CN111610325A - 肿瘤单细胞检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种肿瘤单细胞检测试剂盒，用于从体液中获取肿瘤单细胞，具有这样的特征，包括：脂质磁性纳米微球，用于从体液中捕获肿瘤细胞；细胞染色液，用于对肿瘤细胞进行染色；载玻片，用于盛放梯度稀释后的肿瘤细胞，包括载玻片主体以及设置在载玻片主体上的多个装样孔，其中，脂质磁性纳米微球表面带有与肿瘤细胞相对应的抗体，装样孔由涂覆在载玻片主体表面的超疏水油墨包围形成，装样孔的装样量为1μL～100μL。通过本试剂盒能够成本低廉、高效地快速地分离、获取肿瘤单细胞，所获得的肿瘤单细胞能够用于单细胞单细胞基因组测序和转录组测序。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术与生物医学领域，具体涉及一种肿瘤单细胞检测试剂盒。
背景技术
肿瘤是指机体在各种致瘤因子作用下，局部组织细胞增生所形成的新生物，其具有异质性、多样性，并表达不同的标志物。常规检测手段受肿瘤纯度、瘤内细胞异质性限制，很多低丰度的突变信息可能会在整体表征中丢失，而针对单个细胞检测分析策略，能够弥补常规检测分析的局限性，实现低丰度突变检出的可能。单细胞测序技术是指在单个细胞水平上对基因组进行扩增与测序的一项新技术。单细胞测序主要涉及单细胞基因组测序和转录组测序两方面，分别针对单个细胞的DNA和RNA进行序列分析和比较，进而揭示基因组和转录组的变化。
单细胞基因组测序通过在单个细胞水平上对基因组进行测序，揭示单个细胞的基因结构和突变状态，能够解决肿瘤高异质性的难题，为深入研究癌症发生、发展机制及诊断、治疗提供了新的研究思路，开辟了新的研究方向。
目前，为了获取较纯的肿瘤单细胞用于肿瘤基因组学研究，人们开展了一系列纯化技术，如利用手工显微切割纯化技术、激光捕获显微切割技术、流式细胞仪分离技术以及微流控技术等。但以上方法由于实验仪器成本高，对操作技术要求高，对样品损耗大，获取单细胞纯度低等原因，从而限制其广泛普及与应用。
发明内容
本发明是为了解决上述问题而进行的，目的在于提供一种肿瘤单细胞检测试剂盒。
本发明提供了一种肿瘤单细胞检测试剂盒，用于从体液中获取肿瘤单细胞，具有这样的特征，包括：脂质磁性纳米微球，用于从体液中捕获肿瘤细胞；细胞染色液，用于对肿瘤细胞进行染色；载玻片，用于盛放梯度稀释后的肿瘤细胞，包括载玻片主体以及设置在载玻片主体上的多个装样孔，其中，脂质磁性纳米微球表面带有与肿瘤细胞相对应的抗体，装样孔由涂覆在载玻片主体表面的超疏水油墨包围形成，装样孔的装样量为1μL～100μL。
在本发明提供的肿瘤单细胞检测试剂盒中，还可以具有这样的特征：其中，装样孔的装样量为1μL～2μL。
在本发明提供的肿瘤单细胞检测试剂盒中，还可以具有这样的特征：其中，超疏水油墨的厚度为15μm～500μm。
在本发明提供的肿瘤单细胞检测试剂盒中，还可以具有这样的特征：其中，装样孔的形状为圆形，直径为1.0mm～10mm。
在本发明提供的肿瘤单细胞检测试剂盒中，还可以具有这样的特征：其中，装样孔的形状为方形，长度为1.0mm～10mm，宽度为1.0mm～10mm。
在本发明提供的肿瘤单细胞检测试剂盒中，还可以具有这样的特征：其中，多个装样孔在载玻片主体上排布成X排Y列，1≤X≤40，1≤Y≤15。
在本发明提供的肿瘤单细胞检测试剂盒中，还可以具有这样的特征：其中，载玻片主体为长度为75mm、宽度为25mm、厚度为1.15mm的玻璃片。
在本发明提供的肿瘤单细胞检测试剂盒中，还可以具有这样的特征：其中，脂质磁性纳米微球是由二油酰基磷脂酰胆碱组成的磷脂双分子层包裹的Fe3O4纳米粒子，脂质磁性纳米微球平均粒径为50nm～10000nm。
在本发明提供的肿瘤单细胞检测试剂盒中，还可以具有这样的特征：其中，染色液包括荧光类染色液、探针类染色液以及化学类染料。
在本发明提供的肿瘤单细胞检测试剂盒中，还可以具有这样的特征，还包括：磁分离装置，用于将被捕获的肿瘤细胞与体液中的其它成分进行分离。
发明的作用与效果
根据本发明所涉及的肿瘤单细胞检测试剂盒，因为包括脂质磁性纳米微球、细胞染色液以及载玻片，载玻片包括多个装样量为1μL～100μL的装样孔，通过脂质磁性纳米微球能够从体液中捕获肿瘤细胞，通过细胞染色液能够对被捕获的肿瘤细胞进行染色，然后将经过染色的肿瘤细胞进行梯度稀释后，将不同浓度的稀释液分别涂布在载玻片的不同装样孔内并置于显微镜下就能够鉴定得到肿瘤单细胞。通过本试剂盒能够成本低廉、高效地快速地分离、获取肿瘤单细胞，所获得的肿瘤单细胞能够用于单细胞单细胞基因组测序和转录组测序。
此外，由于装样孔由涂覆在载玻片主体表面的超疏水油墨包围形成，因此装样孔的装样量能够达到1μL～100μL这样小的体积，而这样小的体积有助于获得肿瘤单细胞，即某一个装样孔内仅有一个肿瘤细胞，避免了当装样孔的装样量过大时多个装样孔内都是多个肿瘤细胞的情况发生。同时，载玻片主体上能够包含多个装样孔，可以满足多个浓度梯度的样品同时测试的需要，还可以满足多组样品同时进行平行实验的要求。
附图说明
图1是本发明的实施例一中载玻片的结构示意图；
图2是本发明的实施例一中载玻片的剖视图；
图3是本发明的实施例三中荧光显微镜观察结果图；
图4是本发明的实施例四中荧光显微镜观察结果图；
图5是本发明的实施例五中荧光显微镜观察结果图。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，以下实施例结合附图对本发明肿瘤单细胞检测试剂盒作具体阐述。
<实施例一>
本实施例提供了一种肿瘤单细胞检测试剂盒用于从体液中分离得到肿瘤单细胞，包括脂质磁性纳米微球、磁分离架、细胞染色液、载玻片、以及清洗液。其中，体液可以为血液、尿液、唾液、胸腹水、痰液以及脑脊液等。
脂质磁性纳米微球为由二油酰基磷脂酰胆碱(DOPC)组成的磷脂双分子层包裹的Fe3O4纳米粒子。并且，脂质磁性纳米微球的表面带(负载)有与体液中的肿瘤细胞相对应的抗体。例如，如果体液中的肿瘤细胞为肺癌、胃癌细胞，则抗体为表皮生长因子受体抗体(EGFR)、上皮细胞粘附分子抗体(EpCAM)、波形蛋白抗体(Vimentin)以及叶酸等抗体中的一种或多种；如果体液中的肿瘤细胞为乳腺癌、卵巢癌细胞，则抗体为人表皮生长因子受体-2抗体(HER-2)、附膜蛋白抗体(MUC-1)等抗体中的一种或多种；如果体液中的肿瘤细胞为神经上皮肿瘤细胞，则抗体为胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。脂质磁性纳米微球平均粒径为50nm～10000nm。脂质磁性纳米微球能够从体液中特异性地捕获肿瘤细胞。
磁分离架采用塑料材料经过注塑工艺制成，且内含永久磁铁。在使用时，磁分离架能够通过磁铁对Fe3O4的吸引作用从而对脂质磁性纳米微球以及其它溶液(例如体液中的其它成分)进行磁分离。
细胞染色液包括荧光类染色液、探针类染色液以及化学类染料。
荧光类染色液包括CK8-FITC、CK18-FITC、CK19-FITC、CD45-PE、DAPI、DiA以及罗丹明123中的任意一种或多种。探针类染色液包括CEP8、CEP17以及HER-2中的任意一种或多种。化学类染料包括苏木精-伊红。在使用时，可以根据实际需要选择所需种类的荧光染色液，并配合使用相应的显微镜进行观察。例如，使用荧光类染色液或探针类染色液时，需要配合使用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜进行观察；使用化学类染料时，需要配合使用光学显微镜进行观察。
图1是本发明的实施例一中载玻片的结构示意图。
图2是本发明的实施例一中载玻片的剖视图。
如图1、2所示，载玻片10用于盛放梯度稀释后的肿瘤细胞并用于显微镜观察，包括载玻片主体11以及多个装样孔12。
载玻片主体11的长度为75mm，宽度25为mm，厚度为1.15mm。载玻片主体11与现有的常规载玻片的结构相同，为玻璃片，具有透明区的显微镜视野区域111及不透明的的手持区域112。
多个装样孔12均匀分布在载玻片主体11的显微镜视野区域111的一侧表面。装样孔12由涂覆在载玻片主体表面的超疏水油墨包围形成。装样孔12的装样量为1μL～100μL。超疏水油墨的厚度为15μm～500μm。装样孔12的形状为圆形或方形。装样孔12为圆形时，其直径为1.0mm～10mm。装样孔12为方形时，其长度为1.0mm～10mm，宽度为1.0mm～10mm。当装样孔12为方形时，优选的，装样孔12为正方形。
优选的，装样孔12的装样量为1μL～2μL。超疏水油墨的厚度为15μm～30μm。装样孔12为圆形时，其直径为1.0mm～1.6mm。装样孔12为方形时，其长度为1.0mm～1.6mm，宽度为1.0mm～1.6mm。
在本实施例中，装样孔12的装样量为2μL，超疏水油墨的厚度为20μm，装样孔12的形状为正方形，装样孔12的长度为1.4mm。
多个装样孔12在载玻片主体上11排布成X排Y列，1≤X≤40，1≤Y≤15。优选的，3≤X≤6，6≤Y≤15。
在本实施例中，装样孔12在载玻片主体上11排布成6排15列。
为了便于区分各个装样孔12，载玻片主体11上还可以标有或贴有计数标记(例如图1所示的，排数用A、B、C...F表示，列数用1、2、3...15表示)。这些计数标记设置在显微镜视野区域111的超疏水油墨区域的外侧。
清洗液为0.1M PBS(pH＝7.4，不含Mg2+，Ca2+)。
<实施例二>
本实施例为使用实施例一中的肿瘤单细胞检测试剂盒从体液中获取肿瘤单细胞并对获取的肿瘤单细胞进行基因分析的方法。
该检测方法包括以下步骤：
步骤一、肿瘤细胞富集。
向适宜体积的体液样本中加入20μL脂质磁性纳米微球，孵育15min～30min，孵育期间每隔5min轻轻震荡混匀一次，磁分离架上静置10min～15min，收集肿瘤细胞。
步骤二、肿瘤细胞染色。
向步骤一得到的肿瘤细胞中加入细胞染色液并用清洗液洗掉多余染色液。
步骤三、肿瘤细胞梯度稀释。
用蒸馏水对染色后的肿瘤细胞进行梯度稀释，分别得到不同稀释倍数的稀释液。通常选择稀释1倍、稀释5倍以及稀释10倍。然后将这些不同浓度的稀释液分别点样在载玻片10的不同装样孔12中。
步骤四、肿瘤细胞可视化鉴定。
将装样后的载玻片置于相应的显微镜下鉴定肿瘤单细胞。
步骤五、肿瘤单细胞获取。
用清洗液将载玻片中的肿瘤单细胞吹打下来，转移到200μL EP管中。
步骤六、肿瘤单细胞基因分析。
向步骤五的EP管中加入常用的细胞裂解液(例如，市售DNA提取试剂盒中的裂解液)裂解细胞；利用MALBAC方法，进行MALBAC预扩增和指数式扩增。然后进行文库构建、全基因组测序以及生物信息学分析。
<实施例三>
本实施例为使用实施例一中的肿瘤单细胞检测试剂盒，并按照实施例二中的检测方法对血液样本进行肿瘤单细胞获取及单细胞测序实验。
实验过程包括：
步骤一、肿瘤细胞富集。
向7.5mL的血液样本中加入20μL脂质磁性纳米微球，孵育30min，孵育期间每隔5min轻轻震荡混匀一次，磁分离架上静置15min，收集肿瘤细胞。本实施例中的脂质磁性纳米微球的表面带(负载)有EGFR。
步骤二、肿瘤细胞染色。
向步骤一得到的肿瘤细胞中加入细胞染色液并用清洗液洗掉多余染色液。本实施例中的染色液包括荧光染料DAIP、CK8-FITC、CK18-FITC以及CK19-FITC。
步骤三、肿瘤细胞梯度稀释。
将染色后的肿瘤细胞平均分成三份，进行三组平行实验。每组实验进行相同的操作，即用蒸馏水对该组的肿瘤细胞进行梯度稀释，分别得到稀释1倍、稀释5倍以及稀释10倍的稀释液。然后所有不同浓度的稀释液分别点样在载玻片10的不同装样孔12中。在点样时，为了方便比较，可以将一组平行实验的稀释液按照浓度由高至低依次点样于载玻片10的第A排第1～3列。将其余两组平行实验的稀释液按照同样的规则依次点样于载玻片10的第B、C排。
步骤四、肿瘤细胞可视化鉴定。
将装样后的载玻片置于相应的显微镜下鉴定肿瘤单细胞。本实施例中的显微镜为荧光显微镜。
图3是本发明的实施例三中荧光显微镜观察结果图。
如图3所示，载玻片10的装样孔(盛装稀释10倍的稀释液)分别在明场、FITC检测视场(在FITC相应的激发和发射光照射下)、DAIP检测视场(在DAIP相应的激发和发射光照射下)下的视图分别为图3a、图3b、图3c，图3a、图3b以及图3c的重叠图为3d。从图3可以看出，图3a、图3b、图3c为同一细胞，该细胞能够被FITC着染，也能够被DAIP着染，因此，可以鉴定该单细胞为癌细胞。
此外，在荧光显微镜下观察发现该装样孔内仅观察到这一个癌细胞。
步骤五、肿瘤单细胞获取。
用清洗液将载玻片10中的肿瘤单细胞吹打下来，转移到200μL EP管中。
步骤六、肿瘤单细胞基因分析。
向步骤五的EP管中加入细胞裂解液裂解细胞；利用MALBAC方法，进行MALBAC预扩增和指数式扩增。然后进行文库构建、全基因组测序以及生物信息学分析。
<实施例四>
本实施例为使用实施例一中的肿瘤单细胞检测试剂盒，并按照实施例二中的检测方法对脑脊液样本进行肿瘤单细胞获取及单细胞测序实验。
实验过程包括：
步骤一、肿瘤细胞富集。
向15mL脑脊液样本中加入20μL脂质磁性纳米微球，孵育30min，孵育期间每隔5min轻轻震荡混匀一次，磁分离架上静置15min，收集肿瘤细胞。本实施例中的脂质磁性纳米微球的表面带(负载)有EpCAP。
步骤二、肿瘤细胞染色。
向步骤一得到的肿瘤细胞中加入细胞染色液并用清洗液洗掉多余染色液。本实施例中的染色液包括荧光染料DAIP、CK8-FITC、CK18-FITC以及CK19-FITC。
步骤三、肿瘤细胞梯度稀释。
将染色后的肿瘤细胞平均分成三份，进行三组平行实验。每组实验进行相同的操作，即用蒸馏水对该组的肿瘤细胞进行梯度稀释，分别得到稀释1倍、稀释5倍以及稀释10倍的稀释液。然后所有不同浓度的稀释液分别点样在载玻片10的不同装样孔12中。在点样时，为了方便比较，可以将一组平行实验的稀释液按照浓度由高至低依次点样于载玻片10的第A排第1～3列。将其余两组平行实验的稀释液按照同样的规则依次点样于载玻片10的第B、C排。
步骤四、肿瘤细胞可视化鉴定。
将装样后的载玻片置于相应的显微镜下鉴定肿瘤单细胞。本实施例中的显微镜为荧光显微镜。
图4是本发明的实施例四中荧光显微镜观察结果图。
如图4所示，载玻片10的装样孔(盛装稀释10倍的稀释液)分别在明场、FITC检测视场(在FITC相应的激发和发射光照射下)、DAIP检测视场(在DAIP相应的激发和发射光照射下)下的视图分别为图4a、图4b、图4c，图4a、图4b以及图4c的重叠图为4d。从图4可以看出，图4a、图4b、图4c为同一细胞，该细胞能够被FITC着染，也能够被DAIP着染，因此，可以鉴定该单细胞为癌细胞。
此外，在荧光显微镜下观察发现该装样孔内仅观察到这一个癌细胞。
步骤五、肿瘤单细胞获取。
用清洗液将载玻片10中的肿瘤单细胞吹打下来，转移到200μL EP管中。
步骤六、肿瘤单细胞基因分析。
向步骤五的EP管中加入细胞裂解液裂解细胞；利用MALBAC方法，进行MALBAC预扩增和指数式扩增。然后进行文库构建、全基因组测序以及生物信息学分析。
<实施例五>
本实施例为使用实施例一中的肿瘤单细胞检测试剂盒，并按照实施例二中的检测方法对胸腹水样本进行肿瘤单细胞获取及单细胞测序实验。
实验过程包括：
步骤一、肿瘤细胞富集。
向10mL的胸腹水样本中加入20μL脂质磁性纳米微球，孵育30min，孵育期间每隔5min轻轻震荡混匀一次，磁分离架上静置15min，收集肿瘤细胞。本实施例中的脂质磁性纳米微球的表面带(负载)有Vimentin。
步骤二、肿瘤细胞染色。
向步骤一得到的肿瘤细胞中加入细胞染色液并用清洗液洗掉多余染色液。本实施例中的染色液包括荧光染料DAIP、CK8-FITC、CK18-FITC以及CK19-FITC。
步骤三、肿瘤细胞梯度稀释。
将染色后的肿瘤细胞平均分成三份，进行三组平行实验。每组实验进行相同的操作，即用蒸馏水对该组的肿瘤细胞进行梯度稀释，分别得到稀释1倍、稀释5倍以及稀释10倍的稀释液。然后所有不同浓度的稀释液分别点样在载玻片10的不同装样孔12中。在点样时，为了方便比较，可以将一组平行实验的稀释液按照浓度由高至低依次点样于载玻片10的第A排第1～3列。将其余两组平行实验的稀释液按照同样的规则依次点样于载玻片10的第B、C排。
步骤四、肿瘤细胞可视化鉴定。
将装样后的载玻片置于相应的显微镜下鉴定肿瘤单细胞。本实施例中的显微镜为荧光显微镜。
图5是本发明的实施例五中荧光显微镜观察结果图。
如图5所示，载玻片10的装样孔(盛装稀释10倍的稀释液)分别在明场、FITC检测视场(在FITC相应的激发和发射光照射下)、DAIP检测视场(在DAIP相应的激发和发射光照射下)下的视图分别为图5a、图5b、图5c，图5a、图5b以及图5c的重叠图为5d。从图5可以看出，图5a、图5b、图5c为同一细胞，该细胞能够被FITC着染，也能够被DAIP着染，因此，可以鉴定该单细胞为癌细胞。
此外，在荧光显微镜下观察发现该装样孔内仅观察到这一个癌细胞。
步骤五、肿瘤单细胞获取。
用清洗液将载玻片10中的肿瘤单细胞吹打下来，转移到200μL EP管中。
步骤六、肿瘤单细胞基因分析。
向步骤五的EP管中加入细胞裂解液裂解细胞；利用MALBAC方法，进行MALBAC预扩增和指数式扩增。然后进行文库构建、全基因组测序以及生物信息学分析。
实施例的作用与效果
根据实施例一所涉及的肿瘤单细胞检测试剂盒，因为包括脂质磁性纳米微球、细胞染色液以及载玻片，载玻片包括多个装样量为1μL～100μL的装样孔，通过脂质磁性纳米微球能够从体液中捕获肿瘤细胞，通过细胞染色液能够对被捕获的肿瘤细胞进行染色，然后将经过染色的肿瘤细胞进行梯度稀释后，将不同浓度的稀释液分别涂布在载玻片的不同装样孔内并置于显微镜下就能够鉴定得到肿瘤单细胞。通过本试剂盒能够成本低廉、高效地快速地分离、获取肿瘤单细胞，所获得的肿瘤单细胞能够用于单细胞单细胞基因组测序和转录组测序。
此外，由于装样孔由涂覆在载玻片主体表面的超疏水油墨包围形成，因此装样孔的装样量能够达到1μL～100μL这样小的体积，而这样小的体积有助于获得肿瘤单细胞，即某一个装样孔内仅有一个肿瘤细胞，避免了当装样孔的装样量过大时多个装样孔内都是多个肿瘤细胞的情况发生。同时，载玻片主体上能够包含多个装样孔，可以满足多个浓度梯度的样品同时测试的需要，还可以满足多组样品同时进行平行实验的要求。
进一步地，超疏水油墨的厚度为15μm～30μm，装样孔的形状为圆形，直径为1.0mm～1.6mm，使得装样孔的装样量为1μL～2μL，进而便于显微镜下快速鉴定单细胞，避免了装样孔的直径过大时待观测面积太大所造成的显微镜下检测时间长的问题；还避免了装样孔的直径过小时，液体厚度太大使得无法观测到液体内的细胞的问题。
进一步地，超疏水油墨的厚度为15μm～30μm，装样孔的形状为方形，长度为1.0mm～1.6mm，宽度为1.0mm～1.6mm。使得装样孔的装样量为1μL～2μL，进而便于显微镜下快速鉴定单细胞，避免了装样孔的表面积过大时待观测面积太大所造成的显微镜下检测时间长的问题；还避免了装样孔的表面积过小时，液体厚度太大使得无法观测到液体内的细胞的问题。
上述实施方式为本发明的优选案例，并不用来限制本发明的保护范围。
例如，在上述实施方式中用蒸馏水对染色后的肿瘤细胞进行梯度稀释，将肿瘤细胞稀释成稀释1倍、稀释5倍以及稀释10倍的稀释液。但在实际应用中，还可以根据装样孔的装样量的多少来调整稀释倍数，例如，如果装样孔的装样量较大，那么可以肿瘤细胞稀释成稀释1倍、稀释5倍、稀释10倍以及稀释20倍或更大稀释倍数的稀释液，只要使得显微镜下鉴定时有装样孔满足装样孔内仅有一个肿瘤细胞的要求即可；如果装样孔的装样量较小，那么可以肿瘤细胞稀释成稀释1倍、稀释5倍或更小稀释倍数的稀释液。
Claims (10)
1.一种肿瘤单细胞检测试剂盒，用于从体液中获取肿瘤单细胞，其特征在于，包括：
脂质磁性纳米微球，用于从所述体液中捕获肿瘤细胞；
细胞染色液，用于对所述肿瘤细胞进行染色；
载玻片，用于盛放梯度稀释后的所述肿瘤细胞，包括载玻片主体以及设置在所述载玻片主体上的多个装样孔，
其中，所述脂质磁性纳米微球表面带有与所述肿瘤细胞相对应的抗体，
所述装样孔由涂覆在所述载玻片主体表面的超疏水油墨包围形成，
所述装样孔的装样量为1μL～100μL。
2.根据权利要求1所述的肿瘤单细胞检测试剂盒，其特征在于：
其中，所述装样孔的装样量为1μL～2μL。
3.根据权利要求1所述的肿瘤单细胞检测试剂盒，其特征在于：
其中，所述超疏水油墨的厚度为15μm～500μm。
4.根据权利要求3所述的肿瘤单细胞检测试剂盒，其特征在于：
其中，所述装样孔的形状为圆形，直径为1.0mm～10mm。
5.根据权利要求3所述的肿瘤单细胞检测试剂盒，其特征在于：
其中，所述装样孔的形状为方形，长度为1.0mm～10mm，宽度为1.0mm～10mm。
6.根据权利要求1所述的肿瘤单细胞检测试剂盒，其特征在于：
其中，多个所述装样孔在所述载玻片主体上排布成X排Y列，1≤X≤40，1≤Y≤15。
7.根据权利要求1所述的肿瘤单细胞检测试剂盒，其特征在于：
其中，载玻片主体为长度为75mm、宽度为25mm、厚度为1.15mm的玻璃片。
8.根据权利要求1所述的肿瘤单细胞检测试剂盒，其特征在于：
其中，所述脂质磁性纳米微球是由二油酰基磷脂酰胆碱组成的磷脂双分子层包裹的Fe3O4纳米粒子，
所述脂质磁性纳米微球平均粒径为50nm～10000nm。
9.根据权利要求1所述的肿瘤单细胞检测试剂盒，其特征在于：
其中，所述染色液包括荧光类染色液、探针类染色液以及化学类染料。
10.根据权利要求1所述的肿瘤单细胞检测试剂盒，其特征在于，还包括：
磁分离装置，用于将被捕获的所述肿瘤细胞与所述体液中的其它成分进行分离。
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