CN111735945B - 胰腺肿瘤组织中CICs在制备预测胰腺癌预后生存产品中的应用 - Google Patents

胰腺肿瘤组织中CICs在制备预测胰腺癌预后生存产品中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了胰腺肿瘤组织中CICs在制备预测胰腺癌预后生存产品中的应用。本发明提供了检测胰腺癌患者胰腺癌组织中是否存在oCIC或oCIC数目的物质在制备预测胰腺癌患者预后生存率的产品中的应用；还提供了检测胰腺癌患者胰腺癌组织中是否存在TiT或TiT亚型数目的物质在制备预测胰腺癌患者预后生存率的产品中的应用；还提供了检测胰腺癌患者胰腺癌组织中MiT亚型数目的物质在制备预测胰腺癌患者预后生存率的产品中的应用；还提供了检测胰腺癌患者胰腺癌组织中是否存在T/MiT的物质在制备预测胰腺癌患者预后生存率的产品中的应用；本发明通过CICs亚型分析及计数的方法预测胰腺癌患者预后，具有显著的原创性。

Description

胰腺肿瘤组织中CICs在制备预测胰腺癌预后生存产品中的 应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，尤其涉及胰腺肿瘤组织中CICs在制备预测胰腺癌预后生存产品中的应用。
背景技术
胰腺癌是目前预后最差的恶性肿瘤之一，5年生存率低于5％，在不接受治疗的情况下中位存活时间不足6月，其中导管腺癌(PDCA)是其最常见的病理类型。胰腺癌预后不良的原因一方面由于难以早期发现，80-85％的患者首次诊断时已丧失手术切除机会,另一方面治疗耐药以及缺乏有效的个体化治疗药物也是导致患者预后不良的因素之一。因此，对于胰腺癌预后的准确预测对于患者病情判断及治疗决策制定具有重要的意义。
肿瘤组织学分级、TNM分期、肿瘤切缘、淋巴结状态等病理因素是目前公认的胰腺癌预后因素，但上述指标只能在一定程度上对患者的预后进行粗略预测。寻找灵敏有效地预测指标有赖于对于肿瘤发生发展分子机制深入了解，众多学者以肿瘤细胞的基因表达异常为出发点探寻有效的预后标记物，研究显示肿瘤组织中MUC1和间皮素(mesothelin)的表达升高能够预测患者的不良预后，并且三个肿瘤标记物(MUC1，MSLN和MUC2)联合应用的模式与经典的预后相关病理因素(肿瘤大小、组织学分级、淋巴结状态和肿瘤切缘)的联合应用模式相比较，肿瘤标志物联合应用的模式在统计学上显示出优于临床因素的趋势。尽管如此，上述基因检测结果预测患者预后的证据尚缺乏大规模临床研究的验证，尚未常规应用于临床实践。血清学检测肿瘤标记物在胰腺癌预后预测的研究和应用中也占有重要地位，包括检测肿瘤抗原CA-199、循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)以及CEAmRNA等。肿瘤抗原CA-199是目前临床最常用的与胰腺癌预后有关的肿瘤标记物，其水平增高不仅提示患者预后不良，而且在疾病的早期诊断阶段有助于疾病的筛查，是目前唯一被NCCN指南推荐的用于胰腺导管腺癌的肿瘤标记物。然而，在临床使用过程中，其假阴性及假阳性仍客观存在，约25％的患者在血清中能够检测到CA-199。尤其对于有胆管阻塞的患者而言，CA-199的预测价值显著降低。其他包括CTCs以及CEA mRNA在内的血清学肿瘤标记物检测多处于研究阶段。
综上所述，目前常规应用于临床的胰腺癌预后预测指标不仅数目有限，而且预测价值有限。仍需寻找新的肿瘤预后预测指标，肿瘤标记物的寻找不仅着眼于肿瘤细胞本身的基因表达异常，还应关注肿瘤微环境中肿瘤细胞的相互作用，在不同分子机制的层面寻找新的预后相关标记物，并将其联合使用实现提高预测效力，准确预测患者预后。
Cell-in-cells(CICs)结构是指一个或多个结构和功能上完整的活细胞存在于另外一个细胞内部，从而形成一种细胞叠套样的结构，该结构可以形成于来源相同的细胞之间(homotypic)，也可以形成于来源不同的细胞之间(heterotypic)，如肿瘤细胞和免疫细胞之间。该结构的形成能够导致内化细胞的死亡。在肿瘤组织中常见的CICs类型是肿瘤细胞之间形成同质性CICs结构，同质性CICs结构的形成可能通过筛选恶性程度更高的细胞克隆促进了肿瘤的恶性进展。
发明内容
为了预测胰腺癌患者预后生存率，本发明提供了如下技术方案。
本发明提供了检测胰腺癌患者胰腺癌组织中是否存在中A-D至少一种结构的物质在制备预测乳腺癌患者预后生存率的产品中的应用；
或，本发明提供了检测胰腺癌患者胰腺癌组织中A-D至少一种结构的数目的物质在制备预测胰腺癌患者预后生存率的产品中的应用；
A、oCIC；B、TiT亚型；C、MiT亚型；D、T/MiT亚型；
所述oCIC为CICs所有亚型；
所述CICs的亚型由TiT亚型、MiT亚型、LiT亚型和TiM亚型组成；
所述TiT亚型为肿瘤细胞吞噬肿瘤细胞形成的CICs结构；
所述MiT亚型为肿瘤细胞吞噬巨噬细胞形成的CICs结构；
所述LiT亚型为肿瘤细胞吞噬淋巴细胞形成的CICs结构；
所述TiM亚型为巨噬细胞吞噬肿瘤细胞形成的CICs结构；
所述T/MiT为由TiT和MiT这2个亚型组成；
所述T/MiT亚型的数目为TiT亚型和MiT亚型数目之和。
上述应用中，所述检测胰腺癌患者胰腺癌组织中是否存在中A-D至少一种结构的物质为检测胰腺癌患者胰腺癌组织中A-D任一种结构数目的物质。
或，所述检测胰腺癌患者胰腺癌组织中是否存在中A-D至少一种结构的物质为检测胰腺癌患者胰腺癌组织中A以及B-D中任意组合的结构数目的物质。
在实际应用中，可以先根据oCIC或其数目进行初步判断，再利用B-D所示亚型或其数目任意组合进行准确判断；也可以单独用各个亚型判断；也可以单独用oCIC判断。
上述应用中，所述物质包括为E-cadherin抗体、CD68抗体、CD45抗体和能分别结合该三个抗体的荧光抗体或荧光染料。
上述应用中，所述能分别结合该三个抗体的荧光抗体或荧光染料的荧光颜色或波长不同。
上述应用中，所述物质还包括荧光显微镜。
本发明还提供了一种预测胰腺癌患者预后生存率的产品。
本发明提供的产品，包括如下1)-4)中至少一种：
1)检测胰腺癌患者胰腺癌组织中是否存在oCIC或oCIC数目的物质；
2)检测胰腺癌患者胰腺癌组织中是否存在TiT亚型或TiT亚型数目的物质；
3)检测胰腺癌患者胰腺癌组织中是否存在MiT亚型或MiT亚型数目的物质；
4)检测胰腺癌患者胰腺癌组织中是否存在T/MiT亚型或T/MiT亚型数目的物质。
上述产品还包括：记载如下1)-7)至少一种判断标准的可读载体：
1)有oCICs的待测患者的预后生存率小于无oCICs的待测患者的预后生存率；
2)oCICs数目大于等于5的待测患者的预后生存率小于oCICs数目大于0且小于5的待测患者的预后生存率；
3)有TiT亚型的待测患者的预后生存率小于无TiT亚型的待测患者的预后生存率；
4)TiT亚型数目大于等于5的待测患者的预后生存率小于TiT亚型数目大于0且小于5的待测患者的预后生存率；
5)有MiT亚型的待测患者的预后生存率小于无MiT亚型的待测患者的预后生存率；
6)有T/MiT亚型的待测患者的预后生存率小于无T/MiT亚型的待测患者的预后生存率；
7)T/MiT数目大于等于5的待测患者的预后生存率小于T/MiT亚型数目大于0且小于5的待测患者的预后生存率。
上述检测胰腺癌患者胰腺癌组织中各个CIC亚型数目的物质和记载如下1)-7)至少一种判断标准的可读载体在制备预测胰腺癌患者预后生存率的产品中的应用也是本发明保护的范围。
上述产品为试剂盒。
本发明还提供了预测乳腺癌患者预后生存率的方法，包括如下步骤：检测胰腺癌患者胰腺癌组织中A-D至少一种结构的数目的物质；
A、oCIC；B、TiT亚型；C、MiT亚型；D、T/MiT亚型；
所述oCIC为CICs所有亚型；
所述CICs的亚型由TiT亚型、MiT亚型、LiT亚型和TiM亚型组成；
所述TiT亚型为肿瘤细胞吞噬肿瘤细胞形成的CICs结构；
所述MiT亚型为肿瘤细胞吞噬巨噬细胞形成的CICs结构；
所述LiT亚型为肿瘤细胞吞噬淋巴细胞形成的CICs结构；
所述TiM亚型为巨噬细胞吞噬肿瘤细胞形成的CICs结构；
所述T/MiT为由TiT和MiT这2个亚型组成；
所述T/MiT亚型的数目为TiT亚型和MiT亚型数目之和；
按照如下1)-7)至少一种判断标准判断：
1)有oCICs的待测患者的预后生存率小于无oCICs的待测患者的预后生存率；
2)oCICs数目大于等于5的待测患者的预后生存率小于oCICs数目大于0且小于5的待测患者的预后生存率；
3)有TiT亚型的待测患者的预后生存率小于无TiT亚型的待测患者的预后生存率；
4)TiT亚型数目大于等于5的待测患者的预后生存率小于TiT亚型数目大于0且小于5的待测患者的预后生存率；
5)有MiT亚型的待测患者的预后生存率小于无MiT亚型的待测患者的预后生存率；
6)有T/MiT亚型的待测患者的预后生存率小于无T/MiT亚型的待测患者的预后生存率；
7)T/MiT数目大于等于5的待测患者的预后生存率小于T/MiT亚型数目大于0且小于5的待测患者的预后生存率。
本发明的方法具有如下优点：
1.通过CICs亚型分析及计数的方法预测胰腺癌患者预后，具有显著的原创性；
2.CICs的研究着眼于肿瘤微环境中肿瘤细胞与肿瘤细胞或其他细胞的相互作用，更加接近肿瘤细胞恶性生物学行为的本质，更能够深入揭示肿瘤恶性生物学行为。我们的研究发现通过CICs亚型分析及计数的方法预测胰腺癌患者预后优于常用经典的临床病理因素如淋巴结转移状态及TNM分期等；
3.CICs亚型分级及计数在常规获得病理切片基础上即可进行，无需额外或特殊取材；
4.通过多重荧光标记的方法，在同一张组织切片同时实现多种细胞的荧光标记，不仅能够清晰呈现肿瘤细胞边界，而且能够区分不同细胞类型，实现CICs的精确亚型分析。
附图说明
图1为胰腺肿瘤组织中的不同类型CICs。
图2为CICs数目不同胰腺癌患者的生存。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、肿瘤组织中CICs亚型预测胰腺癌预后的方法的建立
一、预处理胰腺肿瘤组织切片实现脱蜡及抗原修复
1.获取带有胰腺肿瘤组织的石蜡病理切片；
2.石蜡切片65℃烘烤1.5小时；
3.经二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各5-10min，然后放入100％、95％、90％、80％、70％等各级酒精溶液中各3-5分钟，再放入蒸馏水中3分钟；
4.将切片置于抗原修复液(博世德公司，AR0024)微波煮沸15分钟后自然冷却至室温；
5.将切片置于TBST溶液(1×TBS，0.1％(体积百分含量)Tween 20浸泡2分钟；
6.将切片置于封闭液(1×TBS，0.1％Tween 20(体积百分含量)，5％BSA(质量百分含量)中，室温静置1小时。
二、多重荧光标记细胞
1、CD45分子标记染色
以Opal多重组织染色试剂盒(Opal Multiplex tissue staining kit，PerkinElmer,NEL791001KT，试剂盒包含以下组分：Fluorescein Plus Tyramide，Cyanine-3Tyramide，Cyanine-5Plus和Plus Amplification Diluent)将处理后的组织切片以CD45抗体(Boster，BM0091)进行标记染色，具体操作流程详见试剂盒说明书。主要步骤简述如下。
1)按照试剂盒说明书，将一抗(CD45抗体)按照1：400的比例以封闭液(同前)稀释，组织切片加稀释好的一抗(500μL/张切片)室温孵育1小时；
2)弃去一抗，将切片以TBST溶液(同前)洗涤3次；
3)加入带有HRP标记的二抗(Anti-mouse IgG,HRP-linked Antibody)(CellSignaling Technology，7076，稀释比例1:500，稀释液为TBST溶液)500μL/张切片，室温孵育1小时；
4)弃去二抗，将切片以TBST溶液(同前)洗涤3次；
5)加入Cyanine-5Plus(Perkin Elmer，NEL791001KT，稀释比例1:50，以PlusAmplification Diluent稀释)200μL/张切片，室温孵育1小时；
6)按照说明书洗涤，去除结合抗体，得到CD45分子标记的切片。
2、E-cadherin分子标记和CD68分子标记染色
在上述步骤1得到的CD45分子标记的切片上加入稀释混合好的抗E-cadherin抗体(mouse mAb，BD Biosciences,610181)和抗CD68抗体(rabbit pAb，Proteintech,25747–1-AP)500μL/张切片(稀释比例1:200，以封闭液稀释)，室温孵育1小时；弃去一抗，TBST溶液(同前)洗涤3次；
加入二抗Alexa Fluor 568anti-rabbit antibody(Invitrogen,A11036)和AlexaFluor 488anti-mouse antibody(Invitrogen,A11029)500μL/张切片(稀释比例1:500，以TBST溶液稀释)，室温孵育1小时；弃去二抗，TBST洗涤3次；以含DAPI的封片剂(ZSGB-Bio，ZLI-9557)封片，得到CD45、E-cadherin和CD68分子多重标记的组织切片。
三、荧光显微镜下计数CICs数目
1、多光谱成像(Multispectral imaging)及分析
1)使用
Figure BDA0002005471850000061
Automated Imaging System(Perkin Elmer)的TMA模式进行多光谱成像采集(20x物镜)；
2)使用Nuance system(Perkin Elmer)构建每个单光谱(DAPI,488,568和Cy5)的数据集并进行光谱拆分获得每个光谱对应的清晰图像；
3)使用InForm automated image analysis software package(Perkin Elmer)批量分析多光谱成像数据。
4)荧光显微镜下观察标记好的组织切片，计数cell-in-cells(CICs)数目，典型的CICs是指一个细胞中不仅包含完整进入的单个或者多个细胞，而且还可以观察到新月形细胞核。在显微镜下对所有组织芯片中的CICs进行计数。
2、胰腺癌肿瘤组织中的CICs亚型分析
多重荧光标记对细胞类型进行标记：E-cadherin阳性(E-cad+)为肿瘤细胞；CD68阳性(CD68+)为巨噬细胞；CD45阳性(CD45+)为淋巴细胞；
从上述多重荧光标记计数可以看出，胰腺癌肿瘤组织中有4种CICs不同亚型结构(图1)；
TiT(Tumor cell in Tumor cell,标记特点为E-cad+/CD45-/CD68-in E-cad+/CD45-/CD68-)/亚型，指肿瘤细胞吞噬肿瘤细胞形成的CICs结构；该亚型占总体CICs(overall CICs，oCICs)的绝大多数。
MiT(Macrophage in Tumor cell，标记特点为CD68+/E-cad-/CD45-/in E-cad+/CD45-/CD68-)亚型，指肿瘤细胞吞噬巨噬细胞形成的CICs结构。
LiT(Lymphocyte in Tumor cell，标记特点为CD45+/E-cad-/CD68-in E-cad+/CD45-/CD68-)亚型，指肿瘤细胞吞噬淋巴细胞形成的CICs结构。
TiM(Tumor cell in Macrophage，标记特点为E-cad+/CD45-/CD68-in CD68+/E-cad-/CD45-)亚型，指巨噬细胞吞噬肿瘤细胞形成的CICs结构。
其中，TiT与MiT较为多见，LiT与TiM数目较少。
根据上述CIC亚型，oCIC(overall CICs)定义如下：包括以上4种亚型，其数目为以上4种亚型数目的总和。
根据上述CIC亚型，T/MiT定义如下：由TiT和MiT这2个亚型组成，其数目为TiT亚型和MiT亚型之和。
四、肿瘤组织中CICs与胰腺癌患者预后相关
1、肿瘤组织中oCICs数目与胰腺癌患者预后相关
检测胰腺癌组织芯片(上海芯超生物科技有限公司，HPan-Ade180Sur-01，HPan-Ade120Sur-01，)中每个肿瘤组织中的CICs数目。采用的组织芯片包含153例胰腺肿瘤组织及相应患者的临床信息及随访信息，肿瘤组织来自患者胰腺癌切除手术。所有失访病例或染色过程中脱片导致无CICs染色结果的病例均被删除。最终144例生存随访信息完整并有CICs染色结果的肿瘤组织对应资料进入分析，总生存(OS，Overall Survival)定义为从患者接受手术起至患者死亡或末次随访的时间。
采用Kaplan-Meier方法绘制生存曲线，根据肿瘤组织中oCICs数目将患者分为2组，oCICs数目大于等于5定义为High-oCICs组，oCICs数目小于5定义为Low-oCICs组。
Kaplan-Meier分析结果如图2(C)所示，High-oCICs组与Low-oCICs组患者的中位生存时间分别为7月和21月，生存率具有统计学差异(P＝0.000)。
根据肿瘤组织中oCICs数目将患者分为3组，oCICs数目为0定义为无oCICs组，大于0且小于5定义为Low-oCICs组，大于等于5定义为High-oCICs组。
Kaplan-Meier分析结果如图2(G)所示，High-oCICs组、Low-oCICs组和无oCICs组患者的中位生存时间分别为(7月，17月和31月)，生存率具有统计学差异(P＝0.000)。
因此，可以根据检测胰腺癌肿瘤组织中oCICs数目预测待测患者的预后生存情况，
有oCICs的待测患者的预后生存率小于无oCICs的待测患者的预后生存率；
或，oCICs数目大于等于5的待测患者的预后生存率小于oCICs数目大于0且小于5的待测患者的预后生存率。
检测胰腺癌肿瘤组织中oCICs数目的方法包括如下步骤：先对胰腺癌肿瘤组织切片预处理实现脱蜡及抗原修复，再对预处理后的切片进行多重荧光染色，最后荧光显微镜检测是否存在oCICs或统计oCICs数目。
2、肿瘤组织中TiT亚型数目与胰腺癌患者预后相关
检测上述144例胰腺癌组织中同质型CICs(TiT)数目，采用Kaplan-Meier方法绘制生存曲线，根据肿瘤组织中TiT数目将患者分为2组，TiT数目大于等于5定义为High-TiT组，TiT数目小于5定义为Low-TiT组。
Kaplan-Meier分析结果如图2(A)所示，High-TiT组与Low-TiT组患者的中位生存时间分别为7月和15月，生存率具有统计学差异(P＝0.000)。
根据肿瘤组织中TiT数目将患者分为3组，TiT数目为0定义为无TiT组，大于0且小于5定义为Low-TiT组，大于等于5定义为High-TiT组。
Kaplan-Meier分析结果如图2(E)所示，High-TiT组、Low-TiT组和无TiT组患者的中位生存时间分别为(7月，14月和23月)，生存率具有统计学差异(P＝0.000)。
因此，可以根据检测胰腺癌肿瘤组织中TiT亚型数目预测待测患者的预后生存情况，
有TiT亚型的待测患者的预后生存率小于无TiT亚型的待测患者的预后生存率；
或，TiT亚型数目大于等于5的待测患者的预后生存率小于TiT亚型数目大于0且小于5的待测患者的预后生存率。
检测胰腺癌肿瘤组织中TiT亚型数目的方法包括如下步骤：先对胰腺癌肿瘤组织切片预处理实现脱蜡及抗原修复，再对预处理后的切片进行多重荧光染色，最后荧光显微镜检测是否存在TiT亚型或统计TiT亚型数目。
3、肿瘤组织中MiT数目与患者术后生存时间相关
检测上述144例胰腺癌组织中MiT数目，采用Kaplan-Meier方法绘制生存曲线，根据肿瘤组织中MiT是否存在将患者分为2组，MiT数目大于等于1定义为MiT阳性组，MiT数目为0定义为MiT阴性组。
Kaplan-Meier分析结果如图2(D)所示，MiT阳性组与MiT阴性组患者的中位生存时间分别为(7月和17月)，生存率具有统计学差异(P＝0.000)。
因此，可以根据检测胰腺癌肿瘤组织中MiT亚型数目预测待测患者的预后生存情况，
有MiT亚型的待测患者的预后生存率小于无MiT亚型的待测患者的预后生存率。
检测胰腺癌肿瘤组织中MiT亚型数目的方法包括如下步骤：先对胰腺癌肿瘤组织切片预处理实现脱蜡及抗原修复，再对预处理后的切片进行多重荧光染色，最后荧光显微镜检测是否存在MiT亚型。
4、肿瘤组织中T/MiT数目与患者术后生存时间相关
检测上述144例胰腺癌组织中T/MiT数目。采用Kaplan-Meier方法绘制生存曲线，根据肿瘤组织中T/MiT数目将患者分为2组，T/MiT数目大于等于5定义为High-T/MiT组，T/MiT数目小于5定义为Low-T/MiT组。
Kaplan-Meier分析结果如图2(B)所示，High-T/MiT组与Low-T/MiT组患者的中位生存时间分别为7月和21月，生存率具有统计学差异(P＝0.000)。
根据肿瘤组织中T/MiT数目将患者分为3组，T/MiT数目为0定义为无T/MiT组(TiT和MiT均没有)，大于0且小于5定义为Low-T/MiT组(TiT和MiT至少有一个，但是这2种亚型的数目合计后小于5)，大于等于5定义为High-T/MiT组(TiT和MiT至少有一个，但是这2种亚型的数目合计后大于等于5)。Kaplan-Meier分析结果如图2(F)所示，High-T/MiT组、Low-T/MiT组和无T/MiT组患者的中位生存时间分别为(7月，17月和28月)，生存率具有统计学差异(P＝0.000)。
因此，可以根据检测胰腺癌肿瘤组织中T/MiT亚型数目预测待测患者的预后生存情况，
有T/MiT亚型的待测患者的预后生存率小于无T/MiT亚型的待测患者的预后生存率。
或，T/MiT数目大于等于5的待测患者的预后生存率小于T/MiT亚型数目大于0且小于5的待测患者的预后生存率。
检测胰腺癌肿瘤组织中T/MiT亚型数目的方法包括如下步骤：先对胰腺癌肿瘤组织切片预处理实现脱蜡及抗原修复，再对预处理后的切片进行多重荧光染色，最后荧光显微镜检测是否存在T/MiT或T/MiT亚型的数目。
五、oCIC、TiT、MiT与T/MiT数目均为独立的胰腺癌预后因素
为了明确上述CIC数目能否独立预测胰腺癌患者预后，采用Cox回归多因素分析，该统计分析使用SPSS软件。分别将CIC、TiT与MiT数目分别与患者的性别、淋巴结转移状态和TNM分期进行多因素分析，结果显示oCIC是预测胰腺癌预后的独立因素(表1)，HR为1.917(95％CI:1.276-2.878)，P值为0.002，具有统计学差异。提示oCIC预测价值优于淋巴结转移状态(HR:1.510，95％CI：0.989-2.306，P＝0.056)及TNM分期(HR:1.798，95％CI：1.015-3.187，P＝0.004)。
TiT是预测乳腺癌预后的独立因素(表2)，HR为1.850(95％CI:1.221-2.803)，P值为0.004，具有统计学差异。提示TiT预测价值优于淋巴结转移状态(HR:1.520，95％CI：0.995-2.322，P＝0.053)及TNM分期(HR:1.795，95％CI：1.012-3.184，P＝0.046)。
MiT是预测乳腺癌预后的独立因素，HR为1.700(95％CI:1.117-2.589)，P值为0.013，有统计学差异(表3)。提示MiT预测价值优于淋巴结转移状态(HR:1.620，95％CI：1.064-2.465，P＝0.024)及TNM分期(HR:1.684，95％CI：0.935-3.032，P＝0.083)。
T/MiT是预测乳腺癌预后的独立因素，HR为2.005(95％CI:1.330-3.024)，P值为0.001，具有统计学差异(表4)。提示T/MiT预测价值优于淋巴结转移状态(HR:1.471，95％CI：0.962-2.249，P＝0.075)及TNM分期(HR:1.773，95％CI：1.000-3.141，P＝0.05)。
表1. Cox多因素分析显示oCICs数目为胰腺癌预后的独立预测因素
变量 例数 HR(95％CI) P值
oCICs数目 1.917(1.276-2.878) 0.002
<5 86
≥5 58
性别 0.697(0.458-1.060) 0.092
男 88
女 56
淋巴结转移 1.510(0.989-2.306) 0.056
无 88
有 56
TNM分期 1.798(1.015-3.187) 0.004
Ⅰ+Ⅱ 126
Ⅲ+Ⅳ 18
表2. Cox多因素分析显示TiT数目为胰腺癌预后的独立预测因素
变量 例数 HR(95％CI) P值
TiT数目 1.850(1.221-2.803) 0.004
<5 98
≥5 46
性别 0.673(0.443-1.022) 0.063
男 88
女 56
淋巴结转移 1.520(0.995-2.322) 0.053
无 88
有 56
TNM分期 1.795(1.012-3.184) 0.046
Ⅰ+Ⅱ 126
Ⅲ+Ⅳ 18
表3. Cox多因素分析显示MiT数目为胰腺癌预后的独立预测因素
变量 例数 HR(95％CI) P值
MiT数目 1.700(1.117-2.589) 0.013
＝0 89
≥1 55
性别 0.701(0.459-1.069) 0.099
男 88
女 56
淋巴结转移 1.620(1.064-2.465) 0.024
无 88
有 56
TNM分期 1.684(0.935-3.032) 0.083
Ⅰ+Ⅱ 126
Ⅲ+Ⅳ 18
表4. Cox多因素分析显示T/MiT数目为胰腺癌预后的独立预测因素
变量 例数 HR(95％CI) P值
T/MiT数目 2.005(1.330-3.024) 0.001
<5 88
≥5 56
性别 0.700(0.460-1.066) 0.097
男 88
女 56
淋巴结转移 1.471(0.962-2.249) 0.075
无 88
有 56
TNM分期 1.773(1.000-3.141) 0.050
Ⅰ+Ⅱ 126
Ⅲ+Ⅳ 18

Claims (6)

1.检测胰腺癌患者胰腺癌组织中A-D至少一种结构的数目的物质在制备预测胰腺癌患者预后生存率的产品中的应用；
A、oCIC；B、TiT亚型；C、MiT亚型；D、T/MiT亚型；
所述oCIC为CICs所有亚型，所述CICs为Cell-in-cells结构；
所述CICs的亚型由TiT亚型、MiT亚型、LiT亚型和TiM亚型组成；
所述TiT亚型为肿瘤细胞吞噬肿瘤细胞形成的CICs结构；
所述MiT亚型为肿瘤细胞吞噬巨噬细胞形成的CICs结构；
所述LiT亚型为肿瘤细胞吞噬淋巴细胞形成的CICs结构；
所述TiM亚型为巨噬细胞吞噬肿瘤细胞形成的CICs结构；
所述T/MiT为由TiT和MiT这2个亚型组成；
所述T/MiT亚型的数目为TiT亚型和MiT亚型数目之和；
所述产品还包括：记载如下1）-7）至少一种判断标准的可读载体：
1）有oCICs的待测患者的预后生存率小于无oCICs的待测患者的预后生存率；
2）oCICs数目大于等于5的待测患者的预后生存率小于oCICs数目大于0且小于5的待测患者的预后生存率；
3）有TiT亚型的待测患者的预后生存率小于无TiT亚型的待测患者的预后生存率；
4）TiT亚型数目大于等于5的待测患者的预后生存率小于TiT亚型数目大于0且小于5的待测患者的预后生存率；
5）有MiT亚型的待测患者的预后生存率小于无MiT亚型的待测患者的预后生存率；
6）有T/MiT亚型的待测患者的预后生存率小于无T/MiT亚型的待测患者的预后生存率；
7）T/MiT数目大于等于5的待测患者的预后生存率小于T/MiT亚型数目大于0且小于5的待测患者的预后生存率。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述检测胰腺癌患者胰腺癌组织中是否存在中A-D至少一种结构数目的物质为检测胰腺癌患者胰腺癌组织中A-D任一种结构数目的物质。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述检测胰腺癌患者胰腺癌组织中是否存在中A-D至少一种结构数目的物质为检测胰腺癌患者胰腺癌组织中A以及B-D中任一组合的结构数目的物质。
4.根据权利要求1-3中任一所述的应用，其特征在于：
所述物质包括为E-cadherin抗体、CD68抗体、CD45抗体和能分别结合该三个抗体的荧光抗体或荧光染料。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：
所述能分别结合该三个抗体的荧光抗体或荧光染料的荧光颜色或波长不同。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于： 所述物质还包括荧光显微镜。
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