包括：
准备过滤网备用，所述过滤网的孔径为100-300目；Ⅰ、将经过滤网过滤之后的脱落细胞液置于一个洁净的离心管中，在2000-3000rpm的转速下离心5-15min；Ⅱ、观察离心管底部是否有沿离心管底部倾斜侧壁内分布的脱落细胞沉淀，若是有肉眼可见的脱落细胞沉淀时，振荡离心管使得在离心管内的上清液和脱落细胞沉淀再次混合，随后转移至专用离心管内进行离心操作；若是无肉眼可见的脱落细胞沉淀，重复步骤Ⅰ-Ⅱ，直至观察到有肉眼可见的脱落细胞沉淀，振荡离心管使得离心管内的上清液和脱落细胞沉淀混合，随后转移至专用离心管内进行离心操作。
通过采用上述技术方案，由于专用离心管的成本较高且是一次性的，因此在使用专用离心管进行脱落细胞液的离心之前，先使用普通离心管离心，确认有脱落细胞的时候再利用专用离心管进行离心操作，节约成本。
综上所述，本申请具有以下有益效果：
第一、由于本申请的细胞采集装置采用带有直管的专用离心管、以重力离心的方式对脱落细胞进行采集，结合固定托板和限位件实现对脱落细胞的固定，使得本申请的细胞采集装置具有高效富集、采集脱落细胞的优势，利于脱落细胞的后期检测，对于癌症等疾病的早期筛查具有重要的意义。
第二、本申请中的体液中脱落细胞的采集方法，通过对脱落细胞的高效采集，结合后期的细胞硬化、细胞固定以及细胞包埋，使得各个步骤中细胞的转移方便高效，有利于后期的切片、镜检和药理分析，采用本申请的采集方法，对于病变样品的检出率更高，检测结果更加准确，对癌症等疾病的早期筛查和确诊具有重要的意义。
附图说明
图1是本申请细胞块采集装置的整体结构示意图。
图2是体现图1中承托板整体结构的示意图。
图3是图1中专用离心管的结构示意图。
图4是体现直管和封口件处结构的剖视图。
图中，1、承托板；11、辅料管凹槽；12、离心管凹槽；13、托板凹槽；14、限位件凹槽；15、包埋盒凹槽；21、细胞固定胶管；3、专用离心管；31、管体；32、直管；33、封口件；331、外管；332、顶柱；333、卡接块；334、密封片；4、固定托板；5、限位件；6、组织包埋盒。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本申请作进一步详细说明。
原料的制备例
制备例明胶制备：制备明胶的水溶液，将琼脂、组织固定液和水按照质量比为1：1：8的比例添加，随后搅拌均匀即可。其中，组织固定液为医用甲醛或者医用酒精；医用甲醛是甲醛质量分数为35～40％的甲醛水溶液，医用酒精为体积分数为75％的乙醇水溶液。本制备例选择的组织固定液为甲醛的质量分数为38％的甲醛水溶液。
实施例
痰液的溶解液为乙酰半胱氨酸溶液，其规格为每支3ml，每支含有乙酰半胱氨酸0.3g，共5支，商品编号为C14200772141，批准文号为H20150548。
实施例1
一种细胞块采集装置，如图1和图2所示，包括承托板1和若干辅助件，承托板1是塑料材质且具有一定的形变能力，承托板1上开设有形状不同的凹槽，每个凹槽的开设形状和相应的辅助件外形适配，使得每个辅助件能牢固地卡接在对应的凹槽内。辅助件包括辅料管、固定托板4、用于在离心时盛装脱落细胞液的专用离心管3、限位件5和组织包埋盒6。辅料管包括密封的内置了细胞固定胶的细胞固定胶管21。
如图2所示，凹槽包括辅料管凹槽11、离心管凹槽12、托板凹槽13、限位件凹槽14和包埋盒凹槽15。具体地，如图1和2所示，离心管凹槽12开设在承托板1的一侧，离心管凹槽12与专用离心管3(参考图1)的外形相适配，专用离心管3卡接在离心管凹槽12内。辅料管凹槽11开设在承托板1的另一侧，且辅料管凹槽11的长度方向和离心管凹槽12的长度方向相同，辅料管凹槽11与细胞固定胶管21的外形相适配，细胞固定胶管21(参考图1)卡接在辅料管凹槽11内，进一步地，在承托板1上，辅料管凹槽11开设有两个，与辅料管凹槽11的数量对应的，细胞固定胶管21设置有两个，且两个细胞固定胶管21分别卡接在两个辅料管凹槽11内。如图1和图2所示，在承托板1上，托板凹槽13、限位件凹槽14和包埋盒凹槽15均开设在辅料管凹槽11和离心管凹槽12之间。具体地，包埋盒凹槽15和托板凹槽13沿着专用离心管3的长度方向依次设置，包埋盒凹槽15和组织包埋盒6的外形相适配，使得组织包埋盒6卡接在包埋盒凹槽15内。首先托板凹槽13自承托板1上开设，随后限位件凹槽14自托板凹槽13的槽底开设；托板凹槽13与固定托板4的外形相适配，固定托板4卡接在托板凹槽13内；限位件凹槽14与限位件5的外形相适配，限位件5卡接在限位件凹槽14内。进一步地，固定托板4为长方形板，限位件5为周面封闭且两端开口的限位环；与固定托板4的形状相适配的，托板凹槽13为长方体形的凹槽；与限位环的形状相适配的，限位件凹槽14为圆柱体形的凹槽。
在使用的过程中，首先将首先将专用离心管3自承托板1内取出，将从人体获取的脱落细胞液置于专用离心管3内，离心后弃去上清液；同时将固定托板4和限位环自承托板1内取出，将限位环放在固定托板4上；然后将专用离心管3内的处理后的细胞块置于固定托板4上的限位环内；随后将细胞固定胶管21自承托板1内取出，将细胞固定胶管21内的细胞固定胶置于限位环的内部空间后，使得细胞块被包覆且固定于限位环内；最后将组织包埋盒6自承托板1内取出，将限位环(带有细胞固定胶和所有细胞块)转移至组织包埋盒6内，进行后期的细胞洗脱和石蜡化后，制备得到石蜡细胞块后进行细胞切片和病理学检测。
具体地，如图3和图4所示，专用离心管3包括两端开口且一端为倒置的圆台状的管体31，管体31的另一端螺纹连接有管盖，管体31的为倒圆台状的一端连通有内径小于管体31内径的直管32，直管32的内径不大于4mm。进一步地，在能实现体液离心并获取细胞块的目的的情况下，根据实际情况，选择的专用离心管3的容积为15-50mL，直管32的内径为1-4mm。鉴于直管制备条件的限制，直管32选自内径为1、1.5、2、3、4mm其中的一种。
直管32远离专用离心管3的管体31的一端可拆卸连接有封口件33。封口件33包括两端开口的外管331，外管331的一端和直管32可拆卸套接，具体地，外管331与直管32过盈连接或者螺纹连接，图中显示的是外管331和直管32螺纹连接。外管331的远离管体31的一端面开设有插接孔，外管331开设插接孔处插接有截面为T型的插接件，插接件包括顶柱332和圆盘状的卡接块333，顶柱332和卡接块333同轴设置，卡接块333连接于顶柱332的一端且与顶柱332一体成型。顶柱332插入插接孔后，顶柱332的远离卡接块333的一端伸出外管331，且卡接块333位于外管331内。卡接块333的直径和外管331的内径相同。
在将脱落细胞液置于专用离心管3内的时候，离心过程中，在离心力的作用下，脱落细胞液内的脱落细胞被逐渐富集在专用离心管3的直管32内，且由于初始获取的脱落细胞的相对质量不同，根据离心的原理，不同相对质量的脱落细胞会根据其自身质量的大小有序堆叠在直管32内。离心结束后，在专用离心管3内将脱落细胞硬化处理后，得到细胞块，取下外管331的过程中，细胞块存在于直管32内或落于外管331内。当细胞块落于外管331内时，将顶柱332推向逐渐靠近外管331开口的方向，以便将细胞块取出。
进一步地，卡接块333靠近直管32的一侧设置有密封片334，进一步将卡接块333和外管331连接处密封。在离心时，在2000-3000rpm的转速下，离心机产生的离心力较大，若是没有密封片334的设置，在较大的离心力的作用下，专用离心管3内的液体容易自卡接处漏出，而密封片334的使用使得此处的液体的压力将密封片334压在卡接块333上，密封效果更好。
进一步地，固定托板4为镜检实验用的玻璃板。
为了能够在后期将限位环放置在组织包埋盒6内，使得二者适配，限位环的环高为2.5-3.5mm，具体根据组织包埋盒6和限位环的实际情况选择即可。
采集装置还包括过滤脱落细胞液的过滤网，进一步地，过滤网孔径为100-300目。
当采用本申请的离心管进行脱落细胞液的离心时，脱落细胞被集中采集于直管32处，采集效率高；随后将封口件33从直管32上拆卸下来之后，直管32的高效富集再和限位环以及固定托板4的配合使用，便于后期将脱落细胞样品转移至组织包埋盒6内，以便进行细胞块的洗脱和石蜡化，实现最终制备得到石蜡化的细胞块。
一种细胞块采集方法，本实施例初始得到的胸腹水样本较为清澈，无明显块状聚集物，其细胞块的采集步骤为：
S1将得到的体液预处理后得到杂质含量少的脱落细胞液，备用；准备细胞硬化液备用，细胞硬化液可选择为医用级要求的甲醛质量分数为35～40％的福尔马林液或体积分数为75％的乙醇液，本实施例选择的为甲醛的质量分数为38％的甲醛水溶液；细胞固定胶可选择为卡拉胶或者明胶，卡拉胶为普通市售，明胶由制备例制备得到，本实施例选择的是明胶；准备用于脱落细胞石蜡化过程的石蜡液和洗脱液备用，洗脱液为体积分数分别为70％、75％、80％、85％的乙醇溶液，准备二甲苯液备用；准备吸水纸、包埋纸、以及顶针备用，吸水纸和包埋纸选择为普通滤纸即可，包埋纸剪裁为恰好能放置在组织包埋盒6内即可，顶针为柱体，该柱体能够自专用离心管3的管口处伸进专用离心管3内，并伸进专用离心管3上的直管32内，将直管32内的脱落细胞捅出直管32即可。
对得到的体液预处理的具体步骤为：Ⅰ、取一个容积为50mL的洁净的普通离心管，将得到的体液取20mL倒入普通离心管内，随后在2000rpm的转速下离心15min，Ⅱ、观察普通离心管底部，观察发现，普通离心管底部有肉眼可见的脱落细胞沉淀，振荡普通离心管，使得普通离心管内的上清液和脱落细胞重新混合；Ⅲ、自承托板1内取出专用离心管3，打开管盖，将步骤Ⅱ中最终得到的脱落细胞液转移至专用离心管3内，本方法中选择的是容积为50mL、直管32内径为3mm的专用离心管3。
S2将装有处理后的脱落细胞液的专用离心管3置于离心机内，在2500rpm的转速下离心10min后倒掉上清液，脱落细胞被采集于直管32内。由于采用的是离心的方式将脱落细胞采集在直管32内，而脱落细胞的相对质量不同时，相对质量大的脱落细胞被采集在直管32的远离管盖的一端，相对质量小的脱落细胞被采集在直管32的靠近管盖的一端，脱落细胞在直管32内按照相对质量的大小规律地堆积在直管32内。
S3于专用离心管3中加入10mL的上述备用的细胞硬化液，在2500rpm的转速下离心5min后，静置12h，脱落细胞被硬化，得到细胞块，随后倒掉上清液。
S4将固定托板4和限位环自承托板1内取出，并将限位环置于固定托板4上，随后取下直管32处的封口件33，打开专用离心管3的管盖，将顶针自专用离心管3的管口处伸进专用离心管3内并伸进直管32内，从而将直管32内的脱落细胞从直管32内顶出并置于固定托板4上的限位环内，使得细胞块位于限位环内；随后将细胞固定胶管21自承托板1内取出取出，将细胞固定胶管21内的明胶加热至45℃，打开细胞固定胶管21后将明胶置于固定托板4上的限位环内，使得明胶充满限位环的空间内，并使得细胞块被包裹在明胶内。
S5将组织包埋盒6自承托板1内取出，打开组织包埋盒6，于组织包埋盒6的底部铺设包埋纸，包埋纸为普通滤纸即可；由于限位环并未特殊连接在固定托板4上，仅仅只是依靠明胶的作用力简单固定在固定托板4上，而明胶又易于自固定托板4上移出，因此将限位环(连带限位环内的明胶和细胞块)缓慢移出固定托板4并置于组织包埋盒6内即可，随后在组织包埋盒6内的限位环上铺设包埋纸，关闭组织包埋盒6即可。
S6细胞块的洗脱和石蜡化：将步骤S5中得到的内置有细胞块的组织包埋盒6依次置于体积浓度分别为70％、75％、80％、85％的乙醇溶液内洗脱，随后置于二甲苯液内洗脱，最后用石蜡液洗脱；在制备得到石蜡细胞块之后，进行后期切片镜检以及病理学检测等。
实施例2
本实施例与实施例1的区别在于，操作工艺参数不同，具体为：
在步骤S1中，将得到的体液预处理后得到杂质含量少的脱落细胞液，备用，其预处理的具体步骤为：Ⅰ、取一个容积为50mL的洁净的普通离心管，将得到的体液取20mL倒入普通离心管内，随后在3000rpm的转速下离心5min。步骤S1的其它操作同实施例1。
在步骤S2中，将装有处理后的脱落细胞液的专用离心管3置于离心机内，在3000rpm的转速下离心5min后倒掉上清液，脱落细胞被采集于直管32内；步骤S3-S6同实施例1。
实施例3
本实施例与实施例1的区别在于，初始得到的胸腹水的来源不同，其胸腹水来自不同的患者，得到的胸腹水清澈透明，但是其胸腹水中脱落细胞的含量比实施例1中得到的胸腹水中的脱落细胞含量少。
一种脱落细胞的采集方法，其具体步骤与实施例1的区别为：
步骤S1中，将得到的体液预处理后得到杂质含量少的脱落细胞液，备用，其具体预处理的配制具体步骤为：Ⅰ、将得到的胸腹水置于容积为50mL的普通离心管中，在2500rpm的转速下离心10min，弃去上清液；Ⅱ、观察普通离心管底部，观察发现，普通离心管底部无肉眼可见的脱落细胞沉淀，重复步骤Ⅰ-Ⅱ(注意：于步骤Ⅰ中的普通离心管中加入新的经过滤网过滤之后的胸腹水脱落细胞液或者选取一个新的洁净的容积为50mL的普通离心管用来盛放新获取的经过滤网过滤之后的胸腹水脱落细胞液均可，本实施例选择于步骤Ⅰ中的普通离心管用来盛放经过滤网过滤之后的新的胸腹水脱落细胞液)，直至在普通离心管底部观察到有肉眼可见的脱落细胞沉淀后，振荡普通离心管，使得上清液和脱落细胞沉淀混合，随后将脱落细胞液转移至专用离心管3内进行离心操作。其它步骤同实施例1。
实施例4
本实施例与实施例1的区别在于，初始得到的胸腹水的来源不同，其胸腹水来自不同的患者，得到的胸腹水较为浑浊，有明显的肉眼可见的絮状沉淀(蛋白质等的聚合而成)，其胸腹水中的杂质含量比实施例1中得到的胸腹水杂质含量多。
一种脱落细胞的采集方法，包括以下步骤：
在步骤S1中，准备过滤网备用，过滤网的孔径为100-300目；对胸腹水预处理的具体步骤为：首先将胸腹水放置于4℃的环境中，直至胸腹水成半凝状态后，将过滤网置于专用离心管3内，选择的专用离心管3的容积为50mL、直管32的内径为4mm，取15mL半凝后的胸腹水倒入过滤网内，由于体液比较浑浊，过滤网的过滤速率会越来越慢，所以注意一次倒入的体液量不要过多，不要让体液溢出过滤网即可，过滤后得到清澈透明的脱落细胞液后备用。步骤S2-S6同实施例1。
实施例5
本实施例与实施例3的区别在于，初始得到的体液不同，为痰液，对于痰液的预处理方式为：使用乙酰半胱氨酸溶液将脱落细胞液充分溶解，由于痰液中脱落细胞的含量较少，因此在步骤S1中，溶解后的痰液的预处理方式同实施例3。
实施例6
本实施例与实施例3的区别在于，初始得到的体液为脑脊液，脑脊液中的脱落细胞的含量较少，对于脑脊液的预处理方式同实施例3；所选择的专用离心管3的规格为容积25mL，直管32的内径为1mm。其他操作步骤同实施例3。
实施例7
本实施例与实施例4的区别在于，初始得到的体液为宫颈刮液，宫颈刮液中的杂质较多，获得的初始体液较为浑浊，对于宫颈刮液的预处理方式同实施例4。其专用离心管3的容积为50mL、直管32内径为3mm，其它操作步骤同实施例4。
实施例8
本实施例与实施例3的区别在于，初始得到的体液为尿液，尿液中的脱落细胞含量较少，获得的初始体液较为清澈，对于尿液的预处理方式同实施例3；所选择的专用离心管3的规格为25mL，直管32的半径为1.5mm，置于专用离心管3中的脱落细胞液为8mL，其它同实施例3。
对比例1
本对比例与实施例1的区别在于：一种细胞块采集方法，包括以下步骤：
S1取得到的胸腹水15mL置于容积为50mL的普通离心管内；
S2将装有胸腹水的普通离心管置于离心机内，在2500rpm的转速下离心10min后倒掉上清液，脱落细胞相对集中的富集于普通离心管的下端，但是在倒掉上清液的过程中，被富集在普通离心管底部的脱落细胞会因为富集不够充分、上清液的轻微晃动对脱落细胞有一定的冲散作用，使得上清液不能完全倒出，将大部分上清液倒出后(一般有10mL左右)，普通离心管内还是含有较多的液体，与普通离心管底部的脱落细胞形成悬浊液；
S3于悬浊液中加入琼脂，搅拌均匀后使得悬浊液凝固，便于将脱落细胞取出；
S4将得到的包裹在琼脂内的被富集的细胞块连同琼脂拿去做细胞硬化和细胞洗脱以及石蜡化，其具体步骤为：首先将琼脂块(包覆有细胞块)取部分置于甲醛的质量分数为38％的甲醛水溶液内进行细胞硬化，细胞硬化的时间为12h，随后将硬化后的细胞块置于组织包埋盒6内，组织包埋盒6内的包埋纸的放置方式同实施例1，随后进行细胞洗脱，细胞洗脱的步骤同实施例1，洗脱后得到石蜡细胞块，随后进行后期的切片镜检以及病理学检测。
对比例2
本对比例与对比例1的区别在于：本对比例的体液为痰液，痰液的化开方式同实施例6，其它同对比例1。
对比例3
本对比例与对比例1的区别在于：本对比例的体液为脑脊液，其它同对比例1。
对比例4
本对比例与对比例1的区别在于：本对比例的体液为宫颈刮液，其它同对比例1。
对比例5
本对比例与对比例1的区别在于：本对比例的体液为尿液，其它同对比例1。
试验例
试验例1
针对肝癌的预筛查-方法检出率的确定
对于肝癌的筛查，所选择的初始样本为胸腹水。患者出现胸腹水的可能原因有很多，可能来自肝部积水、肺部积水、胰脏积水或者脑补积水等，但是大部分的胸腹水是来自于肝部积水。但是经常将从胸腹水中得到的脱落细胞用于肝癌的筛查确诊。
分别选取某肿瘤医院的60例出现胸腹水情况的患者的胸腹水样本，其中有40例为通过影像诊断、核磁共振以及化验等方式确诊为肝癌中晚期患者的胸腹水样本，20例为通过影像诊断、核磁共振以及化验等方式确诊为肝癌早期患者的胸腹水样本。随后对这60个胸腹水样本分别采用实施例1-4和对比例1的方法进行细胞采集并制备得到细胞块后，进行细胞切片后镜检，其具体地操作为：将石蜡细胞块切成厚度为3μm的切片，在60℃烘干1h；随后将细胞切片置于显微镜下观察，若见到多个具有恶性特征的细胞则诊断为阳性，未见异型细胞则诊断为阴性，查见异型细胞但不足以诊断为恶性的则要结合临床进行综合诊断。
随后分别确定不同细胞块采集方法的肝癌检出样本和肝癌检出率，结果如表1所示。
表1实施例1-4和对比例1的细胞块采集方法结合细胞切片和病理学检测对杆癌的检出率
从表1中的数据看出，基于本申请细胞块采集装置进行的细胞块采集方法，得到的细胞块的样本用于细胞切片和病理学检测后，对于肝癌的确诊和检出，本申请的方法制备得到的细胞块，其对于肝癌中晚期的检出率显著高于现有技术的方法。其原因在于：得到的胸腹水样本可能是比较清澈透明的，这种样本中本身含有的脱落细胞比较少，相对来讲，细胞富集不易进行。若是采用对比例1的方法进行细胞富集时，得到的脱落细胞块实际上是琼脂和脱落细胞的混合物，而当样本中本身细胞含量较少的时候，得到的脱落细胞块主要是作为细胞支撑的琼脂，这使得在后期做细胞切片时，捕捉不到目标的病变的脱落细胞，从而导致其癌症的检出率低。尤其是对于早期肝癌患者，由于体液内癌细胞含量本身较少，在采用细胞切片结合后期病理学检测确诊癌症时，若采用对比例1的方法采集细胞块时，则会因为前期细胞采集不充足导致漏检或者错检的结果。但是本申请中采用专用离心管对得到的胸腹水样本进行细胞采集，同时在专用离心管内对采集在直管内的细胞块进行细胞固定，这样做的优势在于：首先制备得到的细胞块为无支撑(比如加如琼脂或者蛋清)的全细胞的细胞块，因此使得在后期进行细胞切片时，得到的切片中的有效细胞切片更多，从而使得，一旦初始样本中含有癌变细胞既可检出；其次，将细胞块的固化过程在专用离心管内进行，便于后期将固化的细胞块自专用离心管内取出，减少在细胞块转移过程中细胞的损失，进而提高癌变细胞的检出率。
因此本申请的方法对于体液中细胞采集效果更佳，尤其是针对细胞含量较少的体液样本中的细胞采集更加完全，同时细胞块的制备效果更好，便于后期的细胞切片和病理学检测。
而当得到的胸腹水样本中含有较多的絮状杂质(大分子蛋白等)时，利用过滤网进行过滤后，也使得在专用离心管内采集得到的有效细胞更多，从而使得后期的癌变细胞检出率更高。
试验例2
针对肺癌的预筛查-方法检出率的确定
对于肺癌的筛查，所选择的初始样本为痰液。对于痰液的样本采集为：采用气管拉网的方式自喉部采集得到痰液样本，随后采用实施例5的方式将痰液化开，使之呈现透明溶液的状态即可。
分别选取某医院的已经确诊的50例肺癌患者，其中晚期肺癌患者10例，早期肺癌瘤患者40例。
随后对这50个肺癌患者的痰液样本分别采用实施例5和对比例2的方法进行细胞采集并制备得到细胞块后，对得到的细胞块进行石蜡化，随后切片后镜检，切片的具体地操作同试验例1；随后将细胞切片置于显微镜下观察，若见到多个具有恶性特征的细胞则诊断为阳性，未见异型细胞则诊断为阴性，查见异型细胞但不足以诊断为恶性的则要结合临床进行综合诊断。
分别两种方法的肺癌检出率，计算结果如表2所示。
表2实施例5和对比例2的细胞块采集方法结合细胞切片和病理学检测对肺癌的检出率
目前，由于自痰液中得到的脱落细胞的含量较少，在采用常规的细胞采集方式获取细胞块时，首先得到的痰液不易从粘稠状态溶解至溶液中；其次痰液中本身细胞含量较少，因此采用对比例2中的细胞采集方式，以细胞切片的方法确诊肺癌时，其肺癌的检出率较低，低于50％，所以一般不采用细胞切片的方法进行肺癌的确诊。
试验例3
针对脑癌的预筛查-方法检出率的确定
对于脑癌的筛查，所选择的初始样本为脑脊液，脑脊液的获取采用常规的腰椎穿刺获得。
分别选取某医院的已经确诊的40例肺癌患者。
随后对这40个脑癌患者的穿刺脑脊液样本分别采用实施例6和对比例3的方法进行细胞采集并制备得到细胞块后，对得到的细胞块进行石蜡化，随后切片后镜检，切片的具体地操作同试验例1；制备细胞切片后镜检，分别确定两种方法的检出率，计算结果如表3所示。
表3实施例6和对比例3的细胞块采集方法结合细胞切片和病理学检测对脑癌的检出率
| 检测项目 | 脑癌检出样本/例 | 脑癌检出率/％ |
| 实施例6 | 39 | 97.5 |
| 对比例3 | - | - |
目前，由于自脑脊液中得到的脱落细胞的含量较少，采用对比例3中的细胞采集方式，以细胞切片的方法确诊肺癌时，其肺癌的检出率较低，低于50％，所以一般不采用细胞切片的方法自脑脊液中采取样本并进行脑癌的确诊。
而表3的结果表明，以本申请的方法和装置采集得到细胞块，并结合后期的细胞切片和病理学检测，其脑癌的检出率较高。
试验例4
针对宫颈癌的预筛查-方法检出率的确定
对于宫颈癌的筛查，所选择的初始样本为宫颈刮液。宫颈刮液的获取为常规方式获取。
分别选取选取某医院妇科的已确诊的60例宫颈癌患者。对这60个患者的宫颈刮液样本分别采用实施例7和对比例4的方法进行细胞采集并制备得到细胞块后，对实施例7制备得到的脱落细胞石蜡细胞块进行切片后镜检，镜检操作同试验例1。随后将细胞切片置于显微镜下观察，若见到多个具有恶性特征的细胞则诊断为阳性，未见异型细胞则诊断为阴性，查见异型细胞但不足以诊断为恶性的则要结合临床进行综合诊断。
分别确定这两种方法的检出率，计算结果如表4所示。
表4实施例7和对比例4的细胞块采集方法结合细胞切片和病理学检测对宫颈癌的检出率
| 检测项目 | 宫颈癌检出样本/例 | 宫颈癌检出率/％ |
| 实施例7 | 59 | 98.3 |
| 对比例4 | 51 | 85 |
对于宫颈刮液，在最初始自人体内采取样本时，本身是从病灶处进行样本采取，因此和脑脊液、痰液的获取方式不同的结果是：自宫颈刮液得到的初始样本中，癌变的细胞本身含量较多，因此其宫颈癌的检出率更高。而以对比例4的方法采集得到的细胞块结合细胞切片时，虽然其癌症检出率相比于其他癌症的检出率更高，但是和本申请的细胞块采集方法相比，对比例4的方法还是存在更多的漏检和错检的情况。
试验例5
针对膀胱癌和前列腺炎的预筛查-方法检出率的确定
对于膀胱癌和前列腺炎的筛查，所选择的初始样本为尿液。尿液的获取要求为：待检查患者四小时不喝水后获取的尿液样本。
分别选取选取某医院泌尿科的已确诊的80例患者，其中，膀胱癌患者50例，前列腺炎患者33例，有3人同时患有膀胱癌和前列腺炎。对这80个患者的尿液样本分别采用实施例8和对比例5的方法进行细胞采集并制备得到细胞块后，进行切片后镜检，切片的具体地操作为：将石蜡细胞块切成厚度为3μm的切片，在60℃烘干1h，镜检操作同试验例1。随后将细胞切片置于显微镜下观察，若见到多个具有恶性特征的细胞则诊断为阳性，未见异型细胞则诊断为阴性，查见异型细胞但不足以诊断为恶性的则要结合临床进行综合诊断。
分别确定两种方法的检出率，计算结果如表5所示。
表5实施例8和对比例5的细胞块采集方法结合细胞切片和病理学检测对膀胱癌和前列腺炎的检出率
目前，由于自尿液中得到的脱落细胞的含量较少，采用对比例5中的细胞采集方式，以细胞切片的方法确诊肺癌时，其肺癌的检出率较低，低于50％，所以一般不采用细胞切片的方法自尿液中采取样本并进行膀胱癌或者前列腺炎的确诊。
而表5的结果表明，以本申请的方法和装置采集得到细胞块，并结合后期的细胞切片和病理学检测，其膀胱癌和前列腺炎的检出率较高。而对于前列腺炎症的检出，在一定程度上实现了对该疾病的早期筛查，便于及时就医治疗，在医学治疗以及疾病早期诊断和筛查具有重要意义。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (9)
1.一种细胞块采集装置，其特征在于，包括承托板(1)、辅料管和专用离心管(3)，所述承托板(1)上开设有若干凹槽，所述凹槽包括辅料管凹槽(11)和离心管凹槽(12)，所述辅料管凹槽(11)开设于承托板(1)的一侧，所述离心管凹槽(12)开设于承托板(1)的另一侧；所述辅料管包括密封的内置了细胞固定胶的细胞固定胶管(21)，所述细胞固定胶管(21)卡接在辅料管凹槽(11)内，所述专用离心管(3)卡接在离心管凹槽(12)内；所述专用离心管(3)为两端开口且一端为倒置的圆台状的管体(31)，所述管体(31)的圆台状的一端连通有直管(32)，所述直管(32)的内径小于管体(31)的圆台状的一端的口径，所述直管(32)远离管体(31)的一端开设有出口且出口处可拆卸连接有封口件(33)；
所述封口件(33)包括两端开口的外管(331)，所述外管(331)和直管(32)套接，所述外管(331)远离管体(31)的一端开设有插接孔，插接孔处插接有插接件，所述插接件包括同轴设置的顶柱(332)和卡接块(333)，所述顶柱(332)的一端伸出所述插接孔，所述顶柱(332)的另一端和卡接块(333)固接，所述卡接块(333)位于外管(331)内，所述卡接块(333)远离顶柱(332)的一端设置有密封片(334)。
2.根据权利要求1所述的一种细胞块采集装置，其特征在于，所述采集装置还包括固定托板(4)，所述凹槽还包括托板凹槽(13)，所述托板凹槽(13)开设在辅料管凹槽(11)和离心管凹槽(12)之间，所述托板凹槽(13)和离心管凹槽(12)的长度方向相同，所述固定托板(4)卡接在所述托板凹槽(13)内。
3.根据权利要求2所述的一种细胞块采集装置，其特征在于，所述采集装置还包括限位件(5)，所述凹槽还包括限位件凹槽(14)，所述限位件凹槽(14)自托板凹槽(13)的槽底开设，所述限位件(5)卡接在所述限位件凹槽(14)内。
4.根据权利要求1所述的一种细胞块采集装置，其特征在于，所述采集装置还包括过滤网，所述过滤网的孔径为100-300目。
5.采用权利要求1所述细胞块采集装置进行的细胞块采集方法，包括以下步骤：
S1、将得到的体液预处理后得到脱落细胞液，备用；配制细胞硬化液备用；
S2、自承托板(1)内取出专用离心管(3)，将处理后的脱落细胞液置于专用离心管(3)内，在2000-3000 rpm的转速下离心5-15 min后倒掉上清液，脱落细胞被采集于直管(32)内；
S3、于专用离心管(3)中加入5-15 mL的备用的细胞硬化液，在2000-3000 rpm的转速下离心3-8 min后，静置10-14 h，随后倒掉上清液，得到硬化后的细胞块；
S4、自承托板(1)内取出细胞固定胶管(21)，随后取下所述直管(32)处的封口件(33)，将硬化后的细胞块从直管(32)内取出并置于一容器内；随后打开所述细胞固定胶管(21)，取出所述细胞固定胶管(21)内的细胞固定胶并置于所述容器内，且使得硬化后的细胞块包覆在细胞固定胶内，即采集得到细胞块。
6.根据权利要求5所述的一种细胞块采集方法，其特征在于，所述凹槽还包括托板凹槽(13)和限位件凹槽(14)，所述托板凹槽(13)开设在辅料管凹槽(11)和离心管凹槽(12)之间，所述托板凹槽(13)和离心管凹槽(12)的长度方向相同，所述限位件凹槽(14)自托板凹槽(13)的槽底开设；所述采集装置还包括固定托板(4)和限位件(5)，所述固定托板(4)卡接在所述托板凹槽(13)内，所述限位件(5)卡接在所述限位件凹槽(14)内；
对硬化后的细胞块的固定操作为：依次自承托板(1)内取出固定托板(4)、限位件(5)和细胞固定胶管(21)，将限位件(5)置于固定托板(4)上，将硬化后的脱落细胞置于固定托板(4)上的限位件(5)内，随后打开所述细胞固定胶管(21)，取出所述细胞固定胶管(21)内的细胞固定胶并置于限位件(5)内，并使得硬化后的细胞块包覆在细胞固定胶内即可。
7.根据权利要求5所述的一种细胞块采集方法，其特征在于，所述细胞硬化液选自75%的乙醇液或者福尔马林液中的一种；所述细胞固定胶为卡拉胶或者明胶。
8.根据权利要求5所述的一种细胞块采集方法，其特征在于，所述体液选自痰液、尿液、胸腹水和穿刺液中的一种。
9.根据权利要求5所述的一种细胞块采集方法，其特征在于，所述体液预处理的步骤包括：
准备过滤网备用，所述过滤网的孔径为100-300目；Ⅰ、将经过滤网过滤之后的脱落细胞液置于一个洁净的离心管中，在2000-3000 rpm的转速下离心5-15 min；Ⅱ、观察离心管底部是否有沿离心管底部倾斜侧壁内分布的脱落细胞沉淀，若是有肉眼可见的脱落细胞沉淀时，振荡离心管使得在离心管内的上清液和脱落细胞沉淀再次混合，随后转移至专用离心管(3)内进行离心操作；若是无肉眼可见的脱落细胞沉淀，重复步骤Ⅰ-Ⅱ，直至观察到有肉眼可见的脱落细胞沉淀，振荡离心管使得离心管内的上清液和脱落细胞沉淀混合，随后转移至专用离心管(3)内进行离心操作。
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