CN111808981A - 一种提高玉米单倍体雌穗育性恢复力的方法及其专用引物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种提高玉米单倍体雌穗育性恢复力的方法及其专用引物。本发明通过对单倍体雌穗育性恢复力相关QTL的定位，开发相关的连锁标记，利用该标记进行分子标记辅助育种。本发明所提供的鉴定或辅助鉴定玉米单倍体雌穗育性恢复力性状的方法能直接在苗期鉴定出含有位于7号染色体主效QTL位点qhff4的单株，选择出含有该QTL位点的单株，有助于提高玉米单倍体雌穗育性恢复力，促进玉米DH育种的利用。

Description

一种提高玉米单倍体雌穗育性恢复力的方法及其专用引物
技术领域
本发明涉及生物技术领域中一种提高玉米单倍体雌穗育性恢复力的方法及其专用引物。
背景技术
在玉米单倍体自然加倍的遗传研究中，雌穗的育性恢复力往往被忽视，主要原因在于以往的研究均发现单倍体雌穗具有较强的育性恢复力。通常情况下，利用正常的二倍体花粉与单倍体雌穗杂交，几乎所有的研究结果都表明无论在任何遗传背景下，单倍体雌穗的结实率都能够达到90％甚至更高。Chalyk(1994)就曾对来自马齿类型的遗传种质后代单倍体进行研究，通过采用正常花粉为单倍体雌穗授粉，约有96％的单倍体雌穗可以正常杂交结实。在所有结实的果穗中，平均每穂的结实籽粒粒数为27粒，结实最多的能够达到107粒。Geiger(2006)也对单交种后代单倍体雌穗采取开放授粉方式观察单倍体雌穗结实特征，平均每穂的结实籽粒粒数大约为80粒，范围在25粒至192粒之间。魏俊杰(2006)研究结果也表明单倍体雌穗育性自然恢复率高达90.52％。但是，这些研究主要都集中于对特定材料进行分析，所采取的授粉方式也较为粗放，并且，受到雄穗育性恢复力作为关键限制单倍体自然加倍效率的因素影响，所以雌穗育性恢复力对DH系产生效率的影响无法突出表现。
随着近几年单倍体自然加倍研究的进展，育种家发现DH系的产生效率虽然受到雄穗较低的育性恢复力的显著影响，可育单倍体自交结实效率也与雌穗的育性恢复力紧密相关。任姣姣等(2018)对22个自交系单倍体雌穗育性恢复力性状进行了研究，利用正常花粉与单倍体雌穗杂交，结果表明不同自交系单倍体单穗结实数变异范围为2.67-59.82，其中B73平均结实株率和单穗结实数达到最高，且单倍体雌穗育性恢复力遗传力达到0.86。由此说明DH的生产效率不仅受到雄穗散粉效率的影响，同时受到雌穗育性恢复力的影响。因此开发与单倍体雌穗恢复性状紧密连锁的标记，进行分子标记辅助选择有望鉴定或辅助鉴定单倍体雌穗恢复高频材料，从而提高DH生产效率。
发明内容
本发明所要解决的一个技术问题是如何鉴定或辅助鉴定玉米单倍体雌穗恢复高频材料。
本发明的第一个目的是提供一种用于鉴定或辅助鉴定玉米单倍体雌穗育性恢复力性状的引物对。
本发明提供的用于鉴定或辅助鉴定玉米单倍体雌穗育性恢复力性状的引物对由序列1所示的单链DNA分子和序列2所示的单链DNA分子组成。
本发明的第二个目的是提供用于鉴定或辅助鉴定玉米单倍体雌穗育性恢复力性状的PCR试剂。
本发明提供的用于鉴定或辅助鉴定玉米单倍体雌穗育性恢复力性状的PCR试剂包括上述引物对。
本发明的第三个目的是提供用于鉴定或辅助鉴定玉米单倍体雌穗育性恢复力性状的试剂盒。
本发明提供的用于鉴定或辅助鉴定玉米单倍体雌穗育性恢复力性状的试剂盒包括上述引物对或上述PCR试剂。
本发明的第四个目的是提供上述引物对或上述PCR试剂或上述试剂盒的新用途。
本发明提供了上述引物对或上述PCR试剂或上述试剂盒在如下Y1-Y5中任一种中的应用：
Y1鉴定或辅助鉴定玉米单倍体雌穗育性恢复力性状；
Y2制备鉴定或辅助鉴定玉米单倍体雌穗育性恢复力性状的产品；
Y3选育单倍体雌穗育性恢复力高的玉米单倍体；
Y4制备选育单倍体雌穗育性恢复力高的玉米单倍体的产品；
Y5玉米育种。
本发明的第五个目的是提供一种鉴定或辅助鉴定玉米单倍体雌穗育性恢复力性状的方法。
本发明提供的鉴定或辅助鉴定玉米单倍体雌穗育性恢复力性状的方法，包括如下步骤：用权利要求1所述的引物对对玉米单倍体基因组DNA进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；检测所述PCR扩增产物，根据所述PCR扩增产物确定玉米单倍体雌穗育性恢复力性状：PCR扩增产物是大小为276bp片段的玉米单倍体的雌穗育性恢复力高于或候选高于PCR扩增产物是大小为383bp片段的玉米单倍体的雌穗育性恢复力。
上述方法中，所述玉米单倍体可选自如下A1或A2的单倍体：
A1、由一个单倍体雌穗育性恢复力高和一个单倍体雌穗育性恢复力低的亲本杂交，得到杂交子代，再以单倍体诱导系为父本，对杂交子代进行诱导，获得的单倍体；
A2、将A1所述单倍体与所述单倍体雌穗育性恢复力低的亲本回交，再以单倍体诱导系为父本，对所述回交后代进行诱导，获得的单倍体。
上述方法中，所述单倍体雌穗育性恢复力高的亲本为B73；所述单倍体雌穗育性恢复力低的亲本为齐319；所述单倍体诱导系为诱导系CAU6。
本发明的最后一个目的是提供一种选育单倍体雌穗育性恢复力高的玉米单倍体的方法。
本发明提供的选育单倍体雌穗育性恢复力高的玉米单倍体包括如下步骤：培育上述PCR扩增产物中仅含有大小为276bp片段的玉米单倍体。
本发明提供了一种鉴定或辅助鉴定玉米单倍体雌穗育性恢复力性状的方法及其专用引物，本发明通过对单倍体雌穗育性恢复力相关QTL的定位，开发相关的连锁标记，利用该标记进行分子标记辅助育种。本发明所提供的鉴定或辅助鉴定玉米单倍体雌穗育性恢复力性状的方法能直接在苗期鉴定出含有位于7号染色体主效QTL位点qhff4的单株，选择出含有该QTL位点的单株，有助于提高玉米单倍体雌穗育性恢复力率，促进玉米DH育种的利用。
附图说明
图1为本发明实施例1中F1单倍体群体的琼脂糖电泳图。其中，1为B73单株；2为齐319单株，3-12为F1单倍体群体单株。
图2为本发明实施例2中BC1单株的琼脂糖电泳图。其中，1-22为BC1单株；23为B73单株；24为齐319单株。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
以下实施例中所有性状平均值均为3个以上取平均所得。
以下实施例中的单倍体雌穗育性恢复力率高的玉米B73，其单倍体雌穗结实数为72.8，结实率为30.1％。B73记载于非专利文献“刘治先,赵宝和,韩静,刘朋.美国玉米自交系的种质基础分析[J].山东农业科学,2003(05):23-25.”，公众可以从中国农业大学获得，以重复本申请实验，不可作为其它用途使用。
以下实施例中的单倍体雌穗育性恢复力率低的玉米齐319，其单倍体雌穗结实数为3.0，结实率为1.0％。齐319记载于非专利文献“叶金才.利用外源种质选育优良玉米自交系及强优势杂交种的实践与思考[J].山东农业科学,2000(03):11-13.”，公众可以从中国农业大学获得，以重复本申请实验，不可作为其它用途使用。
以下实施例中的玉米高频单倍体诱导系CAU6，其平均诱导率为12％，具有R1-nj标记。CAU6记载于非专利文献“Zhong Yu,LiuChenxu,et al.Mutation of ZmDMP enhanceshaploid induction in maize.[J].Nature plants,2019,5(6).”，公众可以从中国农业大学获得，以重复本申请实验，不可作为其它用途使用。
以下实施例中的Tris饱和酚、氯仿、酒精、异丙醇和琼脂糖均为北京吉普腾生物技术有限公司产品。
以下实施案例中的PCR扩增所用Mix试剂为北京艾德莱生物科技有限公司产品。
实施例1分子标记的获得
一、玉米单倍体雌穗育性恢复力的QTL定位
利用一个F1来源的玉米单倍体群体对单倍体雌穗育性恢复力这一性状进行全基因组扫描，共检测到了4个控制玉米单倍体雌穗育性恢复力的QTL位点，其中位于第7号染色体的QTL命名为qhff4，该QTL是效应最大的QTL。
二、分子标记的开发
1.F1单倍体群体的构建
以齐319为母本，B73为父本，同期播种于北京中国农业大学上庄试验站，组配杂交组合齐319/B73，获得F1种子。同年冬天，将所得F1于海南中国农业大学试验站进行种植，以高频诱导系CAU6为父本，对F1进行杂交，诱导单倍体。根据R1-nj颜色基因的表达挑选单倍体，胚乳颜色为紫色但胚无紫色的籽粒为单倍体籽粒，获得齐319/B73的F1单倍体群体。
2.分子标记的开发
根据QTL定位结果，下载qhff4定位区间内B73参考序列，选择单拷贝序列，利用Primer5.0在线设计引物，经过多态性筛选及连锁群验证后，选择一对差异性大，带型清晰的多态性引物(分子标记)F/R，将其命名为CB7-16引物序列如下：
F:5’-TCGAATCAGCCCACTAGACC-3’(序列1)；
R:5’-ACCTCTTTAAAATGGCTGAAGGA-3’(序列2)。
以F1单倍体分离群体的基因组DNA为模版，采用引物CB7-16进行PCR扩增，以琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，所得带型表明：该分子标记位于定位区间内，可以用于该QTL位点的基因型检测。
3.分子标记检测亲本基因型
分别以B73和齐319的基因组DNA为模板，采用引物CB7-16进行PCR扩增，分别得到PCR扩增产物。琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物并对其进行测序。
检测结果表明：引物CB7-16在单倍体雌穗育性恢复率高的亲本B73中扩增得到大小为276bp的条带(该位点来源于高亲B73)；而在单倍体雌穗育性恢复率低的亲本中仅扩增得到大小为383bp的条带(该位点来源于低亲齐319)。
三、分子标记在F1单倍体群体中的鉴定及验证
1.表型鉴定
2017年冬海南，在三亚南滨中国农业大学试验站种植1000株以上齐319/B73的F1单倍体群体。在单倍体吐丝期，花丝吐出3-5cm时，统一剪花丝，使用自交系齐319植株的花粉，对单倍体植株雌穗进行过量授粉，成熟时，统计单穗结实数、穗行数和行粒数，并计算单穗结实率：
单穗结实率＝单穗结实数/(穗行数×行粒数)×100％。
最终在F1单倍体中，选取了结实前5％(单穗结实数和单穗结实率均在前5％)的61株单倍体单株，以及结实后5％(单穗结实数和单穗结实率均在后5％)的61株单倍体单株进行基因型鉴定。
2.基因型鉴定
(1)DNA提取
在苗期对经鉴定结实前5％的61株单倍体和结实后5％的61株单倍体进行取样。每株剪取幼嫩叶片2cm，低温冷藏，采用Murray and Thompson(1980)(Murray MG,ThompsonWF(1980)Rapid isolation of high molecular weight plant DNA.Nucleic AcidsRes8:4321–4326)所提供的方法，分别提取玉米基因组DNA。
(2)基因型鉴定
以步骤(1)所得基因组DNA为模板，采用引物CB7-16进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。
PCR扩增反应体系：DNA2μl，正向和反向引物各0.75μl、Mix试剂7.5μl，超纯水补充至15μl，加入20μl石蜡油。
PCR扩增反应条件：95℃预变性5分钟，95℃变性30秒，58℃退火35秒，72℃延伸30秒，循环36次，72℃延伸10分钟。
配制2％的琼脂糖凝胶，对上述PCR的扩增产物分别电泳检测并测序验证，电压160V，电泳时间12分钟。
电泳结果如图1所示。根据带型可以将F1单倍体群体分为两种基因型：PCR扩增产物仅含有大小为276bp的片段(该位点来源于高亲B73)的单株的基因型为含有qhff4型，并将PCR产物仅含有大小为276bp片段的单株命名为有qhff4型单株；PCR扩增产物仅含有大小为383bp的片段(该位点来源于低亲齐319)的单株的基因型为无qhff4型，并将PCR扩增产物仅含有大小为383bp片段的单株命名为无qhff4型单株。
在齐319/B73的F1单倍体群体中，结实前5％的61株单株和结实后5％的61株单株中有qhff4型单株和无qhff4型单株的比例如表1所示。
表1 F1单倍体群体结实表现
Figure BDA0002596034960000051
注：同一项目内，不同的字母代表在0.05水平差异显著，相同的字母代表在0.05水平差异不显著。
从表1中可以看出：在结实前5％群体中，有qhff4型单株样本数出现的概率明显大于无qhff4型单株出现的概率；在结实后5％群体中，有qhff4型单株样本数出现的概率明显小于无qhff4型单株出现的概率。以上结果说明该分子标记具有明显的偏分离现象，可用于单倍体雌穗育性恢复力的选择。
实施例2分子标记在BC1家系单倍体群体中的验证
一、BC1家系单倍体群体的获得
用齐319对实施例1中F1单倍体群体中的有qhff4型单株进行回交，所得BC1籽粒再种植，鉴定基因型，选择qhff4杂合BC1单株(引物CB7-16进行PCR后产物为大小是276bp和大小是383bp的两个片段)，以高频诱导系CAU6为父本与其杂交，诱导获得单倍体。根据R1-nj颜色基因的表达挑选单倍体，胚乳颜色为紫色但胚无紫色的籽粒为单倍体籽粒，获得BC1家系单倍体群体。
二、基因型鉴定
(1)DNA提取
在苗期对上述BC1单株及BC1家系单倍体群体，剪取幼嫩叶片2cm，低温冷藏。采用Murray and Thompson(1980)所提供的方法，提取玉米基因组DNA。
(2)基因型鉴定
以步骤(1)所得基因组DNA为模板，采用实施例1的引物CB7-16进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。
PCR扩增反应体系：DNA2μl，正向和反向引物各0.75μl、Mix7.5μl，超纯水补充至15μl，加入20μl石蜡油。
PCR扩增反应条件：95℃预变性5分钟，95℃变性30秒，58℃退火35秒，72℃延伸30秒，循环36次，72℃延伸10分钟。
配制2％的琼脂糖凝胶，电泳检测上述PCR扩增产物并测序验证，电压160V，电泳时间12分钟。
BC1各个单株电泳结果见图2，共有如下三种基因型：纯合有qhff4型，杂合qhff4型和纯合无qhff4型。其中，纯合有qhff4型是PCR扩增产物为大小是276bp的片段的基因型，纯合无qhff4型PCR扩增产物为大小是383bp的片段的基因型，杂合qhff4型是PCR扩增产物为大小是276bp和大小是383bp的两个片段的基因型。
单倍体仅含有一套染色体，因此BC1家系单倍体群体中的单倍体仅包含有qhff4型和无qhff4型两种基因型，其中，有qhff4型是PCR扩增产物为大小是276bp的片段的基因型，将基因型为有qhff4型的单倍体命名为有qhff4型单株；无qhff4型PCR扩增产物为大小是383bp的片段的基因型，将基因型为无qhff4型的单倍体命名为无qhff4型单株。
三、表型鉴定
将BC1家系单倍体群体进行田间种植，在单倍体吐丝期，花丝吐出3-5cm时，统一剪花丝，使用自交系齐319植株花粉，对单倍体植株雌穗进行过量授粉，成熟时，统计单穗结实数、穗行数和行粒数，并计算单穗结实率：
单穗结实率＝单穗结实数/(穗行数×行粒数)×100％。
各家系内不同基因型单倍体雌穗结实情况如表2所示：
表2 BC1家系单倍体群体结实表现
项目 有qhff4型单株 无qhff4型单株
样本数 46 32
平均单穗结实数 35.02a 14.84b
平均单穗结实率 15％a 8％b
注：同一项目内，不同的字母代表在0.05水平差异显著，相同的字母代表在0.05水平差异不显著。
表2中的结果表明同一家系内有qhff4型单倍体和无qhff4型单倍体的平均单穗结实数和平均单穗结实率存在均显著差异，有qhff4型单倍体的平均单穗结实数和平均单穗结实率显著高于无qhff4型单倍体的平均单穗结实数和平均单穗结实率。基因型鉴定结果与表型鉴定结果一致，说明该分子标记可以用于单倍体雌穗育性恢复力的选择。
以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。

Claims (10)

1.用于鉴定或辅助鉴定玉米单倍体雌穗育性恢复力性状的引物对，其特征在于，其由序列1所示的单链DNA分子和序列2所示的单链DNA分子组成。
2.用于鉴定或辅助鉴定玉米单倍体雌穗育性恢复力性状的PCR试剂，其特征在于，包括权利要求1所述的引物对。
3.用于鉴定或辅助鉴定玉米单倍体雌穗育性恢复力性状的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物对或权利要求2的PCR试剂。
4.权利要求1所述的引物对或权利要求2所述的PCR试剂或权利要求3所述的试剂盒在如下Y1-Y5中任一种中的应用：
Y1鉴定或辅助鉴定玉米单倍体雌穗育性恢复力性状；
Y2制备鉴定或辅助鉴定玉米单倍体雌穗育性恢复力性状的产品；
Y3选育单倍体雌穗育性恢复力高的玉米单倍体；
Y4制备选育单倍体雌穗育性恢复力高的玉米单倍体的产品；
Y5玉米育种。
5.一种鉴定或辅助鉴定玉米单倍体雌穗育性恢复力性状的方法，其特征在于，包括如下步骤：用权利要求1所述的引物对对玉米单倍体基因组DNA进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；检测所述PCR扩增产物，根据所述PCR扩增产物确定玉米单倍体雌穗育性恢复力性状：PCR扩增产物是大小为276bp片段的玉米单倍体的雌穗育性恢复力高于或候选高于PCR扩增产物是大小为383bp片段的玉米单倍体的雌穗育性恢复力。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述玉米单倍体可选自如下A1或A2的单倍体：
A1、由一个单倍体雌穗育性恢复力高和一个单倍体雌穗育性恢复力低的亲本杂交，得到杂交子代，再以单倍体诱导系为父本，对杂交子代进行诱导，获得的单倍体；
A2、将A1所述单倍体与所述单倍体雌穗育性恢复力低的亲本回交，再以单倍体诱导系为父本，对所述回交后代进行诱导，获得的单倍体。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述单倍体雌穗育性恢复力高的亲本为B73。
8.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述单倍体雌穗育性恢复力低的亲本为齐319。
9.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述单倍体诱导系为诱导系CAU6。
10.一种选育单倍体雌穗育性恢复力高的玉米单倍体的方法，包括如下步骤：培育权利要求6中所述的PCR扩增产物为276bp片段的玉米单倍体。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008212005A (ja) * 2007-02-28 2008-09-18 Japan Grassland Farming Forage Seed Association トウモロコシ多葉性関連遺伝子座に連鎖するｄｎａマーカーを検出するプライマーセット及びその使用
CN106191255A (zh) * 2016-07-15 2016-12-07 中国农业大学 一种提高玉米单倍体雄穗育性恢复能力的方法及其专用引物

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008212005A (ja) * 2007-02-28 2008-09-18 Japan Grassland Farming Forage Seed Association トウモロコシ多葉性関連遺伝子座に連鎖するｄｎａマーカーを検出するプライマーセット及びその使用
CN106191255A (zh) * 2016-07-15 2016-12-07 中国农业大学 一种提高玉米单倍体雄穗育性恢复能力的方法及其专用引物

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
任姣姣: "玉米单倍体自然加倍遗传及育性恢复主效QTL定位研究", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库（博士）农业科技辑》 *
任姣姣等: "玉米单倍体雌穗育性自然恢复研究", 《中国农业大学学报》 *

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