CN111727973A - N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺在降低小麦毒素含量中的应用 - Google Patents

N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺在降低小麦毒素含量中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了N‑(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺在降低小麦毒素含量中的应用。应用为抑制小麦B型单端孢霉烯族毒素合成、降低小麦B型单端孢霉烯族毒素含量或抑制禾谷镰孢菌中Tri5基因表达。化合物N‑(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺为式(I)所示化合物。本发明对于控制小麦赤霉病毒素污染具有重大价值。

Description

N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺在降低小麦毒素含量中的应用
技术领域
本发明涉及小麦B型单端孢霉烯族毒素防控，具体涉及化合物N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺在降低小麦B型单端孢霉烯族毒素含量中的应用。
背景技术
由禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)[有性态：玉蜀黍赤霉(Gibberellazeae)]和亚洲镰孢菌(F.asiaticum)为主引起的小麦赤霉病(Fusarium head blight,FHB)在世界各地均有发生，不仅会造成小麦减产，还因产多种真菌毒素，如：B型单端孢霉烯族毒素——脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)及其乙酰化衍生物(3A-DON和15A-DON)和雪腐镰刀菌烯醇(nivalenol)，玉米赤霉烯酮(zearalenone)，而带来食品安全问题。由于缺乏有效的FHB抗性品种、气候条件变化、稻麦/玉麦连作、秸秆还田以及多菌灵抗性病原扩展，FHB流行导致我国每年约500多万公顷小麦大幅减产。江苏省玉蜀黍赤霉对多菌灵抗性发展最为严重，病原对多菌灵产生抗性，不仅导致药剂防效下降，还可增加DON污染。可见，FHB严重威胁粮食生产和食品安全，也是各国政府格外关注并亟待解决的重大问题。
当前，化学防治仍是FHB防控的主要措施，截至2020年5月，我国防治FHB登记制剂有327个，涉及活性成分30余种，其中以多菌灵、甲基硫菌灵、三唑酮和福美双等四种成分单剂及复配剂最多，占登记产品85％以上。在江苏省等多菌灵抗性重发区域，防治FHB常用制剂为戊唑醇、咪鲜胺及氰烯菌酯的相关复配剂产品，但在FHB控害降毒方面并不十分突出，并且氰烯菌酯还有中高度的抗性风险。目前，防治FHB新药剂包括2019年正式登记的丙硫菌唑和叶菌唑，2020年正式登记的氟唑菌酰羟胺。防治FHB的药剂虽逐渐增多，但品种相对较少，新型药剂控害降毒效果仍需检验，鲜有侧重降低毒素的活性成分。
N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺[N-(phenylthio)phthalimide]，分子式：C14H9NO2 S，CAS号：14204-27-4，用邻苯二甲酸酐与苯胺反应制得，常作为芳基丙酸类非甾体抗炎药——吲哚洛芬的中间体，化学结构式如下：
Figure BDA0002567652130000011
至今，尚无关于以N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺为活性成分，或含有N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺的药剂组合物应用于防治小麦赤霉病或小麦毒素防控的相关报道。
发明内容
发明目的：针对现有技术中防治小麦赤霉病，尤其是小麦毒素防控存在的问题，本发明提供了化合物N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺的新用途。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供了N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺在抑制小麦B型单端孢霉烯族毒素合成或防治小麦赤霉病中的应用。
进一步所述小麦赤霉病由禾谷镰孢菌引起。
本发明提供了N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺在降低小麦B型单端孢霉烯族毒素含量中的应用。
本发明还提供了N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺在抑制禾谷镰孢菌中Tri5基因表达中的应用。
本发明中，所述N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺的结构如式(Ⅰ)所示：
Figure BDA0002567652130000021
所述B型单端孢霉烯族毒素包括脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)及其乙酰化衍生物3A-DON和15A-DON中的一种或几种。
所述应用包括：将包含N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺的活性成分加入农药上可接受的辅助剂制成田间施用制剂而施用。
所述田间施用制剂为可湿性粉剂、悬浮剂、水乳剂、微乳剂或水分散粒剂。
所述辅助剂包括高岭土、硅藻土、滑石粉、烷基酚聚氧乙烯醚、木质素磺酸钠、拉开粉、渗透剂T、乙二醇、碳酸钙、聚乙烯醇、十二烷基硫酸钠、苯乙基酚聚氧乙烯醚、脂肪醇聚氧乙烯醚、脂肪酸环氧乙烷加成物、聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段化合物、蓖麻油聚氧乙烯醚、吐温、聚乙二醇、磺酸盐、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、亚磷酸盐、黄原胶、酚甲醛缩合物、铵盐、环己酮、二甲苯和水中的一种或几种。
所述N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺在田间施用制剂中的百分含量为1％～90％，进一步为20～30％。
在一些具体的方案中，田间施用制剂为可湿性粉剂。在一些方案中，按质量百分比计，可湿性粉剂各组分配比为：20％～30％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺，5％～8％木质素磺酸钠，5％～8％拉开粉，0.3％～0.5％渗透剂T，0.2％～0.3％乙二醇，0.5％～0.8％碳酸钙，高岭土补足100％；优选的，按质量百分比计，可湿性粉剂各组分配比为：20％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺，5％木质素磺酸钠，5％拉开粉，0.3％渗透剂T，0.2％乙二醇，0.5％碳酸钙，高岭土补足100％。
在另一些具体的方案中，田间施用制剂为水分散粒剂。在一些方案中，按质量百分比计，水分散粒剂各组分配比为：30％～40％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺，8％～10％十二烷基硫酸钠，8％～10％聚乙烯醇，1％～3％脂肪醇聚氧乙烯醚，1％～3％聚乙烯醇，0.5％～0.8％碳酸钙，滑石粉补足100％；优选的，按质量百分比计，水分散粒剂各组分配比为：30％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺，8％十二烷基硫酸钠，8％聚乙烯醇，1％脂肪醇聚氧乙烯醚，1％聚乙烯醇，0.5％碳酸钙，滑石粉补足100％。
施用N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺时，于小麦扬花初期进行一次喷施，所述一次喷施的5～7d后进行二次喷施。
其中，活性成分N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺的施用量为10～100g/hm2，优选为20～70g/hm2，优选为30～70g/hm2。
所述应用还包括施用防控小麦赤霉病的第二药剂。
所述的第二药剂包括氟唑菌酰羟胺、戊唑醇、和氰烯菌酯中的一种或几种。
所述的第二药剂的活性成分的施用量分别为：戊唑醇50～200g/hm2，优选100～150g/hm2；氟唑菌酰羟胺50～200g/hm2，优选100～150g/hm2；氰烯菌酯200～400g/hm2，优选350～400g/hm2。
有益效果：
(1)本发明发现，化合物N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺，能抑制禾谷镰孢菌产B型单端孢霉烯族毒素(例如DON、3A-DON和15A-DON中的一种或几种)，进而在小麦赤霉毒素控制方面进行应用。
(2)本发明发现，化合物N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺可以抑制禾谷镰孢菌中Tri5基因的相对表达量。
(3)离体胁迫培养试验、qRT-PCR实验和田间控害降毒试验均表明N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺能有效抑制小麦B型单端孢霉烯族毒素合成或降低小麦B型单端孢霉烯族毒素含量。在田间应用中N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺与小麦赤霉病防控药剂组合应用，在有效防治小麦赤霉病的同时提高对毒素污染的控制效果。
附图说明
图1为BSN在离体条件下显著抑制PH-1中Tri5基因的相对表达量。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
室内试验实施例1化合物N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺对禾谷镰孢菌菌丝生长以及产B型单端孢霉烯族毒素效应
1材料与方法
1.1供试试剂
98％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺[N-(Phenylthio)phthalimide]，代号BSN，用适量丙酮溶解后获得10000μg/mL母液置于冰箱中冷藏备用。
1.2供试菌株
禾谷镰孢菌野生型菌株PH-1(F.graminearum PH-1)，为本试验所用菌株。也可以采用其他试验菌株。
1.3供试培养基
马铃薯葡萄糖琼脂(potato dextrose agar，PDA)培养基：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18g、蒸馏水1L，用于PH-1的培养、保存以及室内药剂试验。
绿豆汤(mung bean broth，MBB)培养基：绿豆60g、蒸馏水1L，用于PH-1分生孢子培养。
蔗糖硫酸铵(sucroseammonia sulfate，SAS)培养基：蔗糖30g、硫酸铵2g、KH2PO41g、MgSO4.7H2O 0.5g、KCl 0.5g、FeSO4.7H2O 0.01g、200uL微量元素溶液(每100mL含量，柠檬酸5g，ZnSO4·7H2O 5g，CuSO4·5H2O 0.25g，MnSO4·H2O 0.05g，H3BO3 0.05g，NaMoO4·2H2O 0.05g)、蒸馏水1L、pH 6.5，用于PH-1产B型单端孢霉烯族毒素试验。
1.4毒素标准品和化学试剂
DON、3A-DON和15A-DON毒素的标准样品均购买于美国Romer公司，标准品浓度为100mg/mL。各标准样品用乙腈配制成1.0mg/mL的混合标准溶液，密闭保存在-20℃冰箱中备用。异辛烷(色谱纯)，乙腈(色谱纯)和甲醇(色谱纯)等化学试剂，均购置于美国SIGMA公司。
1.5 BSN胁迫下PH-1菌株的液体培养
将PH-1菌株移植到PDA平皿中，置于28℃培养箱培养3d后，接种于含MBB培养基的250mL三角瓶(100mL/瓶)后置于摇床(DHZ-DA，江苏太仓市实验设备厂)，28℃，140rpm，暗培养7d并收集分生孢子悬浮液备用。配制SAS培养基并分装至250mL三角瓶(100mL/瓶)，121℃下湿热灭菌20min，冷却至室温后，接种分生孢子悬浮液并使浓度为1.0×105个孢子/mL，然后置于摇床，28℃，140rpm，暗培养7d。摇陪12h时，每瓶分别加入1mLBSN一定浓度溶液，并使培养基中的BSN终浓度分别为1、2、4、8、10和12μg/mL，以添加1mL无菌水为空白对照，各处理重复3次(表1)。各处理7d终培养液用1号Whatman滤纸过滤，滤液检测毒素，菌丝体用无菌水冲洗两次。菌丝体置于干燥箱中60℃烘干至恒重，用电子天平称量其重量。毒素以毒素的产量/菌丝干重(μg/g菌丝干重)的量表述。1.6B型单端孢霉烯族毒素的提取和检测
各处理7d终培养滤液，放在摇床上180rpm震荡30min；2500rpm/min离心5min取上清液备用；将氨基柱置于固相萃取装置上，然后用2ml提取液活化(弃滤液)，活化后加入2ml上清液过柱；过柱后再用2ml提取液洗脱两次，收集流出液，将收集到的滤液氮吹干后用1ml流动相重溶后待上机。
LC-MS检测条件，安捷伦1290液相系统，色谱柱，安捷伦1.7μm,C18 100*2.1mm，柱温：40℃；进样量：2μl；流速：0.2ml/min，梯度洗脱流动相：A:5mM醋酸铵水；B:甲醇。质谱条件为：仪器型号：AB 34500质谱；离子化模式：电喷雾电离模式(ESI)；质谱扫描方式：多反应监测模式(MRM)；离子源温度：500℃；驻留时间：100ms；雾化气：50psi；辅助气：50psi；气帘气：35psi；喷雾电压：5500V(ESI+)；碰撞室射出电压：6V(ESI+)；DON母离子297.2Da,定量子离子203.1Da。
菌丝生长抑制效果＝(对照菌丝干重-处理菌丝干重)/对照菌丝干重×100％。
B型单端孢霉烯族毒素控制效果＝(对照B型单端孢霉烯族毒素总量-处理B型单端孢霉烯族毒素总量)/对照B型单端孢霉烯族毒素总量×100％。
2结果与分析
BSN分别在1、2、4、8、10和12μg/mL剂量下胁迫培养后，对PH-1菌株菌丝生长抑制效果分别为1.12％、11.94％、26.12％、38.20％和91.01％；对B型单端孢霉烯族毒素控制效果分别为62.29％、78.85％、86.98％、92.38％和93.44％(表1)。这表明，在离体培养条件下，化合物N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺对禾谷镰孢菌菌丝生长以及产B型单端孢霉烯族毒素均有较好的控制效果，尤其是毒素控制效果显著。
表1 BSN对F.graminearum PH-1菌丝生长及产B型单端孢霉烯族毒素的效应
Figure BDA0002567652130000051
Figure BDA0002567652130000061
注:为同列数据后标有不同小写字母者表示差异显著(P<0.05)。
室内试验例2化合物N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺对禾谷镰孢菌Tri5基因表达效应
1材料与方法
1.1供试菌株
禾谷镰孢菌野生型菌株PH-1(F.graminearum PH-1)
1.2供试培养基
马铃薯葡萄糖琼脂(potato dextrose agar，PDA)培养基：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18g、蒸馏水1L，用于PH-1的培养、保存以及室内药剂试验。绿豆汤(mung beanbroth，MBB)培养基：绿豆60g、蒸馏水1L，用于PH-1分生孢子培养。
酵母浸出粉胨葡萄糖培养基(Yeast Extract Peptone Dextrose Medium，YEPD)：酵母提取物3g，葡萄糖20g，蛋白胨10g，蒸馏水定容至1L，灭菌锅121℃灭菌20min后，常温保存，用于PH-1菌丝体的摇培。
1.3 BSN胁迫下PH-1菌株的液体摇培
待测菌株PH-1在PDA平板上培养至7cm左右，在菌落最外层用打孔器打一圈5mm的菌碟，之后分别将5～6个菌碟挑入分装有20mL绿豆汤培养基的小烧瓶中，将其放在25℃摇床中摇培三天后收集孢子，将孢子接种到YEPD培养基中，使终浓度为1×104个/mL，175rpm，28℃，黑暗条件下摇床培养24h后，加入一定浓度的BSN进行胁迫处理，使培养基中的BSN终浓度为10μg/mL，继续摇培2天。之后用滤布过滤收集菌丝体，保存于-20℃，用于之后菌丝体总RNA的提取。
1.4 PH-1菌株总RNA的提取
PH-1菌株总RNA的提取使用柱式真菌总RNA抽提纯化试剂盒(生工，B518659)。详细操作步骤如下：
1)取450μl Buffer Rlysis-FG加入1.5ml RNase-free的离心管中备用。
2)取25-50mg新鲜真菌或20mg干燥的子实体或菌丝用液氮研磨成粉末，加到上述1.5ml离心管中，立即震荡混匀，室温放置5min。
3)12000rpm 4℃离心3min，将上清移至1.5ml RNase-free的离心管中。
4)加入1/2体积无水乙醇，充分混匀。
5)将吸附柱放入收集管中，用移液器将溶液全部加至吸附柱中，静置1min，室温12000rpm离心1min，倒掉收集管中废液。
6)将吸附柱放回收集管中，加入500μl GT Solution，静置1min，室温10000rpm离心1min，倒掉收集管中废液。
7)将吸附柱放回收集管中，加入500μl NT Solution，静置1min，室温10000rpm离心1min，倒掉收集管中废液。
8)将吸附柱放回收集管中，室温12000rpm离心2min。
9)将吸附柱放入RNase-free的1.5ml的离心管中，在吸附膜中央加入30-50μlDEPC-treated ddH2O，静置2min，12000rpm离心2min，将所得到的RNA溶液置于-70℃保存或用于后续试验。
1.5 PH-1菌株总RNA的反转录反应
将得到的PH-1的总RNA利用PrimeScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time)试剂盒(Takara，RR047A)进行反转录，得到PH-1的cDNA，详细反应体系如下：
Figure BDA0002567652130000071
Figure BDA0002567652130000081
1.6 BSN胁迫下PH-1菌株Tri5基因相对表达量的测定
将得到的PH-1的cDNA利用TB
Figure BDA0002567652130000082
Premix Ex TaqTM II(TliRNaseH Plus)试剂(Takara，RR820A)进行定量PCR试验，详细反应体系如下：
Figure BDA0002567652130000083
扩增程序为：95℃，5s；60℃，20s(第1、2步骤重复40个循环)；95℃，15s；60℃，1min；65℃到95℃结束反应。
定量PCR试验所用引物如下：
Figure BDA0002567652130000084
2结果与分析
Tri5基因是禾谷镰孢菌单端孢霉烯族毒素生物合成途径中的一个关键基因，它是编码单端孢霉烯族毒素合成途径中的第一个关键基因，且它的表达量和禾谷镰孢菌中单端孢霉烯族毒素的产量呈正相关。我们用BSN在10μg/mL剂量下对PH-1进行胁迫处理，我们发现在离体条件下，BSN能显著抑制PH-1中Tri5基因的相对表达量，此结果与上述BSN胁迫处理后B型单端孢霉烯族毒素产量的变化一致，说明BSN能有效抑制PH-1中B型单端孢霉烯族毒素的生物合成(图1)。
本发明中，化合物N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺为活性成分，加入农药上可接受的辅助剂而制成的田间施用制剂。
所述辅助剂优选的包括填料、分散剂、润湿剂、稳定剂或其它有益于有效成分在制剂中稳定和药效发挥的物质。在本发明具体实施过程中所述辅助剂优选的包括高岭土、硅藻土、滑石粉、烷基酚聚氧乙烯醚、木质素磺酸钠、拉开粉、渗透剂T、乙二醇、碳酸钙、聚乙烯醇、十二烷基硫酸钠、苯乙基酚聚氧乙烯醚、脂肪醇聚氧乙烯醚、脂肪酸环氧乙烷加成物、聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段化合物、蓖麻油聚氧乙烯醚、吐温、聚乙二醇、磺酸盐、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、亚磷酸盐、黄原胶、酚甲醛缩合物、铵盐、环己酮、二甲苯和水中的一种或几种。
在本发明中，所述杀菌组合物的剂型优选为可湿性粉剂、悬浮剂、水乳剂、微乳剂或水分散粒剂。在本发明中所述杀菌组合物的制备方法采用本领域常规方法即可，在本发明具体实施过程中，将所述原料包括化合物N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺和辅助剂按比例混合制备获得，其中，化合物N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺在田间施用制剂中的百分含量为1％～90％。
制备实施例1：
20％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺WP的制备：
按质量百分比计，可湿性粉剂各组分配比为：20％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺，5％木质素磺酸钠(分散剂)，5％拉开粉(润湿剂)，0.3％渗透剂T(渗透剂)，0.2％乙二醇(稳定剂)，0.5％碳酸钙(稳定剂)，高岭土(填料)补足100％。
制备方法：
按上述配比备料并经常规可湿性粉剂加工制备方法，制备20％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺WP。
制备实施例2
30％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺WG的制备：
按质量百分比计，水分散粒剂各组分配比为：30％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺，8％十二烷基硫酸钠(润湿剂)，8％聚乙烯醇(分散剂)，1％脂肪醇聚氧乙烯醚(渗透剂)，1％聚乙烯醇(稳定剂)，0.5％碳酸钙(稳定剂)，滑石粉(填料)补足100％。
制备方法：
按上述配比备料并经常规水分散粒剂加工制备方法，制备30％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺WG。
田间应用试验例1
将制备实施例1所制得20％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺WP、制备实施例230％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺WG、25％戊唑醇WP(江苏省盐城双宁农化有限公司)、25％吡唑醚菌酯EC(巴斯夫植物保护有限公司)、25％氰烯菌酯SC(江苏省农药研究所股份有限公司)和200g/L氟唑菌酰羟胺SC(瑞士先正达作物保护有限公司)，开展防治小麦赤霉病的田间药效试验。
供试毒素标准品和化学试剂：DON、3A-DON和15A-DON毒素的标准样品均购买于美国Romer公司，标准品浓度为100mg/mL。各标准样品用乙腈配制成1.0mg/mL的混合标准溶液，密闭保存在-20℃冰箱中备用。异辛烷(色谱纯)，乙腈(色谱纯)和甲醇(色谱纯)等化学试剂，均购置于美国SIGMA公司。
试验处理方法：试验地点位于江苏丘陵地区镇江农业科学研究所的农业科技创新中心园区内的试验田，土壤为马肝土，肥力中等，有机质含量约为1.85％。小麦品种为镇麦12号。试验设13个处理，分别为：20％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺WP 168.75g/hm2和337.5g/hm2、30％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺WG 112.5g/hm2和225.0g/hm2、25％戊唑醇WP720g/hm2、25％吡唑醚菌酯EC 750.0g/hm2、25％氰烯菌酯SC1500.0 g/hm2、200g/L氟唑菌酰羟胺SC 750g/hm2、25％戊唑醇WP 720g/hm2+20％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺WP 168.75g/hm2、25％吡唑醚菌酯EC 750.0g/hm2+20％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺WP 337.5g/hm2、25％氰烯菌酯SC1500.0 g/hm2+30％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺WG 225.0g/hm2、200g/L氟唑菌酰羟胺SC 750g/hm2+30％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺WG 112.5g/hm2和清水空白对照(表2)，其中组合药剂为现混后混合施用，对照药剂戊唑醇、吡唑醚菌酯、氰烯菌酯、氟唑菌酰羟胺按推荐剂量使用。每处理3重复，共39个小区，小区面积为30m2，小区设保护行并随机区组排列。小麦扬花初期(5％植株扬花)(2020年4月10日)，使用1.5L手持小型手动气压喷雾器第1次施药，喷液量为675L/hm2。施药2次，间隔7d，空白对照区喷施等量清水。试验期间不再喷施其他杀菌剂，田间管理按常规进行。
分别于第1次和2次施药后的第1、2、3和7d，目测调查供试复配药剂处理后小麦的叶形、叶色以及植株扬花情况等有无药害症状。小麦赤霉病发生稳定后(2020年5月16日)调查发病情况，采用五点取样法，每点调查200穗，共调查1000穗。调查并记载病穗数和严重度，计算病情指数和防病效果(江苏省植物保护站，2006)，并采用DPS软件进行差异显著性统计分析。
小麦B型单端孢霉烯族毒素(DON、3A-DON和15A-DON)检测方法：采用LC-MS方法检测各供试小麦籽粒单端孢霉烯族毒素含量，于小麦成熟期，在各处理小区内采用对角线五点取样，每个点收割0.33m2内的所有麦穗，晒干后手工脱粒，并确保收获所有麦粒，尤其是发病麦粒和瘪粒。获得麦粒后，将每个处理的所有麦粒用万能粉碎机粉碎8min，然后收集样品面粉于样品袋中，称取5g于50ml离心管中，加入25ml 84％乙腈溶液(提取液)，震荡萃取30min，2500rpm离心5min。石墨化碳柱过滤，收集的溶液氮气吹干，用1ml 10％甲醇复溶。0.22μm微孔滤膜过滤后液相质谱仪检测。色谱柱：ZORBAX Eclipse PlusC18(100×2.1mm，1.7μm)；柱温：40℃；进样量：5μl；流速：0.25ml/min；检测波长：265nm；流动相：A(5Mm醋酸铵水)，B(10％甲醇)；梯度洗脱：90％A-10％B(0～1min)，10％A-90％B(4～5min)，10％A-90％B(6min)，90％A-10％B(6～10min)。
各处理麦粒中B型单端孢霉烯族毒素(DON、3A-DON和15A-DON)以麦粒干重中所含B型单端孢霉烯族毒素总重量计(μg/Kg)。B型单端孢霉烯族毒素控制效果以下列公式计算：B型单端孢霉烯族毒素控制效果＝(对照B型单端孢霉烯族毒素含量-处理B型单端孢霉烯族毒素含量)/对照B型单端孢霉烯族毒素含量×100％。
试验结果得出，在安全性方面，通过药后对小麦叶形、叶色以及扬花情况等方面的调查，未发现药害。这表明，供试20％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺WP或30％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺WG、药剂以及药剂与20％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺WP或30％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺WG制剂组合应用在各试验剂量下施用均对小麦安全。
20％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺WP 168.75g/hm2和337.5g/hm2、30％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺WG 112.5g/hm2和225.0g/hm2、25％戊唑醇WP 720g/hm2、25％吡唑醚菌酯EC750.0g/hm2、25％氰烯菌酯SC1500.0 g/hm2、200g/L氟唑菌酰羟胺SC 750g/hm2、25％戊唑醇WP 720g/hm2+20％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺WP 168.75g/hm2、25％吡唑醚菌酯EC750.0g/hm2+20％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺WP 337.5g/hm2、25％氰烯菌酯SC1500.0 g/hm2+30％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺WG 225.0g/hm2、200g/L氟唑菌酰羟胺SC 750g/hm2+30％N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺WG 112.5g/hm2对小麦赤霉病的防效分别为36.04％、53.78％、37.55％、55.02％、86.80％、73.18％、82.67％、95.19％、86.66％、74.42％、84.46％和95.32％，上述12种处理对小麦B型单端孢霉烯族毒素控制效果分别为65.91％、71.67％、66.27％、72.83％、85.90％、18.92％、84.24％、94.88％、91.15％、61.10％、88.87％和97.72％(表2)。
这表明，化合物N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺对小麦赤霉病有一定的防治效果，而对小麦B型单端孢霉烯族毒素控制效果明显优于病害防效，当其与小麦赤霉病防治药剂组合应用后对小麦B型单端孢霉烯族毒素控制效果增效显著。可见，在小麦赤霉病及小麦毒素防控中，化合物N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺可作为降低小麦B型单端孢霉烯族毒素的活性成分，将其与小麦赤霉病防控药剂组合应用，在有效防治小麦赤霉病的同时有效降低小麦B型单端孢霉烯族毒素污染。另外，研究发现，由于药剂自身的作用机制，25％戊唑醇WP、25％氰烯菌酯SC、200g/L氟唑菌酰羟胺SC达到比较优秀的病害防效和毒素控制效果，而25％吡唑醚菌酯EC的防效较好，但是毒素控制较差，该类药剂有刺激产毒的报道。可见防效与毒素两者之间，既有联系但又不呈正相关关系。N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺在毒素的控制机理上与上述药剂不同，其本身对病害防治效果一般，但是其有突出的降低毒素的功能，将其与防效佳的药剂混用可保证病害防效的同时提高控毒效果，解决小麦毒素超标的生产问题。
表2本发明实施例制备制剂对小麦赤霉病及B型单端孢霉烯族毒素的田间控制效果
Figure BDA0002567652130000121
Figure BDA0002567652130000131
注:同列数据后标有不同小写字母者表示差异显著(P<0.05)。

Claims (10)

1.N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺在抑制小麦B型单端孢霉烯族毒素合成或防治小麦赤霉病中的应用，其特征在于，所述N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺的结构如式(Ⅰ)所示：
Figure FDA0002567652120000011
2.N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺在降低小麦B型单端孢霉烯族毒素含量中的应用，其特征在于，所述N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺的结构如式(Ⅰ)所示：
Figure FDA0002567652120000012
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述B型单端孢霉烯族毒素包括脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物3A-DON和15A-DON中的一种或几种。
4.N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺在抑制禾谷镰孢菌中Tri5基因表达中的应用，其特征在于，所述N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺的结构如式(Ⅰ)所示：
Figure FDA0002567652120000013
5.根据权利要求1～4任一项所述的应用，其特征在于，所述应用包括：将包含N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺的活性成分与农药上可接受的辅助剂制成田间施用制剂而施用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，施用N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺时，于小麦扬花初期进行一次喷施，所述一次喷施的5-7d后进行二次喷施。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，活性成分N-(苯硫基)邻苯二甲酰亚胺的施用量为10～100g/hm2，优选为20～70g/hm2，优选为30～70g/hm2。
8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述应用还包括施用防控小麦赤霉病的第二药剂。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的第二药剂包括氟唑菌酰羟胺、戊唑醇和氰烯菌酯中的一种或几种。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的第二药剂的活性成分施用量分别为：戊唑醇50～200g/hm2，优选100～150g/hm2；氟唑菌酰羟胺50～200g/hm2，优选100～150g/hm2；氰烯菌酯200～400g/hm2，优选350～400g/hm2。
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