CN111808052A - 一种呋喃磺酸类化合物及其制备方法与应用 - Google Patents

一种呋喃磺酸类化合物及其制备方法与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111808052A
CN111808052A CN202010559708.6A CN202010559708A CN111808052A CN 111808052 A CN111808052 A CN 111808052A CN 202010559708 A CN202010559708 A CN 202010559708A CN 111808052 A CN111808052 A CN 111808052A
Authority
CN
China
Prior art keywords
pha
compound
och
water solution
concentrating
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202010559708.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111808052B (zh
Inventor
张卫东
叶霁
李慧梁
程桃芳
武志立
苏日鑫
张榆浩
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Second Military Medical University SMMU
Original Assignee
Second Military Medical University SMMU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Second Military Medical University SMMU filed Critical Second Military Medical University SMMU
Priority to CN202010559708.6A priority Critical patent/CN111808052B/zh
Publication of CN111808052A publication Critical patent/CN111808052A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111808052B publication Critical patent/CN111808052B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D307/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom
    • C07D307/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D307/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D307/56—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one oxygen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D307/64—Sulfur atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种呋喃磺酸类化合物，通式如式I所示：
Figure DDA0002545631270000011
其中，R1、R2、R3各自独立的选自氢、羟基、甲氧基，R1、R2、R3不同时为氢。本发明的呋喃磺酸类化合物对二磷酸腺苷、阿司匹林和胶原诱导的血小板聚集有抑制作用，对FeCl3诱导的小鼠颈总动脉血栓形成以及角叉菜胶诱导小鼠血栓形成有抑制作用，故可用于抗血栓及抗血小板聚集药物。

Description

一种呋喃磺酸类化合物及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体地说，涉及一种从地龙中分离得到的呋喃磺酸类化合物及其制备方法，以及该类化合物在抗血栓及抗血小板聚集的药物中的应用。
背景技术
中药地龙为钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima aspergillum(E.Perrier)、通俗环毛蚓Pheretima vulgaris Chen、威廉环毛蚓Pheretima guillelmi(Michaelsen)或栉盲环毛蚓Pheretima pectinifera Michaelsen的干燥体。前一种习称“广地龙”，后三种习称“沪地龙”，是我国民间传统动物药之一，具有清热定惊、通络、平喘、利尿的功效。李时珍在《本草纲目》称其在通经活络、活血化瘀、预防治疗心脑血管疾病作用方面具有较好的疗效，在临床上的应用表明其可以有效降压降脂、抗凝血、抗血栓、镇痛消炎，并在治疗神经系统疾病如脑血栓、中风等引起的脑损伤中发挥重要作用。
根据文献报道，地龙主要包含氨基酸、蛋白质、甾体、核苷、呋喃磺酸和磷脂等成分，主要生物活性成分是地龙素、氨基酸、蚓激酶、蚯蚓纤溶酶等。2015版《中国药典》仅以氨基酸为对照品开展鉴别，尚无含量测定项。目前，呋喃磺酸类化合物在自然界中仅是地龙才有的一种代谢物，存在于地龙肠道前端部分，可能是肠道的表面活性剂。其作用在于不影响蚓激酶活性的前提下，减少多酚类物质经过肠道产生的可溶性蛋白沉淀，帮助地龙在高多酚土壤环境下的生存(M Liebeke,N.Strittmatter,S.Fearn,et al.,Unique metabolitesprotect earthworms against plant polyphenols,Nature Communications 6(2015)7869)，因此，推测该类成分具有潜在的溶解蛋白大分子，即溶栓活性。日本在1988年公开了从地龙中分离2-乙基-5-己基呋喃-3-磺酸成药的专利(专利公开号为JP 63005088A)，公开了地龙中2-乙基-5-己基呋喃-3-磺酸的分离制备工艺方法及抗血小板聚集作用。
目前，尚无文献具体报导从地龙中分离纯化得到呋喃磺酸类化合物，也尚未见该类化合物在抗血栓及抗血小板聚集的药理作用的相关报道。
发明内容
本发明的第一个目的是提供一种呋喃磺酸类化合物。
本发明的第二个目的是提供一种所述呋喃磺酸类化合物的制备方法。
本发明的第三个目的是提供一种所述呋喃磺酸类化合物在制备抗血栓或抗血小板聚集的药物中的应用。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明的第一个方面是提供了一种呋喃磺酸类化合物，通式如式I所示：
Figure BDA0002545631250000021
其中，R1、R2、R3各自独立的选自氢、羟基、甲氧基，R1、R2、R3不同时为氢。
优选的，所述呋喃磺酸类化合物为以下结构中的一种：
化合物Pha-2*：R1＝H，R2＝OH，R3＝H；
化合物Pha-3*：R1＝OCH3，R2＝H，R3＝H；
化合物Pha-4*：R1＝H，R2＝OCH3，R3＝H；
化合物Pha-5*：R1＝OH，R2＝OH，R3＝H；
化合物Pha-6*：R1＝OCH3，R2＝OH，R3＝H；
化合物Pha-7*/8*：R1＝OH，R2＝OCH3，R3＝H；
化合物Pha-9*：R1＝OCH3，R2＝OCH3，R3＝H；
化合物Pha-10*：R1＝OCH3，R2＝H，R3＝OCH3。
所述呋喃磺酸类化合物是从地龙提取物中分离制备得到。
本发明的第二个方面提供了一种所述呋喃磺酸类化合物的制备方法，包括以下步骤：
将地龙干燥体剪碎后用亲水性溶剂浸泡提取，过滤、减压蒸馏，得到浸膏，用有机溶剂萃取，得到有机相部分，经硅胶柱层析，洗脱液减压浓缩后获得粗品I、II、III、IV；取粗品II和III进行凝胶色谱分离，以甲醇-水溶液进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得到8个组分记为Fr.1-Fr.8；
经LC-MS跟踪，发现Fr.4为主要收集部位，记为粗品Fr.4V；取粗品Fr.4V硅胶拌样，经干燥后装入反相C18中压色谱柱，用30％-75％的乙腈-水溶液进行洗脱，流速为30mL/min，经LC-MS跟踪将40％-50％段收集液经减压蒸馏浓缩得粗品，将粗品硅胶拌样，经干燥后装入反相C18中压色谱柱，用36％乙腈-水溶液进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得到5个组分记为Fr.4V-1-Fr.4V-5，其中Fr.4V-3通过HPLC制备色谱(21.2×250mm，5μm)，其中流速1mL/min，进样量40μL，流动相35％-40％乙腈-水溶液，检测波长为210nm，收集保留时间为16.25min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-2，收集保留时间为17.50min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-3，收集保留时间为19.17min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-4；
经LC-MS跟踪，发现Fr.5为主要收集部位，记为粗品Fr.5V；取粗品Fr.5V硅胶拌样，经干燥后装入反相C18中压色谱柱，用30％-75％的乙腈-水溶液进行洗脱，流速为30mL/min，经LC-MS跟踪将50％-60％段收集液经减压蒸馏浓缩得粗品；将粗品硅胶拌样，经干燥后装入反相C18中压色谱柱，用50％乙腈-水溶液进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得到7个组分记为Fr.5V-1-Fr.5V-7，其中Fr.5V-3及Fr.5V-4通过HPLC制备色谱(21.2×250mm，5μm)，其中流速1mL/min，进样量40μL，流动相30％-35％乙腈-水溶液，检测波长为210nm，收集保留时间为13.23min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-5，收集保留时间为14.20min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-6，收集保留时间为15.10min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-7，收集保留时间为16.45min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-8；
经LC-MS跟踪，发现Fr.6为主要收集部位，记为粗品Fr.6V；取粗品Fr.6V硅胶拌样，经干燥后装入反相C18中压色谱柱，用30％-75％的乙腈-水溶液进行洗脱，流速为30mL/min，经LC-MS跟踪将60％-75％段收集液经减压蒸馏浓缩得粗品，将粗品硅胶拌样，经干燥后装入反相C18中压色谱柱，用50％～70％乙腈-水溶液进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得到5个组分记为Fr.6V-1-Fr.6V-5，其中Fr.6V-4及Fr.6V-5通过HPLC制备色谱(21.2×250mm，5μm)，其中流速1mL/min，进样量40μL，流动相45％-50％乙腈-水溶液，检测波长为210nm，收集保留时间为17.15min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-9，收集保留时间为18.35min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-10。
所述地龙干燥体为参环毛蚓干燥体、通俗环毛蚓干燥体、威廉环毛蚓干燥体或栉盲环毛蚓干燥体中的至少一种。
所述亲水性溶剂为甲醇、乙醇，优选乙醇。
所述地龙干燥体溶于亲水性溶剂的浓度为0.15～0.3g/mL，优选为0.2g/mL。
所述浸泡提取的次数为1～5次，优选为2～3次；时间为12～48小时，优选为24～36小时。
所述有机溶剂为甲醇、乙醇、石油醚、乙酸乙酯中的至少一种，优选甲醇、石油醚。
所述硅胶柱层析的洗脱液为二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲醇中的至少一种，优选为二氯甲烷、甲醇的混合液，二氯甲烷、甲醇的体积比为100:1～25:1。
所述凝胶色谱为Sephadex LH-20、Sephadex G15或Sephadex G50中的一种，优选为Sephadex LH-20。
所述甲醇-水溶液比例为45％～80％。
本发明的第三个方面提供了一种所述呋喃磺酸类化合物在制备抗血栓或抗血小板聚集的药物中的应用。
所述呋喃磺酸类化合物通式如式I所示：
Figure BDA0002545631250000041
其中，R1、R2、R3各自独立的选自氢、羟基、甲氧基。
所述呋喃磺酸类化合物为以下结构中的一种：
化合物Pha-1：R1＝H，R2＝H，R3＝H；
化合物Pha-2*：R1＝H，R2＝OH，R3＝H；
化合物Pha-3*：R1＝OCH3，R2＝H，R3＝H；
化合物Pha-4*：R1＝H，R2＝OCH3，R3＝H；
化合物Pha-5*：R1＝OH，R2＝OH，R3＝H；
化合物Pha-6*：R1＝OCH3，R2＝OH，R3＝H；
化合物Pha-7*/8*：R1＝OH，R2＝OCH3，R3＝H；
化合物Pha-9*：R1＝OCH3，R2＝OCH3，R3＝H；
化合物Pha-10*：R1＝OCH3，R2＝H，R3＝OCH3。
所述抗血栓或抗血小板聚集的药物是以本发明的呋喃磺酸类化合物作为活性成分组成的药物或者药用组合物，包括与药用载体组合，用于制备抗血栓或抗血小板聚集相关的药物；可通过口服、非肠道、脑内直接给药、鼻腔脑靶向给药、基因工程法、受体介导转运法给药或其它局部途径给药；给药剂型可以是片剂(分散片、含片、口崩片、缓释片)、颗粒剂、丸剂、胶囊剂、乳剂、溶液、悬浮液、注射剂、滴注剂、粉针剂或气雾剂等药学上可接受的剂型。
本发明的呋喃磺酸类化合物对血小板聚集、FeCl3诱导的小鼠颈总动脉血栓以及角叉菜胶诱导的小鼠尾部血栓聚集有显著的抑制作用，故可用于制备抗血栓及抗血小板聚集药物。
优选的，本发明还公开了一种呋喃磺酸类化合物Pha-1在制备抗血栓或抗血小板聚集的药物中的应用。
由于采用上述技术方案，本发明具有以下优点和有益效果：
本发明提供的呋喃磺酸类化合物是从地龙中分离得到，地龙具有较长时间的用药历史，常年在治疗和预防心脑血管疾病有着巨大的作用和效果，且分布广泛，资源丰富。研究发现此化合物可用作潜在的抗血栓及抗血小板聚集药物，有望开发为治疗脑血栓及中风的药物，对开发传统中药新的治疗领域具有极大的意义。
本发明的呋喃磺酸类化合物对二磷酸腺苷(ADP)、阿司匹林(AA)和胶原诱导的血小板聚集有抑制作用，对FeCl3诱导的小鼠颈总动脉血栓形成以及角叉菜胶诱导小鼠血栓形成有抑制作用，故可用于抗血栓及抗血小板聚集药物。
附图说明
图1为本发明实施例1～4制备的化合物Pha-1～Pha-10对ADP(图1A)、AA(图1B)和胶原诱导的血小板聚集(图1C)的影响示意图。
图2为本发明实施例1制备的化合物Pha-1对FeCl3诱导的小鼠颈动脉血流的影响示意图。
图3为本发明实施例1制备的化合物Pha-1对角叉菜胶诱导的小鼠尾部血栓形成的影响示意图；其中，图3A为72小时内Pha-1影响角叉菜胶诱导的小鼠尾部血栓形成实物图，图3B为72小时内Pha-1影响角叉菜胶诱导的小鼠尾部血栓长度示意图。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明，下面结合优选实施例对本发明做进一步的说明。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围。
实施例1
呋喃磺酸类化合物Pha-1的制备方法：
1.药材与试剂
(1)药材：地龙干燥体，购于广西省。
(2)试剂：甲醇(分析纯及色谱纯)，乙腈(分析纯及色谱纯)，乙醇(分析纯)，丙酮(分析纯)，乙酸乙酯(分析纯)，二氯甲烷(分析纯)，超纯水。
2.具体分离步骤：
(1)取地龙干燥体50Kg，经干燥剪碎后加入250L乙醇室温浸泡提取，每次提取24h，共提取3次，然后过滤，滤液经减压蒸馏回收溶剂，得到浸膏。
(2)取上述浸膏用甲醇、石油醚分别进行萃取(甲醇：25L，石油醚：25L)萃取2-3次，合并有机相，得到有机相溶解部分。
(3)取上述有机相溶解部分硅胶(薄层层析硅胶)拌样，经干燥后装柱，其中样品与硅胶比例为(1:2)，用二氯甲烷：甲醇为洗脱液进行洗脱，比例分别为100:1～25:1，其中比例为100:1的二氯甲烷:甲醇用量为10L，50:1的二氯甲烷:甲醇用量为15L，25:1的二氯甲烷:甲醇用量为15L，洗脱完毕，将相应洗脱液减压浓缩，得到粗品I、II、III、IV。
(4)取上述粗品II和III，进行凝胶(sephdex-LH-20)色谱分离，以比例为45～80％甲醇-水溶液进行洗脱，分别洗脱6h、12h，收集洗脱液，减压浓缩得到8个组分记为Fr.1-Fr.8。其中经LC-MS跟踪，发现Fr.3为主要收集部位，记为粗品Fr.3V。
(5)取上述粗品Fr.3V硅胶拌样，经干燥后装入反相C18中压色谱柱，用30％-75％的乙腈-水溶液进行洗脱，流速为30mL/min，分别收集30％-40％段、40％-50％段、50％-60％段、60％-75％段。其中经LC-MS跟踪，将30％-40％段收集液经减压蒸馏浓缩得粗品。将粗品硅胶拌样，经干燥后装入反相C18中压色谱柱，用36％乙腈-水溶液进行洗脱，得到呋喃磺酸类化合物Pha-1(JACOB G.BUNDY,EVA M.LENZ,NIGEL J.BAILEY,NICHOLSON,and HUIRUTANG etc.Metabonomic assessment of toxicity of 4-fluoroaniline,3,5-difluoroaniline and 2-fluoro-4-methylaniline to the Earthworm Eisenia Veneta(Rosa):identification of new endogenous biomarkers.Environmental Toxicologyand Chemistry,2002(21)9,1966–1972.)。
实施例2
呋喃磺酸类化合物Pha-2～呋喃磺酸类化合物Pha-4的制备
1.药材与试剂
(1)药材：地龙干燥体，购于广西省。
(2)试剂：甲醇(分析纯及色谱纯)，乙腈(分析纯及色谱纯)，乙醇(分析纯)，丙酮(分析纯)，乙酸乙酯(分析纯)，二氯甲烷(分析纯)，超纯水。
2.具体分离步骤：
(1)取地龙干燥体50Kg，经干燥剪碎后加入250L乙醇室温浸泡提取，每次提取24h，共提取3次，然后过滤，滤液经减压蒸馏回收溶剂，得到浸膏。
(2)取上述浸膏用甲醇、石油醚分别进行萃取(甲醇：25L，石油醚：25L)萃取2-3次，合并有机相，得到有机相溶解部分。
(3)取上述有机相溶解部分硅胶(薄层层析硅胶)拌样，经干燥后装柱，其中样品与硅胶比例为(1:2)，用二氯甲烷：甲醇为洗脱液进行洗脱，比例分别为100:1～25:1，其中比例为100:1的二氯甲烷:甲醇用量为10L，50:1的二氯甲烷:甲醇用量为15L，25:1的二氯甲烷:甲醇用量为15L，洗脱完毕，将相应洗脱液减压浓缩，得到粗品I、II、III、IV。
(4)取上述粗品II和III，进行凝胶(sephdex-LH-20)色谱分离，以比例为45～80％甲醇-水溶液进行洗脱，分别洗脱6h、12h，收集洗脱液，减压浓缩得到8个组分记为Fr.1-Fr.8。其中经LC-MS跟踪，发现Fr.4为主要收集部位，记为粗品Fr.4V。
(5)取上述粗品Fr.4V硅胶拌样，经干燥后装入反相C18中压色谱柱，用30％-75％的乙腈-水溶液进行洗脱，流速为30mL/min，分别收集30％-40％段、40％-50％段、50％-60％段、60％-75％段。其中经LC-MS跟踪，发现40％-50％段收集液为主要收集部位，经减压蒸馏浓缩得粗品。将粗品再进行拌样，经干燥后装入反相C18中压色谱柱，用36％乙腈-水溶液进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得到5个组分记为Fr.4V-1-Fr.4V-5，其中Fr.4V-3通过HPLC制备色谱(21.2×250mm，5μm)，其中流速1mL/min，进样量40μL，流动相35％-40％乙腈-水溶液，检测波长为210nm，收集保留时间为16.25min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-2，收集保留时间为17.50min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-3，收集保留时间为19.17min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-4。
实施例3
呋喃磺酸类化合物Pha-5～呋喃磺酸类化合物Pha-8的制备
1.药材与试剂
(1)药材：地龙干燥体，购于广西省。
(2)试剂：甲醇(分析纯及色谱纯)，乙腈(分析纯及色谱纯)，乙醇(分析纯)，丙酮(分析纯)，乙酸乙酯(分析纯)，二氯甲烷(分析纯)，超纯水。
2.具体分离步骤
(1)取地龙干燥体50Kg，经干燥剪碎后加入250L乙醇室温浸泡提取，每次提取24h，共提取3次，然后过滤，滤液经减压蒸馏回收溶剂，得到浸膏。
(2)取上述浸膏用甲醇、石油醚分别进行萃取(甲醇：25L，石油醚：25L)萃取2-3次，合并有机相，得到有机相溶解部分。
(3)取上述有机相溶解部分硅胶(薄层层析硅胶)拌样，经干燥后装柱，其中样品与硅胶比例为(1:2)，用二氯甲烷：甲醇为洗脱液进行洗脱，比例分别为100:1～25:1，其中比例为100:1的二氯甲烷:甲醇用量为10L，50:1的二氯甲烷:甲醇用量为15L，25:1的二氯甲烷:甲醇用量为15L，洗脱完毕，将相应洗脱液减压浓缩，得到粗品I、II、III、IV。
(4)取上述粗品II和III，进行凝胶(sephdex-LH-20)色谱分离，以比例为45～80％甲醇-水溶液进行洗脱，分别洗脱6h、12h，收集洗脱液，减压浓缩得到8个组分记为Fr.1-Fr.8。其中经LC-MS跟踪，发现Fr.5为主要收集部位，记为粗品Fr.5V。
(5)取上述粗品Fr.5V硅胶拌样，经干燥后装入反相C18中压色谱柱，用30％-75％的乙腈-水溶液进行洗脱，流速为30mL/min，分别收集30％-40％段，40％-50％段，50％-60％段、60％-75％段。其中经LC-MS跟踪，发现50％-60％段为主要收集部位，经减压蒸馏浓缩得粗品。将粗品硅胶拌样，经干燥后装入反相C18中压色谱柱，用50％乙腈-水溶液进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得到7个组分记为Fr.5V-1-Fr.5V-7，其中Fr.5V-3及Fr.5V-4通过HPLC制备色谱(21.2×250mm，5μm)，其中流速1mL/min，进样量40μL，流动相30％-35％乙腈-水溶液，检测波长为210nm，收集保留时间为13.23min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-5，收集保留时间为14.20min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-6，收集保留时间为15.10min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-7，收集保留时间为16.45min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-8。
实施例4
呋喃磺酸类化合物Pha-9～呋喃磺酸类化合物Pha-10的制备
1.药材与试剂
(1)药材：地龙干燥体，购于广西省。
(2)试剂：甲醇(分析纯及色谱纯)，乙腈(分析纯及色谱纯)，乙醇(分析纯)，丙酮(分析纯)，乙酸乙酯(分析纯)，二氯甲烷(分析纯)，超纯水。
2.具体分离步骤
(1)取地龙干燥体50Kg，经干燥剪碎后加入250L乙醇室温浸泡提取，每次提取24h，共提取3次，然后过滤，滤液经减压蒸馏回收溶剂，得到浸膏。
(2)取上述浸膏用甲醇、石油醚分别进行萃取(甲醇：25L，石油醚：25L)萃取2-3次，合并有机相，得到有机相溶解部分。
(3)取上述有机相溶解部分硅胶(薄层层析硅胶)拌样，经干燥后装柱，其中样品与硅胶比例为(1:2)，用二氯甲烷：甲醇为洗脱液进行洗脱，比例分别为100:1～25:1，其中比例为100:1的二氯甲烷:甲醇用量为10L，50:1的二氯甲烷:甲醇用量为15L，25:1的二氯甲烷:甲醇用量为15L，洗脱完毕，将相应洗脱液减压浓缩，得到粗品I、II、III、IV。
(4)取上述粗品II和III，进行凝胶(sephdex-LH-20)色谱分离，以比例为45～80％甲醇-水溶液进行洗脱，分别洗脱6h、12h，收集洗脱液，减压浓缩得到8个组分记为Fr.1-Fr.8。其中经LC-MS跟踪，发现Fr.6为主要收集部位，记为粗品Fr.6V。
(5)取上述粗品Fr.6V硅胶拌样，经干燥后装入反相C18中压色谱柱，用30％-75％的乙腈-水溶液进行洗脱，流速为30mL/min，分别收集30％-40％段，40％-50％段，50％-60％段、60％-75％段。其中经LC-MS跟踪，发现60％-75％段为主要收集部位，经减压蒸馏浓缩得粗品。将粗品硅胶拌样，经干燥后装入反相C18中压色谱柱，用50％～70％乙腈-水溶液进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得到5个组分记为Fr.6V-1-Fr.6V-5，其中Fr.6V-4及Fr.6V-5通过HPLC制备色谱(21.2×250mm，5μm)，其中流速1mL/min，进样量40μL，流动相45％-50％乙腈-水溶液，检测波长为210nm，收集保留时间为17.15min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-9，收集保留时间为18.35min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-10。
实施例1～4制备的化合物的结构鉴定
实施例1-4所得纯品化合物均为淡黄色油状物，溶于甲醇，根据ESI-MS、1D NMR及2D NMR等核磁图谱，鉴定出实施例1-4所得纯品化合物结构，且Pha-2～Pha-10为新的呋喃磺酸类化合物，其具体数据归属见表1和2。
表1：式I所示化合物的1H NMR(500MHz,CD3OD)数据及其归属
Figure BDA0002545631250000091
Figure BDA0002545631250000101
表2：式I所示化合物的13C NMR(125MHz,CD3OD)数据及其归属
Figure BDA0002545631250000102
*表示新化合物。
实施例5
实施例1～4制备的呋喃磺酸类化合物的抗血小板聚集实验包括以下步骤：
第一步，通过兔心脏采取新鲜全血，用3.8％枸橼酸钠溶液(体积比1:9)抗凝。
第二步，取枸橼酸钠抗凝全血，以800rpm离心10min，以3800rpm离心10min，每次离心取上清，各得富血小板血浆(Platelet Rich Plasma，PRP)及贫血小板血浆(PlateletPoor Plasma，PPP)，PRP血小板最终浓度以PPP调整至5×105μL-1。
第三步，采用比浊法在96孔板中测定血小板的聚集率，按以下步骤进行实验(每组各设3个复孔，每孔加入PPP或PRP各200μL)：
(1)：分组与给药的方案如下：贫血小板对照组(PPP)：200μL PPP；富血小板对照组(Vehicle)：200μL PRP+1μL DMSO；阳性药组(Ticagrelor或Aspirin)：200μL PRP+1μLTicagrelor(终浓度为10μM)或Aspirin(终浓度为3μM)；呋喃磺酸类化合物组(Pha-1～Pha-10)：200μL PRP+1μL Pha-1～Pha-10(终浓度为400μM)；
(2)血小板聚集前吸光度数值的测量：将96孔板置于37℃1000rpm条件下温育5min，在酶标仪中测定波长为570nm时的血小板聚集前的吸光度值；
(3)血小板聚集诱导剂的加入：加入诱导剂二磷酸腺苷ADP(终浓度为10μM)或阿司匹林AA(终浓度为30μM)或胶原溶液(终浓度为1μg/mL)；
(4)温育：为使诱导剂与体系混合均匀，用镊子向每孔中加入搅拌子，整个体系在37℃1000rpm条件下温育5min后，再用镊子小心取出搅拌子；
(5)血小板聚集后吸光度数值的测量：在酶标仪中测定570nm下的血小板聚集后的吸光度值；
(6)计算血小板的聚集率，计算公式为：
血小板聚集率(％)＝(聚集前的血小板吸光度值–聚集后的血小板吸光度值)/(聚集前的血小板吸光度值–贫血小板的吸光度值)×100％。
第四步，血小板聚集实验结果
图1为本发明实施例1～4制备的化合物Pha-1～Pha-10对ADP(图1A)、AA(图1B)和胶原诱导的血小板聚集(图1C)的影响示意图。从图中可以看出，替卡格雷Ticagrelor(10μM)组、Pha-1～Pha-10(400μM)组均能不同程度降低ADP诱导的血小板聚集率，且与Vehicle组相比具有显著性差异(*P<0.05)(图1A)，Pha-10效果最好。Aspirin(3μM)组、Pha-1～Pha-10组均能不同程度降低AA和胶原诱导的血小板聚集率，且与Vehicle组相比具有显著性差异(*P<0.05)；Pha-1～Pha-10组与Aspirin组相比不存在显著性差异(图1B和图1C)，Pha-1和Pha-3效果最好。该结果表明，实施例1～4制备的呋喃磺酸类化合物具有抑制ADP、AA和胶原诱导的血小板聚集的药理作用，可以作为制备抗血小板聚集的药物。
实施例6
实施例1～4制备的呋喃磺酸类化合物抗FeCl3诱导的小鼠颈总动脉血栓形成，包括以下步骤：
第一步，动物分组与给药：将30只C57BL/6小鼠随机分为5组(每组6只)：对照组、模型组、Ticagrelor组、Pha-1低剂量组(Pha-1-L)和Pha-1高剂量组(Pha-1-H)。造模前30min，对照组和模型组小鼠均腹腔注射给予含5％丙二醇的生理盐水；Ticagrelor组小鼠腹腔注射给予剂量为10mg/kg的Ticagrelor；Pha-1低剂量组和Pha-1高剂量组小鼠分别腹腔注射给予5mg/kg和10mg/kg的Pha-1。
第二步，模型构建：小鼠腹腔注射混合麻醉剂盐酸氯胺酮(100mg/kg)和甲苯噻嗪(10mg/kg)后，仰卧固定，去除颈部和胸部上部的毛发并用75％酒精消毒，取颈正中切口，切开皮肤，钝性分离肌肉，分离、暴露左侧颈总动脉，除对照组外，其余各组均用10％FeCl3浸泡后的1mm×2mm的滤纸覆于颈动脉上下两侧。
第三步，指标测定：采用配备有0.5mm的血流探头的TS420血流量仪实时记录小鼠颈总动脉60min内血栓形成的曲线。
第四步，抗FeCl3诱导的小鼠颈总动脉血栓形成结果：
图2为本发明实施例1制备的化合物Pha-1对FeCl3诱导的小鼠颈动脉血流的影响示意图。从图中可以看出，造模后，小鼠颈总动脉血流速度随着时间不断下降，到20min后，血流为0mL/min；Pha-1-H组(10mg/kg)和阳性药Ticagrelor(10mg/kg)组血流速度也会随时间而减少，但血流速度在整个实验时间内均不会阻断，且血流速度维持在初始血流的60％左右；Pha-1-L(5mg/kg)组血流变化与模型组相类似，在20min后血流速度为0mL/min(图2)。实验结果说明，本发明制备的呋喃磺酸类化合物在10mg/kg剂量下具有良好的抑制血栓形成的药理活性，可以作为制备抗血栓的药物。
实施例7
实施例1～4制备的呋喃磺酸类化合物抗角叉菜胶诱导的小鼠尾部血栓形成，包括以下步骤：
第一步，动物分组：将50只ICR小鼠随机分为5组(每组10只)：对照组、模型组、Ticagrelor组、Pha-1低剂量组(Pha-1-L)和Pha-1高剂量组(Pha-1-H)。
第二步，小鼠尾部血栓模型构建：根据文献已报道的方法(余华军等，麒麟菜多肽对血小板聚集及角叉菜胶诱导诱导的小鼠尾部血栓形成的影响，解放军医学杂志，2018，43(2)96-100)，用生理盐水配制0.5％的角叉菜胶溶液，除对照组外，其余各组均尾静脉注射50μL的角叉菜胶溶液。
第三步，动物给药：造模30min后按以下方案给予小鼠不同的药物：对照组和模型组小鼠均腹腔注射给予含5％丙二醇的生理盐水；Ticagrelor组小鼠腹腔注射给予剂量为10mg/kg的Ticagrelor；Pha-1低剂量和Pha-1高剂量组小鼠分别腹腔注射给予5mg/kg和10mg/kg的Pha-1。给药后将小鼠置于22±2℃的恒温环境，自由饮水，摄食。
第四步，测定指标：于造模后24h、48h和72h分别用游标卡尺测量小鼠尾部长度及尾部血栓形成长度，血栓形成长度占尾部总长度百分比即为血栓形成相对比例(％)。
第五步，抗角叉菜胶诱导的小鼠尾部血栓形成结果：
图3为本发明实施例1制备的化合物Pha-1对角叉菜胶诱导的小鼠尾部血栓形成的影响示意图；其中，图3A为72小时内Pha-1影响角叉菜胶诱导的小鼠尾部血栓形成实物图，图3B为72小时内Pha-1影响角叉菜胶诱导的小鼠尾部血栓长度示意图。从图中可以看出，Pha-1低剂量、Pha-1高剂量和阳性药Ticagrelor(10mg/kg)均能不同程度减少小鼠尾巴血栓形成的长度；Pha-1高剂量(10mg/kg)和Ticagrelor(10mg/kg)组可显著减小小鼠尾部血栓形成的长度，且与模型组相比存在统计学差异，而Pha-1高剂量的抗血栓形成的作用与阳性药组相比没有显著性差异(**P<0.01，***P<0.005)。实验结果表明，本发明制备的呋喃磺酸类化合物具有效抑制角叉菜胶诱导小鼠血栓形成的作用。
以上所述仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专利的技术人员在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述提示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明方案的范围内。

Claims (10)

1.一种呋喃磺酸类化合物，其特征在于，通式如式I所示：
Figure FDA0002545631240000011
其中，R1、R2、R3各自独立的选自氢、羟基、甲氧基，R1、R2、R3不同时为氢。
2.根据权利要求1所述的呋喃磺酸类化合物，其特征在于，所述呋喃磺酸类化合物为以下结构中的一种：
化合物Pha-2*：R1＝H，R2＝OH，R3＝H；
化合物Pha-3*：R1＝OCH3，R2＝H，R3＝H；
化合物Pha-4*：R1＝H，R2＝OCH3，R3＝H；
化合物Pha-5*：R1＝OH，R2＝OH，R3＝H；
化合物Pha-6*：R1＝OCH3，R2＝OH，R3＝H；
化合物Pha-7*/8*：R1＝OH，R2＝OCH3，R3＝H；
化合物Pha-9*：R1＝OCH3，R2＝OCH3，R3＝H；
化合物Pha-10*：R1＝OCH3，R2＝H，R3＝OCH3。
3.根据权利要求2所述的呋喃磺酸类化合物，其特征在于，所述呋喃磺酸类化合物是从地龙提取物中分离制备得到。
4.一种权利要求1至3任一项所述的呋喃磺酸类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将地龙干燥体剪碎后用亲水性溶剂浸泡提取，过滤、减压蒸馏，得到浸膏，用有机溶剂萃取，得到有机相部分，经硅胶柱层析，洗脱液减压浓缩后获得粗品I、II、III、IV；取粗品II和III进行凝胶色谱分离，以甲醇-水溶液进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得到8个组分记为Fr.1-Fr.8；
经LC-MS跟踪，发现Fr.4为主要收集部位，记为粗品Fr.4V；取粗品Fr.4V硅胶拌样，经干燥后装入反相C18中压色谱柱，用30％-75％的乙腈-水溶液进行洗脱，流速为30mL/min，经LC-MS跟踪将40％-50％段收集液经减压蒸馏浓缩得粗品，将粗品硅胶拌样，经干燥后装入反相C18中压色谱柱，用36％乙腈-水溶液进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得到5个组分记为Fr.4V-1-Fr.4V-5，其中Fr.4V-3通过HPLC制备色谱，其中流速1mL/min，进样量40μL，流动相35％-40％乙腈-水溶液，检测波长为210nm，收集保留时间为16.25min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-2，收集保留时间为17.50min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-3，收集保留时间为19.17min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-4；
经LC-MS跟踪，发现Fr.5为主要收集部位，记为粗品Fr.5V；取粗品Fr.5V硅胶拌样，经干燥后装入反相C18中压色谱柱，用30％-75％的乙腈-水溶液进行洗脱，流速为30mL/min，经LC-MS跟踪将50％-60％段收集液经减压蒸馏浓缩得粗品；将粗品硅胶拌样，经干燥后装入反相C18中压色谱柱，用50％乙腈-水溶液进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得到7个组分记为Fr.5V-1-Fr.5V-7，其中Fr.5V-3及Fr.5V-4通过HPLC制备色谱，其中流速1mL/min，进样量40μL，流动相30％-35％乙腈-水溶液，检测波长为210nm，收集保留时间为13.23min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-5，收集保留时间为14.20min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-6，收集保留时间为15.10min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-7，收集保留时间为16.45min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-8；
经LC-MS跟踪，发现Fr.6为主要收集部位，记为粗品Fr.6V；取粗品Fr.6V硅胶拌样，经干燥后装入反相C18中压色谱柱，用30％-75％的乙腈-水溶液进行洗脱，流速为30mL/min，经LC-MS跟踪将60％-75％段收集液经减压蒸馏浓缩得粗品，将粗品硅胶拌样，经干燥后装入反相C18中压色谱柱，用50％～70％乙腈-水溶液进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得到5个组分记为Fr.6V-1-Fr.6V-5，其中Fr.6V-4及Fr.6V-5通过HPLC制备色谱，其中流速1mL/min，进样量40μL，流动相45％-50％乙腈-水溶液，检测波长为210nm，收集保留时间为17.15min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-9，收集保留时间为18.35min的洗脱液浓缩得到化合物Pha-10。
5.根据权利要求4所述的呋喃磺酸类化合物的制备方法，其特征在于，所述地龙干燥体为参环毛蚓干燥体、通俗环毛蚓干燥体、威廉环毛蚓干燥体或栉盲环毛蚓干燥体中的至少一种；
所述亲水性溶剂为甲醇、乙醇。
6.根据权利要求4所述的呋喃磺酸类化合物的制备方法，其特征在于，所述地龙干燥体溶于亲水性溶剂的浓度为0.15～0.3g/mL；
所述浸泡提取的次数为1～5次，时间为12～48小时。
7.根据权利要求4所述的呋喃磺酸类化合物的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、石油醚、乙酸乙酯中的至少一种。
8.根据权利要求4所述的呋喃磺酸类化合物的制备方法，其特征在于，所述硅胶柱层析的洗脱液为二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲醇中的至少一种；
所述凝胶色谱为Sephadex LH-20、Sephadex G15或Sephadex G50中的一种；
所述甲醇-水溶液比例为45％～80％。
9.一种呋喃磺酸类化合物在制备抗血栓或抗血小板聚集的药物中的应用，其特征在于，所述呋喃磺酸类化合物通式如式I所示：
Figure FDA0002545631240000031
其中，R1、R2、R3各自独立的选自氢、羟基、甲氧基。
10.根据权利要求1所述的呋喃磺酸类化合物在制备抗血栓或抗血小板聚集的药物中的应用，其特征在于，所述呋喃磺酸类化合物为以下结构中的一种：
化合物Pha-1：R1＝H，R2＝H，R3＝H；
化合物Pha-2*：R1＝H，R2＝OH，R3＝H；
化合物Pha-3*：R1＝OCH3，R2＝H，R3＝H；
化合物Pha-4*：R1＝H，R2＝OCH3，R3＝H；
化合物Pha-5*：R1＝OH，R2＝OH，R3＝H；
化合物Pha-6*：R1＝OCH3，R2＝OH，R3＝H；
化合物Pha-7*/8*：R1＝OH，R2＝OCH3，R3＝H；
化合物Pha-9*：R1＝OCH3，R2＝OCH3，R3＝H；
化合物Pha-10*：R1＝OCH3，R2＝H，R3＝OCH3。
CN202010559708.6A 2020-06-18 2020-06-18 一种呋喃磺酸类化合物及其制备方法与应用 Active CN111808052B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010559708.6A CN111808052B (zh) 2020-06-18 2020-06-18 一种呋喃磺酸类化合物及其制备方法与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010559708.6A CN111808052B (zh) 2020-06-18 2020-06-18 一种呋喃磺酸类化合物及其制备方法与应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111808052A true CN111808052A (zh) 2020-10-23
CN111808052B CN111808052B (zh) 2023-07-28

Family

ID=72845202

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010559708.6A Active CN111808052B (zh) 2020-06-18 2020-06-18 一种呋喃磺酸类化合物及其制备方法与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111808052B (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS635088A (ja) * 1986-06-25 1988-01-11 Zeria Shinyaku Kogyo Kk 新規なフラン化合物及びその製造法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS635088A (ja) * 1986-06-25 1988-01-11 Zeria Shinyaku Kogyo Kk 新規なフラン化合物及びその製造法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JACOB G. BUNDY等: "METABONOMIC ASSESSMENT OF TOXICITY OF 4-FLUOROANILINE, 3,5-DIFLUOROANILINE AND 2-FLUORO-4-METHYLANILINE TO THE EARTHWORM EISENIA VENETA (ROSA): IDENTIFICATION OF NEW ENDOGENOUS BIOMARKERS", 《ENVIRONMENTAL TOXICOLOGY AND CHEMISTRY》 *
TAO-FANG CHENG等: ""Investigation of the chemical compounds in Pheretima aspergillum (E. Perrier) using a combination of mass spectral molecular networking and unsupervised substructure annotation topic modeling together with in silico fragmentation prediction"", 《JOURNAL OF PHARMACEUTICAL AND BIOMEDICAL ANALYSIS》 *
刘协等: "蚯蚓提取物对血栓形成和血小板聚集作用的实验研究", 《江苏预防医学》 *
马恩龙等: "溶栓1号抗血小板聚集及抗血栓形成作用", 《沈阳药科大学学报》 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN111808052B (zh) 2023-07-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Sun et al. Phenolic constituents, pharmacological activities, quality control, and metabolism of Dracaena species: A review
Xue et al. Comparative study on the anti-inflammatory and immune suppressive effect of Wilforlide A
CN100577677C (zh) 络石藤总木脂素提取物,提取方法及该提取物和其中有效成分的医药用途
CN101721400A (zh) 阿魏酸在增加某些药物的药效作用及其用途
CN113150049B (zh) 青钱柳的提取物及其抗痛风和降尿酸应用
CN109912551A (zh) 桉烷倍半萜类化合物及其药物组合物和制备方法与应用
Lu et al. Nitidine chloride, a benzophenanthridine alkaloid from Zanthoxylum nitidum (Roxb.) DC., exerts multiple beneficial properties, especially in tumors and inflammation-related diseases
Jin et al. Study the mechanism of peimisine derivatives on NF‐κB inflammation pathway on mice with acute lung injury induced by lipopolysaccharide
CN102180850A (zh) 一类麦冬中高异黄酮类化合物及制备方法和用途
CN1312253A (zh) 两头尖提取物的制备工艺和用途
CN112047954B (zh) 一种环烯醚萜类化合物及其制备方法和应用
CN103145792B (zh) 紫菀酮型三萜及其药物组合物和其制备方法与应用
CN111808052A (zh) 一种呋喃磺酸类化合物及其制备方法与应用
CN113509459A (zh) 黄烷类化合物在制备抗肿瘤的药物中的用途
CN106008641B (zh) 睡茄交酯类化合物及提取方法及用途
CN111995645B (zh) 一种苯丙素类化合物及其制备方法和应用
CN109810153B (zh) 芳香取代葡萄糖类化合物及其药物组合物的制备方法与镇痛应用
CN110563688B (zh) 具有抗补体活性的苯并吡喃类化合物及其用途
CN109970757B (zh) 一种新鱼藤酮型黄酮类化合物及其制备方法和用途
CN112047826B (zh) 一种愈创木烷型倍半萜类化合物及其制备方法和应用
CN110522776A (zh) 一种黄槿中抗肿瘤有效部位的制备方法及应用
CN106420850B (zh) 银杏叶组合物及其在制备舒血宁注射液中的应用
CN106188179B (zh) 具有止泻作用的尖叶假龙胆提取物、化合物及药物组合物
CN104758333B (zh) 徐长卿c21甾体提取物及其制备方法和用途
CN102675330B (zh) 一种竹叶兰中的呋喃黄酮类化合物、制备方法及应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant