CN111655839A - 新型乳酸菌及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及作为新型乳酸菌的粘膜乳杆菌及长双歧杆菌，具体地，涉及如下的组合物，即，抑制作为老化因子的p16蛋白的表达及炎性因子，包含可有用地用于预防及治疗记忆障碍、学习障碍或精神障碍、用于预防及治疗炎症性疾病的新型乳酸菌。

Description

新型乳酸菌及其用途
技术领域
本发明涉及作为新型乳酸菌的粘膜乳杆菌及长双歧杆菌，具体地，涉及如下的组合物，即，抑制作为老化因子的p16蛋白的表达及炎性因子，包含有用地用于预防及治疗记忆障碍、学习障碍或精神障碍、用于预防及治疗炎症性疾病的新型乳酸菌。
背景技术
在随着老年人口增长而发生的疾病中，包括痴呆在内的记忆障碍为最有问题的疾病。根据卫生福利部中央痴呆中心的年度报告，每12分钟就有1名患有痴呆的患者，65万人患有痴呆。尤其，痴呆主要发生在70岁以上的老年人中而周知，但是，最近，由于顽疾、创伤、遗传因素及不良生活习惯，在年轻人中的发病率增加。
包括痴呆在内的记忆障碍为难以根治的疾病，在记忆障碍发病的情况下，成为患者和患者家属一生的痛苦及负担，由此产生的问题很严重。
并且，在正在流通的痴呆治疗剂的情况下，具有包括恶心、呕吐、食欲不振、腹痛等消化器官的副作用在内的皮肤发红、瘙痒等的副作用，其使用受限。
另一方面，作为利用天然物的研究结果，在韩国公开专利第10-2016-0110767号公开了利用君迁子提取物的用于改善记忆力的食品组合物，但目前还没有对于能够治疗包括痴呆在内的记忆障碍的有效乳酸菌研究。
发明内容
技术问题
在研究能够有效地恢复记忆力的治疗剂的过程中，本发明人确认了从人的排泄物分离的新型乳酸菌呈现记忆力改善效果且呈现改善忧虑行动的效果，可用于预防及治疗记忆障碍、学习障碍及精神障碍，从而完成了本发明。并且，经确认，可通过抑制炎性因子来用于预防及治疗与炎症性疾病及炎性因子相关的记忆障碍、学习障碍及精神障碍。
技术方案
本发明的目的在于，提供新型粘膜乳杆菌及长双歧杆菌乳酸菌。
本发明的再一目的在于，提供包含新型乳酸菌的能够抑制作为老化因子的p16蛋白的表达的用于预防或治疗记忆障碍、学习障碍或精神障碍的组合物。
本发明的另一目的在于，提供包含新型乳酸菌的用于预防或治疗炎症性疾病的组合物。
发明的效果
本发明的作为新型乳酸菌的粘膜乳杆菌NK41及长双歧杆菌NK46具有抑制作为老化因子的p16蛋白的表达、呈现记忆力恢复效果、改善忧虑行动的效果。因此，本发明的新型乳酸菌可用作用于预防或治疗记忆障碍、学习障碍或精神障碍的组合物。
进而，本发明的新型乳酸菌具有抑制炎症反应的效果，可利用于用于预防或治疗炎症性疾病的组合物，尤其，可有效地预防及治疗结肠炎。
附图说明
图1为确认向老化动物模型(Ag)给药作为新型乳酸菌的粘膜乳杆菌NK41(LM)、长双歧杆菌NK46(BL)或它们的1:1混合物(ML)的结果Y字形迷宫试验中的自发性交叉行动量恢复到正常组(NOR)水平的图表。
图2为确认向老化动物模型(Ag)给药作为新型乳酸菌的粘膜乳杆菌NK41(LM)、长双歧杆菌NK46(BL)或它们的1:1混合物(ML)的结果物体认知试验中的触摸新物体的次数恢复到正常组(NOR)水平的图表。
图3为确认向阿耳滋海默氏病动物模型(Tg)给药作为新型乳酸菌的粘膜乳杆菌NK41(LM)或长双歧杆菌NK46(BL)的结果Y字形迷宫试验中的自发性交叉行动量恢复到正常组(NOR)水平的图表。
图4为确认向阿耳滋海默氏病动物模型(Tg)给药作为新型乳酸菌的粘膜乳杆菌NK41(LM)或长双歧杆菌NK46(BL)的结果人工回避实验中的停留时间恢复到正常组(NOR)水平的图表。
图5为确认向阿耳滋海默氏病动物模型(Tg)给药作为新型乳酸菌的粘膜乳杆菌NK41(LM)或长双歧杆菌NK46(BL)的结果水下迷宫试验中的停留在踏板所在的位置的时间恢复的图表。
图6为确认向阿耳滋海默氏病动物模型(Tg)给药作为新型乳酸菌的粘膜乳杆菌NK41(LM)或长双歧杆菌NK46(BL)的结果海马体中的NF-kB的活性被抑制且脑源性神经营养因子(BDNF)的表达增加的图。
(从左开始)正常组；阿耳滋海默氏病动物模型，粘膜乳杆菌NK41(LM)给药组；长双歧杆菌NK46(BL)给药组。
图7为确认向抑郁动物模型给药作为新型乳酸菌的粘膜乳杆菌NK41(LM)或长双歧杆菌NK46(BL)的结果停留在开放通道的时间(OT)及开放通道进入(OE)恢复到正常组(NOR)水平的图表。
图8为确认向抑郁动物模型给药作为新型乳酸菌的粘膜乳杆菌NK41(LM)或长双歧杆菌NK46(BL)的结果强制游泳实验中的静止状态减少而改善忧虑行动及抑郁症状的图表。
图9为确认向抑郁动物模型给药作为新型乳酸菌的粘膜乳杆菌NK41(LM)或长双歧杆菌NK46(BL)的结果尾巴悬挂实验中的静止状态减少而改善忧虑行动及抑郁症状的图表。
图10为确认向抑郁动物模型给药作为新型乳酸菌的粘膜乳杆菌NK41(LM)或长双歧杆菌NK46(BL)的结果海马体中的NF-kB的活性被抑制且脑源性神经营养因子的表达增加的图。
图11为确认向抑郁动物模型给药作为新型乳酸菌的粘膜乳杆菌NK41(LM)或长双歧杆菌NK46(BL)的结果血液内的皮质酮显著减少的图表。
图12为确认向抑郁动物模型给药作为新型乳酸菌的粘膜乳杆菌NK41(LM)或长双歧杆菌NK46(BL)的结果离子化钙结合适配分子1(Iba1)-阳性小胶质细胞的活性化显著减少的图。
具体实施方式
作为用于执行上述目的的一实施方式，本发明提供粘膜乳杆菌NK41(Lactobacillus mucosae NK41)(保藏机构：韩国文生物培养中心，保藏日：2017年08月04日，保藏编号：KCCM12091P)。
本发明的粘膜乳杆菌NK41的特征为从人的排泄物分离及鉴定的粘膜乳杆菌的新型乳酸菌。
用于鉴定及分类的本发明的粘膜乳杆菌NK41的16S rDNA碱基序列与本说明书中所附的序列1相同。因此，本发明的粘膜乳杆菌NK41可包括序列1的16S rDNA。
上述序列1的16S rDNA碱基序列的分析结果如下，即，与公知的粘膜乳杆菌菌株具有99％的同源性，因此，显示出与粘膜乳杆菌的最高分子系统发育关系。因此，将上述乳酸菌鉴定为粘膜乳杆菌(Lactobacillus mucosae)，并命名为粘膜乳杆菌NK41，于2017年8月4日保藏于韩国文生物培养中心(保藏编号：KCCM12091P)。
本发明的粘膜乳杆菌NK41为革兰氏阳性菌，细胞的形态为杆菌。可根据本技术领域的常规方法分析更具体的粘膜乳杆菌NK41的生理特征，并在下述表2示出其结果。具体地，粘膜乳杆菌NK41可使用L-阿拉伯糖、D-核糖、D-木糖、D-半乳糖、D-葡萄糖、苦杏仁苷、七叶苷、麦芽糖、乳糖、蜜二糖、蔗糖、棉子糖、龙胆二糖及葡糖酸盐作为碳源。
作为执行上述目的的再一实施方式，本发明提供长双歧杆菌NK46(Bifidobacterium longum NK46)(保藏机构：韩国文生物培养中心，保藏日：2017年08月04日，保藏编号：KCCM12087P)。
本发明的长双歧杆菌NK46的特征为从人的排泄物分离及鉴定的长双歧杆菌的新型乳酸菌。
用于鉴定及分类的本发明的长双歧杆菌NK46的16S rDNA碱基序列与本说明书中所附的序列2相同。因此，本发明的长双歧杆菌NK46可包括序列2的16S rDNA。
上述序列2的16S rDNA碱基序列的分析结果如下，即，与公知的长双歧杆菌菌株具有99％的同源性，因此，显示出与长双歧杆菌的最高分子系统发育关系。因此，将上述乳酸菌鉴定为长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)，并命名为长双歧杆菌NK46，于2017年8月4日保藏于韩国文生物培养中心(保藏编号：KCCM12087P)。
本发明的长双歧杆菌NK46为革兰氏阳性菌，细胞的形态为杆菌。可根据本技术领域的常规方法分析更具体的长双歧杆菌NK46的生理特征，并在下述表3示出其结果。具体地，长双歧杆菌NK46可使用L-阿拉伯糖、D-木糖、D-半乳糖、D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、甘露醇、山梨糖醇、α-甲基-D-葡萄糖苷、七叶苷、水杨苷、麦芽糖、乳糖、蜜二糖、蔗糖、棉子糖及D-松二糖作为碳源。
作为执行上述目的的另一实施方式，本发明提供包含保藏编号为KCCM12091P的粘膜乳杆菌NK41、保藏编号为KCCM12087P的长双歧杆菌NK46或它们的混合物的用于预防或治疗记忆障碍、学习障碍或精神障碍的药学组合物。
本发明的“粘膜乳杆菌NK41”与上述说明相同。
具体地，本发明的药学组合物所包含的粘膜乳杆菌NK41可以为其活细胞体、其死细胞体、其培养产物、其粉碎产物或其提取物，只要是能够实现记忆障碍、学习障碍或精神障碍的预防或治疗效果的粘膜乳杆菌NK41的形态，可无限制地使用。
本发明的“长双歧杆菌NK46”与上述说明相同。
具体地，本发明的药学组合物所包含的长双歧杆菌NK46可以为其活细胞体、其死细胞体、其培养产物、其粉碎产物或其提取物，只要是能够实现记忆障碍、学习障碍或精神障碍的预防或治疗效果的长双歧杆菌NK46的形态，可无限制地使用。
本发明中的术语“培养产物”为在公知的液体培养基或固体培养基培养乳酸菌而获取的物质，本发明中为包含新型乳酸菌的概念。
本发明的记忆障碍、学习障碍可以为选自由老化、阿耳滋海默氏病、精神分裂症、帕金森氏病、亨廷顿氏舞蹈病、皮克氏病、克雅氏病、头部伤害、健忘症、记忆力衰退、外伤性脑损伤、癫痫、海马体硬化、头痛、脑衰老、痴呆及失忆症组成的组中的一种以上。
在本发明的一实施例中，经确认，当在神经细胞一同处理作为应激激素的皮质酮和粘膜乳杆菌NK41或长双歧杆菌NK46时，抑制以诱发如阿耳滋海默氏病的记忆障碍、学习障碍的物质而周知的NF-kB的活性，同时，以在老化及痴呆等的表达减少而周知的脑源性神经营养因子(brain derivated neurotrophic factor，BDNF)的表达增加(表5)。并且，在本发明的一实施例中，经确认，当向老化动物模型及阿耳滋海默氏病动物模型给药粘膜乳杆菌NK41、长双歧杆菌NK46或它们的混合物时，具有记忆力恢复效果，在海马体抑制作为老化因子的p16的表达，抑制NF-kB的活性，脑源性神经营养因子的表达增加(实施例4)。尤其，经确认，相比于个别乳酸菌，粘膜乳杆菌NK41与长双歧杆菌NK46的混合物具有更优秀的效果。由此，确认包含上述粘膜乳杆菌NK41、长双歧杆菌NK46或它们的混合物的药学组合物可有用地用于预防及治疗记忆障碍、学习障碍。
因此，包含保藏编号为KCCM12091P的粘膜乳杆菌NK41、保藏编号为KCCM12087P的长双歧杆菌NK46或它们的混合物的本发明的药学组合物可抑制老化因子p16的表达。
上述p16为从人CDKN2A基因表达的代表性老化因子蛋白，随着上述p16的表达的增加，具有促进老化的特性。
本发明的精神障碍可以为选自由忧虑、抑郁症、心境障碍、失眠、妄想性障碍、强迫症、偏头痛、应激、认知障碍及注意力缺陷障碍组成的组中的一种以上。
在本发明的一实施例中，经确认，当向诱导应激的动物模型给药粘膜乳杆菌NK41、长双歧杆菌NK46或它们的混合物时，显著改善应激引起的忧虑行动(表8)。由此，确认包含上述粘膜乳杆菌NK41、长双歧杆菌NK46或它们的混合物的药学组合物可有用地用于预防及治疗精神障碍。
作为执行上述目的的还有一实施方式，本发明提供包含保藏编号为KCCM12091P的粘膜乳杆菌NK41、保藏编号为KCCM12087P的长双歧杆菌NK46或它们的混合物的用于预防或治疗炎症性疾病的药学组合物。
本发明的“粘膜乳杆菌NK41”及“长双歧杆菌NK46”与上述说明相同。
本发明的炎症性疾病可以为选自由关节炎、痛风、肝炎、哮喘、肥胖、角膜炎、胃炎、肠炎、肾炎、结肠炎、糖尿病、结核病、支气管炎、胸膜炎、腹膜炎、脊椎炎、胰腺炎、炎症痛、尿道炎、膀胱炎、阴道炎、动脉硬化症、败血症、烫伤、皮肤炎、牙周炎及齿龈炎组成的组中的一种以上。
在本发明的一实施例中，经确认，当在从小鼠分离的巨噬细胞与作为炎症反应诱导物质的脂多糖一同处理粘膜乳杆菌NK41或长双歧杆菌NK46时，显著抑制炎症反应(表4)。由此，确认包含上述粘膜乳杆菌NK41及长双歧杆菌NK46的药学组合物可有用地用于预防及治疗炎症性疾病。
具体地，上述炎症性疾病可以为结肠炎。
在本发明的一实施例中，经确认，当向由于应激诱发结肠炎的动物模型给药粘膜乳杆菌NK41、长双歧杆菌NK46或它们的混合物时，作为结肠炎的指标的结肠长度恢复到正常水平，结肠炎的指标因子的表达及活性减少(表6)。由此，包含上述粘膜乳杆菌NK41、长双歧杆菌NK46或它们的混合物的药学组合物可有用地用于预防及治疗炎症性疾病，具体地，可有用地用于预防及治疗结肠炎。
本发明的用于预防或治疗记忆障碍、学习障碍或精神障碍的药学组合物或用于预防或治疗炎症性疾病的药学组合物可通过使用本领域周知的方法制备为药学剂型，以在向哺乳动物给药后迅速、持续或延迟释放活性成分。在制备剂型的过程中，本发明的药学组合物可在不抑制新型乳酸菌的活性的范围内还包含药剂学上可允许的载体。
上述药剂学上可允许的载体包括通常使用的如乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、阿拉伯树胶、海藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羟基苯甲酸甲酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸镁及矿物油等，但并不限定于此。并且，本发明的药学组合物可包括填充剂、增量剂、粘合剂、保湿剂、崩解剂、表面活性剂等的稀释剂或赋形剂、其他药剂学上可允许的添加剂。
本发明的药学组合物的剂量需为药学有效量。“药学有效量”指足够以适用于医学治疗的合理的益处/风险比预防或治疗记忆障碍、学习障碍、精神障碍或炎症性疾病的量。普通技术人员可根据制剂化方法、患者状态及体重、患者的性别、年龄、疾病严重程度、药物形态、给药途径及时间、排泄速度、反应灵敏度等的因素以不同方式选择有效容量水平。如普通技术人员所认知，有效量可根据处理途径、赋形剂的使用及能够与其他药剂一同使用的可能性变化。但是，为了优选效果，在口服给药剂的情况下，通常，可每天向成人每1kg的体重给药0.0001mg/kg至100mg/kg的本发明的组合物，优选地，可给药0.001mg/kg至100mg/kg。可一天给药一次，也可一天分多次给药。上述剂量不以任何方式限定本发明的范围。
本发明的用于预防或治疗记忆障碍、学习障碍或精神障碍的药学组合物或用于预防或治疗炎症性疾病的药学组合物可通过多种途径向小鼠、家畜、人等的哺乳动物给药。具体地，本发明的药学组合物可口服给药或肠胃外给药(例如，涂敷或静脉注射、皮下注射、腹腔注射)，但优选为口服给药。用于口服给药的固体制剂可包括散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、软胶囊剂、丸剂等。用于口服给药的液体制剂包括悬浮剂、内用液体、乳液、糖浆、气雾剂等，除常用的作为简单稀释剂的水、液体石蜡外，还可包括多种赋形剂，例如保湿剂、甜味剂、调味剂、防腐剂等。用于肠胃外给药的制剂可分别根据常规方法以灭菌水溶液、液剂、非水溶剂、悬浮剂、乳液、滴眼剂、眼膏剂、糖浆、栓剂、气雾剂等的外用剂及灭菌注射制剂的形态剂型化并使用，优选地，可通过制造霜剂、凝胶、敷贴、喷雾剂、软膏剂、橡皮膏剂、乳剂、搽剂、眼膏剂、滴眼剂、糊剂或泥罨剂的药剂学组合物并使用，但并不限定于此。根据临床处方，用于局部给药的制剂可以为无水型或含水型。非水溶剂、悬浮剂可使用如丙二醇(propyleneglycol)、聚乙二醇、橄榄油的植物油、如油酸乙酯的可注射酯等。栓剂的基质可使用硬脂(witepsol)、聚乙二醇、吐温(tween)61、可可脂、月桂酯、甘油明胶等。
作为用于执行上述目的的又一实施方式，本发明提供包括向对象给药粘膜乳杆菌NK41、长双歧杆菌NK46或它们的混合物的步骤的记忆障碍、学习障碍或精神障碍疾病的预防或治疗方法。
本发明的“粘膜乳杆菌NK41”及“长双歧杆菌NK46”、“给药”及“记忆障碍、学习障碍或精神障碍”等的术语与上述说明相同。
上述对象指动物，可以为典型的哺乳动物，在其上使用本发明的新型乳酸菌的治疗可以显示出有益效果。作为这种对象的优选例，可包括如人的灵长类动物。并且，如上所述的对象可包括具有作为老化因子的p16蛋白表达、记忆障碍、学习障碍或精神障碍的症状或具有患有上述症状的风险的所有对象。
作为执行上述目的的又一实施方式，本发明提供包括向对象给药粘膜乳杆菌NK41(Lactobacillus mucosae NK41)、长双歧杆菌NK46(Bifidobacterium longum NK46)或它们的混合物的步骤的炎症性疾病的预防或治疗方法。
本发明的“粘膜乳杆菌NK41”及“长双歧杆菌NK46”、“给药”及“炎症”等的术语与上述说明相同。
上述对象指动物，可以为典型的哺乳动物，在其上使用本发明的新型乳酸菌的治疗可以显示出有益效果。作为这种对象的优选例，可包括如人的灵长类动物。并且，如上所述的对象可包括髓过氧物酶活性增加或肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素17(IL-17)的细胞因子的表达量增加或NF-kB的活性或环氧合酶2(COX-2)的活性增加的所有对象。进而，可包括具有炎症症状或具有患有上述症状的风险的所有对象，具体地，可以为具有结肠炎症状的对象，但并不限定于此。
作为又一实施方式，本发明提供包含保藏编号为KCCM12091P的粘膜乳杆菌NK41、保藏编号为KCCM12087P的长双歧杆菌NK46或它们的混合物的用于预防或改善记忆障碍、学习障碍或精神障碍的保健功能食品。
作为又一实施方式，本发明提供包含保藏编号为KCCM12091P的粘膜乳杆菌NK41、保藏编号为KCCM12087P的长双歧杆菌NK46或它们的混合物的用于预防或改善炎症性疾病的保健功能食品。
本发明的“粘膜乳杆菌NK41”及“长双歧杆菌NK46”、“给药”及“记忆障碍、学习障碍或精神障碍”及“炎症性疾病”等的术语与上述说明相同。
上述保健功能食品为强调食品的生物体调节功能的食品，利用物理方法、生物化学方法、生物工学方法以作用于特定目的及以特定目的表达的方式赋予附加价值的食品。这种保健功能食品的成分以对于生物体充分发挥与生物体防御、身体节奏的调节、疾病的防止及恢复有关的身体调节功能的方式设计并加工，可包含食品可允许的食品辅助添加剂、增甜剂或功能性原料。
在将本发明的粘膜乳杆菌NK41或长双歧杆菌NK46用作保健功能食品(或保健功能饮料添加物)的情况下，直接添加上述新型乳酸菌或与其他食品或食品成分一同使用，可根据常规方法适当地使用。上述粘膜乳杆菌NK41或长双歧杆菌NK46的混合量可根据其使用目的(预防、健康或改善、治疗处理)适当地确定。
上述保健功能食品可包含各种营养剂、维生素、矿物(电解质)、合成调味剂及天然调味剂等的调味剂、染色剂及增强剂(奶酪、巧克力等)、果胶酸及其的盐、有机酸、保护性胶体增稠剂、pH调节剂、稳定化剂、防腐剂、甘油、酒精、用于碳酸饮料的碳化剂等。并且，本发明的保健功能食品可包含用于制备水果及蔬菜饮料的果肉。这种成分可单独使用或组合来使用，通常，相对于组合物的总重量，这种添加剂的比例在0.001重量份至50重量份的范围内选择。
上述保健功能食品的种类并没有特殊限制。可添加上述粘膜乳杆菌NK41或长双歧杆菌NK46的食品具有包括香肠、肉类、面包、巧克力类、零嘴类、糖果类、饼干类、泡面、披萨、其他面类、口香糖类、冰淇淋类的冷冻产品、各种汤、饮料、茶、口服液、酒精饮料剂维生素复合剂等。在剂型化为饮料的情况下，如常规饮料，除新型乳酸菌之外添加的液体成分还可包含各种调味剂或天然碳水化合物等作为追加成分，但并不限定于此。如上所述的碳水化合物可以为单糖(例，葡萄糖、果糖等)、二糖(例，麦芽糖、蔗糖等)及多糖(例，如糊精、环糊精等的常规糖)及木糖醇、山梨糖醇、赤藓糖醇等的糖醇。
以上，除非另行明确表示，在本说明书记载的数值包括等同范围。
发明实施方式
以下，为了便于理解本发明，提出优选实施。但是，下述实施例为了更加容易地理解本发明而提供，本发明的内容并不限定于此。
实施例1：乳酸菌的分离及鉴定
(1)从人的排泄物分离乳酸菌
将人的排泄物嵌入并悬浮于GAM液体培养基(GAM broth；日水制药株式会社(Nissui Pharmaceutical)，日本(Japan))。之后，取其上清液并移至BL琼脂培养基(BLagar medium；日水制药株式会社，日本)，将得到的培养基在37℃的温度条件下厌氧培养约48个小时，之后，从中分理出形成菌落(colony)的菌株。
(2)从泡菜分离乳酸菌
分别粉碎白菜泡菜、萝卜泡菜或葱泡菜，取其粉碎上清液并移至MRS琼脂培养基(MRS agar medium；Difco，美国(USA))，并减得到的培养基在37℃的温度条件下厌氧培养约48个小时，并从中分离出形成菌落的菌株。
(3)鉴定分离的乳酸菌
对于从人的排泄物或泡菜中分离的菌株，分析生理特性及16S rDNA序列，以确认菌株的种类并赋予菌株名。所赋予的乳酸菌的菌株名如下述表1。具体地，从泡菜中分离的乳酸菌为5种植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)(表1中的管理编号1至5)、5种短乳杆菌(Lactobacillus brevis)(表1中的管理编号6至10)、5种清酒乳杆菌(Lactobacillussakei)(表1中的管理编号11至15)及5种弯曲乳酸杆菌(Lactocacillus curvatus)(表1中的管理编号16至20)从人的排泄物中分离的乳酸菌为5种鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)(表1中的管理编号21至25)、5种植物乳杆菌(表1中的管理编号26至30)、5种罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)(表1中的管理编号31至35)、4种约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)(表1中的管理编号36至39)、3种粘膜乳杆菌(表1中的管理编号40至42)、3种青春双岐杆菌(Bifidobacterium adolescentis)(表1中的管理编号43至45)、5种长双歧杆菌(表1中的管理编号46至50)。
表1
Figure BDA0002500709510000101
Figure BDA0002500709510000111
(4)新型乳酸菌粘膜乳杆菌(Lactobacillus mucosae)NK41的生理特性
经确认，在上述表1记载的菌株中的粘膜乳杆菌NK41(保藏编号：KCCM12091P)为革兰氏阳性杆菌。并且，粘膜乳杆菌NK41的16S rDNA具有序列1的碱基序列。通过基本局部比对搜索工具(BLAST)比较粘膜乳杆菌NK41的16S rDNA碱基序列的结果，未搜索到具有相同16S rDNA碱基序列的粘膜乳杆菌菌株，并呈现与公知的粘膜乳杆菌菌株的16S rDNA序列具有99％的同源性。
通过使用API 50CHL试剂盒以糖发酵试验分离粘膜乳杆菌NK41的生理特性中的碳源利用性。结果如下述表2所示。在下述表2中，“+”表示碳源利用性为阳性，“-”表示碳源利用性为阴性。
表2
Figure BDA0002500709510000112
Figure BDA0002500709510000121
(5)新型乳酸菌长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)NK46的生理特性
经确认，在上述表1记载的菌株中的长双歧杆菌NK46(保藏编号：KCCM12087P)为革兰氏阳性杆菌。并且，长双歧杆菌NK46的16S rDNA具有序列2的碱基序列。通过基本局部比对搜索工具比较长双歧杆菌NK46的16S rDNA碱基序列的结果，未搜索到具有相同16S rDNA碱基序列的长双歧杆菌菌株，并呈现与公知的长双歧杆菌菌株的16S rDNA序列具有99％的同源性。
通过使用API 50CHL试剂盒以糖发酵试验分析长双歧杆菌NK46的生理特性中的碳源利用性。结果如下述表3所示。在下述表3中，“+”表示碳源利用性为阳性，“-”表示碳源利用性为阴性。
表3
Figure BDA0002500709510000122
Figure BDA0002500709510000131
实施例2：比较所分离的乳酸菌的活性
(1)抗氧化活性(体外(in vitro)
将2，2-二苯基-1-苦基肼(DPPH，2，2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl)以成为0.2mM浓度的方式溶解于乙醇，从而制备了2，2-二苯基-1-苦基肼溶液。向0.1ml的上述2，2-二苯基-1-苦基肼溶液添加乳酸菌的悬浮液(1×106CFU/ml)或维生素C溶液(1g/ml)，并在37℃的温度条件下培养20分钟。在3000rpm的条件下对培养液进行5分钟的离心分离，从而获取了上清液。之后，在517nm中测定上清液的吸光度，以计算所分离的乳酸菌的抗氧化活性。各个乳酸菌的抗氧化活性如下述表4。
(2)巨噬细胞中的炎症指标测定
向C57BL/6小鼠(雄性(male)，6周龄，20～23g)的腹腔给药2ml的灭菌的4％巯基乙酸(thioglycolate)。在96个小时之后，麻醉小鼠并向小鼠的腹腔给药8ml的RPMI 1640培养基。在5分钟～10分钟之后，取出小鼠的腹腔内的RPMI培养基(巨噬细胞)，在1000g条件下进行10分钟的离心分离，再次利用RPMI 1640培养基清洗2次。以每孔0.5×106的数向24-孔板添加上述巨噬细胞，对所分离的乳酸菌(最终处理浓度：1x104 cfu/ml，以下相同)和作为炎症反应诱导物质的脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)处理2个小时或24个小时，之后，获取了上清液及细胞。向RIPA裂解液(Gibco公司)添加所获取的细胞并进行同质化。通过免疫印迹(immunoblotting)方法在处理24个小时的培养上清液中测定肿瘤坏死因子α、白细胞介素10(IL-10)等的细胞因子表达量，通过免疫印迹方法从处理2个小时而获取的细胞中测定p65(NF-kB)、p-p65(phosphor-NF-kB)及β的表达量。各个乳酸菌的炎症指标的表达书评如下述表4。
(表4的活性测定时的标准：+++，>90％，非常强；++，>60～90％，强；+，>20～60％，弱；-，<20％，效果甚微，同样适用于表5)。
表4
Figure BDA0002500709510000141
Figure BDA0002500709510000151
(3)Caco2细胞的ZO-1蛋白表达效果
从韩国细胞库购买作为结直肠癌细胞的Caco2细胞，在RPMI 1640培养基培养48个小时后，以每孔2×106的量向12-孔板分注Caco2细胞。在各个孔单独处理1μg的脂多糖或一同处理1μg的脂多糖和1×104CFU的乳酸菌后，培养24个小时。之后，收集从各个孔培养的细胞，通过免疫印迹方法测定了作为紧密连接蛋白(tight junction protein)的ZO-1的表达量。各个乳酸菌的ZO-1的表达量如下述表5。
(4)SH-SY5Y细胞的脑源性神经营养因子表达效果及NF-kB活性化效果
从韩国细胞库购买作为神经细胞的SH-SY5Y细胞，在添加有10％的胎牛血清(FBS)及1％的抗生素的DMEM培养基培养，以每孔2×106细胞数向12-孔板分注。之后，向各个孔与乳酸菌(1×104CFU/ml)一同添加300mg/ml的浓度的皮质酮(corticosterone)并培养，之后，通过免疫印迹方法测定NF-kB(p65，p-p65)及脑源性神经营养因子的表达量。各个乳酸菌的脑源性神经营养因子表达水平及NF-kB活性化水平如下述表5。
表5
Figure BDA0002500709510000161
Figure BDA0002500709510000171
(5)实验结果
评价所分离的乳酸菌的活性的结果，经确认，在所分离的乳酸菌中，作为新型乳酸菌的粘膜乳杆菌NK41及长双歧杆菌NK46在增加作为紧密连接蛋白的ZO-1的表达量的同时呈现优秀的抗氧化活性及抑制炎症反应的效果。尤其，经确认，抑制以诱发如阿耳滋海默氏病的老化相关疾病的物质而周知的NF-kB的活性，同时，增加用于生产在老化及痴呆等减少的大脑神经的脑源性神经营养因子的表达(及表4及表5)。
实施例3：新型乳酸菌的抗炎效果及结肠炎改善效果
(1)制备结肠炎动物模型及给药乳酸菌
将每组6只的C57BL/6小鼠(雄性，21～23g，6周龄)适应实验室一周后进行实验。将一组设定为正常组，在剩余组的小鼠中，利用2，4，6-三硝基苯磺酸(2，4，6-trinitrobenzenesulfonic acid，TNBS)诱发了结肠炎。具体地，利用醚麻醉实验动物后，利用末端圆润的1ml容量的注射器通过肛门向结肠为给药0.1ml的与50％的乙醇混合的2，4，6-三硝基苯磺酸溶液，并垂直悬挂并维持30秒钟，从而诱发了炎症。另一方面，向正常组口服给药0.1ml的生理盐水。在给药后，从第二天开始将作为新型乳酸菌的粘膜乳杆菌NK41、长双歧杆菌NK46或它们的1:1混合物悬浮于生理盐水，并以1×109CFU的量每天给药，总共给药3天。在乳酸菌给药结束的第二天，在牺牲实验动物之后，摘取从结肠部位中的盲肠至肛门之前部位为止的结肠并测定长度。之后，由此确认下述各种指标。另一方面，在正常组的实验动物中，口服给药作为乳酸菌悬浮液的1％右旋糖溶液，而不是给药新型乳酸菌。并且，在阳性对照组的实验动物中，以50mg/kg的量口服给药作为结肠炎治疗药物的柳氮磺吡啶(sulfasalazine)。
(2)测定髓过氧物酶活性
向100mg的结肠组织添加200μl的含0.5％的十六烷基三甲基溴化胺(hexadecyltrimethyl ammonium bromide)的10mM的磷酸三钾缓冲液(potassium phosphate buffer，pH7.0)并进行同质化(homogenization)。在4℃及10000g的条件下进行10分钟的离心分离来获取上清液。将50μl的上清液添加至0.95ml的反应液(包含1.6mM的四甲基联苯胺(tetramethyl benzidine)和0.1mM的H2O2)，在37℃的温度条件下进行反应并在650nm的条件下随着时间测定吸光度。将作为反应物产生的1μmol/ml的H2O2为1单元计算了上述髓过氧物酶(myeloperoxidase，MPO)的活性。
(3)测定炎症指标
利用免疫印迹方法测定了如p-p65、p65、环氧合酶2及白细胞介素17的炎症反应指标物质。具体地，取出与上述髓过氧物酶活性测定实验相同的方法获取的50μg的上清液并执行免疫印迹。并且，利用酶联免疫试剂盒(ELISA kit)来测定了细胞因子的表达量。
(4)实验结果
在上述说明中执行的实验结果如下述表6。
表6
Figure BDA0002500709510000191
具体地，经确认，给药粘膜乳杆菌NK41、长双歧杆菌NK46或它们的混合物的组中的体重变化不大，因此，没有毒性。并且，经确认，当诱导结肠炎时，结肠的长度变短，但是，在给药乳酸菌的组中，呈现结肠长度的恢复效果。进而，经确认，在给药乳酸菌的组中，随着结肠炎的诱导增加的髓过氧物酶活性减少，肿瘤坏死因子α及白细胞介素17的细胞因子的表达量被抑制，NF-kB的活性及环氧合酶2的活性被抑制。
由此，经确认，新型乳酸菌不呈现毒性，并可有效地预防及治疗结肠炎。
实施例4：确认对于新型乳酸菌的老化引起的记忆力损伤的记忆力改善效果
(1)Y字形迷宫(Y-maze task)
用于实验的Y字形迷宫装置为延伸的3个通道(arm)呈字母Y字形状且各个分支的长度为25cm、高度为14cm、宽度为5cm并以相同角度设置的装置，用于短期记忆力实验。
具体地，使实验动物的头部分朝向Y字形迷宫的一个通道的末端，并使其在通道自由行动8分钟。记录动物的移动，将动物的后肢进入通道的情况视作通过(arm entry)。以交叉次数(alternation)表示动物的移动，上述交叉次数的定义如下，即，当动物连续通过3个通道时交叉一次。以实际交叉次数与能够最大限度交叉的次数(即，总交叉次数除以2的值)的百分比表示自发性交叉行动量(Spon.alternation)。
(2)人工回避实验(Passive avoidance task)
为了评价长期记忆力，进行了人工回避实验。具体地，将小鼠位于打开照明的光亮侧区域(50W电灯)，使其探索10秒钟，并打开闸门(gillotin door，5×5cm)使其能够进入暗区域(Gemini Avoidance System；圣地亚哥(San Diego)，美国)。测定闸门打开之后小鼠进入暗区域为止的时间并将其定义为学习时间(acquisition trial)。首先，若小鼠的四肢均进入暗区域，则关闭闸门，将0.5mA的电冲击通过格子(grid)地板流动3秒钟，使小鼠记住其。在学习时间结束后的24小时之后，为了确认乳酸菌的效果，进行了人工回避实验。在10秒钟的探索时间后，将打开闸门且小鼠的四肢均进入暗区域为止的时间(latency time：停留时间)测定300秒钟(retention trial：记忆试验)。
根据公知的试验结果的解析，进入暗区域的时间越长，记忆力越优秀。
(3)水下迷宫试验(Water maze task)
为了试验长期记忆力及空间感知能力，在20±1℃的弱照明条件下，在向直径为90cm、高度为45cm的圆形水箱中添加30cm深度的500ml牛奶的水箱中执行了水下迷宫试验(Morris water maze test)。具体地，将水箱分为4部分的虚拟区域，在其中的一处，以沉入1cm左右的方式以29cm的高度设置直径为6cm的踏板。在训练的第一天，在没有踏板的情况下，进行60秒钟的游泳训练，在剩余4天的时间，每天进行4次的寻找踏板的训练(训练试验：training trial)。可在踏板停留10秒钟，在60秒钟内未寻找到踏板的情况下，可在踏板上休息10秒钟。在训练结束后，利用紫外线灯干燥实验动物。训练每30秒钟反复一次，利用摄像机测定寻找踏板为止所消耗到的时间。在最终实验中，在去除水箱的踏板后，向水箱放入实验动物，并测定停留在踏板所在的位置的时间(Time spent in target quadrant)(探索实验：probe trial)。
(4)物体认知实验(Novel object task)
在以在内部无法看到外部的方式制作的箱(40×40×40cm)内实施物体认知实验。在箱子内固定2个形状和大小相同的物体(A，A')，并使小鼠从箱的中心出发。并且，记录了10分钟的小鼠触摸2个物体的次数。24小时之后，将2个物体中的一个更换为新物体(A，B)，记录触摸原有的物体和新物体的次数(Exploration time)，并以％计算。
(5)老化动物模型的记忆力改善效果
从Raonbio购买C57BL/6小鼠(Ag，雄性，19月龄)作为老化动物模型，并确认新型乳酸菌的作为老化因子的p16蛋白表达抑制及记忆力改善效果。
具体地，以1×109CFU/小鼠/日的浓度分别给药4周的粘膜乳杆菌NK41、长双歧杆菌NK46或它们的1:1混合物。之后，执行了实施例3的Y字形迷宫试验、物体认知实验及海马体中的记忆力相关因子测定实验。
从实验结果确认，相比于正常组，未给药乳酸菌的老化动物模型的自发性交叉行动量减少，给药粘膜乳杆菌NK41的组(Ag+LM)给药长双歧杆菌NK46的组(Ag+BL)及给药它们的混合物的组(Ag+ML)的自发性交叉行动量恢复到正常组水平(图1)。并且，给药粘膜乳杆菌NK41的组(Ag+LM))、给药双歧杆菌NK46的组(Ag+BL)及给药它们的混合物的组(Ag+ML)的触摸新物体的次数恢复到正常组水平(图2)。经确认，相比于老化动物模型，上述乳酸菌给药组抑制作为老化因子的p16的表达、抑制作为炎症因子的NF-kB的活性、增加脑源性神经营养因子的表达(表7)。尤其，经确认，相比于个别乳酸菌，粘膜乳杆菌NK41与长双歧杆菌NK46的混合物呈现更优秀的效果。
表7
Figure BDA0002500709510000211
由此，经确认，作为新型乳酸菌的粘膜乳杆菌NK41、长双歧杆菌NK46及它们的混合物具有优秀的老化动物模型地记忆力改善效果。
(6)阿耳滋海默氏病动物模型的记忆力改善效果
购入4月龄的Tg小鼠[B6C3-Tg(APPswe，PSEN1dE9)85Dbo/J strain-AD mice(Jackson Laboratory，Bar Harbor，Maine，USA0]作为阿耳滋海默氏病动物模型，并使其适应2个月。购入健康的6月龄C57BL/6小鼠(Orient Bio，首尔，韩国)作为正常组，并使其适应2个月。以1×109CFU/小鼠/日的浓度向Tg小鼠分别给药8周的作为新型乳酸菌的粘膜乳杆菌NK41或长双歧杆菌NK46(星期六及星期日不给药)。之后，执行了实施例3的Y字形迷宫实验、人工回避实验、水下迷宫试验及海马体中的记忆力相关因子测定实验。
从实验结果确认，相比于正常组，未给药乳酸菌的Tg小鼠的Y字形迷宫试验中的自发性交叉行动量减少、人工回避实验中的停留时间减少、水下迷宫试验中的停留时间增加，但是，给药粘膜乳杆菌NK41的组(Tg+LM)及给药长双歧杆菌NK46的组(Tg+BL)的自发性交叉行动量及停留时间恢复到正常组水平(图3至图5)。并且，经确认，相比于Tg小鼠，给药上述乳酸菌的组抑制作为炎症因子的NF-kB的活性、增加脑源性神经营养因子的表达(图6)。
由此，经确认，作为新型乳酸菌的粘膜乳杆菌NK41、长双歧杆菌NK46及它们的混合物具有优秀的阿耳滋海默氏病动物模型地记忆力改善效果。
实施例5：新型乳酸菌的精神障碍改善效果
(1)制备精神障碍诱导动物模型-拘束应激(IS)
为了诱导忧虑、抑郁症或应激等的精神障碍，在3×10cm的圆筒形状的拘束应激机构固定小鼠，使得小鼠无法移动。通过每2日1次使小鼠的头朝向上侧的方法反复5次拘束应激。之后，测定忧虑行动。
(2)高架十字迷宫(elevated plus maze，EPM)试验
高架十字迷宫为用于测定应激或忧虑等的精神障碍的程度的实验装置。在本实验使用的高架十字迷宫实验装置为如下的黑色柔性玻璃装置，即，2个开放通道(Open arm(30×7cm))和具有20cm高度的墙的2个封闭通道(Enclosed arm(30×7cm))距底部的高度为50cm且从中心平台分别延伸7cm。在本试验中，在上侧设置有摄像头的20勒克斯亮度的房记录位于高架十字迷宫的小鼠的移动。
具体地，将C57BL/6小鼠(雄性，19～22g)位于高架十字迷宫的正中心且使头朝向开放通道。测定5分钟的停留在开放通道和封闭通道的时间和次数。将四肢均进入的情况视作进入通道(Arm entry)。
在总试验时间中，通过[停留在开放通道的时间/(停留在开放通道的时间+停留在封闭通道的时间)]×100计算停留在开放通道的时间(Time spent in open arms，OT)。并且，通过[开放通道进入/(开放通道进入+封闭通道进入)]×100)计算开放通道进入(openarm entries，OE)。在每次行动实验结束之后，利用70％乙醇去除味道。
根据所公知的试验结果的解析，在停留在开放通道的时间(OT)及开放通道进入(OE)减少的情况下，呈现忧虑或抑郁症等的精神障碍症状。
(3)实验结果
从实验结果确认，在施加拘束应激后，相比于正常组(NOR)，未给药乳酸菌的小鼠(IS)在高架十字迷宫试验中停留在开放通道的时间(OT)及开放通道进入(OE)减少，给药粘膜乳杆菌NK41的组(IS+LM)、给药长双歧杆菌NK46的组(IS+BL)或给药它们的1:1混合物的组(S+LM+BL)停留在道的时间(OT)及开放通道进入(OE)增加(表8)。
表8
Figure BDA0002500709510000231
由此，经确认，作为新型乳酸菌的粘膜乳杆菌NK41及长双歧杆菌NK46具有优秀的忧虑、抑郁症及应激等的精神障碍的改善效果。
实施例6：新型乳酸菌的抑郁症改善效果
(1)制备抑郁小鼠模型
为了诱导抑郁症，在3×10cm的圆筒形状的拘束应激机构固定，并以12小时/日拘束2日来制备抑郁小鼠模型。之后，从第二天开始，给药5日的粘膜乳杆菌NK41(LM)、长双歧杆菌NK46(BL)或它们的1:1混合物(ML)，在最终给药的第二天测定抑郁行动指标。
(2)高架十字迷宫试验
在本试验使用的高价十字迷宫实验装置为如下的黑色柔性玻璃装置，即，2个开放通道(30×7cm)和具有20cm高度的墙的2个封闭通道(30×7cm)距底部的高度为50cm且从中心平台分别延伸7cm。在本试验中，在上侧设置有摄像头的20勒克斯亮度的房记录位于高架十字迷宫的小鼠的移动。
具体地，将57BL/6小鼠(雄性，19～22g)位于高架十字迷宫的正中心且使头朝向开放通道。测定5分钟的停留在开放通道和封闭通道的时间和次数。将四肢均进入的情况视作进入通道。
在总试验时间中，通过[停留在开放通道的时间/(停留在开放通道的时间+停留在封闭通道的时间)]×100计算停留在开放通道的时间。在每次行动实验结束之后，利用70％乙醇去除味道。
(3)强制游泳实验(Forced Swimming Test，FST)
根据Porsolts RM，Le Pichon M，Jalfre M，Nature 266：730-732(1977)「Depression：a new animal model sensitive to antidepressants.」的方法向高度为40cm、直径为20cm的水箱填充30cm深度的温度为25±1℃的水，向每个水箱放入一只实验用小鼠。在总6分钟的时间中，将最初的2分钟作为适应时间不测定，测定最后4分钟的实验动物静止状态(immobility)。静止状态为仅进行将头露出水外的最小限度的移动且直立漂浮不动的状态，若抑郁状态减少，则呈现静止状态的减少。
(4)尾巴悬挂实验(Tail Suspension Test，TST)
根据Steru，L.et al.，Psychopharmacology，(1985)85，367-370，「The tailsuspension test：a new method for screening antidepressants in mice.」的方法，在小鼠尾巴末端的1cm左右安装固定装置后，悬挂于距地面50cm的位置，并测定总6分钟的实验动物的静止状态时间。
(5)测定忧虑及抑郁症状标记物
如上述(1)，施加拘束应激来制备抑郁小鼠模型，给药5日的粘膜乳杆菌NK41(LM)、长双歧杆菌NK46(BL)或它们的1:1混合物(ML)，在最终给药的第二日测定忧虑及抑郁症状标记物。
利用酶联免疫试剂盒(Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)kit)(Ebioscience，San Diego，CA)车渡边纲小鼠血液中的皮质酮，利用免疫印迹方法测定了脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor)及NF-kB(p-p65，p65)。
具体地，通过手术取出海马体(hippocampus)，添加包含1％蛋白酶抑制剂混合物(protease inhibitor cocktail)及磷酸酶抑制剂混合物(phosphatase inhibitorcocktail)的RIPA裂解液(RIPA lysis buffer)来均匀地同质化，并进行离心分离(13200×g，10min，4℃)来获取上清液。在12％聚丙烯酰胺(SDS，sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide)凝胶(gel)对上清液进行电泳后，移至硝酸纤维膜(nitrocellulosemembrane)，利用脱脂乳蛋白阻断(blocking)后清洗。之后，处理脑源性神经营养因子、p65、p-p65、β-actin抗体来使其结合并清洗，处理包含辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase)的二次抗体，利用增强型化学发光检测试剂盒(enhanced chemiluminescencedetection kit)确认蛋白质。
(6)荧光免疫染色
在载玻片固定脑切片，根据Lee等的方法处理抗(anti)-离子化钙结合适配分子1(ionized calcium-binding adapter molecule 1)抗体(1:100，Abcam)或4，6-联脒-2-苯基吲哚(DAPI，4'，6-diamidino-2-phenylindole)，并通过共聚焦显微镜(confocalmicroscope)确认小胶质细胞(microglia)。
(7)实验结果
如图7所示，经确认，在诱导抑郁症之后，相比于正常组(NOR)，未给药乳酸菌的小鼠(DC)在高架十字迷宫试验中停留在开放通道的时间(OT)及开放通道进入(OE)减少，但是，给药粘膜乳杆菌NK41的组(DC+LM)、给药长双歧杆菌NK46的组(DC+BL)或给药它们的1:1混合物的组(DC+ML)的停留在开放通道的时间(OT)及开放通道进入(OE)增加。
由此，经确认，作为新型乳酸菌的粘膜乳杆菌NK41、长双歧杆菌NK46及它们的混合物具有优秀的抑郁症改善效果。
如图8所示，在强制游泳实验中由于拘束应激诱发的忧虑行动及抑郁症状，在给药粘膜乳杆菌NK41的组(DC+LM)、给药长双歧杆菌NK46的组(DC+BL)或给药它们的1:1混合物的组(DC+ML)的静止状态减少，从而确认忧虑行动及抑郁症状得到改善。
如图9所示，在尾巴悬挂实验中由于拘束应激诱发的忧虑行动及抑郁症状，在给药粘膜乳杆菌NK41的组(DC+LM)、给药长双歧杆菌NK46的组(DC+BL)或给药它们的1:1混合物的组(DC+ML)的静止状态减少，从而确认忧虑行动及抑郁症状得到改善。
如图10所示，在由于拘束应激诱导的抑郁小鼠模型的海马体中，出现脑源性神经营养因子的表达减少且诱导NF-kB的活性的现象。相反，经确认，在给药粘膜乳杆菌NK41的组(DC+LM)、给药长双歧杆菌NK46的组(DC+BL)或给药它们的1:1混合物的组(DC+ML)的脑源性神经营养因子的表达增加且NF-kB的活性被抑制。
并且，如图11所示，测定血液内的皮质酮地结果，经确认，在抑郁小鼠模型中，皮质酮显著增加，但给药粘膜乳杆菌NK41的组(DC+LM)、给药长双歧杆菌NK46的组(DC+BL)或给药它们的1:1混合物的组(DC+ML)的血液内的皮质酮显著减少。
同时，如图12所示，观察海马体中的离子化钙结合适配分子1-阳性活性化的小胶质细胞的结果，经确认，在抑郁小鼠模型中，在海马体的CA1及CA3区域均出现离子化钙结合适配分子1-阳性小胶质细胞的活性化，相反，给药粘膜乳杆菌NK41的组(DC+LM)、给药长双歧杆菌NK46的组(DC+BL)或给药它们的1:1混合物的组(DC+ML)的离子化钙结合适配分子1及小胶质细胞的活性化均显著减少。
从如上所述的结果确认，作为新型乳酸菌的粘膜乳杆菌NK41及长双歧杆菌NK46具有优秀的抑郁症及忧虑症状改善效果。
乳酸菌的保藏信息
本发明的发明人于2017年8月4日向作为保藏机构的韩国文生物培养中心(地址：韩国首尔市西大门区弘济内2街45，裕林大厦)保藏粘膜乳杆菌NK41并授予保藏编号KCCM12091P。
并且，本发明的发明人于2017年8月4日向作为保藏机构的韩国文生物培养中心(地址：韩国首尔市西大门区弘济内2街45，裕林大厦)保藏长双歧杆菌NK46并授予保藏编号KCCM12087P。
保藏机构：韩国文生物培养中心(韩国外)
保藏编号：KCCM12087P
保藏日：20170804
保藏机构：韩国文生物培养中心(韩国外)
保藏编号：KCCM12091P
保藏日：20170804
序列表
<110> 庆熙大学校产学协力团
<120> 新型乳酸菌及其用途
<130> 18OP3111PCT
<150> KR 10-2017-0155078
<151> 2017-11-20
<150> KR 10-2018-0142811
<151> 2018-11-19
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1513
<212> DNA
<213> 人工序列()
<220>

Claims (22)

1.一种保藏编号为KCCM12091P的粘膜乳杆菌NK41。
2.一种保藏编号为KCCM12087P的长双歧杆菌NK46。
3.根据权利要求1所述的保藏编号为KCCM12091P的粘膜乳杆菌NK41，其特征在于，上述保藏编号为KCCM12091P的粘膜乳杆菌NK41包含序列1的16S rDNA碱基序列。
4.根据权利要求2所述的保藏编号为KCCM12087P的长双歧杆菌NK46，其特征在于，上述保藏编号为KCCM12087P的长双歧杆菌NK46包含序列2的16S rDNA碱基序列。
5.一种用于预防或治疗记忆障碍、学习障碍或精神障碍的药学组合物，其特征在于，包含保藏编号为KCCM12091P的粘膜乳杆菌NK41、保藏编号为KCCM12087P的长双歧杆菌NK46或它们的混合物。
6.根据权利要求5所述的用于预防或治疗记忆障碍、学习障碍或精神障碍的药学组合物，其特征在于，上述保藏编号为KCCM12091P的粘膜乳杆菌NK41为其活细胞体、其死细胞体、其培养产物、其粉碎产物或其提取物。
7.根据权利要求5所述的用于预防或治疗记忆障碍、学习障碍或精神障碍的药学组合物，其特征在于，上述保藏编号为KCCM12087P的长双歧杆菌NK46为其活细胞体、其死细胞体、其培养产物、其粉碎产物或其提取物。
8.根据权利要求5所述的用于预防或治疗记忆障碍、学习障碍或精神障碍的药学组合物，其特征在于，上述记忆障碍、学习障碍为选自由老化、阿耳滋海默氏病、精神分裂症、帕金森氏病、亨廷顿氏舞蹈病、皮克氏病、克雅氏病、头部伤害、健忘症、记忆力衰退、外伤性脑损伤、癫痫、海马体硬化、头痛、脑衰老、痴呆及失忆症组成的组中的一种以上。
9.根据权利要求5所述的用于预防或治疗记忆障碍、学习障碍或精神障碍的药学组合物，其特征在于，上述精神障碍为选自由忧虑、抑郁症、心境障碍、失眠、妄想性障碍、强迫症、偏头痛、应激、认知障碍及注意力缺陷障碍组成的组中的一种以上。
10.根据权利要求5所述的用于预防或治疗记忆障碍、学习障碍或精神障碍的药学组合物，其特征在于，上述组合物抑制老化因子p16的表达。
11.一种用于预防或改善记忆障碍、学习障碍或精神障碍的保健功能食品，其特征在于，包含保藏编号为KCCM12091P的粘膜乳杆菌NK41、保藏编号为KCCM12087P的长双歧杆菌NK46或它们的混合物。
12.根据权利要求11所述的用于预防或改善记忆障碍、学习障碍或精神障碍的保健功能食品，其特征在于，上述保藏编号为KCCM12091P的粘膜乳杆菌NK41为其活细胞体、其死细胞体、其培养产物、其粉碎产物或其提取物。
13.根据权利要求11所述的用于预防或改善记忆障碍、学习障碍或精神障碍的保健功能食品，其特征在于，上述保藏编号为KCCM12087P的长双歧杆菌NK46为其活细胞体、其死细胞体、其培养产物、其粉碎产物或其提取物。
14.根据权利要求11所述的用于预防或改善记忆障碍、学习障碍或精神障碍的保健功能食品，其特征在于，上述记忆障碍、学习障碍为选自由老化、阿耳滋海默氏病、精神分裂症、帕金森氏病、亨廷顿氏舞蹈病、皮克氏病、克雅氏病、头部伤害、健忘症、记忆力衰退、外伤性脑损伤、癫痫、海马体硬化、头痛、脑衰老、痴呆及失忆症组成的组中的一种以上。
15.根据权利要求11所述的用于预防或改善记忆障碍、学习障碍或精神障碍的保健功能食品，其特征在于，上述精神障碍为选自由忧虑、抑郁症、心境障碍、失眠、妄想性障碍、强迫症、偏头痛、应激、认知障碍及注意力缺陷障碍组成的组中的一种以上。
16.一种用于预防或治疗炎症性疾病的药学组合物，其特征在于，包含保藏编号为KCCM12091P的粘膜乳杆菌NK41、保藏编号为KCCM12087P的长双歧杆菌NK46或它们的混合物。
17.一种用于预防或改善炎症性疾病的保健功能食品，其特征在于，包含保藏编号为KCCM12091P的粘膜乳杆菌NK41、保藏编号为KCCM12087P的长双歧杆菌NK46或它们的混合物。
18.一种记忆障碍、学习障碍或精神障碍疾病的预防或治疗方法，其特征在于，包括给药保藏编号为KCCM12091P的粘膜乳杆菌NK41、保藏编号为KCCM12087P的长双歧杆菌NK46或它们的混合物的步骤。
19.根据权利要求18所述的记忆障碍、学习障碍或精神障碍疾病的预防或治疗方法，其特征在于，上述记忆障碍、学习障碍为选自由老化、阿耳滋海默氏病、精神分裂症、帕金森氏病、亨廷顿氏舞蹈病、皮克氏病、克雅氏病、头部伤害、健忘症、记忆力衰退、外伤性脑损伤、癫痫、海马体硬化、头痛、脑衰老、痴呆及失忆症组成的组中的一种以上。
20.根据权利要求18所述的记忆障碍、学习障碍或精神障碍疾病的预防或治疗方法，其特征在于，上述精神障碍为选自由忧虑、抑郁症、心境障碍、失眠、妄想性障碍、强迫症、偏头痛、应激、认知障碍及注意力缺陷障碍组成的组中的一种以上。
21.一种炎症性疾病的预防或治疗方法，其特征在于，包括给药保藏编号为KCCM12091P的粘膜乳杆菌NK41、保藏编号为KCCM12087P的长双歧杆菌NK46或它们的混合物的步骤。
22.根据权利要求21所述的炎症性疾病的预防或治疗方法，其特征在于，上述炎症性疾病为选自由关节炎、痛风、肝炎、哮喘、肥胖、角膜炎、胃炎、肠炎、肾炎、结肠炎、糖尿病、结核病、支气管炎、胸膜炎、腹膜炎、脊椎炎、胰腺炎、炎症痛、尿道炎、膀胱炎、阴道炎、动脉硬化症、败血症、烫伤，皮肤炎、牙周炎及齿龈炎组成的组中的一种以上。
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CA (1) CA3083094A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114854619A (zh) * 2022-03-09 2022-08-05 重庆第二师范学院 一种植物乳杆菌hfy09及其分离方法和应用

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102230571B1 (ko) * 2018-03-22 2021-03-22 한국식품연구원 비형광성 최종당화산물 억제용 조성물 및 이의 용도
KR102249260B1 (ko) * 2019-10-10 2021-05-10 경희대학교 산학협력단 신규 유산균 및 이의 용도
WO2022092919A1 (ko) * 2020-10-29 2022-05-05 엠테라파마 주식회사 신규한 비피도박테리움 롱검 z1 균주 및 이의 용도
KR102533469B1 (ko) * 2021-01-05 2023-05-17 연세대학교 산학협력단 염증성 장 질환의 예방 또는 치료용 조성물
AU2022356019A1 (en) * 2021-10-01 2024-04-11 Nvp Healthcare Co., Ltd. Novel probiotics and use thereof
WO2023234166A1 (ja) * 2022-06-01 2023-12-07 森永乳業株式会社 抗てんかん用組成物
WO2024105265A1 (fr) 2022-11-17 2024-05-23 Institut National de Recherche pour l’Agriculture, l’Alimentation et l’Environnement Limosilactobacillus mucosae et désordres nécessitant un accroissement du niveau de glp-1

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009100692A (ja) * 2007-10-24 2009-05-14 Crossfield Bio Inc 新規なラクトバチルス属微生物および哺乳動物用乳酸菌製剤
WO2012014971A1 (ja) * 2010-07-30 2012-02-02 株式会社明治 メタボリックシンドローム改善効果を有する乳酸菌
US20120201796A1 (en) * 2009-08-12 2012-08-09 Vetcare Oy Probiotic preparation for the prevention or treatment of canine gastrointestinal disorders
US20150050254A1 (en) * 2011-07-14 2015-02-19 Gt Biologics Ltd Bacterial strains isolated from pigs
US20160326574A1 (en) * 2013-11-01 2016-11-10 Washington University Methods to establish and restore normal gut microbiota function of subject in need thereof
WO2017047962A1 (ko) * 2015-09-15 2017-03-23 경희대학교 산학협력단 신규 유산균 및 퇴행성 뇌질환 또는 인지기능 장애의 예방, 개선 또는 치료용 조성물

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7344867B2 (en) 2005-04-15 2008-03-18 Eamonn Connolly Selection and use of lactic acid bacteria for reducing inflammation in mammals
EP2110028A1 (en) 2008-04-15 2009-10-21 Nestec S.A. Bifidobacterium longum and hippocampal BDNF expression
BRPI0921617A2 (pt) 2008-11-03 2015-08-18 Nestec Sa Composicao nutricional compreendendo probioticos e padroes do sono aperfeicoados
US9193979B2 (en) 2008-11-11 2015-11-24 Richard Allen Kohn Process for producing lower alkyl alcohols from cellulosic biomass using microorganisms
KR101087973B1 (ko) * 2009-06-30 2011-12-01 일동제약주식회사 신규한 락토바실루스 헬베티쿠스, 이의 배양 방법 및 용도
RU2606770C2 (ru) 2011-12-21 2017-01-10 Компани Жервэ Данон Штамм lactobacillus mucosae для получения ферментированных пищевых продуктов
KR101946818B1 (ko) 2015-03-12 2019-02-13 주식회사 파미니티 기억력 개선, 인지기능장애 및 뇌질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
BR112018015097A2 (pt) 2016-02-04 2018-12-26 Universiteit Gent composição e reatores

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009100692A (ja) * 2007-10-24 2009-05-14 Crossfield Bio Inc 新規なラクトバチルス属微生物および哺乳動物用乳酸菌製剤
US20120201796A1 (en) * 2009-08-12 2012-08-09 Vetcare Oy Probiotic preparation for the prevention or treatment of canine gastrointestinal disorders
WO2012014971A1 (ja) * 2010-07-30 2012-02-02 株式会社明治 メタボリックシンドローム改善効果を有する乳酸菌
US20150050254A1 (en) * 2011-07-14 2015-02-19 Gt Biologics Ltd Bacterial strains isolated from pigs
US20160326574A1 (en) * 2013-11-01 2016-11-10 Washington University Methods to establish and restore normal gut microbiota function of subject in need thereof
WO2017047962A1 (ko) * 2015-09-15 2017-03-23 경희대학교 산학협력단 신규 유산균 및 퇴행성 뇌질환 또는 인지기능 장애의 예방, 개선 또는 치료용 조성물

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114854619A (zh) * 2022-03-09 2022-08-05 重庆第二师范学院 一种植物乳杆菌hfy09及其分离方法和应用
CN114854619B (zh) * 2022-03-09 2023-09-29 重庆第二师范学院 一种植物乳杆菌hfy09及其分离方法和应用

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Publication number Publication date
KR20210053855A (ko) 2021-05-12
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US20210145902A1 (en) 2021-05-20
RU2020116733A (ru) 2021-12-22
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KR102487131B1 (ko) 2023-01-11
US20220370523A1 (en) 2022-11-24

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