CN111781223A - 一种原位观察真菌菌丝形态的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种原位观察真菌菌丝形态的方法，属于真菌菌丝生长研究领域。该方法包括以下步骤：在透气容器底部均匀铺底层土，在底土上层撒播真菌菌种；在菌种上方贴压透明探测管，所述探测管的直径大于根系监测系统的扫描头最大直径，所述容器上设置有开口，使得探测管至少有一端是开放的开口，并且能够穿过容器与外界相连；在探测管周围及上面铺上层土；在菌丝生长过程中，将根系监测系统的扫描头插入探测管内，对探测管壁周围的菌丝进行扫描观察。本发明实现了对菌丝原位生长状况进行可视化分析，观察中不需取样、制样、规范放置样品等。操作过程精细度低，步骤简单，易于完成，并可定点、连续观察菌丝在整个生长季的活体动态变化。
Description
技术领域
本发明属于真菌菌丝生长研究领域，具体地，涉及一种原位观察真菌尤其是竹荪菌丝形态的方法。
背景技术
在自然环境生态条件下，竹荪主要靠孢子繁殖，孢子借助于昆虫的传播，在适宜的条件下萌发，经过菌丝体阶段，形成子实体，再产生孢子的整个发育过程。人工驯化后，生活史从组织分离获得菌种开始，覆土栽培后经过菌丝体阶段，形成子实体，再组织分离制得菌种的过程。不管自然环境还是人工驯化后生长过程，菌丝体阶段都是其生活史中一个重要的生长阶段，是其营养生长的主要模式。菌丝形态是反应竹荪生长情况最直观的参考依据，其中菌丝形态变化又是竹荪菌丝生长状态的重要依据。由于受土壤不可观察性的限制，给覆土食用菌菌丝生态学的研究带来一定的困难。
目前，应用低温扫描电子显微镜对双胞蘑菇子实体原基的超微结构特征进行观察，但这需要配套的制样技术，对技术人员操作水平要求较高。具体地，对样品的处理，需要选取具有大量子实体原基的约5mm直径大小的覆土，用高导电胶固定到载物台上，然后在低温离子潜射仪中，喷金镀膜，镀膜后置于低温电子显微镜内，在-170℃的低温状态下观察照相，实验过程精细，操作水平要求高，取样过程中，破坏了正常的生长环境。
发明内容
为了解决上述技术问题中的至少一个，本发明提供了一种原位观察真菌菌丝形态的方法，包括以下步骤：
(1)在顶部开口的容器底部均匀铺底层土，在底土上层撒播真菌菌种；
(2)在菌种上方贴压ROOT-700根系监测系统配套透明探测管，所述容器上设置有开口，使得所述探测管至少有一端能够通过所述开口与外界相连；
(3)在探测管周围及上面铺上层土；
(4)在菌丝生长过程中，将ROOT-700根系监测系统的扫描头插入探测管内，对探测管壁周围的菌丝进行扫描观察。
在本发明中，所述真菌菌丝为竹荪菌丝。
在本发明中，所述底层土与上层土可以相同也可以不同。底层土和上层土可以是任意类型的土壤。当然，本领域技术人员知道，可能用更有利于真菌尤其是竹荪生长的土壤，例如腐殖土。也可以是人工合成或混制作的各类土壤，本发明对土壤没有任何限制。
在本发明的一些优选实施方案中，所述底层土为腐殖土和辅料。
在本发明的一些优选实施方案中，所述上层土为覆土和辅料。
在本发明的一些实施方案中，所述容器选自方形容器、圆形容器。
在本发明的一些实施方案中，所述容器的侧面和/或底面开有透气孔。在本发明的一些优选实施方案中，所述容器的侧面和底面均开有透气孔。在本发明的一个具体实施方案中，所述容器为有孔框。
在本发明的一些实施方案中，所述透明探测管能够固定在所述容器上。
本发明的有益效果
本发明相对于现有技术，具有以下有益效果：
现有技术低温扫描电镜观察菌丝体生长，需要破坏菌丝体的生长环境，观察一次样，取一次样，制一次样，实验过程严格精细，操作水平要求高。利用本发明，实验方法中不需取样，制样，规范放置样品，操作过程精细度低，步骤简单。
本发明实现了对覆土竹荪-竹荪菌丝体在土壤中生长状况的原位观察，所需材料易于准备，操作过程简单，初期准备工作完成后，后期观察图像不需取样、制样，可根据研究人员需求随机扫描探测管，完成图像采集。
附图说明
图1示出了一种适用于ROOT-700根系监测系统监测菌丝生长的装置示意图。
图2示出了探测管贴压菌种图。
图3示出了菌种覆培养料图。
图4示出覆土埋住扫描管。
图5示出了利用本发明方法观察到的菌种萌发绒毛菌丝。
图6示出了利用本发明方法观察到的羽毛状菌丝。
图7示出了利用本发明方法观察到的菌丝在土壤中蔓延。
图8示出了利用本发明方法观察到的白色菌索1。
图9示出了利用本发明方法观察到的白色菌索2。
具体实施方式
为了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。
实施例
以下例子在此用于示范本发明的优选实施方案。本领域内的技术人员会明白，下述例子中披露的技术代表发明人发现的可以用于实施本发明的技术，因此可以视为实施本发明的优选方案。但是本领域内的技术人员根据本说明书应该明白，这里所公开的特定实施例可以做很多修改，仍然能得到相同的或者类似的结果，而非背离本发明的精神或范围。
除非另有定义，所有在此使用的技术和科学的术语，和本发明所属领域内的技术人员所通常理解的意思相同，在此公开引用及他们引用的材料都将以引用的方式被并入。
那些本领域内的技术人员将意识到或者通过常规试验就能了解许多这里所描述的发明的特定实施方案的许多等同技术。这些等同将被包含在权利要求书中。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的仪器设备，如无特殊说明，均为实验室常规仪器设备；下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。
实施例1一种适用于ROOT-700根系监测系统监测菌丝生长的装置
如图1所示，本实施例提供一种适用于ROOT-700根系监测系统监测菌丝生长的装置，装置可以是任何容器。在使用时：
在容器底部均匀铺底层土(腐殖土和辅料)；
在底土上层撒播菌种；
在菌种上方贴压透明探测管，容器上设置有开口，使得探测管至少有一端能够穿过容器与外界相连；
在探测管周围及上面铺上层土(辅料和覆土)；
在菌丝生长过程中，将ROOT-700根系监测系统的扫描头插入探测管内，对探测管壁周围的菌丝进行扫描观察。
实施例2利用ROOT-700根系监测系统监测菌丝生长的方法
制作获得竹荪菌种(栽培种)并备好栽培辅料、腐殖土、栽培框以后，铺两层遮阳网在框体底部和周围，在底部均匀铺10cm左右腐殖土，再铺辅料，撒播完菌种后，在栽培筐菌种表面上方，框体对应两端，加工直径8cm左右的光滑圆孔，将内径7.1cm的德国ROOT-700根系监测系统透明探测管贴压在菌种表面，固定探测管(如图2)；随后铺辅料、覆土(如图3)，至覆土层高于探测管2cm左右(如图4)。预埋探测管工作完成，发菌、出菇土壤水分等生长条件管理参照竹荪常规栽培生长管理模式。
观察时，将扫描头插入预先埋在土壤中的透明根系探测管中，电脑将控制扫描头自动旋转扫描探测管壁周围的菌丝，可以扫描不同深度的菌丝图像，获得菌丝(甚至土壤颗粒)的剖面图像，完成图像采集步骤。如图5、图6、图7、图8和图9所示。
定期或不定期对菌丝生长形态进行扫描观察，每次扫描都可获得高分辨率菌丝(甚至土壤颗粒)的剖面图像，实现了对菌丝不需要破坏性的生长状况进行原位观察、可视化分析，并可定点、连续观察菌丝在整个生长季的活体动态变化。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Claims (9)
1.一种原位观察真菌菌丝形态的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）在顶部开口的容器底部均匀铺底层土，在底土上层撒播真菌菌种；
（2）在菌种上方贴压ROOT-700根系监测系统配套透明探测管，所述容器上设置有开口，使得所述探测管至少有一端能够通过所述开口与外界相连；
（3）在探测管周围及上面铺上层土；
（4）在菌丝生长过程中，将ROOT-700根系监测系统的扫描头插入探测管内，对探测管壁周围的菌丝进行扫描观察。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述真菌菌丝为竹荪菌丝。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述底层土和上层土相同。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述底层土为腐殖土和辅料。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述上层土为覆土和辅料。
6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述容器选自方形容器、圆形容器。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述容器的侧面和/或底面开有透气孔。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述容器为有孔框。
9.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述透明探测管能够固定在所述容器上。
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