CN111562364A - 一种新型免疫学检测试剂条及试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种新型免疫学检测试剂条，包括检测卡；检测卡上，根据待测样品流动方向，依次布置有样品垫、样品结合垫、非特异性干扰物质警示区、样品检测区、质控区和吸水垫；其中，样品结合垫包被有“示踪物标记的待测靶抗原对应的特异性抗体B”；非特异性干扰物质警示区包被有“抗非人体存在蛋白物质的对应抗体C”；样品检测区包被有“待测特异的靶抗原对应的特异性固相抗体A”；质控区包被有“能够结合所述示踪物标记的固相抗体D”。本发明还提供了一种试剂盒，包括容器以及上述检测试剂条。本发明在传统免疫学检测试剂条的基础上增加了非特异性干扰物质警示区，提高了实际的检测特异性，为临床正确诊疗提供了高效、精准的保证。
Description
技术领域
本发明涉及体外诊断及生物医学检测试剂领域，尤其涉及一种新型免疫学检测试剂条及试剂盒。
背景技术
类风湿因子(Rheumatoid Factor，RF)是在类风湿性关节炎(RheumatoidAnthritis，RA)病人血清中发现的，是一种以变性IgG为靶抗原的自身抗体，主要存在于类风湿性关节炎患者的血清和关节液中。它是一种抗变性IgG的抗体，属IgM型，可与IgG Fc段结合。RA病人以及约50％的健康人体内都存在产生RF的B细胞克隆，在变性IgG(或与抗原结合的IgG)或EB(Epstein Barr virus)病毒直接作用下，可大量合成RF。
异嗜性抗体(Heterophile，Heterophilic Antibody)，又称嗜异性抗体、异质性抗体，是由已知或未知抗原物质刺激人体产生的一类具有足够滴度、能与多个物种免疫球蛋白(Ig)发生相对弱结合的多重特异性免疫球蛋白。目前，临床所使用的免疫试剂抗体大多来源实验动物，而异嗜性抗体可与许多动物lg的Fc和Fab表位非特异性结合，模拟被测抗原的免疫活性，桥联捕获抗体、标记抗体或标记抗原，从而干扰测定结果，使之与临床表现不符，导致误诊。大多数异嗜性抗体是天然抗体，是干扰免疫学检测的主要类型。据研究证实，在健康人群中，约3％-15％体内含有异嗜性抗体，这些异嗜性抗体可以是IgA、IgE、IgG、IgM。它们可能是多聚体或单体，并且浓度范围很广。但是，它们均直接针对检测系统的特异性抗体。由于多数免疫学诊断检测采用单克隆小鼠抗体，因此人抗小鼠抗体(HAMA)是引起免疫学检测的主要干扰物质。其它因素，如：包被于固相载体上的抗体分子发生变构，其FC片段的补体C1q分子结合位点被暴露出来，使C1q可以将二者连接起来，从而造成假阳性。再如：抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素抗体等嗜靶抗原的自身抗体，有时能与靶抗原结合形成复合物，均可产生假阳性结果。外源性因素，如：标本的采集、贮存等不当有可能会导致假阳性结果；如标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存过久、标本凝集不全和采血管中添加物等影响。
双抗体夹心法是常用的免疫学检测方法，尤其广泛应用在体外免疫学诊断试剂中。比如，免疫层析检测试剂就是疾病控制中心和医院检验科用于传染病相关血清学指标的快速检测手段。但是，血清学免疫反应会受到非特异性血液干扰物质(如：自身抗体、类风湿因子、异嗜性抗体等)的干扰，在临床应用会导致假阳性或假阴性，对正确治疗和排查病患带来极大的影响。
据此，目前急需一种能在免疫检测中同时检出非特异性干扰物质(如：人抗动物抗体和/或类风湿因子)的新型免疫学检测方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种能在免疫检测中同时检出非特异性干扰物质的新型免疫学检测试剂条及试剂盒。
本发明采用以下技术方案解决上述技术问题：
一种新型免疫学检测试剂条，包括检测卡；所述检测卡上，根据待测样品的流动迁移方向，依次布置有样品垫、样品结合垫、非特异性干扰物质警示区、样品检测区、质控区以及吸水垫；
其中，所述样品结合垫用于结合样品，其上包被有“示踪物标记的待测靶抗原对应的特异性抗体B”；所述非特异性干扰物质警示区用于检测非特异性干扰物质，其上包被有“抗非人体存在蛋白物质的对应抗体C”；所述样品检测区用于检测样品中待测物，其上包被有“待测特异的靶抗原对应的特异性固相抗体A”；所述质控区用于对检测试剂质量控制，其上包被有“能够结合所述示踪物标记的固相抗体D”。
作为本发明的优选方式之一，所述非特异性干扰物质警示区用于检测非特异性干扰物质；所述非特异性干扰物质包括人抗动物抗体和/或类风湿因子。
作为本发明的优选方式之一，所述人抗动物抗体具体为人抗小鼠抗体。
作为本发明的优选方式之一，所述非特异性干扰物质警示区上的“抗非人体存在蛋白物质的对应抗体C”具体为钥孔戚血蓝素。
作为本发明的优选方式之一，所述样品结合垫上的“示踪物”包括但不限于：胶体金、彩色微球、荧光微球、量子点、量子点微球、磁性微球、吖啶酯、碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、荧光素、放射性同位素中的一种。
作为本发明的优选方式之一，所述质控区上“能够结合所述示踪物标记的固相抗体D”为山羊抗小鼠IgG。
作为本发明的优选方式之一，所述检测试剂条中待测物样品的免疫学检测方法采用“双抗体夹心法”，或称三明治免疫检测法(Sandwich immunoassay)，即：待检测抗原同时被两个特异性抗体结合，形成“夹心”或“三明治”结构。本发明中，当待测物样品中含待检靶抗原时，流动迁移至所述样品结合垫的物质形成“抗原-示踪物标记的特异性抗体B”复合物；流动迁移至所述样品检测区的物质形成“特异性固相抗体A-抗原-示踪物标记的特异性抗体B”复合物。
作为本发明的优选方式之一，所述检测卡包括底板；所述底板上，根据待测样品的流动迁移方向，依次布置有所述样品垫、样品结合垫、非特异性干扰物质警示区、样品检测区、质控区以及吸水垫。
作为本发明的优选方式之一，所述非特异性干扰物质警示区、样品检测区与质控区均设置在硝酸纤维素膜上；所述硝酸纤维素膜的前端依次连接有样品结合垫、样品垫，硝酸纤维素膜的后端连接有吸水垫。
作为本发明的优选方式之一，所述底板采用聚氯乙烯材质。
作为本发明的优选方式之一，所述样品垫和吸水垫均采用玻璃纤维膜或聚酯膜材质。
作为本发明的优选方式之一，所述检测试剂条还包括卡盒，所述卡盒上设有加样孔、警示孔与样品显示观察窗；所述检测卡设置于所述卡盒中，并且，所述加样孔对应于所述检测卡上的样品垫，所述警示孔对应于所述检测卡上的非特异性干扰物质警示区，所述样品显示观察窗对应于所述检测卡上的样品检测区和质控区。
作为本发明的优选方式之一，所述警示孔为一单独形状不限的窗孔，警示待测标本是否含有非特异性血液干扰物质，且与所述样品显示观察窗之间的间距为4～6毫米。
本发明还提供了一种试剂盒，包括容器以及上述所述的新型免疫学检测试剂条。
检测卡制备：将同一硝酸纤维素膜分为三个区带，即非特异性干扰物质警示区、样品检测区、质控区；预先干燥示踪物，并将其固定在样品结合垫上，样品结合垫前端连接亲水的样品垫；硝酸纤维素膜的前端放置上述样品结合垫，硝酸纤维素膜的后端放置吸水垫，以保证待检样本向吸水垫方向迁移。
工作原理：检测试剂条中待测物样品的免疫学检测方法采用“双抗体夹心法”，使用时，操作者将待检样本滴加到样品垫上，样品即可通过毛细力作用向前迁移。
当流经样品结合垫时，如果样品中存在非特异性干扰物质，非特异性干扰物质将结合此处的“示踪物标记的待测靶抗原对应的特异性抗体B”以形成“干扰物质-示踪物标记的特异性抗体B”复合物，然后继续流动；当继续流经非特异性干扰物质警示区时，又可被包被在此处的“抗非人体存在蛋白物质的对应抗体C”捕获，形成“抗体C-干扰物质-示踪物标记的特异性抗体B”复合物，出现可识别的信号(光信号或磁信号，或肉眼可观察到的色斑点)，从而可判定为样本中含有干扰检验的物质，从而造成了假阳性检测结果。反之，如果待检样本中不含有相应的非特异性干扰物质，则在此区域无复合物形成，因此无光信号或磁信号，或肉眼可识别的色斑点呈现；当此样本继续迁移至样品检测区，有效的检测会出现可检测到的光信号/磁信号，或肉眼可见的反应条带；同时，若质控区无上述信号或反应条带出现，则说明该检测结果无效。
其中，当样本中不存在非特异性干扰物质、且含待检靶抗原时：流动迁移至样品结合垫的物质形成“抗原-示踪物标记的特异性抗体B”复合物；流动迁移至样品检测区的物质形成“特异性固相抗体A-抗原-示踪物标记的特异性抗体B”复合物。
本发明相比现有技术的优点在于：本发明在传统免疫学检测试剂条的基础上增加了一个识别非特异性干扰物质的“非特异性干扰物质警示区”，从而提高了实际的检测特异性，避免出现“假阳性”的检测结果，为临床正确诊疗提供了高效、精准的保证。
附图说明
图1是实施例1中新型免疫学检测试剂条的检测卡立体结构图；
图2是实施例1中新型免疫学检测试剂条的检测卡正视结构图；
图3是实施例1中新型免疫学检测试剂条的检测卡俯视结构图；
图4是实施例1中新型免疫学检测试剂条的卡盒俯视结构图。
图中：1为检测卡，11为底板，12为样品垫，13为样品结合垫，14为非特异性干扰物质警示区，15为样品检测区，16为质控区，17为吸水垫，18为硝酸纤维素膜，2为卡盒，21为加样孔，22为警示孔，23为样品显示观察窗。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
如图1-4所示，本实施例的一种同时检测人心肌肌钙蛋白I(Cardiac troponin I,cTnI)和非特异性干扰物质的新型免疫学检测试剂条，包括检测卡1与卡盒2。
检测卡1包括底板11，根据待测样品的流动迁移方向，底板11上依次布置有样品垫12、样品结合垫13、非特异性干扰物质警示区14、样品检测区15(T线)、质控区16(C线)以及吸水垫17。其中，非特异性干扰物质警示区14、样品检测区15与质控区16均设置在硝酸纤维素膜18上；硝酸纤维素膜18的前端依次连接有样品结合垫13、样品垫12，硝酸纤维素膜18的后端连接有吸水垫17。
卡盒2上设有加样孔21、警示孔22与样品显示观察窗23。检测卡1设置于卡盒2中，并且，加样孔21对应于检测卡1上的样品垫12，警示孔22对应于检测卡1上的非特异性干扰物质警示区14，样品显示观察窗23对应于检测卡1上的样品检测区15和质控区16。其中，警示孔22为一单独形状不限的窗孔，警示待测标本是否含有非特异性血液干扰物质，且与样品显示观察窗23之间的间距为4～6毫米。
具体地，样品结合垫13用于结合样品，其上包被有“载有胶体金标记的小鼠抗人cTnI单克隆抗体(HyTest Inc.，克隆：19C7)”；非特异性干扰物质警示区14用于检测非特异性干扰物质，其上包被有“小鼠抗钥孔戚血蓝素单克隆抗体(北京义翘神州科技股份有限公司，Cat:12133-MM04)”；样品检测区15用于检测样品中待测物，其上包被有“小鼠抗人心肌肌钙蛋白I单克隆抗体(HyTest Inc.，克隆：16A11)”；质控区16用于检测质控试剂是否有效，其上包被有“山羊抗小鼠IgG的多克隆抗体(长沙博优生物科技有限公司)”。
此外，关于本实施例中的非特异性干扰物质，其包括人抗小鼠抗体和/或类风湿因子。
关于胶体金“示踪物”，也可替换成“彩色微球、荧光微球、量子点、量子点微球、磁性微球、吖啶酯、碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、荧光素、放射性同位素中的一种”。
关于底板11、样品垫12和吸水垫17的材质，底板11采用聚氯乙烯材质，样品垫12和吸水垫17采用玻璃纤维膜或聚酯膜材质。
使用方法：用移液器吸取100微升血清、血浆或全血样品，通过加样孔21加入到样品垫12上，计时15分钟后观察检测结果。
结果判读：(1)当警示孔22内出现红色斑点，提示：“此标本含有非特异性干扰物质，本结果可能是假阳性结果，建议复查”；(2)当警示孔22没有任何颜色显现，则提示：“标本不含有非特异性干扰物质，检验结果真实可信”。如样品显示观察窗23内的样品检测区15(T线)、质控区16(C线)均显色红线，判定为cTnI阳性；如质控区16(C线)显色红线，而样品检测区15(T线)无显色红线，则结果判读为cTnI阴性。在任何情况下，如质控区16(C线)无显色，则判定检测结果无效。
工作原理：本实施例在“样品检测区15”前再增加一个独立显示非特异性干扰的“非特异性干扰物质警示区14”，可有效地做出提示：样本中存在人抗动物抗体或类风湿因子，从而警示疑似假阳性结果。非特异性干扰物质警示区14固定有能够结合非人体蛋白(如，钥孔戚血蓝素(Keyhole Limpet Hemocyanin，KLH)的小鼠单克隆抗体；钥孔戚血蓝素来源于大锁孔帽贝(透孔螺)的血淋巴，也被叫做钥孔血蓝蛋白，是节肢动物和软体动物中的一种重要的免疫分子)，若待测标本中含有人抗动物抗体和/或类风湿因子时，当此类待测标本到达非特异性干扰物质警示区14时，其中的人抗动物抗体和/或类风湿因子会与小鼠抗KLH单克隆抗体，以及示踪物标记的小鼠抗His-Tag单克隆抗体结合，使检测结果出现假阳性，此时，警示孔22出现示踪信号(如：光信号、磁信号，或肉眼可见的色斑点)，提示：“标本含有非特异性干扰物质，本结果可能是假阳性结果，建议复查”。
反之，若待测标本中不含有人抗动物抗体和/或类风湿因子时，当待测标本到达到“非特异性干扰物质警示区14”时，其中的人抗动物抗体和/或类风湿因子则不会与小鼠抗KLH单克隆抗体、及示踪物标记的小鼠抗His-Tag单克隆抗体结合，此时，警示孔22没有任何信号或颜色显现，提示：“标本不含有非特异性干扰物质，检验结果真实可信”。
实施例2
本实施例的一种同时检测人绒毛膜促性腺激素(Human chorionicgonadotropin,hCG)和非特异性干扰物质的新型免疫学检测试剂条，其结构与实施例1试剂条大致相同，主要不同之处在于：
样品结合垫13用于结合样品，其上包被有“胶体金标记的小鼠hCG单克隆抗体(杭州隆基生物技术有限公司，克隆：MH00402)”；非特异性干扰物质警示区14用于检测非特异性干扰物质，其上包被有“小鼠抗钥孔戚血蓝素单克隆抗体(北京义翘神州科技股份有限公司，Cat:12133-MM04)”；样品检测区15用于检测样品中待测物，其上包被有“小鼠抗hCG单克隆抗体(杭州隆基生物技术有限公司，克隆：MH00401)”；质控区16用于检测质控试剂是否有效，其上包被有“山羊抗小鼠IgG的多克隆抗体(长沙博优生物科技有限公司)”。
使用方法：用移液器吸取100微升临床样本(血清、血浆、全血，或尿液)，通过加样孔21加入到样品垫12上，计时15分钟后观察检测结果。
结果判读：(1)当警示孔22内出现红色斑点，提示：“此标本含有非特异性干扰物质，本结果可能是假阳性结果，建议复查”；(2)当警示孔22没有任何颜色显现，则提示：“标本不含有非特异性干扰物质，检验结果真实可信”。如样品显示观察窗23内的样品检测区15(T线)、质控区16(C线)均显色红线，判定为hCG阳性；如质控区16(C线)显色红线，而样品检测区15(T线)无显色红线，结果判定为hCG阴性。在任何情况下，如质控区15(C线)无显色，则判定检测结果无效。
实施例3
本实施例的一种同时检测新型冠状病毒特异性抗体(IgM)和非特异性干扰物质的新型免疫学检测试剂条，其结构与实施例1试剂条大致相同，主要不同之处在于：
样品结合垫13用于结合样品，其上包被有“新型冠状病毒重组蛋白抗原和胶体金标记的小鼠抗His-Tag单克隆抗体”【新型冠状病毒重组蛋白抗原来源于：金斯瑞生物科技有限公司(S-RBD，Z03479)、厦门万勃生物技术有限公司(新冠N蛋白抗原，AGNCOVN010)、南京佰抗生物科技有限公司(SARS-CoV-2重组S蛋白全长，AG007)；胶体金标记的小鼠抗His-Tag单克隆抗体来源于：北京博尔西生物科技有限公司，B-1401】；非特异性干扰物质警示区14用于检测非特异性干扰物质，其上包被有“小鼠抗钥孔戚血蓝素单克隆抗体(北京义翘神州科技股份有限公司，Cat:12133-MM04)”；样品检测区15用于检测样品中待测物，其上包被有“小鼠抗人IgM单克隆抗体(菲鹏生物股份有限公司)”；质控区16用于检测质控试剂是否有效，其上包被有“山羊抗小鼠IgG的多克隆抗体(长沙博优生物科技有限公司)”。
使用方法：用移液器吸取10微升血清、血浆或全血样品，通过加样孔21加入到样品垫12上，随即加入3滴(约100微升)样本稀释液，计时15分钟后观察检测结果。
结果判读：(1)当警示孔22内出现红色斑点，提示：“此标本含有非特异性干扰物质，本结果可能是假阳性结果，建议复查”；(2)当警示孔22没有任何颜色显现，则提示：“标本不含有非特异性干扰物质，检验结果真实可信”。如样品显示观察窗23内的样品检测区15(T线)、质控区16(C线)均显色红线，判定为新型冠状病毒IgM阳性；如质控区16(C线)显色红线，而样品检测区15(T线)无显色红线，则结果判读为新型冠状病毒IgM阴性。在任何情况下，如质控区16(C线)无显色，则判定检测结果无效。
此外，需要注意的是，关于上述实施例1-3中检测的非特异性干扰物质-人抗动物抗体，除了可以是“人抗小鼠抗体”以外，还可检测其他人抗动物抗体，比如，人抗山羊抗体或人抗兔抗体。但相应地，非特异性干扰物质警示区14上的抗体也要对应替换为与本领域内人抗山羊抗体或人抗兔抗体对应的相应检测抗体，在此便不再赘述。
实施例4
本实施例的一种试剂盒，包括容器以及实施例1-3中任一所述的新型免疫学检测试剂条。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种新型免疫学检测试剂条，其特征在于，包括检测卡；所述检测卡上，根据待测样品的流动迁移方向，依次布置有样品垫、样品结合垫、非特异性干扰物质警示区、样品检测区、质控区以及吸水垫；
其中，所述样品结合垫包被有“示踪物标记的待测靶抗原对应的特异性抗体B”；所述非特异性干扰物质警示区包被有“抗非人体存在蛋白物质的对应抗体C”；所述样品检测区包被有“待测特异的靶抗原对应的特异性固相抗体A”；所述质控区包被有“能够结合所述示踪物标记的固相抗体D”。
2.根据权利要求1所述的新型免疫学检测试剂条，其特征在于，所述非特异性干扰物质警示区用于检测非特异性干扰物质；所述非特异性干扰物质包括人抗动物抗体和/或类风湿因子。
3.根据权利要求2所述的新型免疫学检测试剂条，其特征在于，所述人抗动物抗体具体为人抗小鼠抗体。
4.根据权利要求1所述的新型免疫学检测试剂条，其特征在于，所述非特异性干扰物质警示区上的“抗非人体存在蛋白物质的对应抗体C”具体为钥孔戚血蓝素。
5.根据权利要求1所述的新型免疫学检测试剂条，其特征在于，所述样品结合垫上的“示踪物”为胶体金、彩色微球、荧光微球、量子点、量子点微球、磁性微球、吖啶酯、碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、荧光素、放射性同位素中的一种。
6.根据权利要求1所述的新型免疫学检测试剂条，其特征在于，所述质控区上“能够结合所述示踪物标记的固相抗体D”为山羊抗小鼠IgG。
7.根据权利要求1所述的新型免疫学检测试剂条，其特征在于，所述检测试剂条中待测物样品的免疫学检测方法采用“双抗体夹心法”；当待测物样品中含待检靶抗原时，流动迁移至所述样品结合垫的物质形成“抗原-示踪物标记的特异性抗体B”复合物；流动迁移至所述样品检测区的物质形成“特异性固相抗体A-抗原-示踪物标记的特异性抗体B”复合物。
8.根据权利要求1所述的新型免疫学检测试剂条，其特征在于，所述检测卡包括底板；所述底板上，根据待测样品的流动迁移方向，依次布置有所述样品垫、样品结合垫、非特异性干扰物质警示区、样品检测区、质控区以及吸水垫。
9.根据权利要求1所述的新型免疫学检测试剂条，其特征在于，所述检测试剂条还包括卡盒，所述卡盒上设有加样孔、警示孔与样品显示观察窗；所述检测卡设置于所述卡盒中，并且，所述加样孔对应于所述检测卡上的样品垫，所述警示孔对应于所述检测卡上的非特异性干扰物质警示区，所述样品显示观察窗对应于所述检测卡上的样品检测区和质控区。
10.一种试剂盒，其特征在于，包括容器以及如权利要求1-9任一所述的新型免疫学检测试剂条。
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