CN111500495B - 一种复合型微生物除臭剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种复合型微生物除臭剂及其制备方法,选用氧化亚铁酸硫杆菌、污泥根瘤菌、解淀粉芽胞杆菌、沼泽红假单胞菌、施氏假单胞菌、凝结芽胞杆菌、异常汉逊酵母菌分别进行液态发酵后按比例进行复配,然后再按比例加入芳樟醇经充分混合后制得一种可以有效驱除蝇虫、抑制有害菌群生长繁殖,同时能降低和祛除环境中恶臭气体的复合型微生物除臭剂。本发明产品中氧化亚铁酸硫杆菌(CFU/g)≥2.95×108,污泥根瘤菌(CFU/g)≥1.05×108,解淀粉芽胞杆菌(CFU/g)≥1.73×108,沼泽红假单胞菌(CFU/g)≥2.55×108,施氏假单胞菌(CFU/g)≥1.15×108,凝结芽胞杆菌(CFU/g)≥2.86×108,异常汉逊酵母菌(CFU/g)≥2.97×108,有机酸总量≥25.8g/L。本发明产品除臭效果明显,NH3去除率≥78.14%,H2S去除率≥71.64%,臭气浓度消除率≥84.95%,蚊蝇驱除率≥74.16%。
Description
技术领域:
本发明涉及环境生物工程技术领域,特别是涉及一种复合型微生物除臭剂及其制备方法。
背景技术:
随着社会经济的飞速发展及城市化进程的不断加速,室内外环境污染问题日益突出。恶臭和环境中病菌大量孳生作为环境公害之一,直接影响人们的生活质量,甚至危害到人们的健康,已越来越受到人们的关注。
目前,凭人的嗅觉感知的恶臭物质有4000多种,按产生源可以分为生活源和工业源。生活源是指日常生活中产生的恶臭,如家用卫生间、公厕、污水处理厂、垃圾转运站以及受污染的湖泊、水沟等地方会扩散出恶臭气体,污染周边环境,给家庭生活或周围居民带来很大的不便;工业源是指工业生产中产生的恶臭,如养殖厂、涂料厂、制药厂、食品加工厂、化工厂等。恶臭气体从其组成可分为五类。一是含硫化合物,二是含氮的化合物,三是卤素及其衍生物,四是烃类,五是含氧的有机物。这些恶臭物质,除硫化氢和氨外大都为有机物。
目前,对于臭味的去除方法主要有:(1)化学除臭法(氧化法,吸收法,吸附法)包括燃烧法(热力燃烧,催化燃烧);(2)物理除臭法,如掩避法,稀释扩散法等;(3)生物除臭法,主要是利用微生物除臭,通过微生物的生理代谢将具有臭味的物质加以转化。而相对于其他两种除臭法,生物除臭具有臭气去除率高、设备运行检修成本低、绿色环保无二次污染,治理成本低、能耗低、针对性强、应用范围广等方面优势。但是,现有生物除臭法仍然存在很多问题,如菌种不全,活菌数不高,除臭效果不明显,且处理功能单一,往往去除NH3、H2S效果好,而对其他物质引起的臭味去除效果不佳。
发明内容:
本发明的第一个目的在于提供一种复合型微生物除臭剂。
本发明的第二个目的在于提供一种复合型微生物除臭剂的制备方法。
本发明的第一个目的由如下技术方案实施:一种复合型微生物除臭剂,包括能够降解并利用硫化氢的氧化亚铁酸硫杆菌,其活菌数(CFU/g)≥2.95×108;能够降解环境中吡啶化合物的污泥根瘤菌,其活菌数(CFU/g)≥1.05×108;能够发酵和降解餐厨垃圾的解淀粉芽胞杆菌,其活菌数(CFU/g)≥1.73×108;能够去除污水中氨氮等有机物的沼泽红假单胞菌,其活菌数(CFU/g)≥2.55×108;具有亚硝化作用并能够降解化工废水的施氏假单胞菌,其活菌数(CFU/g)≥1.15×108;能够发酵葡萄糖产生大量L-乳酸的凝结芽胞杆菌,其活菌数(CFU/g)≥2.86×108;能够产生以酯香为主体香味物质的异常汉逊酵母菌,其活菌数(CFU/g)≥2.97×108;和具有杀虫、抑菌、掩盖不良气味作用的芳樟醇;
其中,所述氧化亚铁酸硫杆菌于2007年1月16日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(简称CGMCC,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,邮编:100101),保藏编号为1.5066;
所述污泥根瘤菌于2008年3月26日保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心(简称CICC,地址:北京市朝阳区酒仙桥中路24号院,邮编:100015),保藏编号为10363;
所述解淀粉芽胞杆菌于2006年4月25日保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心(简称CICC,地址:北京市朝阳区酒仙桥中路24号院,邮编:100015),保藏编号为20605;
所述沼泽红假单胞菌于2014年12月16日保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心(简称CICC,地址:北京市朝阳区酒仙桥中路24号院,邮编:100015),保藏编号为23812;
所述施氏假单胞菌于2008年11月21日保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心(简称CICC,地址:北京市朝阳区酒仙桥中路24号院,邮编:100015),保藏编号为23621;
所述凝结芽胞杆菌于2015年1月29日保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心(简称CICC,地址:北京市朝阳区酒仙桥中路24号院,邮编:100015),保藏编号为23843;
所述异常汉逊酵母菌于1963年1月保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心(简称CICC,地址:北京市朝阳区酒仙桥中路24号院,邮编:100015),异常变种1431。
进一步的,所述芳樟醇在复合型微生物除臭剂中的含量为1.0~3.0%(V/V)。
本发明的第二个目的由如下技术方案实施:一种复合型微生物除臭剂的制备方法,
(1)氧化亚铁酸硫杆菌、污泥根瘤菌、解淀粉芽胞杆菌、沼泽红假单胞菌、施氏假单胞菌、凝结芽胞杆菌、异常汉逊酵母菌分别进行液态发酵制得对应菌液;
(2)将氧化亚铁酸硫杆菌、污泥根瘤菌液、解淀粉芽胞杆液、沼泽红假单胞菌液、施氏假单胞菌液、凝结芽胞杆菌液、异常汉逊酵母菌的菌液按比例进行复配混合,制得复合菌液;
(3)将体积浓度为98%的芳樟醇按1.0~3.0%(V/V)的比例加入复合菌液中充分混合均匀即得成品。
进一步的,所述氧化亚铁酸硫杆菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基制备:将硫酸铵3~5g、酵母浸膏2~5g、葡萄糖2~5g、K2HPO4 1~2g、KH2PO4 1~3g、MgSO4·7H2O 3~6g、MnSO4·H2O0.00 1~0.002g加入1000mL蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH6.5~7.0,在温度121℃下灭菌30min;
B.液态发酵培养基制备:将硫酸铵3~6kg、酵母浸粉2~5kg、葡萄糖2~5kg、K2HPO41~2kg、KH2PO4 1~3kg、MgSO4·7H2O 0.3~0.6kg、MnSO4·H2O 0.001~0.002kg加入1000L蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH6.5~7.0,在温度115~121℃下灭菌20min~30min;
C.培养条件:
种子培养:将氧化亚铁酸硫杆菌斜面菌种按每50~100ml一环的比例接入种子培养基中,温度23~28℃、转速150~180r/min、振荡培养20~30h,得到种子菌液;
液态发酵培养:将上述种子菌液按照5~15%的质量比接种到盛有液态发酵培养基的培养罐中,温度23~28℃、通气量0.5~1.5(V/V·min)、罐压0.01~0.05MPa、转速150~180r/min、培养20~30h,得到所述氧化亚铁酸硫杆菌菌液。
进一步的,所述污泥根瘤菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基制备:将蛋白胨3~6g、牛肉浸膏3~6g、葡萄糖3~6g、NaCl 3~6g、MnSO4·H2O 0.003~0.006g加入1000mL蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH6.5~7.5,在温度121℃下灭菌30min;
B.液态发酵培养基制备:将酵母蛋白胨3~7kg、牛肉浸粉3~7kg、葡萄糖3~7kg、NaCl3~5kg、MnSO4·H2O 0.002~0.005kg加入到1000L蒸馏水,搅拌至完全溶解,pH6.5~7.5,在温度115~121℃下灭菌20~30min;
C.培养条件:
种子培养:将污泥根瘤菌斜面菌种按每50~100ml一环的比例接入种子培养基中,温度25~32℃、转速150~180r/min、振荡培养20~30h,得到种子菌液;
液态发酵培养:将上述种子菌液按照5~15%的质量比接种到盛有液态发酵培养基的液态发酵罐中,温度25~32℃、通气量0.5~1.5(V/V·min)、罐压0.01~0.05MPa、转速150~180r/min、培养20~30h,得到污泥根瘤菌菌液。
进一步的,所述解淀粉芽胞杆菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基制备:将蛋白胨8~12g、牛肉浸膏2~5g、葡萄糖3~6g、NaCl 3~6g、MnSO4·H2O 0.002~0.006g加入1000mL蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH6.5~7.5,在温度121℃下灭菌30min;
B.液态发酵培养基制备:将酵母蛋白胨8~12kg、牛肉浸粉2~5kg、葡萄糖3~6kg、NaCl 3~6kg、MnSO4·H2O 0.002~0.005kg加入1000L蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH6.5~7.5,在温度115~121℃下灭菌20~30min;
C.培养条件:
种子培养:将解淀粉芽胞杆菌斜面菌种按每50~100ml一环的比例接入种子培养基中,温度35~40℃、转速150~180r/min、振荡培养20~30h;
液态发酵培养:将上述种子菌液按照5~15%的质量比接种到盛有液态发酵培养基的液态发酵罐中,温度35~40℃、通气量0.5~1.5(V/V·min)、罐压0.01~0.05MPa、转速150~180r/min、培养20~30h,得到解淀粉芽胞杆菌菌液。
进一步的,所述沼泽红假单胞菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基制备:将胰蛋白胨10~20g、酵母浸膏2~5g、葡萄糖3~6g、NaCl 3~6g、NH4Cl 0.5~1.5g、K2HPO4 0.2~0.6g加入1000mL蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH7.0~7.5,在温度121℃下灭菌30min;
B.液态发酵培养基制备:将胰蛋白胨10~20kg、酵母浸膏2~5kg、葡萄糖3~6kg、NaCl 3~6kg、NH4Cl 0.5~1.5kg、K2HPO4 0.2~0.6kg,加入1000L蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH7.0~7.5,在温度115~121℃下灭菌20~30min;
C.培养条件:
种子培养:将沼泽红假单胞菌斜面菌种按每50~100ml一环的比例接入种子培养基中,温度28~32℃、转速100~150r/min、振荡培养20~30h;
液态发酵培养:将上述种子菌液按照10~20%的质量比接种到盛有液态发酵培养基的发酵罐中,温度28~32℃、通气量0.5~1.5(V/V·min)、罐压0.01~0.05MPa、转速100~150r/min、培养20~30h,得到沼泽红假单胞菌菌液。
进一步的,所述施氏假单胞菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基制备:将蛋白胨3~6g、牛肉浸膏8~15g、酵母浸膏3~6g、葡萄糖3~6g、NaCl 3~6g加入1000mL蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH7.0~7.5,在温度121℃下灭菌30min;
B.液态发酵培养基制备:将酵母蛋白胨3~6kg、牛肉浸粉2~5kg、酵母浸粉3~6kg、葡萄糖3~6kg、NaCl 3~6kg加入1000L蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH7.0~7.5,在温度115~121℃下灭菌20~30min;
C.培养条件:
种子培养:将施氏假单胞菌斜面菌种按每50~100ml一环的比例接入种子培养基中,温度30~40℃、转速100~150r/min、振荡培养20~30h;
液态发酵培养:将上述种子菌液按照10~20%的质量比接种到盛有液态发酵培养基的发酵罐中,温度30~40℃、通气量0.5~1.5(V/V·min)、罐压0.01~0.05MPA、转速100~150r/min、培养20~30h,得到施氏假单胞菌菌液。
进一步的,所述凝结芽胞杆菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基制备:将蛋白胨3~6g、牛肉浸膏3~6g、酵母浸粉2~5g、葡萄糖3~6g、MnSO4.H2O 0.003~0.006g、叶酸0.01~0.012g加入1000mL蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH 6.5~7.5,在温度121℃下灭菌30min;
B.液态发酵培养基制备:将蛋白胨3~6kg、牛肉浸膏3~6kg、酵母浸粉2~5kg、葡萄糖3~6kg、MnSO4.H2O 3~6g、叶酸10~15g加入1000L蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH 6.5~7.5,在温度115~121℃下灭菌20~30min;
C.培养条件:
种子培养:将凝结芽胞杆菌斜面菌种按每50~100ml一环的比例接入种子培养基中,温度37~42℃、厌氧培养24~48h;
液态发酵:将上述种子菌液按照10~15%的质量比接种到盛有液态发酵培养基的发酵罐中,37~42℃、罐压0.01~0.05MPa、厌氧培养24~48h,得到凝结芽胞杆菌菌液。
进一步的,所述异常汉逊酵母菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基制备:将麦芽浸粉15~25g、蛋白胨5~15g、酵母浸粉3~6g、葡萄糖5~15g、KH2PO4 1~3g、MgSO4·7H2O 0.3~1g加入1000mL蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH 6.0~7.0,在温度121℃下灭菌25min;
B.发酵培养基制备:将麦芽浸粉15~25kg、蛋白胨5~15kg、酵母浸粉3~6kg、葡萄糖5~15kg、KH2PO4 1~3kg、MgSO4·7H2O 0.3~1.0kg,加入1000L蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH 6.0~7.0,在温度115~121℃下灭菌20~30min;
C.培养条件:
种子培养:将异常汉逊酵母菌斜面菌种按每50~100ml一环的比例接入种子培养基中,温度25~30℃、转速150~180r/min、振荡培养20~30h;
液态发酵培养条件:将上述种子菌液按照5~15%的质量比接种到液态发酵罐中,温度25~30℃、通气量0.5~1.5(V/V·min)、罐压0.01~0.05MPa、转速150~180r/min、培养20~30h,得到异常汉逊酵母菌菌液。
进一步的,所述氧化亚铁酸硫杆菌液、污泥根瘤菌液、解淀粉芽胞杆液、沼泽红假单胞菌液、施氏假单胞菌液、凝结芽胞杆菌液、异常汉逊酵母菌液的复配比例(体积份数)如下:
氧化亚铁酸硫杆菌液15~25份、污泥根瘤菌液5~15份、解淀粉芽胞杆液5~15份、沼泽红假单胞菌液5~10份、施氏假单胞菌液5~15份、凝结芽胞杆菌液15~25份、异常汉逊酵母菌液15~25份。
进一步的,所述成品是由混合菌液和芳樟醇复配而成:
将体积浓度为98%的芳樟醇按1.0~3.0%(V/V)的比例加入复合菌液中,100~150r/min,充分混合1~2h既得成品。
本发明的优点:
1、本发明技术的优点在于利用氧化亚铁酸硫杆菌、污泥根瘤菌、解淀粉芽胞杆菌、沼泽红假单胞菌、施氏假单胞菌、凝结芽胞杆菌、异常汉逊酵母菌的发酵、抑制、吸收、利用、转化功能,将环境中的硫化氢、氨气、硫醇、硫醚、硝酸盐氮、吡啶化合物、含磷化合物等臭味分子转移至微生物细胞内,再将其作为营养物质通过新陈代谢作用分解和利用,从而达到除臭的目的。
2、本发明产品相对于其他传统的生物除臭剂所使用的菌种更全面,活菌数也更高,除臭效果也更明显。本发明产品除了有去除NH3、H2S功能外,还兼具降解环境中吡啶化合物、发酵降解餐厨垃圾的作用。同时本发明所述的菌群能代谢产生丰富的有机酸和酯香,有机酸可以创造不利于腐败微生物生活的酸性环境,能有效抑制腐败菌的生长和繁殖,可以从根本上降解分解时产生恶臭气体的物质;而代微生物谢产生的酯香和添加的芳樟醇能够有效的掩盖不良气味,同时还能驱除蚊蝇,因此本发明产品的功能性更强,应用范围也更广。
3、本发明产品氧化亚铁酸硫杆菌(CFU/g)≥2.95×108,污泥根瘤菌(CFU/g)≥1.05×108,解淀粉芽胞杆菌(CFU/g)≥1.73×108,沼泽红假单胞菌(CFU/g)≥2.55×108,施氏假单胞菌(CFU/g)≥1.15×108,凝结芽胞杆菌(CFU/g)≥2.86×108,异常汉逊酵母菌(CFU/g)≥2.97×108,有机酸总量≥25.8g/L。
4、本发明产品除臭效果明显,NH3去除率≥78.14%,H2S去除率≥71.64%,臭气浓度消除率≥84.95%,蚊蝇驱除率≥74.16%。
5、本发明环保高效、成本低、制备方法简便,具有良好的应用价值与环保意义。
具体实施方式:
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例所用菌种:本发明以下实施例中所用污泥根瘤菌(Rhizobium borbori)、解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)、施氏假单胞菌(Pseudomonas stutzeri)、凝结芽胞杆菌(Bacilluscoagulans)、异常汉逊酵母菌(Hansenula anomala var.anomala),均来自于中国工业微生物微生物保藏管理中心(CICC),保藏编号分别为10363、20605、23812、23621、23843、1431。氧化亚铁酸硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)来自于中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC),保藏编号为1.5066。
实施例一
1.将氧化亚铁酸硫杆菌、污泥根瘤菌、解淀粉芽胞杆、沼泽红假单胞菌、施氏假单胞菌、凝结芽胞杆菌、异常汉逊酵母菌分别按以下方法进行液态发酵:
(1)氧化亚铁酸硫杆菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基:硫酸铵6g、酵母浸膏5g、葡萄糖5g、K2HPO4 2g、KH2PO4 3.0g、MgSO4·7H2O 0.6g、MnSO4·H2O 0.002g,蒸馏水1000mL,搅拌至完全溶解,PH6.8,在温度121℃下灭菌30min。
B.液态发酵培养基:硫酸铵6kg、酵母浸粉5kg、葡萄糖5kg、K2HPO4 2kg、KH2PO42.5kg、MgSO4·7H2O 0.6kg、MnSO4·H2O0.002kg,蒸馏水1000L,搅拌至完全溶解,PH6.8,在温度121℃下灭菌30min。
C.培养条件:
种子培养条件:5000ml三角瓶中装种子培养基3000ml,将斜面菌种按每50ml一环的比例接入种子培养基中,温度28℃、转速200r/min、振荡培养30h。
液态发酵培养条件:将上述种子菌液按照12%的质量比接种到液态发酵罐中,温度28℃、通气量1.2(V/V·min)、罐压0.04MPa、转速180r/min培养30h。
(2)污泥根瘤菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基:蛋白胨6g、牛肉浸膏6g、葡萄糖6g、NaCl 6g、MnSO4·H2O 0.006g,蒸馏水1000mL,搅拌至完全溶解,pH7.0,在温度121℃下灭菌30min。
B.液态发酵培养基:酵母蛋白胨6kg、牛肉浸粉6kg、葡萄糖6kg、NaCl 6kg、MnSO4·H2O 0.005kg,蒸馏水1000L,搅拌至完全溶解,pH7.0,在温度121℃下灭菌30min。
C.培养条件:
种子培养条件:5000ml三角瓶中装种子培养基3000ml,将斜面菌种按每50ml一环的比例接入种子培养基中,温度32℃、转速180r/min、振荡培养30h。
液态发酵培养条件:将上述种子菌液按照12%的质量比接种到液态发酵罐中,温度32℃、通气量1.2(V/V·min)、罐压0.04MPa、转速180r/min培养30h。
(3)解淀粉芽胞杆菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基:蛋白胨12g、牛肉浸膏5g、葡萄糖6g、NaCl 6g、MnSO4·H2O 0.006g,蒸馏水1000mL,搅拌至完全溶解,pH7.0,在温度121℃下灭菌30min。
B.液态发酵培养基:酵母蛋白胨12kg、牛肉浸粉5kg、葡萄糖6kg、NaCl 6kg、MnSO4·H2O 0.005kg,蒸馏水1000L,搅拌至完全溶解,pH7.0,在温度121℃下灭菌30min。
C.培养条件:
种子培养条件:5000ml三角瓶中装种子培养基3000ml,将斜面菌种按每50ml一环的比例接入种子培养基中,温度40℃、转速180r/min、振荡培养30h。
液态发酵培养条件:将上述种子菌液按照12%的质量比接种到液态发酵罐中,温度40℃、通气量1.2(V/V·min)、罐压0.04MPa、转速180r/min、培养30h。
(4)沼泽红假单胞菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基:胰蛋白胨20g、酵母浸膏5g、葡萄糖6g、NaCl 6g、NH4Cl 1.5g、K2HPO40.6g,蒸馏水1000mL,搅拌至完全溶解,pH7.3,在温度121℃下灭菌30min。
B.液态发酵培养基:胰蛋白胨20kg、酵母浸膏5kg、葡萄糖6kg、NaCl 6kg、NH4Cl1.5kg、K2HPO4 0.6kg,蒸馏水1000L,搅拌至完全溶解,pH7.3,在温度121℃下灭菌30min。
C.培养条件:
种子培养条件:5000ml三角瓶中装种子培养基3000ml,将斜面菌种按每50ml一环的比例接入种子培养基中,温度32℃、转速150r/min、振荡培养30h。
液态发酵培养条件:将上述种子菌液按照20%的质量比接种到液态发酵罐中,温度32℃、通气量1.2(V/V·min)、罐压0.04MPa、转速150r/min培养30h。
(5)施氏假单胞菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基:蛋白胨6g、牛肉浸膏15g、酵母浸膏6g、葡萄糖6g、NaCl 6g,蒸馏水1000mL,搅拌至完全溶解,pH7.2,在温度121℃下灭菌30min。
B.液态发酵培养基:酵母蛋白胨6kg、牛肉浸粉5kg、酵母浸粉6kg、葡萄糖6kg、NaCl6kg,蒸馏水1000L,搅拌至完全溶解,pH7.2,在温度121℃下灭菌30min。
C.培养条件:
种子培养条件:5000ml三角瓶中装种子培养基3000ml,将斜面菌种按每50ml一环的比例接入种子培养基中,温度38℃、转速150r/min、振荡培养30h。
液态发酵培养条件:将上述种子菌液按照20%的质量比接种到液态发酵罐中,温度38℃、通气量1.2(V/V·min)、罐压0.04MPa、转速150r/min培养30h。
(6)凝结芽胞杆菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基:蛋白胨6g、牛肉浸膏6g、酵母浸粉5g、葡萄糖6g、MnSO4·H2O 6mg、叶酸12mg,蒸馏水1000mL,搅拌至完全溶解,pH 7.0,在温度121℃下灭菌30min。
B.液态发酵培养基:蛋白胨6kg、牛肉浸膏6kg、酵母浸粉5kg、葡萄糖6kg、MnSO4·H2O 6g、叶酸15g,蒸馏水1000L,搅拌至完全溶解,pH 7.0,在温度121℃下灭菌30min。
C.培养条件:
种子培养条件:5000ml三角瓶中装种子培养基5000ml,将斜面菌种按每50ml一环的比例接入种子培养基中,温度42℃、厌氧培养35h。
液态发酵条件:将上述种子菌液按照15%的质量比接种到液态发酵罐中,42℃、罐压0.04MPa、厌氧培养40h。
(7)异常汉逊酵母菌液按如下方法制备:
A.种子培养基:麦芽浸粉25g、蛋白胨15、酵母浸粉6g、葡萄糖15g、KH2PO4 3g、MgSO4·7H2O 1.0g,蒸馏水1000mL,搅拌至完全溶解,PH 6.5,在温度121℃下灭菌25min。
B.发酵培养基:麦芽浸粉25kg、蛋白胨15kg、酵母浸粉6kg、葡萄糖15kg、KH2PO43.0kg、MgSO4·7H2O 1.0kg,蒸馏水1000L,搅拌至完全溶解,pH 6.5,在温度115℃下灭菌30min。
C.培养条件:
一级种子培养条件:5000ml三角瓶中装种子培养基3000ml,将斜面菌种按每50ml一环的比例接入种子培养基中,温度30℃、转速180r/min、振荡培养30h。
液态发酵培养条件:将上述种子菌液按照12%的质量比接种到液态发酵罐中,温度30℃、通气量1.2(V/V·min)、罐压0.04MPa、转速180r/min培养30h。
2.将氧化亚铁酸硫杆菌液、污泥根瘤菌液、解淀粉芽胞杆液、沼泽红假单胞菌液、施氏假单胞菌液、凝结芽胞杆菌液、异常汉逊酵母菌液分别按以下比例(体积份数)进行复配:氧化亚铁酸硫杆液15份、污泥根瘤菌液15份、解淀粉芽胞杆液15份、沼泽红假单胞菌液10份、施氏假单胞菌液15份、凝结芽胞杆菌液15份、异常汉逊酵母菌液15份,芳樟醇2.5%(V/V),制备得到的一种复合型微生物除臭剂中:氧化亚铁酸硫杆菌(CFU/g)≥4.17×108,污泥根瘤菌(CFU/g)≥1.62×108,解淀粉芽胞杆菌(CFU/g)≥2.17×108,沼泽红假单胞菌(CFU/g)≥2.92×108,施氏假单胞菌(CFU/g)≥1.65×108,凝结芽胞杆菌(CFU/g)≥3.35×108,异常汉逊酵母菌(CFU/g)≥3.88×108,有机酸总量≥30.8g/L。
实施例二
1.将氧化亚铁酸硫杆菌、污泥根瘤菌、解淀粉芽胞杆、沼泽红假单胞菌、施氏假单胞菌、凝结芽胞杆菌、异常汉逊酵母菌分别按以下方法进行液态发酵:
(1)氧化亚铁酸硫杆菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基:硫酸铵3g、酵母浸膏2g、葡萄糖2g、K2HPO4 1g、KH2PO4 1g、MgSO4·7H2O 0.3g、MnSO4·H2O 0.001g,蒸馏水1000mL,搅拌至完全溶解,pH6.8,在温度121℃下灭菌30min。
B.液态发酵培养基:硫酸铵3kg、酵母浸粉2kg、葡萄糖2kg、K2HPO4 1kg、KH2PO41kg、MgSO4·7H2O 0.3kg、MnSO4·H2O 0.001kg,蒸馏水1000L,搅拌至完全溶解,pH6.8,在温度121℃下灭菌30min。
C.培养条件:
种子培养条件:5000ml三角瓶中装种子培养基2500ml,将斜面菌种按每50ml一环的比例接入种子培养基中,温度23℃、转速150r/min、振荡培养20h。
液态发酵培养条件:将上述种子菌液按照5%的质量比接种到液态发酵罐中,温度23℃、通气量0.5(V/V·min)、罐压0.01MPa、转速150r/min培养20h。
(2)污泥根瘤菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基:蛋白胨3g、牛肉浸膏3g、葡萄糖3g、NaCl 3g、MnSO4·H2O 0.003g,蒸馏水1000mL,搅拌至完全溶解,pH7.0,在温度121℃下灭菌30min。
B.液态发酵培养基:酵母蛋白胨3kg、牛肉浸粉3kg、葡萄糖3kg、NaCl 3kg、MnSO4·H2O 0.002kg,蒸馏水1000L,搅拌至完全溶解,pH7.0,在温度121℃下灭菌30min。
C.培养条件:
种子培养条件:5000ml三角瓶中装种子培养基2500ml,将斜面菌种按每50ml一环的比例接入种子培养基中,温度25℃、转速150r/min、振荡培养20h。
液态发酵培养条件:将上述种子菌液按照5%的质量比接种到液态发酵罐中,温度25℃、通气量0.5(V/V·min)、罐压0.01MPa、转速150r/min、培养20h。
(3)解淀粉芽胞杆菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基:蛋白胨8g、牛肉浸膏2g、葡萄糖3g、NaCl 3g、MnSO4·H2O 0.003g,蒸馏水1000mL,搅拌至完全溶解,pH7.0,在温度121℃下灭菌30min。
B.液态发酵培养基:酵母蛋白胨8kg、牛肉浸粉2kg、葡萄糖3kg、NaCl 3kg、MnSO4·H2O 0.003kg,蒸馏水1000L,搅拌至完全溶解,pH7.0,在温度121℃下灭菌30min。
C.培养条件:
种子培养条件:5000ml三角瓶中装种子培养基2500ml,将斜面菌种按每50ml一环的比例接入种子培养基中,温度35℃、转速150r/min、振荡培养20h。
液态发酵培养条件:将上述种子菌液按照5%的质量比接种到液态发酵罐中,温度35℃、通气量0.5(V/V·min)、罐压0.01MPa、转速150r/min培养20h。
(4)沼泽红假单胞菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基:胰蛋白胨10g、酵母浸膏2g、葡萄糖3g、NaCl 3g、NH4Cl 0.5g、K2HPO40.2g,蒸馏水1000mL,搅拌至完全溶解,pH7.3,在温度121℃下灭菌30min。
B.液态发酵培养基:胰蛋白胨10kg、酵母浸膏2kg、葡萄糖3kg、NaCl 3kg、NH4Cl0.5kg、K2HPO4 0.5kg,蒸馏水1000L,搅拌至完全溶解,pH7.3,在温度121℃下灭菌30min。
C.培养条件:
种子培养条件:5000ml三角瓶中装种子培养基2500ml,将斜面菌种按每50ml一环的比例接入种子培养基中,温度28℃、转速100r/min、振荡培养20h。
液态发酵培养条件:将上述种子菌液按照10%的质量比接种到液态发酵罐中,温度28℃、通气量0.5(V/V·min)、罐压0.01MPa、转速100r/min培养20h。
(5)施氏假单胞菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基:蛋白胨3g、牛肉浸膏8g、酵母浸膏3g、葡萄糖3g、NaCl 3g,蒸馏水1000mL,搅拌至完全溶解,pH7.2,在温度121℃下灭菌30min。
B.液态发酵培养基:酵母蛋白胨3kg、牛肉浸粉2kg、酵母浸粉3kg、葡萄糖3kg、NaCl3kg,蒸馏水1000L,搅拌至完全溶解,pH7.2,在温度121℃下灭菌30min。
C.培养条件:
种子培养条件:5000ml三角瓶中装种子培养基2500ml,将斜面菌种按每50ml一环的比例接入种子培养基中,温度30℃、转速100r/min、振荡培养20h。
液态发酵培养条件:将上述种子菌液按照10%的质量比接种到液态发酵罐中,温度30℃、通气量0.5(V/V·min)、罐压0.01MPa、转速100r/min培养20h。
(6)凝结芽胞杆菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基:蛋白胨3g、牛肉浸膏3g、酵母浸粉2g、葡萄糖3g、MnSO4·H2O 3mg、叶酸10mg,蒸馏水1000mL,搅拌至完全溶解,pH 7.0,在温度121℃下灭菌30min。
B.液态发酵培养基:蛋白胨3kg、牛肉浸膏3kg、酵母浸粉2kg、葡萄糖3kg、MnSO4·H2O 3g、叶酸10g,蒸馏水1000L,搅拌至完全溶解,PH 7.0,在温度121℃下灭菌30min。
C.培养条件:
种子培养条件:5000ml三角瓶中装种子培养基4500ml,将斜面菌种按每50ml一环的比例接入种子培养基中,温度37℃、厌氧培养24h。
液态发酵条件:将上述种子菌液按照10%的质量比接种到液态发酵罐中,37℃、罐压0.01MPa、厌氧培养24h。
(7)异常汉逊酵母菌液按如下方法制备:
A.种子培养基:麦芽浸粉15g、蛋白胨5、酵母浸粉3g、葡萄糖5g、KH2PO4 1g、MgSO4·7H2O 0.3g,蒸馏水1000mL,搅拌至完全溶解,pH 6.5,在温度121℃下灭菌25min。
B.发酵培养基:麦芽浸粉15kg、蛋白胨5kg、酵母浸粉3kg、葡萄糖5kg、KH2PO4 1kg、MgSO4·7H2O 0.3kg,蒸馏水1000L,搅拌至完全溶解,pH 6.5,在温度115℃下灭菌30min。
C.培养条件:
种子培养条件:5000ml三角瓶中装种子培养基2500ml,将斜面菌种按每50ml一环的比例接入种子培养基中,温度25℃、转速150r/min、振荡培养20h。
液态发酵培养条件:将上述种子菌液按照5%的质量比接种到液态发酵罐中,温度25℃、通气量0.5(V/V·min)、罐压0.01MPa、转速150r/min、培养20h。
2.将氧化亚铁酸硫杆菌液、污泥根瘤菌液、解淀粉芽胞杆液、沼泽红假单胞菌液、施氏假单胞菌液、凝结芽胞杆菌液、异常汉逊酵母菌液分别按以下比例(体积份数)进行复配:氧化亚铁酸硫杆菌液10份、污泥根瘤菌液15份、解淀粉芽胞杆液15份、沼泽红假单胞菌液15份、施氏假单胞菌液15份、凝结芽胞杆菌液15份、异常汉逊酵母菌液15份,芳樟醇1%(V/V),制备得到的复合型微生物除臭剂中:氧化亚铁酸硫杆菌(CFU/g)≥2.95×108,污泥根瘤菌(CFU/g)≥1.05×108,解淀粉芽胞杆菌(CFU/g)≥1.73×108,沼泽红假单胞菌(CFU/g)≥2.55×108,施氏假单胞菌(CFU/g)≥1.15×108,凝结芽胞杆菌(CFU/g)≥2.86×108,异常汉逊酵母菌(CFU/g)≥2.97×108,有机酸总量≥25.8g/L。
实施例三
1.将氧化亚铁酸硫杆菌、污泥根瘤菌、解淀粉芽胞杆、沼泽红假单胞菌、施氏假单胞菌、凝结芽胞杆菌、异常汉逊酵母菌分别按以下方法进行液态发酵:
(1)氧化亚铁酸硫杆菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基:硫酸铵5g、酵母浸膏3g、葡萄糖3g、K2HPO4 1.5g、KH2PO4 2g、MgSO4·7H2O 0.5g、MnSO4·H2O 0.001g,蒸馏水1000mL,搅拌至完全溶解,pH6.8,在温度121℃下灭菌30min。
B.液态发酵培养基:硫酸铵5kg、酵母浸粉3kg、葡萄糖3kg、K2HPO4 1.5kg、KH2PO42kg、MgSO4·7H2O 0.5kg、MnSO4·H2O0.001kg,蒸馏水1000L,搅拌至完全溶解,pH6.8,在温度121℃下灭菌30min。
C.培养条件:
种子培养条件:5000ml三角瓶中装种子培养基2500ml,将斜面菌种按每80ml一环的比例接入种子培养基中,温度25℃、转速160r/min、振荡培养24h。
液态发酵培养条件:将上述种子菌液按照10%的质量比接种到液态发酵罐中,温度25℃、通气量1.0(V/V·min)、罐压0.03MPa、转速160r/min培养24h。
(2)污泥根瘤菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基:蛋白胨5g、牛肉浸膏5g、葡萄糖5g、NaCl 5g、MnSO4·H2O 0.005g,蒸馏水1000mL,搅拌至完全溶解,pH7.0,在温度121℃下灭菌30min。
B.液态发酵培养基:酵母蛋白胨5kg、牛肉浸粉5kg、葡萄糖5kg、NaCl 5kg、MnSO4·H2O 0.005kg,蒸馏水1000L,搅拌至完全溶解,pH7.0,在温度121℃下灭菌30min。
C.培养条件:
种子培养条件:5000ml三角瓶中装种子培养基2500ml,将斜面菌种按每80ml一环的比例接入种子培养基中,温度30℃、转速150r/min、振荡培养24h。
液态发酵培养条件:将上述种子菌液按照10%的质量比接种到液态发酵罐中,温度30℃、通气量1.0(V/V·min)、罐压0.03MPa、转速160r/min、培养24h。
(3)解淀粉芽胞杆菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基:蛋白胨10g、牛肉浸膏3g、葡萄糖5g、NaCl 5g、MnSO4·H2O 0.005g,蒸馏水1000mL,搅拌至完全溶解,pH7.0,在温度121℃下灭菌30min。
B.液态发酵培养基:酵母蛋白胨10kg、牛肉浸粉3kg、葡萄糖5kg、NaCl 5kg、MnSO4·H2O 0.005kg,蒸馏水1000L,搅拌至完全溶解,pH7.0,在温度121℃下灭菌30min。
C.培养条件:
种子培养条件:5000ml三角瓶中装种子培养基2500ml,将斜面菌种按每80ml一环的比例接入种子培养基中,温度37℃、转速160r/min、振荡培养24h。
液态发酵培养条件:将上述种子菌液按照10%的质量比接种到液态发酵罐中,温度37℃、通气量1.0(V/V·min)、罐压0.03MPa、转速160r/min培养30h。
(4)沼泽红假单胞菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基:胰蛋白胨15g、酵母浸膏3g、葡萄糖5g、NaCl 5g、NH4Cl 1.0g、K2HPO40.5g,蒸馏水1000mL,搅拌至完全溶解,pH7.3,在温度121℃下灭菌30min。
B.液态发酵培养基:胰蛋白胨15kg、酵母浸膏3kg、葡萄糖5kg、NaCl 5kg、NH4Cl1.0kg、K2HPO4 0.5kg,蒸馏水1000L,搅拌至完全溶解,pH7.3,在温度121℃下灭菌30min。
C.培养条件:
种子培养条件:5000ml三角瓶中装种子培养基2500ml,将斜面菌种按每80ml一环的比例接入种子培养基中,温度30℃、转速120r/min、振荡培养24h。
液态发酵培养条件:将上述种子菌液按照15%的质量比接种到液态发酵罐中,温度32℃、通气量0.8(V/V·min)、罐压0.03MPa、转速120r/min培养30h。
(5)施氏假单胞菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基:蛋白胨5g、牛肉浸膏10g、酵母浸膏5g、葡萄糖5g、NaCl 5g,蒸馏水1000mL,搅拌至完全溶解,pH7.2,在温度121℃下灭菌30min。
B.液态发酵培养基:酵母蛋白胨5kg、牛肉浸粉5kg、酵母浸粉5kg、葡萄糖5kg、NaCl5kg,蒸馏水1000L,搅拌至完全溶解,pH7.2,在温度121℃下灭菌30min。
C.培养条件:
种子培养条件:5000ml三角瓶中装种子培养基2500ml,将斜面菌种按每80ml一环的比例接入种子培养基中,温度35℃、转速120r/min、振荡培养24h。
液态发酵培养条件:将上述种子菌液按照15%的质量比接种到液态发酵罐中,温度35℃、通气量1.0(V/V·min)、罐压0.03MPa、转速120r/min培养30h。
(6)凝结芽胞杆菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基:蛋白胨5g、牛肉浸膏5g、酵母浸粉3g、葡萄糖5g、MnSO4·H2O 5mg、叶酸10.0mg,蒸馏水1000mL,搅拌至完全溶解,pH 7.0,在温度121℃下灭菌30min。
B.液态发酵培养基:蛋白胨5kg、牛肉浸膏5kg、酵母浸粉3kg、葡萄糖5kg、MnSO4·H2O 5g、叶酸12g,蒸馏水1000L,搅拌至完全溶解,PH 7.0,在温度121℃下灭菌30min。
C.培养条件:
种子培养条件:5000ml三角瓶中装种子培养基4500ml,将斜面菌种按每80ml一环的比例接入种子培养基中,温度40℃、厌氧培养30h。
液态发酵条件:将上述种子菌液按照12%的质量比接种到液态发酵罐中,40℃、罐压0.03MPa、厌氧培养30h。
(7)异常汉逊酵母菌液按如下方法制备:
A.种子培养基:麦芽浸粉20g、蛋白胨10、酵母浸粉5g、葡萄糖10g、KH2PO4 2g、MgSO4·7H2O 0.5g,蒸馏水1000mL,搅拌至完全溶解,pH 6.5,在温度121℃下灭菌25min。
B.发酵培养基:麦芽浸粉20kg、蛋白胨10kg、酵母浸粉5kg、葡萄糖10kg、KH2PO42.0kg、MgSO4·7H2O 0.5kg,蒸馏水1000L,搅拌至完全溶解,pH 6.5,在温度115℃下灭菌30min。
C.培养条件:
种子培养条件:5000ml三角瓶中装种子培养基2500ml,将斜面菌种按每80ml一环的比例接入种子培养基中,温度28℃、转速160r/min、振荡培养24h。
液态发酵培养条件:将上述种子菌液按照10%的质量比接种到液态发酵罐中,温度28℃、通气量1.0(V/V·min)、罐压0.03MPa、转速160r/min、培养24h。
2.将氧化亚铁酸硫杆菌液、污泥根瘤菌液、解淀粉芽胞杆液、沼泽红假单胞菌液、施氏假单胞菌液、凝结芽胞杆菌液、异常汉逊酵母菌液分别按以下比例(体积份数)进行复配:氧化亚铁酸硫杆液16份、污泥根瘤菌液12份、解淀粉芽胞杆液12份、沼泽红假单胞菌液12份、施氏假单胞菌液12份、凝结芽胞杆菌液18份、异常汉逊酵母菌液18份、芳樟醇2%(V/V),制备得到的复合型微生物除臭剂中:氧化亚铁酸硫杆菌(CFU/g)≥4.35×108,污泥根瘤菌(CFU/g)≥1.58×108,解淀粉芽胞杆菌(CFU/g)≥2.1×108,沼泽红假单胞菌(CFU/g)≥3.66×108,施氏假单胞菌(CFU/g)≥1.62×108,凝结芽胞杆菌(CFU/g)≥4.4×108,异常汉逊酵母菌(CFU/g)≥5.25×108,有机酸总量≥46.5g/L。
实施例四
复合型微生物除臭剂除臭试验
1.材料与方法
1.1试验地点
巴彦淖尔市张军养猪场
1.2试验材料
1.2.1受试物:按照实施例一、二、三所述方法制得的复合型微生物除臭剂分别标记为A、B、C组,以及山东济宁金山生物工程有限公司生产的生物除臭剂D组。
1.2.2试剂和器材:CD-1大气采样器、722型分光光度计、无臭袋等。
1.2.3试验场条件
表1试验场条件
2.试验方法
2.1试验设计
将3个试验舍保持原有饲养管理条件,分别独立开展喷雾除臭试验。将复合型微生物除臭剂用自来水按照1:10的比例进行稀释,然后用背负式喷雾器按照50ml/㎡的用量均匀地喷洒于猪舍内。每天上午8:00和下午17:00各喷雾一次,试验期为一周。
2.2试验测定
采集试验舍试验开始前后的的空气样品,分别检测恶臭气体浓度、NH3及H2S浓度指标。每栋猪舍在中部通道均匀设采样点2个,距离地面50cm。取三个试验舍的检测平均值进行数据分析。根据单位平米内蚊蝇的平均数量来计算蚊蝇驱除效果。
恶臭气体、NH3及H2S的检测方法分别按照GB/14675—1993、HJ533—2009、GB/11742—89执行。
3.试验结果分析
表2复合型微生物除臭剂在猪场的除臭效果对比试验
4.讨论和结论
通过试验证明,四组试验产品均有一定的除臭效果,但经过比较得出,试验组A-C的综合效果远高于试验组D,其中,尤以试验组C的综合效果最优。在猪舍中喷洒使用一周试验组C复合型微生物除臭剂后,猪舍中臭气去除率高达93.15%,H2S的去除率达82.19%,NH3的去除率达88.21%,蝇虫减少89.17%。可见,本发明要求保护的复合型微生物除臭剂具有显著除臭效果。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (12)
1.一种复合型微生物除臭剂,其特征在于,由
能够降解并利用硫化氢的氧化亚铁酸硫杆菌,其活菌数≥2.95×108CFU/g,
能够降解环境中吡啶化合物的污泥根瘤菌,其活菌数≥1.05×108CFU/g,
能够发酵和降解餐厨垃圾的解淀粉芽胞杆菌,其活菌数≥1.73×108CFU/g,
能够去除污水中氨氮等有机物的沼泽红假单胞菌,其活菌数≥2.55×108CFU/g,
具有亚硝化作用并能够降解化工废水的施氏假单胞菌,其活菌数≥1.15×108CFU/g,
能够发酵葡萄糖产生大量L-乳酸的凝结芽胞杆菌,其活菌数≥2.86×108CFU/g,
能够产生以酯香为主体香味物质的异常汉逊酵母菌,其活菌数≥2.97×108CFU/g,
和具有杀虫、抑菌、掩盖不良气味作用的芳樟醇组成;
其中,所述氧化亚铁酸硫杆菌于2007年1月16日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,简称CGMCC,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,邮编:100101,保藏编号为1.5066;
所述污泥根瘤菌于2008年3月26日保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心,简称CICC,地址:北京市朝阳区酒仙桥中路24号院,邮编:100015,保藏编号为10363;
所述解淀粉芽胞杆菌于2006年4月25日保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心,简称CICC,地址:北京市朝阳区酒仙桥中路24号院,邮编:100015,保藏编号为20605;
所述沼泽红假单胞菌于2014年12月16日保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心,简称CICC,地址:北京市朝阳区酒仙桥中路24号院,邮编:100015,保藏编号为23812;
所述施氏假单胞菌于2008年11月21日保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心,简称CICC,地址:北京市朝阳区酒仙桥中路24号院,邮编:100015,保藏编号为23621;
所述凝结芽胞杆菌于2015年1月29日保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心,简称CICC,地址:北京市朝阳区酒仙桥中路24号院,邮编:100015,保藏编号为23843;
所述异常汉逊酵母菌于1963年1月保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心,简称CICC,地址:北京市朝阳区酒仙桥中路24号院,邮编:100015,异常变种1431。
2.根据权利要求1所述一种复合型微生物除臭剂,其特征在于,所述芳樟醇在复合型微生物除臭剂中的含量为1.0~3.0%V/V。
3.权利要求1或2所述一种复合型微生物除臭剂的制备方法,其特征在于:
(1)氧化亚铁酸硫杆菌、污泥根瘤菌、解淀粉芽胞杆菌、沼泽红假单胞菌、施氏假单胞菌、凝结芽胞杆菌、异常汉逊酵母菌分别进行液态发酵制得对应菌液;
(2)将氧化亚铁酸硫杆菌、污泥根瘤菌液、解淀粉芽胞杆液、沼泽红假单胞菌液、施氏假单胞菌液、凝结芽胞杆菌液、异常汉逊酵母菌的菌液按比例进行复配混合,制得复合菌液;
(3)将体积浓度为98%的芳樟醇按1.0~3.0%V/V的比例加入复合菌液中充分混合均匀即得成品。
4.权利要求3所述一种复合型微生物除臭剂的制备方法,其特征在于:所述氧化亚铁酸硫杆菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基制备:将硫酸铵3~5g、酵母浸膏2~5g、葡萄糖2~5g、K2HPO4 1~2g、KH2PO4 1~3g、MgSO4·7H2O 3~6g、MnSO4·H2O0.00 1~0.002g加入1000mL蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH6.5~7.0,在温度121℃下灭菌30min;
B.液态发酵培养基制备:将硫酸铵3~6kg、酵母浸粉2~5kg、葡萄糖2~5kg、K2HPO4 1~2kg、KH2PO4 1~3kg、MgSO4·7H2O 0.3~0.6kg、MnSO4·H2O 0.001~0.002kg加入1000L蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH6.5~7.0,在温度115~121℃下灭菌20min~30min;
C.培养条件:
种子培养:将氧化亚铁酸硫杆菌斜面菌种按每50~100ml一环的比例接入种子培养基中,温度23~28℃、转速150~180r/min、振荡培养20~30h,得到种子菌液;
液态发酵培养:将上述种子菌液按照5~15%的质量比接种到盛有液态发酵培养基的培养罐中,温度23~28℃、通气量0.5~1.5V/V·min、罐压0.01~0.05MPa、转速150~180r/min、培养20~30h,得到所述氧化亚铁酸硫杆菌菌液。
5.权利要求3所述一种复合型微生物除臭剂的制备方法,其特征在于:所述污泥根瘤菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基制备:将蛋白胨3~6g、牛肉浸膏3~6g、葡萄糖3~6g、NaCl 3~6g、MnSO4·H2O 0.003~0.006g加入1000mL蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH6.5~7.5,在温度121℃下灭菌30min;
B.液态发酵培养基制备:将酵母蛋白胨3~7kg、牛肉浸粉3~7kg、葡萄糖3~7kg、NaCl3~5kg、MnSO4·H2O 0.002~0.005kg加入到1000L蒸馏水,搅拌至完全溶解,pH6.5~7.5,在温度115~121℃下灭菌20~30min;
C.培养条件:
种子培养:将污泥根瘤菌斜面菌种按每50~100ml一环的比例接入种子培养基中,温度25~32℃、转速150~180r/min、振荡培养20~30h,得到种子菌液;
液态发酵培养:将上述种子菌液按照5~15%的质量比接种到盛有液态发酵培养基的液态发酵罐中,温度25~32℃、通气量0.5~1.5V/V·min、罐压0.01~0.05MPa、转速150~180r/min、培养20~30h,得到污泥根瘤菌菌液。
6.权利要求3所述一种复合型微生物除臭剂的制备方法,其特征在于:所述解淀粉芽胞杆菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基制备:将蛋白胨8~12g、牛肉浸膏2~5g、葡萄糖3~6g、NaCl 3~6g、MnSO4·H2O 0.002~0.006g加入1000mL蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH6.5~7.5,在温度121℃下灭菌30min;
B.液态发酵培养基制备:将酵母蛋白胨8~12kg、牛肉浸粉2~5kg、葡萄糖3~6kg、NaCl3~6kg、MnSO4·H2O 0.002~0.005kg加入1000L蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH6.5~7.5,在温度115~121℃下灭菌20~30min;
C.培养条件:
种子培养:将解淀粉芽胞杆菌斜面菌种按每50~100ml一环的比例接入种子培养基中,温度35~40℃、转速150~180r/min、振荡培养20~30h;
液态发酵培养:将上述种子菌液按照5~15%的质量比接种到盛有液态发酵培养基的液态发酵罐中,温度35~40℃、通气量0.5~1.5V/V·min、罐压0.01~0.05MPa、转速150~180r/min、培养20~30h,得到解淀粉芽胞杆菌菌液。
7.权利要求3所述一种复合型微生物除臭剂的制备方法,其特征在于:所述沼泽红假单胞菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基制备:将胰蛋白胨10~20g、酵母浸膏2~5g、葡萄糖3~6g、NaCl 3~6g、NH4Cl 0.5~1.5g、K2HPO4 0.2~0.6g加入1000mL蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH7.0~7.5,在温度121℃下灭菌30min;
B.液态发酵培养基制备:将胰蛋白胨10~20kg、酵母浸膏2~5kg、葡萄糖3~6kg、NaCl3~6kg、NH4Cl 0.5~1.5kg、K2HPO4 0.2~0.6kg,加入1000L蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH7.0~7.5,在温度115~121℃下灭菌20~30min;
C.培养条件:
种子培养:将沼泽红假单胞菌斜面菌种按每50~100ml一环的比例接入种子培养基中,温度28~32℃、转速100~150r/min、振荡培养20~30h;
液态发酵培养:将上述种子菌液按照10~20%的质量比接种到盛有液态发酵培养基的发酵罐中,温度28~32℃、通气量0.5~1.5V/V·min、罐压0.01~0.05MPa、转速100~150r/min、培养20~30h,得到沼泽红假单胞菌菌液。
8.权利要求3所述一种复合型微生物除臭剂的制备方法,其特征在于:所述施氏假单胞菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基制备:将蛋白胨3~6g、牛肉浸膏8~15g、酵母浸膏3~6g、葡萄糖3~6g、NaCl 3~6g加入1000mL蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH7.0~7.5,在温度121℃下灭菌30min;
B.液态发酵培养基制备:将酵母蛋白胨3~6kg、牛肉浸粉2~5kg、酵母浸粉3~6kg、葡萄糖3~6kg、NaCl 3~6kg加入1000L蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH7.0~7.5,在温度115~121℃下灭菌20~30min;
C.培养条件:
种子培养:将施氏假单胞菌斜面菌种按每50~100ml一环的比例接入种子培养基中,温度30~40℃、转速100~150r/min、振荡培养20~30h;
液态发酵培养:将上述种子菌液按照10~20%的质量比接种到盛有液态发酵培养基的发酵罐中,温度30~40℃、通气量0.5~1.5V/V·min、罐压0.01~0.05MPA、转速100~150r/min、培养20~30h,得到施氏假单胞菌菌液。
9.权利要求3所述一种复合型微生物除臭剂的制备方法,其特征在于:所述凝结芽胞杆菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基制备:将蛋白胨3~6g、牛肉浸膏3~6g、酵母浸粉2~5g、葡萄糖3~6g、MnSO4.H2O 0.003~0.006g、叶酸0.01~0.012g加入1000mL蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH6.5~7.5,在温度121℃下灭菌30min;
B.液态发酵培养基制备:将蛋白胨3~6kg、牛肉浸膏3~6kg、酵母浸粉2~5kg、葡萄糖3~6kg、MnSO4.H2O 3~6g、叶酸10~15g加入1000L蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH 6.5~7.5,在温度115~121℃下灭菌20~30min;
C.培养条件:
种子培养:将凝结芽胞杆菌斜面菌种按每50~100ml一环的比例接入种子培养基中,温度37~42℃、厌氧培养24~48h;
液态发酵:将上述种子菌液按照10~15%的质量比接种到盛有液态发酵培养基的发酵罐中,37~42℃、罐压0.01~0.05MPa、厌氧培养24~48h,得到凝结芽胞杆菌菌液。
10.权利要求3所述一种复合型微生物除臭剂的制备方法,其特征在于:所述异常汉逊酵母菌菌液按如下方法制备:
A.种子培养基制备:将麦芽浸粉15~25g、蛋白胨5~15g、酵母浸粉3~6g、葡萄糖5~15g、KH2PO4 1~3g、MgSO4·7H2O 0.3~1g加入1000mL蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH 6.0~7.0,在温度121℃下灭菌25min;
B.发酵培养基制备:将麦芽浸粉15~25kg、蛋白胨5~15kg、酵母浸粉3~6kg、葡萄糖5~15kg、KH2PO4 1~3kg、MgSO4·7H2O 0.3~1.0kg,加入1000L蒸馏水中,搅拌至完全溶解,pH 6.0~7.0,在温度115~121℃下灭菌20~30min;
C.培养条件:
种子培养:将异常汉逊酵母菌斜面菌种按每50~100ml一环的比例接入种子培养基中,温度25~30℃、转速150~180r/min、振荡培养20~30h;
液态发酵培养条件:将上述种子菌液按照5~15%的质量比接种到液态发酵罐中,温度25~30℃、通气量0.5~1.5V/V·min、罐压0.01~0.05MPa、转速150~180r/min、培养20~30h,得到异常汉逊酵母菌菌液。
11.权利要求3所述一种复合型微生物除臭剂的制备方法,其特征在于:所述氧化亚铁酸硫杆菌液、污泥根瘤菌液、解淀粉芽胞杆液、沼泽红假单胞菌液、施氏假单胞菌液、凝结芽胞杆菌液、异常汉逊酵母菌液的复配体积份数如下:
氧化亚铁酸硫杆菌液15~25份、污泥根瘤菌液5~15份、解淀粉芽胞杆液5~15份、沼泽红假单胞菌液5~10份、施氏假单胞菌液5~15份、凝结芽胞杆菌液15~25份、异常汉逊酵母菌液15~25份。
12.权利要求11所述一种复合型微生物除臭剂的制备方法,其特征在于:所述成品是由混合菌液和芳樟醇复配而成:
将体积浓度为98%的芳樟醇按1.0~3.0%V/V的比例加入复合菌液中,100~150r/min,充分混合1~2h既得成品。
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