CN111518094B - 一种抗流感小分子化合物及其制备方法和用途 - Google Patents

一种抗流感小分子化合物及其制备方法和用途 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种如式Ⅰ所示的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物。本发明还提供了该化合物的制备方法和用途。本发明制备的化合物与PB2蛋白，特别是与PB2318‑483蛋白有较强的结合能力，从而可以阻断流感RNA聚合酶的转录过程，进而抑制流感病毒的增殖。本发明化合物可以用于制备抗流感病毒的药物。
Figure DDA0001965972010000011

Description

一种抗流感小分子化合物及其制备方法和用途
技术领域
本发明属于化学医药领域，具体涉及一种抗流感小分子化合物及其制备方法和用途。
背景技术
流行性感冒(简称流感，Flu)是由流感病毒(Influenza virus)引起的呼吸系统疾病。根据病毒核蛋白和基质蛋白的抗原决定簇的差异，可将流感病毒分为甲(A)、乙(B)、丙(C)、丁(D)四种类型，其中A型流感最为常见，致病性强，易发生大范围流行，严重威胁人类生命与健康。根据WHO(2018)估计，全世界每年感染流感人数在3到5百万之间，大约29到65万人死于流感。禽流感病毒(Avian influenza virus)属于A型流感病毒，正常情况下仅在禽类等动物之间传播。但是有些变异株直接由禽类等动物传染给人类，给人类带来严重健康威胁，例如高致病性禽流感H5N1、H7N9等，其致死率可达30％。历史上曾发生过多次严重的流感大流行，最严重的一次为1918年西班牙大流感，造成了近4000万人死亡，给人类社会带来严重损失。
目前为止，预防和治疗流感主要采用疫苗接种和抗流感药物治疗两种方法。疫苗接种是目前预防流感的一种有效措施。成年人接种后可以达到较好预防效果，但是婴幼儿、老年人等免疫力较低者接种后效果并不理想。而且流感病毒不断地变异，旧疫苗难以对抗新病毒。化学药物是治疗流感的另一种重要手段，但是迄今为止，上市抗流感化学药物数量少，应用较多的是M2离子通道抑制剂、神经氨酸酶(NA)抑制剂以及核苷类抗病毒药物。
目前，上市的M2离子通道抑制剂仅有金刚烷胺(Amantadine，1966年上市)、金刚乙胺(Rimantadine，1987年上市)，但仅对A型流感病毒有效，且近年来涌现了较多耐药病毒株，因此全球不再推荐这些药物用于临床用药。神经氨酸酶抑制剂(NAI)是一类强效的抗流感药物，除了FDA批准上市的奥司他韦(Oseltamivir，达菲，1999年上市)和扎拉米韦(Zanamivir，1999年上市)，还有在局部地区上市的帕拉米韦(Peramivir，日本、韩国、中国上市)和拉尼那米韦(Laninamivir，日本上市)。然而，患者在感染流感病毒48h后，服用奥司他韦并不能起到抗流感效果。而且NAI也出现了严重的耐药情况。核苷类代表药物是利巴韦林(Ribavirin)和法匹拉韦(Favipiravir，T-705)。利巴韦林是一种广谱抗病毒上市药物，对DNA和RNA病毒均有抑制效果，作用机制尚不明确，在体内能引起溶血性贫血、心肺方面的毒性反应，所以临床应用受限。法匹拉韦主要抑制RNA病毒的复制，与利巴韦林相比具有活性较高、细胞毒性较小的优点，目前仅在日本上市。另外，巴洛沙韦酯(Baloxvir marboxil)于2018年先后在日本和美国上市，其作用机制在于抑制病毒复制的关键酶—CAP依赖性核酸内切酶。虽然该药对大多数流感病毒包括奥司他韦耐药株(H7N9,H5N1)显示良好的抗病毒效果，但并未在除日本与美国以外的地区上市。
近年来，流感RNA聚合酶(RdRp)受到了广泛关注。RdRp是由PA、PB1和PB2三个亚基组成的异源三聚体，在流感病毒基因组转录和复制过程中发挥重要作用。流感病毒RNA的转录具有特殊的“夺帽”机制，在此过程中，PB2亚基负责识别和结合宿主前体mRNA的“帽子结构”，然后PA亚基剪切宿主mRNA得到引物，启动转录过程。抑制“夺帽”可以阻断转录过程，达到抑制流感病毒增殖的效果。因此，PB2被认为是很有前途的抗流感药物靶标，已引起了制药公司和学术研究机构的高度重视。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种抗流感小分子化合物及其制备方法和用途。
本发明提供了一种如式Ⅰ所示的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物：
Figure BDA0001965970990000021
式中，
X选自CR4、N；
Y选自CR5R6、NR7、O、S；
R4、R5、R6、R7可独立选自H、C1～C6烷基、卤素；
R1选自氢、被0～4个R8取代的C1～C6烷基、被0～4个R9取代的3～8元环烷基、被0～4个R10取代的芳基或杂芳基；
R8选自3～8元环烷基、卤素、羧基、3～8元饱和或不饱和杂环基、被0～4个R11取代的芳基或杂芳基；
R9选自C1～C6烷基、卤素；
R10选自被0～4个R12取代的C1～C6烷基、C1～C4烷氧基、卤素；
R11选自被0～4个R12’取代的C1～C6烷基、卤素；
R12和R12’分别独立选自卤素、羟基、氨基；
R2选自氢、被0～4个R13取代的C1～C6烷基、被0～4个R14取代的3～10元环烷基；
R13选自3～6元饱和或不饱和杂环基、羧基、被0～3个R15取代的芳基、酰胺基、
Figure BDA0001965970990000031
R14选自C1～C6烷基、羧基；
R15选自卤素、C1～C4烷氧基；
R3选自
Figure BDA0001965970990000032
R16选自卤素。
进一步地，所述化合物如式Ⅱ所示：
Figure BDA0001965970990000033
式中，
R1选自氢、被0～4个R8取代的C1～C6烷基、被0～4个R9取代的3～8元环烷基、被0～4个R10取代的芳基或杂芳基；所述杂芳基的杂原子为O、N、S，杂原子个数为1～3个；
R8选自3～8元环烷基、卤素、羧基、3～8元饱和或不饱和杂环基、被0～4个R11取代的芳基或杂芳基；所述杂环基的杂原子为O、N、S，杂原子个数为1～3个；所述杂芳基的杂原子为O、N、S，杂原子个数为1～3个；
R9选自C1～C6烷基、卤素；
R10选自被0～4个R12取代的C1～C6烷基、C1～C4烷氧基、卤素；
R11选自被0～4个R12’取代的C1～C6烷基、卤素；
R12和R12’分别独立选自卤素、羟基、氨基；
R2选自氢、被0～4个R13取代的C1～C6烷基、被0～4个R14取代的3～10元环烷基；
R13选自3～6元饱和或不饱和杂环基、羧基、被0～3个R15取代的芳基、酰胺基、
Figure BDA0001965970990000034
所述饱和或不饱和杂环基的杂原子为O、N、S，杂原子个数为1～3个；
R14选自C1～C6烷基、羧基；
R15选自卤素、C1～C4烷氧基；
R3选自
Figure BDA0001965970990000041
R16选自卤素。
进一步地，所述化合物如式Ⅲ所示：
Figure BDA0001965970990000042
式中，
R1选自氢、被0～4个R8取代的C1～C6烷基、被0～4个R9取代的3～8元环烷基、被0～4个R10取代的芳基或杂芳基；所述杂芳基的杂原子为O、N、S，杂原子个数为1～2个；
R8选自3～8元环烷基、卤素、羧基、3～8元饱和或不饱和杂环基，被0～4个R11取代的芳基或杂芳基；所述杂环基的杂原子为O、N、S，杂原子个数为1～2个；所述杂芳基的杂原子为O、N、S，杂原子个数为1～2个；
R9选自C1～C6烷基、卤素；
R10选自被0～4个R12取代的C1～C6烷基、C1～C4烷氧基、卤素；
R11选自被0～4个R12’取代的C1～C6烷基、卤素；
R12和R12’分别独立选自卤素、羟基、氨基；
R2选自氢、被0～4个R13取代的C1～C6烷基、被0～4个R14取代的3～10元环烷基；
R13选自3～6元饱和或不饱和杂环基、羧基、被0～3个R15取代的芳基、酰胺基、
Figure BDA0001965970990000043
所述饱和或不饱和杂环基的杂原子为O、N、S，杂原子个数为1～2个；
R14选自C1～C6烷基、羧基；
R15选自卤素、C1～C4烷氧基。
进一步地，R1选自氢、被0～3个R8取代的C1～C6烷基、被0～3个R9取代的3～6元环烷基、被0～3个R10取代的芳基；
R8选自3～6元环烷基、卤素、羧基、3～6元不饱和杂环基，被0～3个R11取代的芳基；所述不饱和杂环基的杂原子为S，杂原子个数为1～2个；
R9选自C1～C6烷基、卤素；
R10选自被0～3个R12取代的C1～C6烷基、C1～C4烷氧基、卤素；
R11选自被0～3个R12’取代的C1～C6烷基、卤素；
R12和R12’均为卤素；
R2选自氢、被0～3个R13取代的C1～C6烷基、被0～3个R14取代的3～10元环烷基；
R13选自3～6元饱和杂环基、羧基、被0～3个R15取代的芳基、酰胺基、
Figure BDA0001965970990000051
所述饱和杂环基的杂原子为O，杂原子个数为1～2个；
R14选自C1～C3烷基、羧基；
R15选自卤素、C1～C4烷氧基。
进一步地，R1选自被0～2个R8取代的C1～C2烷基、被0～1个R9取代的3～6元环烷基、被0～2个R10取代芳基；
R8选自3元环烷基、卤素、羧基、5元不饱和杂环基，被0～1个R11取代的芳基；所述不饱和杂环基的杂原子为S，杂原子个数为1个；
R9选自C1～C6烷基；
R10选自被0～3个R12取代的C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素；
R11选自被0～3个R12’取代的C1～C4烷基；
R12和R12’均为卤素；
R2选自氢、被0～3个R13取代的C1～C6烷基、被0～3个R14取代的3～10元环烷基；
R13选自3～6元饱和杂环基、羧基、被0～3个R15取代的芳基、酰胺基、
Figure BDA0001965970990000052
所述饱和杂环基的杂原子为O，杂原子个数为1个；
R14选自C1～C3烷基、羧基；
R15选自卤素。
进一步地，所述化合物如式Ⅳ所示：
Figure BDA0001965970990000061
其中，R2选自被1～2个R13取代的C1～C5烷基、被0～1个R14取代的6～10元环烷基；
R13选自5元饱和杂环基、羧基、被0～1个R15取代的芳基、酰胺基、
Figure BDA0001965970990000062
所述饱和杂环基的杂原子为O，杂原子个数为1个；
R14选自C1～C2烷基、羧基；
R15选自卤素。
进一步地，R14选自甲基；
R15选自氟。
进一步地，化合物为如下化合物之一：
Figure BDA0001965970990000063
Figure BDA0001965970990000071
进一步地，所述化合物如式Ⅴ所示：
Figure BDA0001965970990000072
其中，R1选自被0～2个R8取代的C1～C2烷基；被0～1个R9取代的3～6元环烷基；被0～2个R10取代的芳基；
R8选自3元环烷基、卤素、羧基、5元不饱和杂环基，被0～1个R11取代的芳基；所述不饱和杂环基的杂原子为S，杂原子个数为1个；
R9选自C1～C4烷基；
R10选自被0～3个R12取代的C1～C4烷基、C1～C2烷氧基、卤素；
R11选自被3个R12’取代的C1～C2烷基；
R12和R12’均为卤素。
进一步地，R1选自被0～2个R8取代的C1～C2烷基；被0～1个R9取代的3～6元环烷基；被0～2个R10取代的芳基；
R8选自3元环烷基、氟、羧基、5元不饱和杂环基，被0～1个R11取代的芳基；所述不饱和杂环基的杂原子为S，杂原子个数为1个；
R9选自C4烷基；
R10选自被0～3个R12取代的C1～C4烷基、C1～C2烷氧基、氟；
R11选自被3个R12’取代的甲基；
R12和R12’均为氟。
进一步地，化合物为如下化合物之一：
Figure BDA0001965970990000081
Figure BDA0001965970990000091
本发明还提供了一种制备前述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物的方法，其特征在于：它包括如下步骤：
合成路线1：
Figure BDA0001965970990000092
其中，
Figure BDA0001965970990000101
合成路线2：
Figure BDA0001965970990000102
其中，
Figure BDA0001965970990000103
本发明还提供了前述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物在制备抗流感病毒药物中的应用。
进一步地，所述药物用于与流感RNA聚合酶结合。
进一步地，所述药物用于与流感RNA聚合酶中的PB2蛋白结合。
进一步地，所述PB2蛋白为PB2318-483蛋白。
本发明还提供了一种药物，它是以前述的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。
本发明制备的化合物与PB2蛋白，特别是与PB2318-483蛋白有较强的结合能力，从而可以阻断流感RNA聚合酶的转录过程，进而抑制流感病毒的增殖。本发明化合物可以用于制备抗流感病毒的药物。
本发明中提供的化合物和衍生物可以根据IUPAC(国际纯粹与应用化学联合会)或CAS(化学文摘服务社，Columbus，OH)命名系统命名。
关于本发明的使用术语的定义：除非另有说明，本文中基团或者术语提供的初始定义适用于整篇说明书的该基团或者术语；对于本文没有具体定义的术语，应该根据公开内容和上下文，给出本领域技术人员能够给予它们的含义。
“取代”是指分子中的氢原子被其它不同的原子或分子所替换。
碳氢基团中碳原子含量的最小值和最大值通过前缀表示，例如，前缀Ca～Cb的烷基表明任何含“a”至“b”个碳原子的烷基，包括直链或直链烷基。因此，例如，C1～C4的烷基是指包含1～4个碳原子的直链烷基或支链烷基。
本发明中“Ca～Cb的烷氧基”是指含有“a”至“b”个碳原子的烷基与对应的氧原子相连得到的基团。例如，C1～C4的烷氧基是指1～4个碳原子的直链烷基或支链烷基取代羟基中的一个氢原子而形成的取代基。
本发明中“环烷基”指由碳原子相连形成的饱和环或非芳香性的不饱和环。
本发明中“杂环基”指包含至少一个杂原子的饱和饱和环或非芳香性的不饱和环，其中杂原子指氧原子、硫原子。
本发明中“芳基”指由碳原子相连形成的具有芳香性的不饱和环。
卤素为氟、氯、溴或碘。
术语“药学上可接受的”是指某载体、运载物、稀释剂、辅料，和/或所形成的盐通常在化学上或物理上与构成某药物剂型的其它成分相兼容，并在生理上与受体相兼容。
术语“立体异构体”指本发明化合物所涉及手性碳原子可以为R构型，也可以为S构型，或其组合。
术语“溶剂合物”指本发明化合物与药学上可接受的溶剂形成溶剂合物，其中，所述药学上可接受的溶剂包括(但并不限于)：水、乙醇、甲醇、异丙醇、丙二醇、四氢呋喃、二氯甲烷。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1为表面等离子体共振(SPR)实验中，化合物11b与PB2蛋白的的结合数据，图中KD表示平衡解离常数，用于评估化合物11b与PB2蛋白的亲和力。
图2为表面等离子体共振(SPR)实验中，化合物11b与PB2蛋白的的结合数据。
具体实施方式
一、化合物5a-5p的制备
合成路线1如下：
Figure BDA0001965970990000121
Figure BDA0001965970990000131
其中，步骤a中使用试剂为乙腈和N,N-二异丙基乙胺(DIEA)，反应条件为85℃回流，产物收率为60％～70％；
步骤b中使用的试剂为1-对甲苯磺酰基-5-氟-7-氮杂吲哚-3-频那醇酯、PdCl2(dppf)·DCM、碳酸铯、二氧六环和蒸馏水，反应条件为100℃，产物收率为78-86％；
步骤c中使用的试剂为氢氧化钠水溶液、四氢呋喃和甲醇，反应条件为常温，产物收率为90-95％。
实施例1反应中间体3a-3p的制备
1、中间体3-((3S，5S，7S)-金刚烷-1-基氨基)-5-溴-1-甲基吡嗪-2(1H)-酮(3a)
于100mL圆底烧瓶中加入3,5-二溴-1-甲基吡嗪-2(1H)-酮(536mg,2mmol,1.0eq)、1a(333mg,2.2mmol,1.1eq)、乙腈(25mL)和N,N-二异丙基乙胺(DIEA)(661μL,4mmol,2.0eq)，将反应体系置于85℃回流反应12h。反应结束，减压蒸馏除去溶剂，拌样，柱层析，以石油醚：乙酸乙酯(PE:EA)＝3:1洗脱得到产品(3a)，黄色固体，产率66％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.06(s,1H),6.36(s,1H),3.34(s,3H),2.06(s,9H),1.65(s,6H).ESI-ms(m/z):338.1[M+H]+。
中间体3c-3p可以由上述类似方法制得。
2、中间体5-溴-1-甲基-3-((2-甲基环己基)氨基)吡嗪-2(1H)-酮(3c)
淡黄色固体，产率60％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.29(d,J＝9.2Hz,1H),6.98(s,1H),3.36(d,J＝6.7Hz,4H),1.81–0.96(m,9H),0.80(d,J＝6.5Hz,3H).ESI-ms(m/z):300.1[M+H]+。
3、中间体(R)-5-溴-1-甲基-3-(((四氢呋喃-2-基)甲基)氨基)吡嗪-2(1H)-酮(3d)
黄色固体，产率70％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.37(t,J＝5.8Hz,1H),7.05(s,1H),4.06–3.98(m,1H),3.76(dd,J＝14.1,7.0Hz,1H),3.66–3.58(m,1H),3.36(s,3H),3.30–3.22(m,2H),1.93–1.74(m,3H),1.62–1.50(m,1H).ESI-ms(m/z):288.0[M+H]+。
4、中间体(S)-5-溴-1-甲基-3-(((四氢呋喃-2-基)甲基)氨基)吡嗪-2(1H)-酮(3e)
黄色固体，产率69％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.37(t,J＝5.8Hz,1H),7.05(s,1H),4.07–3.98(m,1H),3.76(dd,J＝14.1,7.0Hz,1H),3.62(dd,J＝14.3,7.4Hz,1H),3.36(s,3H),3.28(dd,J＝6.9,5.2Hz,2H),1.92–1.75(m,3H),1.62–1.51(m,1H).ESI-ms(m/z):288.0[M+H]+。
5、中间体5-溴-1-甲基-3-((3-(2-氧代吡咯烷-1-基)丙基)氨基)吡嗪-2(1H)-酮(3f)
黄色固体，产率65％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.62(t,J＝6.1Hz,1H),7.03(s,1H),3.37–3.32(m,4H),3.24–3.15(m,4H),2.21(t,J＝8.0Hz,2H),1.98–1.87(m,2H),1.76–1.64(m,2H),1.29–1.21(m,1H).ESI-ms(m/z):329.1[M+H]+。
6、中间体5-溴-1-甲基-3-((3-吗啉代丙基)氨基)吡嗪-2(1H)-酮(3g)
黄色固体，产率67％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.90(t,J＝5.3Hz,1H),7.01(s,1H),3.60(t,J＝4.6Hz,4H),3.35(s,3H),3.32–3.25(m,2H),2.34(t,J＝6.6Hz,6H),1.69(p,J＝6.7Hz,2H).ESI-ms(m/z):331.1[M+H]+。
7、3-((6-溴-4-甲基-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)-4-甲基戊酸甲酯(3h)
黄色油状物，加2mL乙醚，油泵抽滤得黄色固体，产率66％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.35(d,J＝9.2Hz,1H),7.03(s,1H),4.18–4.07(m,1H),3.54(s,3H),3.36(s,3H),2.62(t,J＝6.1Hz,2H),1.88(dd,J＝13.4,6.7Hz,1H),0.85(dd,J＝6.5,4.8Hz,6H).ESI-ms(m/z):332.1[M+H]+。
8、(+/-)-3-((6-溴-4-甲基-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸甲酯(3i)黄色油状物，加2mL乙醚，油泵抽滤得黄色固体，产率68％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.53(d,J＝6.9Hz,1H),7.06(s,1H),4.21(t,J＝7.0Hz,1H),3.61(s,3H),3.35(s,3H),2.92(d,J＝6.2Hz,1H),1.88(s,1H),1.76(s,1H),1.69(s,2H),1.58–1.38(m,6H).ESI-ms(m/z):370.1[M+H]+。
9、5-溴-3-((4-氟苄基)氨基)-1-甲基吡嗪-2(1H)-酮(3j)
黄色固体，产率69％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.19(t,J＝6.3Hz,1H),7.33(dd,J＝8.5,5.7Hz,2H),7.12(t,J＝8.9Hz,2H),7.06(s,1H),4.42(d,J＝6.4Hz,2H),3.36(s,3H).ESI-ms(m/z):312.0[M+H]+。
10、(S)-2-((6-溴-4-甲基-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)-3-苯基丙酰胺(3k)
黄色固体，产率68％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.56(s,1H),7.28–7.14(m,7H),7.08(s,1H),4.52(td,J＝8.2,4.7Hz,1H),3.34(s,3H),3.15–3.02(m,2H).ESI-ms(m/z):351.0[M+H]+。
11、(S)-5-溴-3-((1-(3-氟苯基)乙基)氨基)-1-甲基吡嗪-2(1H)-酮(3l)
黄色固体，产率70％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.32–7.23(m,1H),7.14(d,J＝7.7Hz,1H),7.10–7.01(m,1H),6.94(td,J＝8.3,2.1Hz,1H),6.66–6.47(m,2H),5.16(dd,J＝14.6,7.2Hz,1H),3.44(s,3H),1.56(d,J＝6.9Hz,3H).ESI-ms(m/z):326.0[M+H]+。
12、(S)-5-溴-1-甲基-3-((1-苯基丙基)氨基)吡嗪-2(1H)-酮(3m)
黄色固体，产率70％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.90(d,J＝8.8Hz,1H),7.38(d,J＝7.2Hz,2H),7.30(t,J＝7.5Hz,2H),7.21(d,J＝7.2Hz,1H),7.02(s,1H),4.75(dd,J＝15.1,8.6Hz,1H),3.34(s,3H),2.02–1.88(m,1H),1.86–1.73(m,1H),0.84(t,J＝7.3Hz,3H).ESI-ms(m/z):322.0[M+H]+。
13、(S)-5-溴-3-((1-(4-甲氧基苯基)乙基)氨基)-1-甲基吡嗪-2(1H)-酮(3n)
黄色固体，产率69％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.29(d,J＝8.6Hz,2H),6.86(d,J＝8.7Hz,2H),6.56(s,1H),6.51(d,J＝7.7Hz,1H),5.19–5.09(m,1H),3.79(s,3H),3.42(s,3H),1.55(d,J＝6.9Hz,3H).ESI-ms(m/z):338.0[M+H]+。
14、5-溴-1-甲基-3-((2-(噻吩-2-基)乙基)氨基)吡嗪-2(1H)-酮(3o)
黄色固体，产率70％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.69(s,1H),7.33(dd,J＝5.1,1.1Hz,1H),7.05(s,1H),6.95(dd,J＝5.0,3.5Hz,1H),6.89(d,J＝2.5Hz,1H),3.50(dd,J＝13.3,7.0Hz,2H),3.36(s,3H),3.08(t,J＝7.2Hz,2H).ESI-ms(m/z):314.0[M+H]+。
15、5-溴-1-甲基-3-((2-(吡啶-2-基)乙基)氨基)吡嗪-2(1H)-酮(3p)
黄色固体，产率68％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.52–8.44(m,1H),7.69(ddd,J＝12.4,9.1,3.7Hz,2H),7.27(d,J＝7.8Hz,1H),7.22(dd,J＝7.0,5.3Hz,1H),7.04(s,1H),3.61(dd,J＝13.2,7.0Hz,2H),3.35(s,3H),3.02(t,J＝7.2Hz,2H).ESI-ms(m/z):309.0[M+H]+。
实施例2、终产物5a-5p的制备
1、终产物3-((3S，5S，7S)-金刚烷-1-基氨基)-5-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1-甲基吡嗪-2(1H)-酮(5a)
Figure BDA0001965970990000151
于50mL双颈瓶中加入3a(102mg,0.3mmol,1.0eq)、1-对甲苯磺酰基-5-氟-7-氮杂吲哚-3-频那醇酯(156mg,0.36mmol,1.2eq)、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(24mg,0.03mmol,0.1eq)和碳酸铯(195mg,0.6mmol,2.0eq)，用二氧六环/水(10/1.5mL)溶解，超声下用氩气置换空气(3遍)。置于100℃反应，12h后反应完毕。减压蒸馏除去溶剂，残留物用DCM溶解，拌样，柱层析，以PE:EA＝1:1洗脱得到中间体4a，淡黄色固体，产率82％。
将得到的4a用甲醇：四氢呋喃(MeOH:THF)＝1:1溶解完全，加入2mL饱和氢氧化钠水溶液，常温搅拌2小时。反应完全后，减压蒸馏除去溶剂，加入水，用盐酸调pH至6-7，用乙酸乙酯萃取，减压蒸馏除去溶剂，加入1mL乙酸乙酯，10mL石油醚，析出大量固体，抽滤即得产物5a，黄色固体，产率90％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.99(s,1H),8.60(d,J＝2.3Hz,1H),8.24(d,J＝2.3Hz,1H),7.83(d,J＝2.6Hz,1H),7.36(s,1H),6.21(s,1H),3.48(s,3H),2.19(s,6H),2.12(s,3H),1.81–1.66(m,6H).ESI-ms(m/z):394.2[M+H]+。
终产物5c～5p用制备终产物5a的类似方法制得。
2、终产物5-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1-甲基-3-((2-甲基环己基)氨基)吡嗪-2(1H)-酮(5c)
Figure BDA0001965970990000161
黄色固体，水解脱保护基的产率为92％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.88(s,1H),8.35(dd,J＝10.2,2.7Hz,1H),8.22(s,1H),7.87(d,J＝2.6Hz,1H),7.28(s,1H),6.87(d,J＝8.9Hz,1H),3.62(d,J＝9.1Hz,1H),3.48(s,3H),1.99(s,1H),1.79(d,J＝14.2Hz,2H),1.68(d,J＝12.4Hz,2H),1.58(s,1H),1.38–1.22(m,3H),0.89(d,J＝6.4Hz,3H).ESI-ms(m/z):356.2[M+H]+。
3、终产物(R)-5-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1-甲基-3-(((四氢呋喃-2-基)甲基)氨基)吡嗪-2-(1H)-酮(5d)
Figure BDA0001965970990000162
黄色固体，水解脱保护基的产率为95％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.90(s,1H),8.35(d,J＝7.9Hz,1H),8.22(s,1H),7.88(s,1H),7.31(s,1H),7.07(s,1H),4.19–4.08(m,1H),3.81(d,J＝6.9Hz,1H),3.70–3.60(m,1H),3.49(s,4H),2.02–1.76(m,4H),1.68(d,J＝15.0Hz,1H).ESI-ms(m/z):344.1[M+H]+。
4、终产物(S)-5-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1-甲基-3-(((四氢呋喃-2-基)甲基)氨基)吡嗪-2-(1H)-酮(5e)
Figure BDA0001965970990000171
黄色固体，水解脱保护基的产率为95％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.90(s,1H),8.35(d,J＝9.8Hz,1H),8.23(s,1H),7.88(s,1H),7.31(s,1H),7.07(s,1H),4.14(s,1H),3.81(d,J＝6.6Hz,1H),3.64(d,J＝6.7Hz,1H),3.49(s,4H),1.87(d,J＝20.2Hz,4H),1.66(s,1H).ESI-ms(m/z):344.1[M+H]+。
5、终产物5-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1-甲基-3-((3-(2-氧代吡咯烷-1-基)丙基)氨基)吡嗪-2-(1H)-酮(5f)
Figure BDA0001965970990000172
黄色固体，水解脱保护基的产率为92％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.91(s,1H),8.32(dd,J＝10.0,2.7Hz,1H),8.23(s,1H),7.87(d,J＝2.5Hz,1H),7.28(s,1H),7.26(d,J＝6.2Hz,1H),3.49(s,3H),3.42–3.33(m,4H),3.26(t,J＝6.9Hz,2H),2.21(t,J＝8.1Hz,2H),1.91(dd,J＝14.9,7.4Hz,2H),1.85–1.76(m,2H).ESI-ms(m/z):385.2[M+H]+。
6、终产物5-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1-甲基-3-((3-吗啉代丙基)氨基)吡嗪-2(1H)-酮(5g)
Figure BDA0001965970990000181
黄色固体，水解脱保护基的产率为93％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.89(s,1H),8.34(dd,J＝10.1,2.7Hz,1H),8.23(d,J＝1.4Hz,1H),7.86(d,J＝2.6Hz,1H),7.51(t,J＝5.7Hz,1H),7.28(s,1H),3.63–3.56(m,4H),3.52–3.42(m,5H),2.39(dd,J＝14.0,7.2Hz,6H),1.84–1.74(m,2H).ESI-ms(m/z):387.2[M+H]+。
7、终产物3-((6-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-4-甲基-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)-4-甲基戊酸(5h)
Figure BDA0001965970990000182
调pH之前先用乙酸乙酯萃取一遍，去掉有机层，水层再调pH，其余操作与制备5a类似，黄色固体，水解脱保护基的产率为90％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.11(s,1H),11.88(s,1H),8.39(dd,J＝10.1,2.5Hz,1H),8.22(s,1H),7.86(d,J＝2.4Hz,1H),7.30(s,1H),6.94(d,J＝8.8Hz,1H),4.37(s,1H),3.49(s,3H),2.59(dd,J＝15.7,6.4Hz,2H),2.04(dd,J＝12.8,6.4Hz,1H),0.93(dd,J＝11.2,6.8Hz,6H).ESI-ms(m/z):374.2[M+H]+。
8、终产物3-((6-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-4-甲基-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)二环[2.2.2]辛烷-2-羧酸(5i)
Figure BDA0001965970990000183
调pH之前先用乙酸乙酯萃取一遍，去掉有机层，水层再调pH，其余操作与制备5a类似，黄色固体，水解脱保护基的产率为91％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.88(s,1H),8.40(dd,J＝10.1,2.6Hz,1H),8.22(s,1H),7.87(d,J＝2.2Hz,1H),7.33(s,1H),7.09(d,J＝5.5Hz,1H),4.49(s,1H),3.48(s,3H),2.81(s,1H),1.96(s,2H),1.73(s,2H),1.63–1.35(m,6H).ESI-ms(m/z):412.2[M+H]+。
9、终产物5-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3-((4-氟苄基)氨基)-1-甲基吡嗪-2(1H)-酮(5j)
Figure BDA0001965970990000191
黄色固体，水解脱保护基的产率为93％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.85(s,1H),8.18(s,1H),8.01(d,J＝10.3Hz,1H),7.90(s,1H),7.81(s,1H),7.41(s,2H),7.29(s,1H),7.12(t,J＝8.6Hz,2H),4.58(d,J＝6.0Hz,2H),3.49(s,3H).ESI-ms(m/z):368.1[M+H]+。
10、终产物(S)-2-((6-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-4-甲基-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)-3-苯基丙酰胺(5k)
Figure BDA0001965970990000192
黄色固体，水解脱保护基的产率为94％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.92(s,1H),8.33(dd,J＝9.9,2.4Hz,1H),8.23(s,1H),7.88(s,1H),7.61(s,1H),7.39–7.21(m,5H),7.21–7.13(m,2H),6.90(d,J＝7.9Hz,1H),4.74–4.61(m,1H),3.47(s,3H),3.23–3.08(m,2H).ESI-ms(m/z):407.2[M+H]+。
11、终产物(S)-5-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3-((1-(3-氟苯基)乙基)氨基)-1-甲基吡嗪-2(1H)-酮(5l)
Figure BDA0001965970990000201
黄色固体，水解脱保护基的产率为93％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.84(s,1H),8.18(s,1H),8.01(d,J＝9.9Hz,1H),7.79(s,1H),7.57(d,J＝7.6Hz,1H),7.39–7.18(m,4H),7.01(s,1H),5.26–5.10(m,1H),3.49(s,3H),1.55(d,J＝7.0Hz,3H).ESI-ms(m/z):382.1[M+H]+。
12、终产物(S)-5-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1-甲基-3-((1-苯基丙基)氨基)吡嗪-2(1H)-酮(5m)
Figure BDA0001965970990000202
黄色固体，水解脱保护基的产率为90％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.85(s,1H),8.19(s,1H),8.12(dd,J＝10.1,2.7Hz,1H),7.80(d,J＝2.6Hz,1H),7.51–7.43(m,3H),7.31(t,J＝7.6Hz,2H),7.27(s,1H),7.21(d,J＝7.3Hz,1H),4.92(d,J＝6.7Hz,1H),3.48(s,3H),2.00(dd,J＝15.2,6.4Hz,1H),1.88–1.79(m,1H),0.91(t,J＝7.3Hz,3H).ESI-ms(m/z):378.2[M+H]+。
13、终产物(S)-5-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3-((1-(4-甲氧基苯基)乙基)氨基)-1-甲基吡嗪-2(1H)-酮(5n)
Figure BDA0001965970990000203
黄色固体，水解脱保护基的产率为94％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.86(s,1H),8.19(s,1H),8.09(d,J＝9.3Hz,1H),7.81(s,1H),7.54–7.16(m,4H),6.86(d,J＝7.6Hz,2H),5.13(s,1H),3.70(s,3H),3.48(s,3H),1.53(d,J＝6.1Hz,3H).ESI-ms(m/z):394.2[M+H]+。
14、终产物5-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1-甲基-3-((2-(噻吩-2-基)乙基)氨基)吡嗪-2(1H)-酮(5o)
Figure BDA0001965970990000211
黄色固体，水解脱保护基的产率为95％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.91(s,1H),8.35(s,1H),8.22(s,1H),7.90(s,1H),7.32(s,3H),6.95(s,2H),3.68(s,2H),3.49(s,3H),3.17(s,2H).ESI-ms(m/z):370.1[M+H]+。
15、终产物5-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-1-甲基-3-((2-(吡啶-2-基)乙基)氨基)吡嗪-2(1H)-酮(5p)
Figure BDA0001965970990000212
黄色固体，水解脱保护基的产率为92％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.89(s,1H),8.53(d,J＝4.3Hz,1H),8.41(dd,J＝10.0,2.6Hz,1H),8.22(s,1H),7.91(s,1H),7.70(td,J＝7.6,1.7Hz,1H),7.43–7.28(m,3H),7.27–7.16(m,1H),3.79(dd,J＝13.5,6.7Hz,2H),3.48(s,3H),3.11(t,J＝7.2Hz,2H).ESI-ms(m/z):365.1[M+H]+。
二、化合物11a-11s的制备
合成路线2如下：
Figure BDA0001965970990000221
其中，步骤a中第ⅰ步使用试剂为四氢呋喃和DIEA，反应条件为80℃，产物收率为90-95％；步骤a中第ⅱ步使用试剂为草酰溴和二氯甲烷，反应条件为45℃，产物收率为50-62％；
步骤b中使用的试剂为(2S，3S)-3-氨基双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸甲酯盐酸盐、乙腈和DIEA，反应条件为90℃回流，产物收率为60-70％；
步骤c中使用的试剂为1-对甲苯磺酰基-5-氟-7-氮杂吲哚-3-频那醇酯、PdCl2(dppf)·DCM、碳酸铯、二氧六环和蒸馏水，反应条件为100℃，产物收率为80-86％；
步骤d中使用的试剂为氢氧化钠水溶液、四氢呋喃和甲醇，反应条件为常温，产物收率为90-95％。
实施例3、反应中间体8a-8s的制备
1、中间体8a可由商业途径购得。(成都聚慧化工科技有限公司，纯度95％)
2、中间体3,5-二溴-1-乙基吡嗪-2(1H)-酮(8b)
于100mL圆底烧瓶中加入溴乙腈(762μL,11mmol,1.1eq)，65％-70％乙胺水溶液(857μL,10mmol,1.0eq)，DIEA(3.3mL,20mmol,2.0eq)，用20mL四氢呋喃溶解，置于80℃下搅拌5小时。反应完全后，减压蒸馏除去溶剂，残渣用水和乙酸乙酯萃取，减压蒸馏除去有机层溶剂，不做进一步纯化，直接往下投。
将上一步得到的中间体用25mL二氯甲烷溶解。缓慢加入草酰溴(1.6mL,11mmol,1.1eq)，滴加完毕后置于45℃反应20小时。反应完全后，减压蒸馏除去溶剂，残渣用二氯甲烷溶解，拌样，柱层析，以PE:EA＝3:1洗脱得到中间体8b，黄棕色油状物，产率52％。1H
NMR(400MHz,CDCl3)δ7.31(s,1H),3.99(q,J＝7.2Hz,2H),1.41(t,J＝7.2Hz,
3H).ESI-ms(m/z):280.8[M+H]+。
中间体8c-8s可以由上述类似方法制得。
3、中间体3,5-二溴-1-环丙基吡嗪-2(1H)-酮(8c)
黄棕色油状物，产率53％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.90(s,1H),3.36(dd,J＝11.6,5.8Hz,1H),0.99(d,J＝5.8Hz,4H).ESI-ms(m/z):292.9[M+H]+。
4、中间体3,5-二溴-1-环丁基吡嗪-2(1H)-酮(8d)
黄棕色油状物，产率55％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.09(s,1H),4.90–4.80(m,1H),2.39–2.25(m,4H),1.75(td,J＝9.6,5.2Hz,2H).ESI-ms(m/z):306.9[M+H]+。
5、中间体3,5-二溴-1-环戊基吡嗪-2(1H)-酮(8e)
黄色固体，产率62％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.02(s,1H),4.95–4.79(m,1H),2.07–1.93(m,2H),1.88–1.70(m,4H),1.69–1.52(m,2H).ESI-ms(m/z):320.9[M+H]+。
6、中间体3,5-二溴-1-环己基吡嗪-2(1H)-酮(8f)
黄色固体，产率60％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.11(s,1H),4.57–4.43(m,1H),1.87–1.58(m,7H),1.43–1.29(m,2H),1.22(dd,J＝21.1,8.3Hz,1H).ESI-ms(m/z):334.9[M+H]+。
7、中间体3,5-二溴-1-(4-(叔丁基)环己基吡嗪-2(1H)-酮(8g)
黄色固体，产率61％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.89(s,1H),4.61–4.53(m,1H),2.05(dd,J＝14.2,4.8Hz,2H),1.75(ddd,J＝15.0,10.4,4.9Hz,2H),1.59(dd,J＝13.5,4.3Hz,2H),1.35–1.25(m,2H),1.20(d,J＝10.3Hz,1H),0.86(s,9H).ESI-ms(m/z):391.0[M+H]+。
8、中间体3,5-二溴-1-(1-环丙基乙基)吡嗪-2(1H)-酮(8h)
黄棕色油状物，产率52％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.25(s,1H),3.98(dd,J＝9.6,6.8Hz,1H),1.40(d,J＝6.8Hz,4H),0.65(ddd,J＝6.6,5.1,3.9Hz,1H),0.53–0.40(m,2H),0.22(dd,J＝10.7,5.1Hz,1H).ESI-ms(m/z):320.9[M+H]+。
9、中间体3,5-二溴-1-(2,2-二氟乙基)吡嗪-2(1H)-酮(8i)
黄棕色油状物，产率58％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.12(s,1H),6.32(ddt,J＝58.7,54.9,3.8Hz,1H),4.38(tt,J＝12.3,6.1Hz,2H).ESI-ms(m/z):316.9[M+H]+。
10、中间体2-(3,5-二溴-2-氧代吡嗪-1(2H)-基)乙酸甲酯(8j)
黄棕色油状物，产率56％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.16(s,1H),4.77(s,2H),3.72(s,3H).ESI-ms(m/z):324.9[M+H]+。
11、中间体3,5-二溴-1-(噻吩-3-基甲基)吡嗪-2(1H)-酮(8k)
黄棕色油状物，产率57％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.33(s,1H),7.52(dd,J＝5.1,1.0Hz,1H),7.26(d,J＝2.8Hz,1H),7.02(dd,J＝5.0,3.6Hz,1H),5.25(s,2H).ESI-ms(m/z):348.9[M+H]+。
12、中间体3,5-二溴-1-苯基吡嗪-2(1H)-酮(8l)
黄色固体，产率62％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.12(s,1H),7.58–7.47(m,5H).ESI-ms(m/z):328.9[M+H]+。
13、中间体3,5-二溴-1-(4-甲氧基苯基)吡嗪-2(1H)-酮(8m)
黄色固体，产率61％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.08(s,1H),7.45–7.39(m,2H),7.10–7.04(m,2H),3.81(s,3H).ESI-ms(m/z):358.9[M+H]+。
14、中间体3,5-二溴-1-(4-(叔丁基)苯基)吡嗪-2(1H)-酮(8n)
黄色固体，产率62％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.12(s,1H),7.56(d,J＝8.6Hz,2H),7.42(d,J＝8.6Hz,2H),1.32(s,9H).ESI-ms(m/z):384.9[M+H]+。
15、中间体3,5-二溴-1-(4-(三氟甲基)苯基)吡嗪-2(1H)-酮(8o)
黄色固体，产率60％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.18(s,1H),7.96(d,J＝8.4Hz,2H),7.76(d,J＝8.3Hz,2H).ESI-ms(m/z):396.9[M+H]+。
16、中间体3,5-二溴-1-(3,4-二氟苯基)吡嗪-2(1H)-酮(8p)
黄色固体，产率59％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.15(s,1H),7.77–7.70(m,1H),7.66(dd,J＝19.3,8.9Hz,1H),7.46–7.39(m,1H).ESI-ms(m/z):364.9[M+H]+。
17、中间体3,5-二溴-1-(3,5-二甲基苯基)吡嗪-2(1H)-酮(8q)
黄色固体，产率59％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.07(s,1H),7.14(s,1H),7.10(s,2H),2.32(s,6H).ESI-ms(m/z):356.9[M+H]+。
18、中间体3,5-二溴-1-(4-乙氧基苯基)吡嗪-2(1H)-酮(8r)
黄色固体，产率62％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.07(s,1H),7.40(d,J＝8.9Hz,2H),7.05(d,J＝8.9Hz,2H),4.09(q,J＝6.9Hz,2H),1.35(t,J＝6.9Hz,3H).ESI-ms(m/z):372.9[M+H]+。
19、中间体3,5-二溴-1-(3-(三氟甲基)苄基)吡嗪-2(1H)-酮(8s)
黄色固体，产率61％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.36(s,1H),7.82(s,1H),7.69(t,J＝6.9Hz,2H),7.66–7.58(m,1H),5.16(s,2H).ESI-ms(m/z):410.9[M+H]+。
实施例4、反应中间体9a-9s的制备
中间体9a-9s可由制备中间体3a类似的方法制得。
1、中间体(2S，3S)-3-((6-溴-4-甲基-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸甲酯(9a)
黄棕色油状物，加3mL乙醚，油泵抽，呈黄色固体，产率70％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.53(d,J＝6.9Hz,1H),7.06(s,1H),4.21(t,J＝7.0Hz,1H),3.61(s,3H),3.35(s,3H),2.92(d,J＝6.2Hz,1H),1.88(s,1H),1.76(s,1H),1.69(s,2H),1.58–1.38(m,6H).ESI-ms(m/z):370.1[M+H]+。
2、中间体(2S，3S)-3-((6-溴-4-乙基-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸甲酯(9b)
黄棕色油状物，产率62％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.57(s,1H),6.35(d,J＝5.3Hz,1H),4.32(s,1H),3.92–3.79(m,2H),3.75(s,3H),2.39(d,J＝5.7Hz,1H),1.95(d,J＝2.5Hz,1H),1.88(d,J＝2.7Hz,1H),1.82–1.72(m,2H),1.69–1.56(m,6H),1.33(t,J＝7.2Hz,3H).ESI-ms(m/z):384.0[M+H]+。
3、中间体(2S,3S)-3-((6-溴-4-环丙基-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸甲酯(9c)
黄棕色油状物，产率64％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.53(d,J＝7.0Hz,1H),6.81(s,1H),4.21(t,J＝6.7Hz,1H),3.61(s,3H),3.36(dd,J＝9.5,3.7Hz,1H),2.92(d,J＝6.8Hz,1H),1.87(s,1H),1.76(s,1H),1.70(s,2H),1.52(s,2H),1.48–1.30(m,4H),0.96–0.85(m,4H).ESI-ms(m/z):396.1[M+H]+。
4、中间体(2S，3S)-3-((6-溴-4-环丁基-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸甲酯(9d)
黄棕色油状物，产率65％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.53(d,J＝6.8Hz,1H),7.11(s,1H),4.96(dd,J＝17.3,8.4Hz,1H),4.21(t,J＝6.9Hz,1H),3.61(s,3H),2.91(d,J＝6.8Hz,1H),2.36–2.22(m,4H),1.87(s,1H),1.78-1.74(m,3H),1.70(s,2H),1.52(s,2H),1.46–1.29(m,4H).ESI-ms(m/z):410.1[M+H]+。
5、中间体(2S，3S)-3-((6-溴-4-环戊基-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸甲酯(9e)
黄棕色油状物，加3mL乙醚，油泵抽，呈黄色固体，产率68％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.54(d,J＝6.7Hz,1H),6.96(s,1H),4.95(dd,J＝16.5,8.3Hz,1H),4.21(s,1H),3.61(s,3H),2.92(d,J＝6.4Hz,1H),2.02–1.86(m,3H),1.65(ddd,J＝37.5,36.8,19.8Hz,11H),1.40(dd,J＝36.9,21.2Hz,4H).ESI-ms(m/z):424.1[M+H]+。
6、中间体(2S，3S)-3-((6-溴-4-环己基-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸甲酯(9f)
黄棕色油状物，加3mL乙醚，油泵抽，呈黄色固体，产率66％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.50(d,J＝7.1Hz,1H),7.05(s,1H),4.51(dd,J＝12.9,7.5Hz,1H),4.21(t,J＝6.8Hz,1H),3.61(s,3H),2.92(d,J＝6.4Hz,1H),1.87(s,1H),1.79(d,J＝18.3Hz,3H),1.65(dd,J＝20.0,8.0Hz,6H),1.52(s,2H),1.38(d,J＝34.7Hz,6H),1.19(dd,J＝25.5,12.5Hz,2H).ESI-ms(m/z):438.1[M+H]+。
7、中间体(2S，3S)-3-((6-溴-4-(4-(叔丁基)环己基)-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸甲酯(9g)
黄棕色油状物，加3mL乙醚，油泵抽，呈黄色固体，产率67％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.61(s,1H),6.35(d,J＝5.9Hz,1H),4.62(t,J＝12.2Hz,1H),4.31(s,1H),3.75(s,3H),2.40(d,J＝5.6Hz,1H),1.94(s,2H),1.91(s,2H),1.80–1.47(m,15H),0.88(s,9H).ESI-ms(m/z):494.2[M+H]+。
8、中间体(2S，3S)-3-((6-溴-4-(1-环丙基乙基)-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸甲酯(9h)
黄棕色油状物，产率61％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.52(d,J＝6.5Hz,1H),7.18(s,1H),4.22(d,J＝5.3Hz,1H),3.99(d,J＝7.5Hz,1H),3.62(s,3H),2.92(t,J＝6.7Hz,1H),1.88(s,1H),1.77(s,1H),1.69(s,2H),1.53(s,2H),1.48–1.38(m,4H),1.35(d,J＝6.6Hz,4H),0.61(dd,J＝16.8,9.4Hz,1H),0.43(dd,J＝13.1,7.3Hz,2H),0.21–0.11(m,1H).ESI-ms(m/z):424.1[M+H]+。
9、中间体(2S，3S)-3-((6-溴-4-(2,2-二氟乙基)-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸甲酯(9i)
黄棕色油状物，产率61％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.72(d,J＝6.9Hz,1H),7.05(s,1H),6.32(ddt,J＝58.7,54.9,3.8Hz,1H),4.34–4.22(m,3H),3.62(s,3H),2.95(d,J＝6.6Hz,1H),1.88(s,1H),1.78(s,1H),1.69(d,J＝7.0Hz,2H),1.53(s,2H),1.47–1.30(m,4H).ESI-ms(m/z):420.1[M+H]+。
10、中间体(2S，3S)-3-((6-溴-4-(2-甲氧基-2-氧代乙基)-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸甲酯(9j)
黄棕色油状物，加3mL乙醚，油泵抽，呈黄色固体，产率70％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.66(d,J＝7.0Hz,1H),7.08(s,1H),4.63(d,J＝2.4Hz,2H),4.23(t,J＝6.7Hz,1H),3.69(s,3H),3.62(s,3H),2.93(d,J＝6.5Hz,1H),1.88(s,1H),1.78(s,1H),1.69(s,2H),1.53(s,2H),1.46–1.31(m,4H).ESI-ms(m/z):428.1[M+H]+。
11、中间体(2S，3S)-3-((6-溴-3-氧代-4-(噻吩-3-基甲基)-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸甲酯(9k)
黄棕色油状物，加3mL乙醚，油泵抽，呈黄色固体，产率68％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.30(dd,J＝5.1,1.1Hz,1H),7.10(d,J＝2.4Hz,1H),7.00(dd,J＝5.0,3.6Hz,1H),6.62(s,1H),6.38(d,J＝5.6Hz,1H),5.11(d,J＝6.7Hz,2H),4.31(s,1H),3.74(s,3H),2.38(d,J＝5.6Hz,1H),1.95(d,J＝2.4Hz,1H),1.87(d,J＝2.7Hz,1H),1.75(d,J＝13.3Hz,2H),1.68–1.57(m,6H).ESI-ms(m/z):452.0[M+H]+。
12、中间体(2S，3S)-3-((6-溴-3-氧代-4-苯基-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸甲酯(9l)
黄棕色油状物，加3mL乙醚，油泵抽，呈黄色固体，产率70％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.48(d,J＝7.7Hz,2H),7.44(d,J＝7.2Hz,1H),7.37(d,J＝7.2Hz,2H),6.72(s,1H),6.48(d,J＝5.5Hz,1H),4.39(s,1H),3.78(s,3H),2.43(d,J＝5.6Hz,1H),1.97(d,J＝2.4Hz,1H),1.92(d,J＝2.6Hz,1H),1.85–1.57(m,8H).ESI-ms(m/z):432.0[M+H]+。
13、中间体(2S，3S)-3-((6-溴-4-(4-甲氧基苯基)-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸甲酯(9m)
黄棕色油状物，加3mL乙醚，油泵抽，呈黄色固体，产率69％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.70(d,J＝6.9Hz,1H),7.40(d,J＝9.2Hz,2H),7.04(d,J＝8.9Hz,2H),6.95(s,1H),4.28(t,J＝6.6Hz,1H),3.80(s,3H),3.63(s,3H),2.97(d,J＝6.4Hz,1H),1.86(d,J＝26.5Hz,2H),1.71(d,J＝8.2Hz,2H),1.56(s,2H),1.50–1.30(m,4H).ESI-ms(m/z):462.1[M+H]+。
14、中间体(2S，3S)-3-((6-溴-4-(4-(叔丁基)苯基)-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸甲酯(9n)
黄棕色油状物，加3mL乙醚，油泵抽，呈黄色固体，产率69％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.71(d,J＝6.9Hz,1H),7.52(d,J＝8.6Hz,2H),7.40(d,J＝8.5Hz,2H),7.00(s,1H),4.28(t,J＝6.5Hz,1H),3.63(s,3H),2.98(d,J＝6.7Hz,1H),1.86(d,J＝26.3Hz,2H),1.71(d,J＝7.8Hz,2H),1.56(s,2H),1.42(dd,J＝32.9,14.3Hz,4H),1.32(s,9H).ESI-ms(m/z):488.1[M+H]+。
15、中间体(2S，3S)-3-((6-溴-3-氧代-4-(4-(三氟甲基)苯基)-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸甲酯(9o)
黄棕色油状物，加3mL乙醚，油泵抽，呈黄色固体，产率70％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.90(d,J＝8.5Hz,2H),7.81(d,J＝7.0Hz,1H),7.76(d,J＝8.4Hz,2H),7.10(s,1H),4.30(t,J＝6.7Hz,1H),3.63(s,3H),2.99(d,J＝6.5Hz,1H),1.87(d,J＝23.6Hz,2H),1.71(d,J＝8.6Hz,2H),1.54(d,J＝13.2Hz,2H),1.50–1.32(m,4H).ESI-ms(m/z):500.1[M+H]+。
16、中间体(2S，3S)-3-((6-溴-4-(3,4-二氟苯基)-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸甲酯(9p)
黄棕色油状物，加3mL乙醚，油泵抽，呈黄色固体，产率68％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.77(dd,J＝18.9,7.6Hz,2H),7.61(dd,J＝18.5,9.4Hz,1H),7.42(s,1H),7.06(s,1H),4.30(s,1H),3.64(s,3H),2.99(d,J＝5.2Hz,1H),1.87(d,J＝28.6Hz,2H),1.72(s,2H),1.63–1.29(m,6H).ESI-ms(m/z):468.1[M+H]+。
17、中间体(2S，3S)-3-((6-溴-4-(3,5-二甲基苯基)-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸甲酯(9q)
黄棕色油状物，加3mL乙醚，油泵抽，呈黄色固体，产率69％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.71(d,J＝6.9Hz,1H),7.15(s,1H),7.11(s,2H),6.98(s,1H),4.30(s,1H),3.63(s,3H),2.99(d,J＝6.5Hz,1H),2.31(s,6H),1.87(d,J＝23.6Hz,2H),1.71(d,J＝8.6Hz,2H),1.54(d,J＝13.2Hz,2H),1.50–1.32(m,4H).ESI-ms(m/z):460.1[M+H]+。
18、中间体(2S，3S)-3-((6-溴-4-(4-乙氧基苯基)-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸甲酯(9r)
黄棕色油状物，加3mL乙醚，油泵抽，呈黄色固体，产率67％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.69(d,J＝6.9Hz,1H),7.38(d,J＝8.9Hz,2H),7.02(d,J＝8.9Hz,2H),6.95(s,1H),4.28(t,J＝6.6Hz,1H),4.07(q,J＝6.9Hz,2H),3.63(s,3H),2.97(d,J＝6.6Hz,1H),1.86(d,J＝27.4Hz,2H),1.70(d,J＝8.0Hz,2H),1.54(d,J＝12.9Hz,2H),1.39(dt,J＝13.9,9.7Hz,7H).ESI-ms(m/z):476.1[M+H]+。
19、中间体(2S，3S)-3-((6-溴-3-氧代-4-(3-(三氟甲基)苄基)-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸甲酯(9s)
黄棕色油状物，加3mL乙醚，油泵抽，呈黄色固体，产率69％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.79(s,1H),7.67(m,3H),7.63–7.58(m,1H),7.29(s,1H),5.06(q,J＝14.3Hz,2H),4.22(t,J＝6.6Hz,1H),3.61(s,3H),2.92(d,J＝6.7Hz,1H),1.87(s,1H),1.77(s,1H),1.69(s,2H),1.52(s,2H),1.46–1.30(m,4H).ESI-ms(m/z):514.1[M+H]+。
实施例5、终产物11a-11s的制备
终产物11a-11s可由制备终产物5a类似的方法制得。
1、终产物(2S，3S)-3-((6-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-4-甲基-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸(11a)
Figure BDA0001965970990000291
黄棕色固体，水解产率94％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.90(s,1H),8.41(dd,J＝10.1,2.4Hz,1H),8.21(s,1H),7.87(s,1H),7.32(s,1H),6.90(d,J＝6.2Hz,1H),4.51(s,1H),3.47(s,3H),2.63(s,1H),1.97(s,2H),1.70(s,3H),1.57(s,2H),1.47(d,J＝11.5Hz,1H),1.42–1.28(m,2H)..ESI-ms(m/z):412.2[M+H]+。
2、终产物(2S，3S)-3-((6-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-4-乙基-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸(11b)
Figure BDA0001965970990000292
黄棕色固体，水解产率92％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.89(s,1H),8.41(dd,J＝10.1,2.6Hz,1H),8.21(s,1H),7.90(d,J＝2.3Hz,1H),7.34(s,1H),7.06(d,J＝6.6Hz,1H),4.49(t,J＝6.6Hz,1H),4.03–3.85(m,2H),2.78(d,J＝6.4Hz,1H),1.97(s,2H),1.73(s,3H),1.48(m,5H),1.30(t,J＝7.1Hz,3H).ESI-ms(m/z):426.2[M+H]+。
3、终产物(2S，3S)-3-((4-环丙基-6-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸(11c)
Figure BDA0001965970990000301
黄棕色固体，水解产率94％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.88(s,1H),8.40(d,J＝10.8Hz,1H),8.19(s,1H),8.00(s,1H),7.07(s,1H),6.84(s,1H),4.52(s,1H),3.41(m,1H),1.98(s,2H),1.72(d,J＝19.1Hz,3H),1.56(s,2H),1.46(d,J＝11.3Hz,1H),1.34(d,J＝17.0Hz,3H),1.00(d,J＝6.9Hz,4H).ESI-ms(m/z):438.2[M+H]+。
4、终产物(2S，3S)-3-((4-环丁基-6-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸(11d)
Figure BDA0001965970990000302
黄棕色固体，水解产率94％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.89(s,1H),8.46(d,J＝7.9Hz,1H),8.19(s,1H),8.09(s,1H),7.38(s,1H),6.50(s,1H),5.15–5.08(m,1H),4.53(s,1H),2.67(s,1H),2.32(s,2H),1.99(d,J＝11.6Hz,2H),1.78(d,J＝18.1Hz,3H),1.59(d,J＝39.9Hz,5H),1.29(s,2H),0.87–0.80(m,2H).ESI-ms(m/z):452.2[M+H]+。
5、终产物(2S，3S)-3-((4-环戊基-6-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸(11e)
Figure BDA0001965970990000303
黄棕色固体，水解产率95％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.23(s,1H),11.90(s,1H),8.37(dd,J＝10.1,2.8Hz,1H),8.21(s,1H),8.04(d,J＝2.6Hz,1H),7.23–7.16(m,2H),5.16–5.01(m,1H),4.51(t,J＝7.1Hz,1H),2.89(d,J＝6.7Hz,1H),2.07–1.93(m,4H),1.93–1.83(m,4H),1.74(d,J＝11.6Hz,3H),1.69–1.58(m,4H),1.46(dd,J＝17.0,12.7Hz,3H).ESI-ms(m/z):466.2[M+H]+。
6、终产物(2S，3S)-3-((4-环己基-6-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸(11f)
Figure BDA0001965970990000311
黄棕色固体，水解产率94％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.89(s,1H),8.42(d,J＝9.7Hz,1H),8.20(s,1H),8.04(s,1H),7.30(s,1H),6.93(s,1H),4.66(s,1H),4.51(s,1H),2.67(s,1H),1.99(s,2H),1.92–1.62(m,9H),1.56(d,J＝7.2Hz,2H),1.49–1.22(m,7H).ESI-ms(m/z):480.2[M+H]+。
7、终产物(2S，3S)-3-((4-(4-(叔丁基)环己基)-6-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸(11g)
Figure BDA0001965970990000312
黄棕色固体，水解产率94％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.92(s,1H),8.30(dd,J＝9.9,2.6Hz,1H),8.22(s,1H),7.91(s,1H),7.24(s,1H),6.94(s,1H),4.79–4.69(m,1H),4.51(t,J＝6.7Hz,1H),2.65(s,1H),2.13(dd,J＝14.0,4.7Hz,2H),1.97(s,2H),1.85–1.23(m,15H),0.90(s,9H).ESI-ms(m/z):536.3[M+H]+。
8、终产物(2S，3S)-3-((4-(1-环丙基乙基)-6-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸(11h)
Figure BDA0001965970990000321
黄棕色固体，水解产率91％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.21(s,1H),11.89(s,1H),8.40(d,J＝10.0Hz,1H),8.21(s,1H),8.01(d,J＝2.6Hz,1H),7.41(s,1H),7.16(d,J＝7.0Hz,1H),4.51(d,J＝6.9Hz,1H),4.19–4.03(m,1H),2.88(s,1H),1.98(s,2H),1.75(s,3H),1.65–1.32(m,8H),0.84(dd,J＝8.7,6.5Hz,1H),0.65(dd,J＝11.1,5.7Hz,1H),0.51–0.39(m,2H),0.23(d,J＝5.4Hz,1H).ESI-ms(m/z):466.2[M+H]+。
9、终产物(2S，3S)-3-((4-(2,2-二氟乙基)-6-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3-氧代-3，4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸(11i)
Figure BDA0001965970990000322
黄棕色固体，水解产率90％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.94(s,1H),8.40(dd,J＝10.2,2.6Hz,1H),8.22(s,1H),7.87(s,1H),7.32(s,1H),6.89(s,1H),6.42(t,J＝55.3Hz,1H),4.52(s,1H),4.39(t,J＝14.6Hz,2H),1.98(s,2H),1.64(dd,J＝57.5,11.6Hz,5H),1.46(d,J＝12.9Hz,1H),1.38–1.21(m,3H).ESI-ms(m/z):462.2[M+H]+。
10、终产物(2S，3S)-3-((4-(羧甲基)-6-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸(11j)
Figure BDA0001965970990000323
黄棕色固体，水解产率90％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.15(s,2H),11.90(s,1H),8.37(d,J＝7.9Hz,1H),8.23(s,1H),7.84(s,1H),7.35(s,1H),7.21(d,J＝7.0Hz,1H),4.64(s,2H),4.49(s,1H),2.87(d,J＝7.0Hz,1H),1.97(s,2H),1.73(s,3H),1.44(dd,J＝39.6,18.9Hz,5H).ESI-ms(m/z):456.2[M+H]+。
11、终产物(2S，3S)-3-((6-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3-氧代-4-(噻吩-2-基甲基)-3，4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸(11k)
Figure BDA0001965970990000331
黄棕色固体，水解产率94％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.91(s,1H),8.38(dd,J＝10.1,2.6Hz,1H),8.22(s,1H),7.87(s,1H),7.46(d,J＝2.6Hz,2H),7.28(d,J＝3.2Hz,1H),7.08(s,1H),7.04–6.96(m,1H),5.26(s,2H),4.49(s,1H),2.67(s,1H),1.96(s,2H),1.71(s,3H),1.58–1.29(m,5H).ESI-ms(m/z):494.2[M+H]+。
12、终产物(2S，3S)-3-((6-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3-氧代-4-苯基-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸(11l)
Figure BDA0001965970990000332
黄棕色固体，水解产率92％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.89(s,1H),8.46(d,J＝10.0Hz,1H),8.20(s,1H),8.01(s,1H),7.57(d,J＝3.0Hz,4H),7.48(d,J＝5.4Hz,1H),7.32(s,1H),7.10(s,1H),4.60(s,1H),2.67(s,1H),2.04(s,1H),1.99(s,1H),1.73(d,J＝8.4Hz,2H),1.59(s,2H),1.53–1.31(m,4H).ESI-ms(m/z):474.2[M+H]+。
13、终产物(2S，3S)-3-((6-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-4-(4-甲氧基苯基)-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸(11m)
Figure BDA0001965970990000341
黄棕色固体，水解产率95％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.88(s,1H),8.42(dd,J＝10.0,2.7Hz,1H),8.21(s,1H),7.99(d,J＝2.5Hz,1H),7.49(d,J＝8.9Hz,2H),7.28(s,2H),7.09(d,J＝8.9Hz,2H),4.59(d,J＝7.4Hz,1H),3.83(s,3H),2.86(s,1H),2.00(d,J＝12.3Hz,2H),1.76(s,2H),1.67–1.33(m,6H).ESI-ms(m/z):504.2[M+H]+。
14、终产物(2S，3S)-3-((4-(4-(叔丁基)苯基)-6-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸(11n)
Figure BDA0001965970990000342
黄棕色固体，水解产率95％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.88(s,1H),8.44(dd,J＝10.0,2.7Hz,1H),8.20(s,1H),8.01(d,J＝2.4Hz,1H),7.57(d,J＝8.6Hz,2H),7.49(d,J＝8.6Hz,2H),7.33(s,1H),7.30(d,J＝6.6Hz,1H),4.58(t,J＝7.1Hz,1H),2.89(s,1H),2.01(d,J＝15.2Hz,2H),1.76(s,3H),1.68–1.40(m,5H),1.35(s,9H).ESI-ms(m/z):530.3[M+H]+。
15、终产物(2S，3S)-3-((6-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3-氧代-4-(4-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸(11o)
Figure BDA0001965970990000343
黄棕色固体，水解产率94％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.93(s,1H),8.47(dd,J＝10.1,2.7Hz,1H),8.21(s,1H),8.00(s,1H),7.94(d,J＝8.5Hz,2H),7.85(d,J＝8.3Hz,2H),7.38(s,1H),7.06(s,1H),4.62(t,J＝7.0Hz,1H),2.53(s,1H),2.02(d,J＝23.9Hz,2H),1.74(dd,J＝24.3,10.5Hz,3H),1.59(s,2H),1.49–1.31(m,3H).ESI-ms(m/z):542.2[M+H]+。
16、终产物(2S，3S)-3-((4-(3,4-二氟苯基)-6-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3-氧代-3，4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸(11p)
Figure BDA0001965970990000351
黄棕色固体，水解产率93％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.92(s,1H),8.44(dd,J＝10.0,2.7Hz,1H),8.21(s,1H),7.99(s,1H),7.90–7.79(m,1H),7.64(dd,J＝19.3,8.9Hz,1H),7.49(d,J＝8.7Hz,1H),7.33(s,1H),7.16(s,1H),4.60(t,J＝6.9Hz,1H),2.67(s,1H),2.01(d,J＝15.1Hz,2H),1.72(d,J＝7.9Hz,2H),1.59(s,2H),1.51–1.30(m,4H).ESI-ms(m/z):510.2[M+H]+。
17、终产物(2S，3S)-3-((4-(3,5-二甲基苯基)-6-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3-氧代-3，4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸(11q)
Figure BDA0001965970990000352
黄棕色固体，水解产率94％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.23–12.01(m,1H),11.88(s,1H),8.42(d,J＝8.5Hz,1H),8.21(s,1H),8.00(s,1H),7.33(s,1H),7.28(s,1H),7.14(d,J＝19.0Hz,3H),4.58(s,1H),2.93(s,1H),2.35(s,6H),1.99(s,2H),1.77(s,3H),1.63(s,1H),1.43(d,J＝38.7Hz,4H).ESI-ms(m/z):502.2[M+H]+。
18、终产物(2S，3S)-3-((4-(4-乙氧基苯基)-6-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3-氧代-3,4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸(11r)
Figure BDA0001965970990000361
黄棕色固体，水解产率94％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.88(s,1H),8.43(d,J＝8.9Hz,1H),8.20(s,1H),7.99(s,1H),7.46(d,J＝8.4Hz,2H),7.24(d,J＝26.8Hz,2H),7.06(d,J＝8.5Hz,2H),4.58(s,1H),4.10(d,J＝6.7Hz,2H),2.79(s,1H),2.01(d,J＝14.5Hz,2H),1.75(s,3H),1.52(d,J＝45.1Hz,5H),1.36(t,J＝6.6Hz,3H).ESI-ms(m/z):518.2[M+H]+。
19、终产物(2S，3S)-3-((6-(5-氟-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)-3-氧代-4-(3-(三氟甲基)苄基)-3，4-二氢吡嗪-2-基)氨基)双环[2.2.2]辛烷-2-羧酸(11s)
Figure BDA0001965970990000362
黄棕色固体，水解产率92％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.94(s,1H),8.40(d,J＝7.7Hz,1H),8.22(s,1H),7.87(d,J＝14.7Hz,2H),7.72(d,J＝7.4Hz,1H),7.68(d,J＝7.7Hz,1H),7.64–7.59(m,1H),7.53(s,1H),7.05(s,1H),5.19(q,J＝14.4Hz,2H),4.51(s,1H),2.65(s,1H),1.97(s,2H),1.69(s,3H),1.55(s,2H),1.49–1.28(m,3H).ESI-ms(m/z):555.2[M+H]+。
用以下试验例验证本发明化合物的有益效果。
试验例1、测定PB2318-483蛋白与本发明化合物之间的KD值
1、实验目的：检测本发明化合物与PB2318-483蛋白的结合能力。采用表面等离子体共振(SPR)的技术测定本发明化合物和蛋白之间的KD值。
2、实验材料：PB2318-483蛋白(流感RNA聚合酶PB2亚基的318-483肽段，即“帽子”结合域)来源于四川大学生物治疗国家重点实验室。biacore-X100的仪器和CM5芯片。
3、实验步骤：
(1)PB2318-483蛋白与芯片偶联：首先通过芯片表面预富集的过程知道偶联PB2318-483蛋白的最佳pH为5.5，然后注射等体积的EDC/NHC使芯片表面的葡聚糖基质所带的羧基活化为琥珀酰亚胺脂，琥珀酰亚胺脂可以与PB2318-483蛋白的氨基发生共价反应，从而将PB2318-483蛋白固定在芯片表面。偶联完毕后，注射乙醇胺，使余下的活化脂失活。以上过程都只在芯片的二通道进行。
(2)本发明化合物与PB2318-483蛋白溶液的准备：利用过分子筛的磷酸盐缓冲液和DMSO(二甲基亚砜)，配制不同浓度的PB2318-483蛋白溶液和本发明化合物溶液。蛋白溶液的终浓度分别为5μM、10μM、20μM、50μM，DMSO含量为1％。再根据蛋白和本发明化合物浓度为1:10的比例配制本发明化合物溶液。取350μL蛋白溶液和80μL本发明化合物溶液，13000rpm离心2min。
(3)测试：使本发明化合物同时流经芯片表面的1、2通道，通过传感器检测本发明化合物流经带有配体的芯片表面，能量最低角的变化以及SPR角度的变化，从而可以得到本发明化合物和PB2318-483蛋白的亲和力大小。
KD指平衡解离常数，可由公式KD＝kd/ka算得，在本实验中直接由软件(biacoreX100evaluation)计算得到。平衡解离常数(KD)用于评估配体对于其目标的结合亲和力，在本专利中即本发明化合物对PB2318-483蛋白的亲和力，KD值越小，表示亲和力越大，说明本发明化合物与PB2318-483蛋白结合更牢靠。
VX787是阳性对照，是一个已经进入三期临床的化合物。
4、实验结果
表1化合物与PB2318-483蛋白结合能力评估
Figure BDA0001965970990000371
Figure BDA0001965970990000381
ND表示没有明显结合作用。
试验结果如表1、图1和图2所示，试验结果说明除化合物5g、5j、5n、5o和5p，本发明其他化合物对于PB2318-483蛋白有较强的结合能力，其中化合物11b与PB2318-483蛋白的结合能力最强，化合物与PB2318-483蛋白结合后可以阻断流感RNA聚合酶的转录过程，进而抑制流感病毒的增殖。进一步说明本发明化合物可以用于制备抗流感病毒的药物。
综上，本发明制备的化合物与PB2蛋白，特别是与PB2318-483蛋白有较强的结合能力，从而可以阻断流感RNA聚合酶的转录过程，进而抑制流感病毒的增殖。本发明化合物可以用于制备抗流感病毒的药物。

Claims (13)

1.一种式IV所示的化合物、或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003016783220000011
其中，R2选自被1个R13取代的C1～C5烷基、被0～1个R14取代的6～10元环烷基；
R13选自5元饱和杂环基、羧基、
Figure FDA0003016783220000012
所述饱和杂环基的杂原子为O，杂原子个数为1个；
R14选自C1～C2烷基、羧基。
2.根据权利要求1所述的化合物、或其药学上可接受的盐，其特征在于：
R14选自甲基。
3.根据权利要求1或2所述的化合物、或其药学上可接受的盐，其特征在于：化合物为如下化合物之一：
Figure FDA0003016783220000021
4.一种式V所示的化合物、或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003016783220000022
其中，R1选自被0～2个R8取代的C1～C2烷基；被0～1个R9取代的3～6元环烷基；
R8选自3元环烷基、卤素、羧基、5元不饱和杂环基；所述不饱和杂环基的杂原子为S，杂原子个数为1个；
R9选自C1～C4烷基。
5.根据权利要求4所述的化合物、或其药学上可接受的盐，其特征在于：
R1选自被0～2个R8取代的C1～C2烷基；被0～1个R9取代的3～6元环烷基；
R8选自3元环烷基、氟、羧基、5元不饱和杂环基；所述不饱和杂环基的杂原子为S，杂原子个数为1个；
R9选自C4烷基。
6.根据权利要求4或5所述的化合物、或其药学上可接受的盐，其特征在于：化合物为如下化合物之一：
Figure FDA0003016783220000031
7.一种化合物、或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述化合物的结构式如下：
Figure FDA0003016783220000041
8.一种制备权利要求1～7任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐的方法，其特征在于：它包括如下步骤：
合成路线1：
Figure FDA0003016783220000051
其中，
Figure FDA0003016783220000052
合成路线2：
Figure FDA0003016783220000061
其中，
Figure FDA0003016783220000062
9.权利要求1～7任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐在制备抗流感病毒药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述药物用于与流感RNA聚合酶结合。
11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于：所述药物用于与流感RNA聚合酶中的PB2蛋白结合。
12.根据权利要求11所述的应用，其特征在于：所述PB2蛋白为PB2318-483蛋白。
13.一种药物，其特征在于：它是以权利要求1～7任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。
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