CN111587818A - 一种斑鳠的人工繁殖方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种斑鳠的人工繁殖方法，先进行精液冷冻储备，然后在繁殖季节对雌鱼进行催产，并挤出卵粒，再将卵粒与解冻的精液混合受精得到受精卵，最后受精卵孵化，进行苗种培育即可，实现了斑鳠的人工繁殖，解决了当前斑鳠鱼苗人工繁育困难的技术问题，使得批量生产斑鳠苗种成为现实。

Description

一种斑鳠的人工繁殖方法
技术领域
本发明涉及水产品养殖技术领域，特别是涉及一种斑鳠的人工繁殖方法。
背景技术
斑鳠是鲿科鳠属的一个物种，也叫做魽鱼、芝麻魽、白须魽。斑鳠栖息于江河的底层，以小型水生动物为食，如水生昆虫、小鱼、小虾等，也食少量的高等水生植物碎屑。斑鳠分布于中国钱塘江、九龙江、韩江、珠江、元江等水系和南亚地区的湄公河流域及马来西亚、印度尼西亚的内陆河流。斑鳠是性情较为温和的大型肉食性经济鱼类，全身无鳞，肉质细嫩，味美，营养价值高，享有“淡水之王”的美誉，被誉为珠江“四大名鱼”之一，曾为产区的重要经济鱼类。由于人工繁育技术还不成熟，加上过度捕捞，现数量稀少。
近年来，由于长江上游生态环境的变化，其资源量呈下降趋势，为保护此种长江上游特有鱼类资源，开展人工养殖是目前我国采取的主要措施之一。批量生产斑鳠苗种是开展人工养殖的前提条件，斑鳠的人工繁殖技术是目前开展其人工养殖的关键。
斑鳠的人工繁殖技术尚处于研究阶段，采用的主要方法是利用野外采集的成熟亲鱼，立即进行人工催产，发情后进行人工授精，由于雄鱼精巢为放射分枝状，根本无法挤出精液，要靠杀雄鱼将精巢碾碎才能得到精液，但由于人工驯养的成熟亲鱼较少，在野外收集的成熟亲鱼又具偶然性，往往收集到了发育较好的雌鱼又找不到好的雄鱼配对，导致无法催产繁殖。即使有雄鱼，在对雌鱼进行催产繁殖时将雄鱼杀死，也不能保证精子的质量，也可能造成繁殖失败。
专利申请CN109496921A公开了一种斑鳠养殖方法，对斑鳠进行分时段养殖，将斑鳠的养殖过程分成了鱼苗培育前期、鱼苗培育后期、养殖前期、养殖中期、养殖后期等5个时期，并严格控制养殖过程中各个时期的水体参数并使用每个时期对应的不同养殖料进行饲喂，使得斑鳠的生长发育全过程都能得到充分环境及营养支持，以改善其营养结构，提高成鱼产量。但是该专利主要技术改进在于养殖过程，仍然没有解决鱼苗人工繁育困难的问题。
发明内容
本发明的目的就是要提供一种斑鳠的人工繁殖方法，以解决鱼苗人工繁育困难的技术问题。
为实现上述目的，本发明是通过如下方案实现的：
一种斑鳠的人工繁殖方法，先进行精液冷冻储备，然后在繁殖季节对雌鱼进行催产，并挤出卵粒，再将卵粒与解冻的精液混合受精得到受精卵，最后受精卵孵化，进行苗种培育即可；其中，精液冷冻储备的具体方法如下：
(A)预混液的制备：以重量份计，先边搅拌边将0.2～0.3份月见草油滴加至1份鸡蛋清，搅拌混匀，然后于55～65℃条件下水浴加热5～8分钟，10000～12000r/min搅拌15～20分钟，离心取上清液；再向上清液中加入0.05～0.08份木瓜籽干细胞提取物和0.02～0.04份酵母葡聚糖，超声波振荡均匀，即得所述预混液，备用；
(B)防冻液的制备：以重量份计，先将3～4份质量浓度8～12％甲醛水溶液与0.08～0.12份氯化钠、1份麦芽糖搅拌混合，然后加入0.2～0.3份预混液，超声波振荡均匀，即得所述防冻液；
(C)然后从雄鱼精巢中采集精子活力90％以上的精液，再将精液与防冻液按照体积比1：15～25混合制成混合液；
(D)分装，密封并平衡处理，液氮熏蒸并保存。
优选的，步骤(A)中，所述木瓜籽干细胞提取物的制备方法如下：先取成熟木瓜籽，洗净晾干后粉碎成木瓜籽粉末，然后将木瓜籽粉末接种至培养基中，在温度26～30℃和pH＝5.5～6.5条件下培养时间30～35天，后处理，即得所述的木瓜籽干细胞提取物。
进一步优选的，木瓜籽粉末的接种方法为：将木瓜籽粉末均匀撒在培养基表面，接种量为每平方厘米3～5mg。
进一步优选的，所述培养基为水溶液，以重量浓度计，包含：硫酸镁130～140mg/L，硝酸钾800～900mg/L，氯化钙100～110mg/L，烟酸1～2mg/L，L-精氨酸110～120mg/L，α-萘乙酸2.5～3.5mg/L，蔗糖35～45mg/L，琼脂3～3.3mg/L。
进一步优选的，后处理的具体方法是：过滤得固体培养物，-40～-50℃冷冻8～10小时，自然解冻后利用超声波破碎仪破碎细胞，离心取上清，浓缩，真空冷冻干燥，即得所述的木瓜籽干细胞提取物。
优选的，步骤(C)中，精液采集的具体方法如下：从市场上购买的雄鱼宰杀获得精巢，或直接买回斑鳠雄鱼的精巢；精巢必须饱满，用手捏碎有乳白色的精液流出；精巢带回无菌实验室，用剪刀剪碎，再用匀浆器磨成浆，用吸管吸2～3滴精液放到载玻片上，用清水激活，在显微镜下观察精子的活力，将精子活力大于90％的精液分装到事先准备好的抗冻试管中。
优选的，步骤(D)的具体方法是：将混合液分装至试管中，每支试管装1mL，密封后在4℃冰箱内平衡30分钟，平衡结束后在液氮上方7cm处熏蒸10分钟，熏蒸结束后放入液氮中保存。
优选的，催产的具体方法如下：在繁殖季节，将从野外收集的发育较好的雌鱼或经过人工驯养发育较好的成熟雌鱼作为催产亲鱼，先对催产亲鱼进行催产药物注射，然后放入催产池中，开启进水阀进行冲水，流速控制在0.5m/s以上，水温为24～28℃，水中溶解氧保持在8mg/L以上，pH为7.0～8.2。
进一步优选的，采用两针注射法进行催产药物注射，即促黄体素释放激素类似物(LRH-A3)、鲤鱼脑垂体(PG)和绒毛膜促性腺激素(HCG)的混合物，第一针剂量为每公斤雌鱼注射PG 1mg+LRH-A3 2μg，第二针剂量为每公斤雌鱼注射PG 6～8mg+LRH-A3 6～10μg+HCG800～1200IU。
进一步优选的，所述催产池的准备方法如下：准备一长方形玻璃钢催产池或水泥催产池，水泥催产池底部和池壁贴上瓷砖，安装好进排水管道，做好防逃，在催产池底部放置2～3个容量大于50kg的陶瓷坛，营造仿野外生存环境。
优选的，受精卵的获得方法为：将雌鱼捞出用毛巾檫干水分，将卵挤到干燥光滑的塑料盆里，同时将储存在液氮罐中的精液取出放置在清水中6s解冻后倒入塑料盆中，用羽毛轻轻搅动使精卵充分混合，再加入少量清水(用量以刚刚没过受精卵为宜)激活，静置1～2分钟完成受精。
优选的，孵化的具体方法是：先将受精卵用羽毛均匀撒在聚乙烯粘网上，再放进孵化槽内进行流水孵化；孵化时受精卵脱膜前孵化槽内水体交换率为10次/d，脱膜后交换率为5次/d，脱膜后在孵化槽发育至仔鱼鳔充气后即可进行苗种培育。
本发明的有益效果是：
本发明先进行精液冷冻储备，然后在繁殖季节对雌鱼进行催产，并挤出卵粒，再将卵粒与解冻的精液混合受精得到受精卵，最后受精卵孵化，进行苗种培育即可，实现了斑鳠的人工繁殖，解决了当前斑鳠鱼苗人工繁育困难的技术问题，使得批量生产斑鳠苗种成为现实。
在进行精液冷冻储备时，将精液与防冻液混合冷冻储备，有效抑制精子新陈代谢水平，延长精子寿命保持精子活力，保证受精卵的孵化率和斑鳠成活率。
本发明的防冻液是由甲醛水溶液、氯化钠、麦芽糖和预混液等混合制成，其中，预混液是由月见草油、鸡蛋清、木瓜籽干细胞提取物、酵母葡聚糖混合制成。甲醛作为最主要的抗冻成分，氯化钠、麦芽糖作为稀释成分；月见草油的主要成分为γ-亚麻油酸以及维生素、矿物质等；鸡蛋清含有丰富的蛋白质；木瓜籽干细胞提取物，其原料木瓜籽中含有木瓜酵素、矿物质、丰富种类的氨基酸等，具有良好的自由基清除能力，干细胞提取物可促进细胞再生，恢复细胞的活跃能力；酵母葡聚糖是一种细菌性多糖，具有修复细胞之功效。预混液中的成分一方面包裹在精子表面形成保护作用，强化抗冻效果，另一方面为精子提供营养支持，后续解冻后迅速恢复活力，完成受精孵化。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
参考实施例1
防冻液的制备
(A)预混液的制备：先边搅拌边将0.2～0.3kg月见草油滴加至1kg鸡蛋清，搅拌混匀，然后于55～65℃条件下水浴加热5～8分钟，10000～12000r/min搅拌15～20分钟，离心取上清液；再向上清液中加入0.05～0.08kg木瓜籽干细胞提取物和0.02～0.04kg酵母葡聚糖，超声波振荡均匀，即得所述预混液，备用；
(B)防冻液的制备：先将3～4kg质量浓度8～12％甲醛水溶液与0.08～0.12kg氯化钠、1kg麦芽糖搅拌混合，然后加入0.2～0.3kg预混液，超声波振荡均匀，即得所述防冻液。
参考实施例2
防冻液的制备
(A)预混液的制备：先边搅拌边将0.2～0.3kg月见草油滴加至1kg鸡蛋清，搅拌混匀，然后于55～65℃条件下水浴加热5～8分钟，10000～12000r/min搅拌15～20分钟，离心取上清液；再向上清液中加入0.05～0.08kg木瓜籽干细胞提取物和0.02～0.04kg酵母葡聚糖，超声波振荡均匀，即得所述预混液，备用；
(B)防冻液的制备：先将3～4kg质量浓度8～12％甲醛水溶液与0.08～0.12kg氯化钠、1kg麦芽糖搅拌混合，然后加入0.2～0.3kg预混液，超声波振荡均匀，即得所述防冻液。
参考实施例3
防冻液的制备
(A)预混液的制备：先边搅拌边将0.2～0.3kg月见草油滴加至1kg鸡蛋清，搅拌混匀，然后于55～65℃条件下水浴加热5～8分钟，10000～12000r/min搅拌15～20分钟，离心取上清液；再向上清液中加入0.05～0.08kg木瓜籽干细胞提取物和0.02～0.04kg酵母葡聚糖，超声波振荡均匀，即得所述预混液，备用；
(B)防冻液的制备：先将3～4kg质量浓度8～12％甲醛水溶液与0.08～0.12kg氯化钠、1kg麦芽糖搅拌混合，然后加入0.2～0.3kg预混液，超声波振荡均匀，即得所述防冻液。
参考对比例1
防冻液的制备
(A)预混液的制备：先将1kg鸡蛋清于55～65℃条件下水浴加热5～8分钟，10000～12000r/min搅拌15～20分钟，离心取上清液；再向上清液中加入0.05～0.08kg木瓜籽干细胞提取物和0.02～0.04kg酵母葡聚糖，超声波振荡均匀，即得所述预混液，备用；
(B)防冻液的制备：先将3～4kg质量浓度8～12％甲醛水溶液与0.08～0.12kg氯化钠、1kg麦芽糖搅拌混合，然后加入0.2～0.3kg预混液，超声波振荡均匀，即得所述防冻液。
参考对比例2
防冻液的制备
(A)预混液的制备：先边搅拌边将0.2～0.3kg月见草油滴加至1kg鸡蛋清，搅拌混匀，然后于55～65℃条件下水浴加热5～8分钟，10000～12000r/min搅拌15～20分钟，离心取上清液；再向上清液中加入0.02～0.04kg酵母葡聚糖，超声波振荡均匀，即得所述预混液，备用；
(B)防冻液的制备：先将3～4kg质量浓度8～12％甲醛水溶液与0.08～0.12kg氯化钠、1kg麦芽糖搅拌混合，然后加入0.2～0.3kg预混液，超声波振荡均匀，即得所述防冻液。
参考对比例3
防冻液的制备
(A)预混液的制备：先边搅拌边将0.2～0.3kg月见草油滴加至1kg鸡蛋清，搅拌混匀，然后于55～65℃条件下水浴加热5～8分钟，10000～12000r/min搅拌15～20分钟，离心取上清液；再向上清液中加入0.05～0.08kg木瓜籽干细胞提取物，超声波振荡均匀，即得所述预混液，备用；
(B)防冻液的制备：先将3～4kg质量浓度8～12％甲醛水溶液与0.08～0.12kg氯化钠、1kg麦芽糖搅拌混合，然后加入0.2～0.3kg预混液，超声波振荡均匀，即得所述防冻液。
实施例1：
一种斑鳠的人工繁殖方法，具体步骤如下：
1)精子的保存：2019年4月，在广西来宾市兴宾区农业农村局水产技术推广站，4月15日从市场上购买了2尾1.5kg左右的雄鱼，另外在鱼贩子销售时将他们宰杀的雄鱼精巢一并带回推广站无菌试验室，将雄鱼宰杀后取出精巢，用干毛巾檫干精巢表面水分，用剪刀将精巢剪碎，肉眼能看到乳白色精液，再分几次用匀浆器磨成浆，用吸管吸几滴精液放到载玻片上，用清水激活在显微镜下观察精子的活力，将精子活力大于90％的精液分装到事先准备好的烧杯中，加入参考实施例1所得防冻液；将装有精液和防冻液的混合液分装至抗冻试管中，每支试管装1ml，密封后在4℃冰箱内平衡30min，平衡结束后在液氮上方7cm处熏蒸10min，熏蒸结束后放入液氮中保存，2019年5月20日运到迁江镇桥巩水电站鱼类增殖放流站。
2)催产池准备：2019年5月21日在迁江镇桥巩水电站鱼类增殖放流站，选择2个长300cm、宽100cm、深100cm的水泥暂养池作为催产池，使用时池底和池壁都贴上卫生间使用的防滑瓷砖，另外找2口腌制腌菜的陶瓷坛(陶瓷坛高70cm、坛口直径30cm、容量45kg)放置在池底进水口一端，方便亲鱼藏匿；催产池进排水口分别在长边的两头，进水口架设在催产池上方，管径63mm，从上部进水，底部排水，排水管管径110mm，并用PVC插管连接排水口控制池水深在80cm之间，PVC管在控制水位以上钻孔便于排水和控制水位，套上30目聚乙烯材质的防逃网防逃。
3)亲鱼选择：2019年5月26日从迁江镇桥头渔民手中购买3尾发育较好的雌鱼，雌鱼平均体重3kg。运回站进一步挑选，选择标准为：腹部膨大，卵巢轮廓明显，生殖孔略红肿，将亲鱼腹部朝上前后移动，卵巢有流动感，用挖卵器挖取卵粒观察，卵粒均匀饱满。此批挑选繁育较好的雌鱼2尾进行催产。
4)人工催产：2019年5月26日，将2尾发育较好的亲鱼注射催产药物。采用两针注射法对雌亲鱼注射催产药物，第一针注射时间为上午10:00，药物为促黄体素释放激素类似物(LRH-A3)和鲤鱼脑垂体(PG)，剂量为每公斤雌鱼注射PG1mg+LRH-A3μg；第二针注射时间为18:00，注射药物为促黄体素释放激素类似物、鲤鱼脑垂体和绒毛膜促性腺激素的混合物，剂量为每公斤雌鱼注射PG8mg+LRH-A38μg+HCG1000IU，药物使用0.9％的生理盐水配制，用水量每公斤0.5ml，两针的针距为8小时；注射催产药物后放入催产池，开启进水阀进行冲水，流速控制在0.6m/s，水温为24.8℃，水中溶解氧在8mg/L以上，pH8.1；
5)受精：5月27日6:00检查，雌鱼肛门较松弛，按压腹部只能挤出几颗卵粒，8：00再次检查能顺利挤出卵粒，催产率100％。将雌鱼捞出用毛巾檫干水分，将卵挤到一个干燥光滑的塑料盆里，同时将储存在液氮罐中的精液(每次每尾雌鱼取5支)取出放置在清水中解冻6s后倒入塑料盆中，用羽毛轻轻搅拌使精卵充分混合，再加入少量清水激活，静置1分钟完成受精，统计卵粒约40000粒。
6)孵化：将受精卵用羽毛均匀撒在准备的聚乙烯粘网上，再放进孵化槽内进行流水孵化，孵化水温24.6℃；孵化时受精卵脱膜前孵化槽内水体交换率为10次/d，15小时后观察鱼卵受精情况，见发白发霉的鱼卵剔出。脱膜后水交换率调整为5次/d，脱膜后继续在孵化槽发育至仔鱼鳔充气，鱼苗完全充气后进行计数转入鱼苗池中培育。
实施例2：
1)精子的保存：2019年4月，在广西来宾市兴宾区农业农村局水产技术推广站，4月15日从市场上购买了2尾1.5kg左右的雄鱼，另外在鱼贩子销售时将他们宰杀的雄鱼精巢一并带回推广站无菌试验室，将雄鱼宰杀后取出精巢，用干毛巾檫干精巢表面水分，用剪刀将精巢剪碎，肉眼能看到乳白色精液，再分几次用匀浆器磨成浆，用吸管吸几滴精液放到载玻片上，用清水激活在显微镜下观察精子的活力，将精子活力大于90％的精液分装到事先准备好的烧杯中，加入参考实施例2所得防冻液；将装有精液和防冻液的混合液分装至抗冻试管中，每支试管装1ml，密封后在4℃冰箱内平衡30min，平衡结束后在液氮上方7cm处熏蒸10min，熏蒸结束后放入液氮中保存，2019年5月20日运到迁江镇桥巩水电站鱼类增殖放流站。
2)催产池准备：2019年5月21日在迁江镇桥巩水电站鱼类增殖放流站，选择2个长300cm、宽100cm、深100cm的水泥暂养池作为催产池，使用时池底和池壁都贴上卫生间使用的防滑瓷砖，另外找2口腌制腌菜的陶瓷坛(陶瓷坛高70cm、坛口直径30cm、容量45kg)放置在池底进水口一端，方便亲鱼藏匿；催产池进排水口分别在长边的两头，进水口架设在催产池上方，管径63mm，从上部进水，底部排水，排水管管径110mm，并用PVC插管连接排水口控制池水深在80cm之间，PVC管在控制水位以上钻孔便于排水和控制水位，套上30目聚乙烯材质的防逃网防逃。
3)亲鱼选择：2019年6月8日从迁江镇桥头渔民手中购买4尾发育较好的雌鱼，雌鱼平均体重4kg。运回站进一步检查，选择标准尾：腹部膨大，卵巢轮廓明显，生殖孔略红肿，将亲鱼腹部朝上前后移动，卵巢有流动感，用挖卵器挖取卵粒观察，卵粒均匀饱满；成熟雄鱼体型修长，体表手感略粗糙，生殖突明显。此批共挑选发育较好的雌鱼3尾进行催产繁殖。
4)人工催产：2019年6月8日，将3尾发育较好的亲鱼注射催产药物。采用两针注射法对雌亲鱼注射催产药物，第一针注射时间为上午11:00，药物为促黄体素释放激素类似物(LRH-A3)和鲤鱼脑垂体(PG)，剂量为每公斤雌鱼注射PG1mg+LRH-A32μg；第二针注射时间为19:00，注射药物为促黄体素释放激素类似物、鲤鱼脑垂体和绒毛膜促性腺激素的混合物，剂量为每公斤雌鱼注射PG6mg+LRH-A37μg+HCG800IU，药物使用0.9％的生理盐水配制，用水量每公斤0.5ml，两针的针距为8小时；注射催产药物后放入催产池，开启进水阀进行冲水，流速控制在0.6m/s，水温为26.2℃，水中溶解氧在8mg/L以上，pH8.1；
5)受精：6月9日7:00检查，雌鱼肛门较松弛，按压腹部能挤出卵粒但不流畅，8：30再次检查能顺利挤出卵粒。将雌鱼捞出用毛巾檫干水分，将卵挤到一个干燥光滑的塑料盆里，同时将储存在液氮罐中的精液(每次每尾雌鱼取5支)取出放置在清水中解冻6s后倒入塑料盆中，用羽毛轻轻搅拌使精卵充分混合，再加入少量清水激活，静置2分钟完成受精。此批共分三次操作完成，有2尾全部产空，1尾产卵一部分，催产率约75％，统计共获卵约50000粒。
6)孵化：将受精卵用羽毛均匀撒在准备的聚乙烯粘网上，再放进孵化槽内进行流水孵化，孵化水温26.8℃；孵化时受精卵脱膜前孵化槽内水体交换率为10次/d，14小时后观察鱼卵受精情况，见发白发霉的鱼卵剔出。脱膜后水交换率调整为5次/d，脱膜后继续在孵化槽发育至仔鱼鳔充气，鱼苗完全充气后进行计数转入鱼苗池中培育。
实施例3
在步骤1)中采用参考实施例3所得防冻液。
其余同实施例1。
对比例1
在步骤1)中采用参考对比例1所得防冻液。
其余同实施例1。
对比例2
在步骤1)中采用参考对比例2所得防冻液。
其余同实施例1。
对比例3
在步骤1)中采用参考对比例3所得防冻液。
其余同实施例1。
试验例
1、统计估算鱼卵受精率，具体方法是将发白发霉的鱼卵剔除，按照公式(1-剔除量/初始鱼卵总量)×100％，即得受精率；
统计鱼苗尾数，计算孵化率，孵化率＝鱼苗尾数/(初始鱼卵总量×受精率)×100％，
结果见表1。
表1.鱼卵受精率、鱼苗尾数以及孵化率比较
Figure BDA0002510661870000131
由表1可知，实施例1～3的鱼卵受精率高，受精卵孵化率高，说明精子活性保持相对较好。对比例1所使用防冻液中略去月见草油，对比例2所使用防冻液中略去木瓜籽干细胞提取物，对比例3所使用防冻液中略去酵母葡聚糖，无论是鱼卵受精率还是受精卵的孵化率都明显降低，说明这些防冻液成分具有协同保护精子的作用。
2、采用专利申请CN108719141A中实施例1记载的方法进行斑鳠养殖，其中步骤2)的7日龄斑鳠分别为本发明实施例1～3或对比例1～3所得鱼苗。统计斑鳠成活尾数，计算成活率(成活尾数/鱼苗尾数×100％)，结果见表2。
表2.斑鳠成活率比较
成活尾数(尾) 成活率(％)
实施例1 37233 98.7
实施例2 47139 98.8
实施例3 38450 99.3
对比例1 21522 83.1
对比例2 15448 72.8
对比例3 16358 74.3
由表2可知，实施例1～3的鱼苗养殖后斑鳠成活率高，说明鱼苗的健康状况更佳。对比例1所使用防冻液中略去月见草油，对比例2所使用防冻液中略去木瓜籽干细胞提取物，对比例3所使用防冻液中略去酵母葡聚糖，无论是鱼卵受精率还是受精卵的孵化率都明显降低，说明这些防冻液成分对鱼苗的健康状况具有协同增强的作用。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (9)

1.一种斑鳠的人工繁殖方法，先进行精液冷冻储备，然后在繁殖季节对雌鱼进行催产，并挤出卵粒，再将卵粒与解冻的精液混合受精得到受精卵，最后受精卵孵化，进行苗种培育即可；其特征在于，精液冷冻储备的具体方法如下：
(A)预混液的制备：以重量份计，先边搅拌边将0.2～0.3份月见草油滴加至1份鸡蛋清，搅拌混匀，然后于55～65℃条件下水浴加热5～8分钟，10000～12000r/min搅拌15～20分钟，离心取上清液；再向上清液中加入0.05～0.08份木瓜籽干细胞提取物和0.02～0.04份酵母葡聚糖，超声波振荡均匀，即得所述预混液，备用；
(B)防冻液的制备：以重量份计，先将3～4份质量浓度8～12％甲醛水溶液与0.08～0.12份氯化钠、1份麦芽糖搅拌混合，然后加入约0.2～0.3份预混液，超声波振荡均匀，即得所述防冻液；
(C)然后从雄鱼精巢中采集精子活力90％以上的精液，再将精液与防冻液按照体积比1：15～25混合制成混合液；
(D)分装，密封并平衡处理，液氮熏蒸并保存。
2.根据权利要求1所述的一种斑鳠的人工繁殖方法，其特征在于，步骤(A)中，所述木瓜籽干细胞提取物的制备方法如下：先取成熟木瓜籽，洗净晾干后粉碎成木瓜籽粉末，然后将木瓜籽粉末接种至培养基中，在温度26～30℃和pH＝5.5～6.5条件下培养时间30～35天，后处理，即得所述的木瓜籽干细胞提取物。
3.根据权利要求1所述的一种斑鳠的人工繁殖方法，其特征在于，步骤(C)中，精液采集的具体方法如下：从市场上购买的雄鱼宰杀获得精巢，或直接买回斑鳠雄鱼的精巢；精巢必须饱满，用手捏碎有乳白色的精液流出；精巢带回无菌实验室，用剪刀剪碎，再用匀浆器磨成浆，用吸管吸2～3滴精液放到载玻片上，用清水激活，在显微镜下观察精子的活力，将精子活力大于90％的精液分装到事先准备好的抗冻试管中。
4.根据权利要求1所述的一种斑鳠的人工繁殖方法，其特征在于，步骤(D)的具体方法是：将混合液分装至试管中，每支试管装1mL，密封后在4℃冰箱内平衡30分钟，平衡结束后在液氮上方7cm处熏蒸10分钟，熏蒸结束后放入液氮中保存。
5.根据权利要求1所述的一种斑鳠的人工繁殖方法，其特征在于，催产的具体方法如下：在繁殖季节，将从野外收集的发育较好的雌鱼或经过人工驯养发育较好的成熟雌鱼作为催产亲鱼，先对催产亲鱼进行催产药物注射，然后放入催产池中，开启进水阀进行冲水，流速控制在0.5m/s以上，水温为24～28℃，水中溶解氧保持在8mg/L以上，pH为7.0～8.2。
6.根据权利要求5所述的一种斑鳠的人工繁殖方法，其特征在于，采用两针注射法进行催产药物注射，即促黄体素释放激素类似物、鲤鱼脑垂体和绒毛膜促性腺激素的混合物，第一针剂量为每公斤雌鱼注射PG1mg+LRH-A3 2μg，第二针剂量为每公斤雌鱼注射PG 6～8mg+LRH-A3 6～10μg+HCG 800～1200IU。
7.根据权利要求5所述的一种斑鳠的人工繁殖方法，其特征在于，所述催产池的准备方法如下：准备一长方形玻璃钢催产池或水泥催产池，水泥催产池底部和池壁贴上瓷砖，安装好进排水管道，做好防逃，在催产池底部放置2～3个容量大于50kg的陶瓷坛，营造仿野外生存环境。
8.根据权利要求1所述的一种斑鳠的人工繁殖方法，其特征在于，受精卵的获得方法为：将雌鱼捞出用毛巾檫干水分，将卵挤到干燥光滑的塑料盆里，同时将储存在液氮罐中的精液取出放置在清水中6s解冻后倒入塑料盆中，用羽毛轻轻搅动使精卵充分混合，再加入量清水激活，静置1～2分钟完成受精。
9.根据权利要求1所述的一种斑鳠的人工繁殖方法，其特征在于，孵化的具体方法是：先将受精卵用羽毛均匀撒在聚乙烯粘网上，再放进孵化槽内进行流水孵化；孵化时受精卵脱膜前孵化槽内水体交换率为10次/d，脱膜后交换率为5次/d，脱膜后在孵化槽发育至仔鱼鳔充气后即可进行苗种培育。
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